CN101039948A

CN101039948A - 雷帕霉素多晶型ⅱ及其应用

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Publication number: CN101039948A
Application number: CNA2005800353638A
Authority: CN
Inventors: T·朱; M·B·法齐
Original assignee: Wyeth LLC
Current assignee: Wyeth LLC
Priority date: 2004-08-20
Filing date: 2005-08-18
Publication date: 2007-09-19
Also published as: US20060040971A1; TW200608973A; ECSP077268A; PA8642501A1; PE20060649A1; MX2007002044A; CA2575887A1; WO2006023627A1; AU2005277407A1; RU2007104518A; IL181170A0; JP2008510710A; NO20071050L; CR8929A; KR20070051863A; EP1781671A1; ZA200701453B; US7282505B2; GT200500223A; SV2006002201A

Abstract

本发明提供了雷帕霉素多晶型II。本发明还提供了雷帕霉素多晶型II的制备方法和含有雷帕霉素多晶型II的药物组合物。

Description

雷帕霉素多晶型Ⅱ及其应用

背景技术

本发明涉及雷帕霉素多晶型II。

雷帕霉素是吸湿链霉菌(Streptomyces hygroscopicus)产生的一种大环三烯类抗生素，最初发现这种抗生素具有抗真菌活性，尤其是在体外和体内都具有抗白色念珠菌(Candida albicans)活性(C.Vezina等，J.Antibiot.28，721(1975)；S.N.Sehgal等，J.Antibiot.28，727(1975)；H.A.Baker等，J.Antibiot.31，539(1978)；第3,929,992和3,993,749号美国专利)。商业上得到的雷帕霉素有西罗莫司(Wyeth)。

雷帕霉素广泛用作器官移植接受者的免疫抑制剂，其毒性有限，甚至在与环孢霉素或皮质激素等其它免疫抑制剂合用时也是如此。细胞内的雷帕霉素受体是一种叫作FKBP12(FK506结合蛋白)的小蛋白质。FKBP-雷帕霉素复合物抑制丝氨酸/苏氨酸激酶，即mTOR(哺乳动物的雷帕霉素靶点)的功能，从而阻断核糖体s6激酶p70s6激酶(p70s6k)的刺激。而p70s6k又将40s核糖体蛋白S6磷酸化，这有助于编码核糖体蛋白和延伸因子的mRNA的翻译。mTOR的另一靶点是翻译起始的一种低分子量抑制剂，叫作磷酸化的热与酸稳定的胰岛素调节的蛋白质(PHAS-I)。PHAS-I的磷酸化使其与真核起始因子(eIF)-4E解离，并增加依赖于eIF-4E的翻译起始。

已有报道称，雷帕霉素能在许多类型的细胞中，包括人类T细胞和B细胞中抑制细胞周期进展。另外，雷帕霉素对于广泛的人类肿瘤细胞系具有体外和体内活性，被认为是代表了一类新的有前景的细胞抑制抗癌药。

发明概述

一方面，本发明提供了雷帕霉素多晶型II。优点是，这种多晶型与I型相比，在压缩过程中较少粘着于加工工具，从而使制剂和其它工艺更具机械效益。

另一方面，本发明提供了一种制备雷帕霉素多晶型II的方法。

另一方面，本发明提供了含有雷帕霉素多晶型II的药物组合物。

另一方面，本发明提供了含有雷帕霉素多晶型II的药盒。

另一方面，本发明提供了含有雷帕霉素多晶型II的药物组合物的制备方法。

本发明的其它方面和优点在以下优选实施方案的详细描述中作进一步描述。

附图简单说明

图1提供了雷帕霉素多晶型II的X射线衍射(XRD)图。雷帕霉素多晶型II的XRD图是顶部的一组峰，标准图位于中间，雷帕霉素的XRD图是底部的一组峰

图2提供了雷帕霉素和雷帕霉素多晶型II的差示扫描量热法(DSC)温度记录图。雷帕霉素的DSC温度记录图位于雷帕霉素多晶型II的DSC温度记录图下方。

本发明详细描述

本发明提供了雷帕霉素多晶型II，并提供了通过除去溶剂由II型制备I型的新方法。分离出雷帕霉素多晶型II，并通过X射线衍射(XRD)、差示扫描量热法(DSC)和热重分析(TGA)鉴定。雷帕霉素多晶型II与雷帕霉素相比具有较低的熔点，与I型相比，较少粘着于加工工具，能形成平滑的压缩表面。由这种新方法制备的I型的可区别特性为，在甲基叔丁基醚蒸汽环境中，这种I型可完全转变为II型。

以下将提供雷帕霉素多晶型II的进一步的优点，和它的获得及使用方法。

I.定义

这里所用的“雷帕霉素”是指本领域人员目前可得到的雷帕霉素形态，通过特征性的且容易获得或可获得的高效液相色谱保留时间、X射线晶体结构、粉末XRD图和DSC温度记录图鉴别。雷帕霉素的粉末XRD图对于本领域技术人员而言容易获得，在约7.2°、9.9°、10.2°、11.1°、12.5°、14.5°、15.3°、15.5°、16.2°、20.0°、20.4°和21.8°2θ处有几个不同强度的峰。见图1中底部的雷帕霉素XRD图。雷帕霉素的X射线晶体结构具有正交空间群P2₁2₁2₁，a＝34.85(2)，b＝13.08(1)，c＝12.25(1)(D.C.Neil Swindwells等Can.J.Chem.56，2491，1978，以引用方式并入本文)。雷帕霉素DSC温度记录图的特征为，在约194℃有尖锐的熔化吸热峰。

这里所用的“多晶型”是指当以固体存在时具有不同形态的化合物(如雷帕霉素)。理想的是，雷帕霉素多晶型包括如晶体、微晶、泡沫体和粉末等化合物固体形态。优选本发明的雷帕霉素多晶型为晶体。由于多晶型晶格中分子次序不同，多晶型的物理性质有典型的区别。另外，多晶型的物理性质可能由于溶剂分子或其它分子引入多晶型的晶格中而产生差异。典型地，用例如熔点、溶解速度、红外光谱和拉曼光谱和X射线衍射(如晶体技术和粉末技术)等技术，可以容易地区分多晶型。

这里所用的“无定形”是指没有确定的晶体结构或形态的化合物。在本申请中，“无定形”是指无定形雷帕霉素，可以是固体无定形物，或者是溶液。

“沉淀”是指固体化合物从溶有该化合物的溶液中沉淀出来的过程。在这里，“沉淀”是指雷帕霉素多晶型II从雷帕霉素溶液中沉淀出来，优选在甲基叔丁基醚中沉淀出来。

“室温”是指约23℃至约25℃。但是，本领域技术人员容易理解，具体的室温可随雷帕霉素多晶型II生成过程中所用的条件和环境条件而变化。

II.雷帕霉素多晶型II的制备方法

一方面，本发明提供了雷帕霉素多晶型II的制备方法。优选由无定形雷帕霉素制备雷帕霉素多晶型II。但是，由雷帕霉素制得无定形雷帕霉素所用的特殊方法并非对本发明的限制。

雷帕霉素与能够溶解雷帕霉素的初始溶剂混合。典型的初始溶剂是丙酮。然后在不到约1个大气压(atm)的减压条件下将初始溶剂除去，一般使用旋转蒸发仪(rotavap)，在约40℃至50℃的高温下除去初始溶剂。除去初始溶剂后，固体雷帕霉素重新生成，优选为无定形。可用更低或更高的温度除去初始溶剂，但所用的温度不应看作对本发明的限制。典型的，除去初始溶剂后生成的固体雷帕霉素是泡沫体。但是，除去初始溶剂后得到的雷帕霉素可以是粉末或油。

除去初始溶剂后，将无定形雷帕霉素溶解于第二种溶剂中。在一个实施方案中，所述第二种溶剂是醚，优选甲基叔丁基醚(TBME)。所述醚可以是脱水或含水的醚。优选在约45℃的高温下将雷帕霉素溶解在第二种溶剂中。但是，本领域技术人员可以容易地采用45℃以上或以下的温度，将雷帕霉素溶解于第二种溶剂中。

将雷帕霉素加入第二种溶剂后，将该溶液混合至少约1分钟。典型地，最初在上述高温下，使雷帕霉素与第二种溶剂混合。但是，本领域技术人员可用较低的温度促使雷帕霉素多晶型II生成，并且本领域技术人员容易选择该较低的温度。典型的，将温度降低至并维持在大约室温。一般使溶液在大约室温下维持约6至约12小时。本领域技术人员容易确定所采用的混合类型、时间和将无定形雷帕霉素溶解于该溶剂中所需的温度。优选在约45℃下将雷帕霉素溶解于TBME，然后在室温下保持约6至8小时。

雷帕霉素溶解于第二种溶剂并维持一段时间后，雷帕霉素多晶型II固体样品从溶液中沉淀出来。典型的，雷帕霉素多晶型II以白色晶体形态沉淀出来。但是，雷帕霉素多晶型II可以以细粉或粗粉形态沉淀出来。可用本领域技术人员已知的方法分离雷帕霉素多晶型II，这些方法包括过滤、倾析、离心和层析等。典型的，用过滤方法分离沉淀出的雷帕霉素多晶型II样品。任选可将过滤后剩下的溶剂浓缩和/或冷却至约室温以下，促使更多的雷帕霉素多晶型II沉淀。

一旦分离后，可经空气干燥，或在氮气等惰性气体下干燥，除去残留溶剂。典型的，除去任何残留溶剂要经过至少0.5小时，优选约0.5至3小时。

一个具体实施方案中，本发明提供了一种制备雷帕霉素多晶型II的方法，包括将雷帕霉素溶解于丙酮；除去丙酮，生成泡沫体；将所述泡沫体溶解于甲基叔丁基醚；和收集雷帕霉素多晶型II。

III.雷帕霉素多晶型II的表征

用本领域技术人员已知的技术表征雷帕霉素多晶型II，并将其与雷帕霉素区分。具体地说，用包括熔点、红外光谱(IR)、核磁共振波谱(NMR)、质谱分析(MS)、燃烧分析、拉曼光谱、元素分析和色谱(包括高效液相色谱)等技术，验证沉淀后是否存在雷帕霉素多晶型II。其它技术，包括差示扫描量热法(DSC)和X射线衍射(XRD)，也可用于区分多晶型，特别是区分雷帕霉素和雷帕霉素多晶型II。

(A)用波谱学鉴别

可用HPLC验证上述得到的产品为雷帕霉素多晶型II。优选用HPLC-紫外(UV)或HPLC-质谱(MS)分析雷帕霉素多晶型，所用方法描述于“French等，Clinical Chemistry，47(7)：1316(2001)”和“Holt等，Clinical Chemistry，46(8)：1179(2000)”，这些文献通过引用结合于本文中。

理想的是，用上述French和Holt所描述的条件，雷帕霉素多晶型II的HPLC色谱图与雷帕霉素的HPLC色谱图相同。雷帕霉素多晶型II的HPLC色谱图可能含有对应于杂质的其它的峰，本领域技术人员容易鉴别出这些杂质。但是，本领域技术人员容易理解，这些杂质的存在不干扰雷帕霉素多晶型II的鉴别和表征。

本领域技术人员容易确定多种用于获得HPLC色谱图的HPLC条件，这些条件不应当作对本发明的限制。这些HPLC条件包括柱温的变化、流速、检测波长、柱型、柱尺寸和流动相等。在一个实施方案中，HPLC-MS条件包括上述Holt阐明的条件。例如，所述条件包括15厘米(cm)×4.6mm的Supelcosil^TMLC-18-DB色谱柱，该色谱柱含有5微米(μ)的ODS颗粒，温度约50℃，流速约1.0毫升(mL)/分钟。可用多种流动相获得雷帕霉素多晶型II的HPLC-UV色谱图。一个实施方案中，流动相为甲醇∶水(例如体积比80∶20)的溶液，任选补加醋酸铵溶液或其它溶剂，如乙腈和/或二烷等。

使用上述HPLC-MS条件，HPLC色谱图上雷帕霉素多晶型II的保留时间应为约6分钟。然后可将雷帕霉素多晶型II的HPLC-MS色谱图与使用相同HPLC-MS条件获得的雷帕霉素的HPLC-MS色谱图对比。本发明中，雷帕霉素多晶型II的保留时间应该与雷帕霉素的保留时间相同，约为6分钟。

典型的，可用XRD和DSC技术进一步确证雷帕霉素多晶型II的存在。

(B)用X射线衍射鉴别

用XRD技术区别雷帕霉素多晶型II和雷帕霉素。本领域技术人员容易确定获得雷帕霉素多晶型II的XRD图所需的条件。有多种XRD仪器可供使用，包括使用衍射处理软件NT(DiffractionManagement Software NT)程序的Scintag^TMX-2高级衍射系统等仪器。

用本领域技术人员知道的X射线晶体学技术获得所述雷帕霉素多晶型II的粉末XRD图。在一个实施方案中，雷帕霉素多晶型II的XRD图包含不同于雷帕霉素XRD峰的多重峰。在另一实施方案中，雷帕霉素多晶型II的XRD图含有一个大峰和几个较小的峰。在进一步的实施方案中，雷帕霉素多晶型II的XRD图在约7.0°、9.7°、10.1°、11.0°、12.4°、13.1°、14.1°、14.6°、15.0°、15.2°、15.8°、16.3°、16.6°、17.6°、18.1°、18.3°、19.7°、20.2°和21.2°的2θ处有峰。

其它峰也可能存在于雷帕霉素多晶型II的XRD图中，对应于样品中的杂质。所述其它峰一般对应于少量存在的雷帕霉素。

除了表征雷帕霉素多晶型II，XRD还可用于监测雷帕霉素多晶型II的生成。

(C)用差示扫描量热法鉴别

也可用差示扫描量热技术(DSC)区分雷帕霉素多晶型II和雷帕霉素。本领域技术人员容易确定获得雷帕霉素多晶型II的DSC温度记录图所必须的条件。有多种差示扫描量热计可供本领域技术人员使用，包括Pyris^TM1 DSC仪器，采用约25℃至约220℃的温度，温度以各种速度升高，包括5℃/分钟、10℃/分钟和30℃/分钟，还有其它仪器和条件可用。

按照本发明制得的雷帕霉素多晶型II的DSC温度记录图中缺少约194℃的吸热峰，该吸热峰存在于雷帕霉素的XRD图中。但雷帕霉素多晶型II的DSC温度记录图中包含约188°的吸热峰。见图2。雷帕霉素多晶型II的DSC温度记录图还可以包含降解吸热峰。不愿受理论束缚，对应于残留的甲基叔丁基醚的吸热峰也可能存在。

因而在一个实施方案中，可制备出雷帕霉素多晶型II，其DSC温度记录图在约188℃具有吸热峰，并且在约194℃没有吸热峰。

(D)用热重分析鉴别(TGA)

还可用TGA确定溶剂合物分子，如TBME分子的存在。本发明中，雷帕霉素多晶型II中雷帕霉素分子与捕获的溶剂分子的比例约为2∶1，因此所述溶剂分子占该固体样品大约4％。本领域技术人员容易确定TGA所用的仪器和条件。

IV.雷帕霉素多晶型II转变为雷帕霉素其它形式

可用本领域技术人员已知的技术将雷帕霉素多晶型II转变为相应的酯、氨基甲酸酯、硫酸酯、醚、肟、碳酸酯等。例如，可用3-羟基-2-(羟甲基)-2-甲基丙酸(CCI-779)将雷帕霉素多晶型II转变为雷帕霉素42-酯。

还可使雷帕霉素多晶型II去溶剂，生成特殊的雷帕霉素I型，或者雷帕霉素I型与雷帕霉素多晶型II的混合物。典型的，通过在约60℃以上加热固体II型，可以使II型转变为I型，或者I型与II型的混合物。或者，可用真空使II型转变为I型，或者I型与II型的混合物。本发明中可用不到约1个大气压(atm)的真空，去除雷帕霉素多晶型II的溶剂。优选理想地用speedvac获得真空。这样的真空可以短期维持或长期维持。本领域技术人员容易确定去除雷帕霉素多晶型II的溶剂所需的时间量。在一个实施方案中，真空维持至少约8小时。在另一实施方案中，真空维持至少约2天。在另一实施方案中，真空维持约2至7天。

不愿受理论束缚，发明人发现雷帕霉素多晶型II是一种溶剂合物，含有约4％的溶剂。除去该溶剂，可制得特殊的雷帕霉素多晶型I，雷帕霉素多晶型I与雷帕霉素I型的X射线衍射图相同，但是物理性质有以下微小的差异。因此，发明人提供了由雷帕霉素多晶型II脱溶剂制得的雷帕霉素多晶型I。发明人还发现，在甲基叔丁基醚蒸汽环境中，这种特殊的I型可完全转化为II型。这不同于用先前技术制得的常规的雷帕霉素I型，常规的雷帕霉素I型暴露于溶剂时，不能完全生成雷帕霉素多晶型II。

优选在减压条件下将II型加热至约100℃以上，将雷帕霉素多晶型II转变为雷帕霉素I型。发明人还发现，雷帕霉素I型在溶剂蒸汽中，优选在TBME蒸汽中可重新溶剂化，生成雷帕霉素多晶型II。

V.含有雷帕霉素多晶型II的组合物

也可按本发明制备含雷帕霉素多晶型II的组合物。将雷帕霉素多晶型II与药学上可接受的载体混合，制备这样的组合物。

一个实施方案中，本发明提供了雷帕霉素多晶型II和/或特殊的雷帕霉素多晶型I与一种或多种其它晶型、多晶型、溶剂合物、无定形或其它形态的雷帕霉素的组合物或混合物。例如，这样的组合物可包含雷帕霉素多晶型II与一种或多种其它形态雷帕霉素，如雷帕霉素和/或雷帕霉素多晶型I。另一个实施例中，这样的组合物可包含雷帕霉素多晶型I和一种或多种其它形态的雷帕霉素，如雷帕霉素和/或雷帕霉素多晶型II。更具体地说，该组合物可包含0.5％至100％(重量)的雷帕霉素多晶型II或雷帕霉素多晶型I，或者0.5％与100％(重量)之间任何的量。例如，该组合物可包含少于该组合物总量的1％、2％、5％、10％、20％、30％、40％或50％(重量)的雷帕霉素多晶型II或雷帕霉素多晶型I。或者，该组合物可包含占该组合物中雷帕霉素总量的至少50％、60％、70％、80％、90％、95％、97％、98％、99％、99.5％或99.9％(重量)的雷帕霉素多晶型II和/或雷帕霉素多晶型I。

另一实施方案中，在给药之前，可将雷帕霉素多晶型II或雷帕霉素多晶型I制成药物组合物，所述药物组合物包含有效剂量的雷帕霉素多晶型II和/或雷帕霉素多晶型I，并与一种(或多种)药学上可接受的载体混合。

另一实施方案中，该药物组合物包含有效剂量的雷帕霉素组合物，该雷帕霉素组合物含有至少一定百分比的雷帕霉素多晶型II或雷帕霉素多晶型I(基于该组合物中雷帕霉素的总量，即各种形态的雷帕霉素的总量为100％计算)。换句话说，所述药物组合物中至少有一定百分比的雷帕霉素以雷帕霉素多晶型II或雷帕霉素多晶型I的形态存在，其余的雷帕霉素以不同的形态存在，包括(但不限于)雷帕霉素、雷帕霉素多晶型II、雷帕霉素多晶型I或其它任何晶型、多晶型、溶剂合物或无定形。

可用药学上有效量的雷帕霉素多晶型II，将这里所述的含有雷帕霉素多晶型II的组合物制成适合所需给药途径的任何剂型。例如，本发明组合物可通过如下途径给药：口服、皮肤、透皮、支气管内、鼻内、静脉内、肌肉内、皮下、肠胃外、腹膜内、鼻内、阴道、直肠、舌下、颅内、硬膜外、气管内，或者缓释。优选口服给药。

本发明口服剂量片剂组合物也可用来制成含有雷帕霉素多晶型II衍生物的口服剂量片剂，所述衍生物包括但不限于本领域技术人员所知的酯、氨基甲酸酯、硫酸酯、醚、肟、碳酸酯等。

II型与II型相比，较少粘着于加工工具，这一性质将特别有利于压片，使片剂的表面平滑。

雷帕霉素多晶型II的药学有效量可以随具体化合物、给药方式、待治疗病情的严重性和组合物中所用的其它任何活性成分的不同而改变。也可以调整给药方案，以得到最佳的治疗结果。可以每天给予几个分剂量，例如每天给予2到4次的分剂量，或者可以给予单剂量。但可以根据治疗情况的紧急需要，相应地增加或减少剂量。在一个实施方案中，按每天、每周或每月的给药方案给药。另一实施方案中，按每天的给药方案给药。但每日剂量可以基于给药周期增加或减少。

雷帕霉素多晶型II可与一种或多种药学上可接受的载体或赋形剂混合，所述载体或赋形剂包括但不限于与本发明组合物相适合的固态和液态载体。这样的载体包括佐剂、糖浆剂、酏剂、稀释剂、粘合剂、表面活性剂、水溶性聚合物、润滑剂、表面活性剂、成粒剂、崩解剂、润肤剂、金属螯合剂、pH调节剂、表面活性剂、填充剂、崩解剂、助悬剂和稳定剂及其组合等。一个实施方案中，雷帕霉素多晶型II与金属螯合剂、pH调节剂、表面活性剂、填充剂、崩解剂、润滑剂和粘合剂混合。

佐剂可包括但不限于矫味剂、着色剂、防腐剂和辅助抗氧剂，可包括维生素E、柠檬酸、抗坏血酸、丁羟甲苯(BHT)、丁羟茴醚(BHA)、d，l-α-生育酚、单硫代甘油和没食子酸丙酯。本发明口服制剂中所用抗氧剂的典型的浓度为0.0005％至0.5％w/v。

润滑剂可包括硬脂酸镁、轻无水硅酸、滑石粉、硬脂酸、十二烷基硫酸钠和硬脂基富马酸钠等。一个实施方案中，润滑剂为硬脂酸镁、硬脂酸或硬脂基富马酸钠。另一个实施方案中，润滑剂为硬脂酸镁。

成粒剂可包括但不限于二氧化硅、微晶纤维素、淀粉、碳酸钙、果胶和交联聚维酮、polyplasdone(交联聚维酮)等。

粘合剂、填充剂和崩解剂可包括淀粉、甘露醇、磷酸钙、糖类(如蔗糖、高岭土、乳糖和葡萄糖)、交联羧甲纤维素钠、硬脂酸镁、阿拉伯树胶和阿拉伯胶、胆甾醇、黄蓍胶、硬脂酸、明胶、酪蛋白、卵磷脂(磷脂)、羧甲基纤维素、羧甲基纤维素钙、羧甲基纤维素钠、甲基纤维素、羟乙基纤维素、羟甲基纤维素、羟丙基纤维素、羟丙甲纤维素邻苯二甲酸酯、非晶纤维素、微晶纤维素、十八十六醇、十六醇、十六烷基酯蜡、葡萄糖结合剂、糊精、甘油单油酸酯、甘油单硬脂酸酯、甘油棕榈硬脂酸酯、聚氧乙烯烷基醚、聚乙二醇、聚氧乙烯蓖麻油衍生物、聚氧乙烯硬脂酸酯、聚乙烯醇、取代的碳酸氢钠、柠檬酸钙、羟基乙酸淀粉钠、预胶化淀粉、交联聚维酮、聚丙基吡咯烷酮、聚乙烯吡咯烷酮(聚维酮，PVP)、胆甾醇、硬脂酸、明胶、酪蛋白、卵磷脂(磷脂)，类似的物质也可包含在口服制剂中。

润肤剂可包括但不限于硬脂醇、水貂油、十六醇、油醇、月桂酸异丙酯、聚乙二醇、橄榄油、石油膏、棕榈酸、油酸和肉豆蔻酸肉豆蔻酯。

表面活性剂可包括非离子和阴离子物质，包括聚山梨醇酯(如聚山梨醇酯20和80)、脱水山梨醇酯、泊洛沙姆(如泊洛沙姆188)、月桂基硫酸钠、十二烷基硫酸钠、苯扎氯铵、硬脂酸钙、十八十六醇、聚西托醇乳化蜡、胶体二氧化硅、磷酸盐、硅酸镁铝、三乙醇胺或可与卵磷脂结合的胆汁酸的盐(牛磺胆酸盐、甘胆酸盐、胆酸盐、去氧胆酸盐等)。表面活性剂还可包括乙氧基化植物油(如Cremophor EL或聚乙二醇化蓖麻油[例如PEG-35蓖麻油，上市产品有CremophorEL，BASF])、维生素E生育酚丙二醇琥珀酸酯(维生素E TGPS)、聚氧乙烯-聚氧丙烯嵌段共聚物和泊洛沙姆。预期表面活性剂可占所述组合物的0.5％至100％(w/v)、0.5％至10％(w/v)、5％至80％(w/v)、10％至75％(w/v)、15％至60％(w/v)，优选至少为组合物的5％(w/v)或至少为组合物的10％(w/v)。

金属螯合剂可包括生理学上可接受的螯合剂，包括依地酸、苹果酸、富马酸、乙二胺四醋酸(EDTA)或能够增强雷帕霉素多晶型II的稳定性的氨基酸(如甘氨酸)。一个实施方案中，金属螯合剂为依地酸。

还可用pH调节剂将含雷帕霉素的溶液的pH值调到约4至约6。一个实施方案中，将含雷帕霉素的溶液的pH值调到约4.6。pH调节剂可包括生理上可接受的物质，包括柠檬酸、抗坏血酸、富马酸、苹果酸或稀盐酸及其盐。一个实施方案中，pH调节剂是柠檬酸。

水溶性聚合物包括但不限于聚乙烯吡咯烷酮(PVP)、羟丙甲纤维素(HPMC)、聚乙二醇(PEG)和环糊精或其混合物。优选水溶性聚合物为PVP，并具有2.5至60千道尔顿的分子量。用于本发明的任何给定的口服制剂可包含各类组分中的多种成分。例如，含有抗氧剂的口服制剂可含有一种或多种抗氧剂作为抗氧化组分。

助悬剂或稳定剂可包括但不限于硬脂酸镁、硬脂酸、滑石粉、月桂基硫酸钠、微晶纤维素、羧甲基纤维素钙、聚乙烯吡咯烷酮、明胶、褐藻酸、阿拉伯树胶、黄原胶、柠檬酸钠、复合硅酸盐、碳酸钙、甘氨酸、糊精、蔗糖、山梨醇、磷酸氢钙、硫酸钙、乳糖、高岭土、甘露醇、氯化钠、滑石粉、干淀粉和糖粉。

稀释剂可包括水、乙醇、聚乙二醇300、聚乙烯400、聚乙烯600、聚乙烯1000或一种或多种聚乙二醇的混合物、丙二醇和其它药学上可接受的共溶剂或调节溶液渗透压的物质，如氯化钠、乳糖、甘露醇或其它胃肠外可接受的糖、多元醇和电解质。

一个实施方案中，含有雷帕霉素多晶型II的组合物通过片剂、囊片剂或胶囊剂、微囊剂、散剂、颗粒剂、混悬剂、糖浆剂、酏剂和气雾剂经口服给药。理想的是，含有雷帕霉素多晶型II的组合物口服给药时，通过片剂和硬胶囊或液体填充胶囊给药。

非醇溶剂可包括二甲基乙酰胺、二甲亚砜或乙腈或其混合物等。

醇溶剂可包括一种或多种醇作为制剂的醇溶剂组分。

特别适合的雷帕霉素多晶型II口服制剂包括US-20040077677号美国专利和WO 04/026280号国际专利(申请号为PCT/US03/29228)中描述的与CCI-779合用的同样的制剂，上述专利公开以引用的方式合并于本文中。这样的口服制剂包含湿法制粒工艺制得的颗粒。该颗粒可含有雷帕霉素多晶型II、水溶性聚合物、pH调节剂、表面活性剂和抗氧剂。一个实施方案中，该制剂包含0.1％至30％，0.5％至25％，1％至20％，5％至15％，或7％至12％(重量/重量)的雷帕霉素多晶型II；0.5％至50％，1％至40％，5％至35％，10％至25％，15％至20％(重量/重量)的水溶性聚合物；0.5％至10％，1％至8％，或3％至5％(重量/重量)的表面活性剂；和0.001％至1％，0.01％至1％，或0.1％至0.5％(重量/重量)的抗氧剂。但其它实施方案可包含更多或更少的这些组分。

另一实施方案中，含有雷帕霉素多晶型II的该组合物可以无菌注射溶液、混悬液、分散体和粉末的形式经静脉内、肌肉内、皮下、胃肠外和腹膜内给药，这些制剂的流动性足以使其能够轻易地排出注射器。这样的注射组合物是无菌的，在生产和储存条件下稳定，并且未受细菌和真菌等微生物的污染。在一般的储存和使用条件下，这些制剂含有防腐剂，以防止微生物生长。

用于本发明的胃肠外制剂可制成单一溶液，或优选制成含雷帕霉素多晶型II、醇溶剂和抗氧剂的共溶剂浓缩物，继而将该浓缩物与含有稀释溶剂和适当表面活性剂的稀释剂混合。

当制成单一溶液或分散体时，将雷帕霉素多晶型II与稀释剂混合。一个实施方案中，雷帕霉素多晶型II与水混合，优选与表面活性剂，如羟丙基纤维素混合。分散体可用甘油、液态聚乙二醇及其油状混合物制备。

特别适合的雷帕霉素多晶型II注射制剂包括20040167152-A1号美国专利(申请号为10/626,943)、WO 03/23267号国际专利(申请号为PCT/US03/223276)、WO 2004/011000号国际专利和20040167152-1A号美国专利(申请号为10/626,943)中用于CCI-779的那些注射制剂，上述说明书通过引用方式合并于本文中。用于本发明的任何给定的制剂可包含各类组分中的多种成分。一个实施方案中，胃肠外可接受的溶剂可包括非醇溶剂、醇溶剂或其混合物。用于本发明制剂的溶剂的实例包括但不限于乙醇、丙二醇、聚乙二醇300、聚乙二醇400、聚乙二醇600、聚乙二醇1000或其混合物。这些溶剂特别理想，是因为这些共溶剂发生氧化降解和内酯裂解的程度较低。另外，乙醇和丙二醇可以混合制成可燃性较低的产品，但混合物中大量的乙醇通常会产生更好的化学稳定性。该混合物中乙醇的浓度优选30％至100％v/v。

可向制剂中加入抗氧剂，以提高雷帕霉素多晶型II在胃肠外可接受的醇共溶剂中的稳定性。一般，本发明的该实施方案中所用的胃肠外制剂含有抗氧剂组分，浓度为共溶剂浓缩物的0.001％至1％w/v，或0.01％至0.5％w/v，也可能需要更低或更高的浓度。抗氧剂中，d，l-α-生育酚尤为理想，使用浓度为共溶剂浓缩物的0.01％至0.1％w/v，优选为0.075％w/v。

本发明中所用胃肠外制剂的某些实施方案中，最好在稀释溶液中使用表面活性剂，以防止当用输注水溶液或血液稀释时，雷帕霉素多晶型II沉淀出来。一种特别理想的表面活性剂是下述的聚山梨醇酯20或聚山梨醇酯80。但是本领域技术人员容易选择其它适合的表面活性剂。

使用前，将所述共溶剂浓缩物与含有稀释溶剂的稀释剂和表面活性剂混合。按照本发明将雷帕霉素多晶型II制成共溶剂浓缩物时，所述浓缩物中雷帕霉素多晶型II的浓度可为0.05mg/mL至高达约50mg/mL、2.5mg/mL至高达约50mg/mL、5mg/mL至高达约50mg/mL、10mg/mL至高达约50mg/mL或25mg/mL至高达约50mg/mL。可将所述浓缩物以高达约1份浓缩物比一份稀释剂的比例，与稀释剂混合，得到的胃肠外制剂中雷帕霉素多晶型II的浓度为1mg/mL至约25mg/mL、5mg/mL至约25mg/mL、10mg/mL至约25mg/mL、20mg/mL至约25mg/mL。例如，所述胃肠外制剂中雷帕霉素多晶型II的浓度可为约2.5至10mg/mL。本发明还包括使用以下制剂：共溶剂浓缩物中雷帕霉素多晶型II的浓度较低的制剂；和一份浓缩物与超过一份的稀释剂混合所得的制剂，例如浓缩物：稀释剂约为1∶1.5、1∶2、1∶3、1∶4、1∶5或1∶9v/v等，使雷帕霉素多晶型II胃肠外制剂中雷帕霉素多晶型II的浓度降至最低检测浓度。

就本发明公开而言，透皮给药应理解为包括经身体表面和身体通道内层(包括上皮组织和粘膜组织)的所有给药方式。可将雷帕霉素多晶型II或其药学上可接受的盐制成洗剂、乳膏剂、泡沫剂、贴片剂、混悬剂、溶液剂和栓剂(直肠栓剂和阴道栓剂)实现这种给药方式。

用含有雷帕霉素多晶型II及载体的透皮贴片剂可完成透皮给药，所述载体对于雷帕霉素多晶型II是惰性的，对皮肤无毒，可使供全身吸收的药物经皮肤到达血液中。所述载体可载有任何量的泡沫体，例如乳膏剂和软膏剂、糊剂、凝胶剂和封堵器。乳膏剂和软膏剂可以是粘稠液体或者是水包油型或油包水型半固体乳剂。也可使用含有吸收粉末的糊剂，该吸收粉末分散于含有雷帕霉素多晶型II的石油或亲水石油中。可用各种封堵器将雷帕霉素多晶型II释放入血液中，例如可用半透膜盖在贮器上，贮器中含有雷帕霉素多晶型II，可以有载体，也可以没有载体；或者可用含雷帕霉素多晶型II的模具。文献中还有其它封堵器。

另一实施方案中，含有雷帕霉素多晶型II的组合物可以以常规栓剂形式经直肠给药。栓剂可由传统材料制成，包括可可脂(可以加入蜡类物质以改变栓剂的熔点，也可不加)和甘油。也可使用水溶性栓剂基质，如不同分子量的聚乙二醇。

另一实施方案中，含有雷帕霉素多晶型II的组合物可以以常规的栓剂、乳膏剂、凝胶剂、环或涂覆的宫内节育器(IUD)的形式经阴道给药。

另一实施方案中，含有雷帕霉素多晶型II的组合物可以以气雾剂形式经鼻内或支气管内给药。

还考虑到，含有雷帕霉素多晶型II的本发明组合物可与包括抗排异化疗药物的一种或多种其它药物共同给予。

雷帕霉素多晶型II所需的剂量可以随当前症状的严重程度、特定的待治疗的病人以及给药的途径而有所不同。本领域技术人员容易确定雷帕霉素多晶型II所需剂量。一个实施方案中，雷帕霉素多晶型II的给药剂量约为2至100毫克/天。其它实施方案中，雷帕霉素多晶型II的给药剂量为5毫克/天至75毫克/天，10毫克/天至50毫克/天，15毫克/天至35毫克/天，或约20毫克/天至25毫克/天。

开始治疗时的雷帕霉素多晶型II的剂量可以低于达到理想效果所需的剂量，通常低于雷帕霉素多晶型II的最佳剂量。此后，可以增加剂量，直至达到该情况下的最佳效果。精确的剂量将由给药的医生根据各个待治疗病人的相关经验确定。一般而言，本发明组合物最理想的给药浓度是通常会产生有效的结果而不会导致任何有害副作用的浓度。

VI.含有雷帕霉素多晶型II的可给予组合物的制备方法

一方面，本发明包括含雷帕霉素多晶型II的药物组合物的制备方法。该组合物可通过上述几种不同的给药途径给予哺乳动物患者，最好以固体或液体剂型口服给药。

含有雷帕霉素多晶型II的口服制剂可包含常规使用的任何口服制剂，包括片剂、胶囊剂、口腔含剂、锭剂、糖锭剂和口服液、混悬剂或溶液剂。可将雷帕霉素多晶型II与上述一种或多种组分混合，制成含雷帕霉素多晶型II的口服制剂。一个实施方案中，将组合物的组分通过干法或湿法混合。另一实施方案中，将这些组分用干法制粒。另一实施方案中，将这些组分混悬或溶解于液体中，加入适合给予哺乳动物患者的制剂中。口服制剂还可包括标准的缓释或控释制剂，以改变雷帕霉素多晶型II的吸收。口服制剂还可包括将雷帕霉素多晶型II置于水或果汁中给予的制剂，根据需要可含有适当的增溶剂或乳化剂。

胶囊可含有雷帕霉素多晶型II与填充剂和/或稀释剂的混合物，所述填充剂和/或稀释剂如上述药学上可接受的淀粉(如玉米淀粉、马铃薯淀粉或木薯淀粉)、糖类、人造甜味剂、粉状纤维素(如晶体纤维素和微晶纤维素)、面粉、明胶、树胶等。

可用常规压片、湿法制粒或干法制粒方法，使用药学上可接受的稀释剂、粘合剂、润滑剂、崩解剂、表面改性剂(包括表面活性剂)，制成有用的片剂。优选用含有水和醇的水醇溶剂系统进行湿法制粒，优选的醇组分为乙醇。

可将雷帕霉素多晶型II溶解或混悬于适合给予哺乳动物患者的液体中，制成含雷帕霉素多晶型II的液体制剂。

一个实施方案中，含雷帕霉素多晶型II的药物组合物的制备方法包括将雷帕霉素多晶型II、金属螯合剂、pH调节剂、表面活性剂、填充剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂混合。

另一实施方案中，含有雷帕霉素多晶型II的药物组合物的制备方法包括将雷帕霉素多晶型II、金属螯合剂、pH调节剂、表面活性剂、至少一种填充剂、粘合剂、崩解剂和润滑剂混合。

本发明还提供了供本发明使用的药物组合物的药盒或包装。本发明的药盒可包含雷帕霉素多晶型II和适合给予哺乳动物患者的上述载体。因此本发明包括用于治疗哺乳动物的含有雷帕霉素多晶型II的产品。本发明还包括药物包装，该包装中含有供单个哺乳动物使用一个疗程的药物(neoplasm)，所述包装含有单位剂量剂型的雷帕霉素多晶型II。

因此，本发明的雷帕霉素多晶型II可制成药物组合物和任选组合成药盒形式，供哺乳动物治疗用。

VII.雷帕霉素多晶型II的使用方法

可用雷帕霉素多晶型II治疗或预防本领域技术人员已知的，用雷帕霉素可以治疗或预防的多种疾病。因此，雷帕霉素多晶型II具有免疫抑制、抗排异、抗真菌、抗炎、抗肿瘤和抗增殖活性。

具体地说，雷帕霉素多晶型II单独使用，或制成上述组合物或药盒形式使用，可作为抗肿瘤药，尤其是用于治疗实体肿瘤，包括肉瘤和癌，更具体地说，可治疗星形细胞瘤、前列腺癌、乳腺癌、结肠癌、小细胞肺癌和卵巢癌；和成人T细胞性白血病/淋巴瘤。含有雷帕霉素多晶型II的组合物和药盒也用于治疗或抑制移植排异，例如肾、心脏、肝、肺、骨髓、胰腺(胰岛细胞)、角膜、小肠和皮肤同种移植及心脏瓣膜异种移植的排异；可用于治疗或抑制移植物抗宿主疾病；可用于治疗或抑制自身免疫疾病，如狼疮(包括系统性红斑狼疮)、类风湿性关节炎、糖尿病、重症肌无力和多发性硬化症；以及炎性疾病，如牛皮癣、皮炎、湿疹、脂溢性皮炎、肠病(包括炎性肠病)、肺炎(包括哮喘、慢性阻塞性肺病、肺气肿、急性呼吸窘迫综合征、支气管炎等)、心脏炎性疾病和眼部炎性疾病(如眼色素层炎；贫血；成人T细胞性白血病/淋巴瘤；真菌感染；恶性肿瘤；过度增生性血管疾病(如再狭窄)；移植物血管动脉粥样硬化；和心血管疾病、脑血管疾病及外周血管疾病，如冠状动脉疾病、脑血管疾病、动脉硬化、动脉粥样硬化、非动脉粥样化的动脉硬化、由细胞活动(导致免疫介导的血管损伤)引起的血管壁损伤、血管损伤之后的平滑肌细胞增生和内膜增厚，以及抑制中风或多梗死性痴呆。

根据本文提供的信息容易确定适合的给药方案。

以下实施例用于说明本发明，不限制本发明的范围。本领域技术人员应理解，尽管以下实施例中描述了具体的试剂和条件，但可作修改，并仍然包含于本发明的精神和范围内。

实施例

实施例1-雷帕霉素多晶型II的制备

将雷帕霉素(3克)溶解于20毫升丙酮中。然后用旋转蒸发仪在大约40℃至50℃下将溶剂减压除去，得到泡沫体。在约45℃下将干燥泡沫状的雷帕霉素溶解于甲基叔丁基醚(10毫升)中，然后在室温下保持过夜。将沉淀出的白色晶体过滤收集，并暴露于空气中干燥或用氮气干燥约0.5至约3小时。总共得到2.5克雷帕霉素多晶型II。

实施例2-雷帕霉素多晶型II的X射线衍射研究

用Scintag^TMX-2高级衍射系统(Scintag Inc.，USA提供)对雷帕霉素多晶型II进行粉末XRD分析。使用标准焦点铜X射线管，功率为1.8kW，从3.00度扫描到40.00度，扫描速度为1度/分钟。用带有Diffraction Management Software^TMNT(DMSNT)程序的计算机记录数据。误差小于0.1°。

将样品磨成细粉，装入带有零背景板的腔式样品支持器中。报告并比较以峰位置(角位置2θ)为特征的粉末X射线衍射图。

雷帕霉素多晶型II的粉末XRD在7.0°、9.7°、10.1°、11.0°、12.4°、13.1°、14.1°、14.6°、15.0°、15.2°、15.8°、16.3°、16.6°、17.6°、18.1°、18.3°、19.7°、20.2°和21.2°2θ处有峰。见图1。

实施例3-雷帕霉素多晶型II的差示扫描温度记录图研究

用带有Pyris^TM处理软件的Pyris^TM1型差示扫描量热计(DSC)(Pekin Elmer)分析雷帕霉素多晶型II。将大约4至5毫克雷帕霉素多晶型II加至铝盘，然后密封。以一定的温度变化率(5℃/分钟、10℃/分钟和30℃/分钟)将该样品由25℃加热至220℃。以50毫升/分钟的流量吹扫氮气。

得到的差示扫描量热温度记录图具有约188°的吸热峰。见图2。

本说明书中引用的所有出版物均以引用的方式合并于本文中。虽然本发明参照特别的优选实施方案进行了描述，但应理解，在不脱离本发明精神的前提下可以进行修改。这样的修改落入所附权利要求的范围。

Claims

1.一种雷帕霉素多晶型II：

(a)其差示扫描量热温度记录图中没有约194°的吸热峰；且

(b)其X射线衍射峰图在7.2°、9.9°、10.2°、11.1°、12.5°、14.5°、15.3°、15.5°、16.2°、20.0°、20.4°和21.8°2θ处没有峰。

2.一种具有以下特征的雷帕霉素多晶型II：

(a)其X射线衍射峰图在约7°、9.7°、10.1°、11.0°、12.4°、13.1°、14.1°、14.6°、15.0°、15.2°、15.8°、16.3°、16.6°、17.6°、18.1 °、18.3°、19.7°、20.2°和21.2°2θ处有峰；且

(b)其差示扫描量热温度记录图具有约188°的吸热峰。

3.权利要求2或权利要求3的雷帕霉素多晶型II，其中所述温度记录图没有约194°的吸热峰。

4.权利要求1至4中任一项的雷帕霉素多晶型II，所述雷帕霉素多晶型II包含甲基叔丁基醚溶剂合物分子。

5.权利要求4的雷帕霉素多晶型II，其中所述溶剂合物分子经热重分析TGA测定，占所述雷帕霉素多晶型II的约4％。

6.权利要求4的雷帕霉素多晶型II，其中所述雷帕霉素与所述溶剂合物的分子比约为2∶1。

7.一种雷帕霉素多晶型II，所述雷帕霉素多晶型II通过使雷帕霉素从甲基叔丁基醚中重结晶得到。

8.权利要求7的雷帕霉素多晶型II，其中所述无定形雷帕霉素在高温下溶解于所述甲基叔丁基醚中。

9.权利要求8的雷帕霉素多晶型II，其中所述高温是大约45℃。

10.权利要求8或权利要求9的雷帕霉素多晶型II，进一步包括将所述甲基叔丁基醚溶液冷却至约23℃至约25℃。

11.权利要求10的雷帕霉素多晶型II，所述雷帕霉素多晶型II从所述的冷却的甲基叔丁基醚溶液中沉淀出来。

12.权利要求7至权利要求11中任一项的雷帕霉素多晶型II，所述雷帕霉素多晶型II在低于约23℃的温度下干燥。

13.一种雷帕霉素多晶型II，所述雷帕霉素多晶型II是从含有无定形雷帕霉素和甲基叔丁基醚的溶液中沉淀出来得到的。

14.权利要求13的雷帕霉素多晶型II，所述雷帕霉素在高温下溶解于所述甲基叔丁基醚中。

15.权利要求14的雷帕霉素多晶型II，其中所述高温是大约45℃。

16.权利要求14或权利要求15的雷帕霉素多晶型II，进一步包括将所述甲基叔丁基醚溶液冷却至23℃至约25℃。

17.权利要求13至权利要求16中任一项的雷帕霉素多晶型II，所述雷帕霉素多晶型II在低于约23℃的温度下干燥。

18.权利要求13至权利要求17中任一项的雷帕霉素多晶型II，其中所述沉淀在约45℃或在低于约45℃的温度下进行。

19.一种制备雷帕霉素多晶型II的方法，所述方法包括使雷帕霉素多晶型II从含有甲基叔丁基醚和无定形雷帕霉素的溶液中沉淀出来。

20.权利要求19的方法，其中所述无定形雷帕霉素是通过将雷帕霉素溶解于丙酮中，然后旋转蒸发得到泡沫体制得的。

21.权利要求19或权利要求20的方法，其中所述甲基叔丁基醚溶液维持在约40℃至约50℃。

22.权利要求21的方法，其中所述甲基叔丁基醚溶液维持在约45℃。

23.权利要求19至权利要求22中任一项的方法，其中所述沉淀是通过冷却所述甲基叔丁基醚溶液进行的。

24.权利要求19至权利要求23中任一项的方法，所述方法进一步包括干燥沉淀出的雷帕霉素多晶型II。

25.一种制备雷帕霉素多晶型II的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)将雷帕霉素溶解于初始溶剂中；

(b)除去步骤(a)中所述初始溶剂；

(c)将步骤(b)的产物溶解于甲基叔丁基醚；和

(d)收集所述雷帕霉素多晶型II。

26.权利要求25的方法，其中所述初始溶剂为丙酮。

27.一种制备雷帕霉素多晶型I的方法，所述方法包括使雷帕霉素多晶型II脱溶剂。

28.权利要求27的方法，其中所述脱溶剂在真空中进行。

29.权利要求27的方法，其中所述脱溶剂在高温下进行。

30.一种制备雷帕霉素多晶型I的方法，所述方法包括以下步骤：

(a)将雷帕霉素溶解于初始溶剂中；

(b)除去步骤(a)中所述初始溶剂；

(c)将步骤(b)的产物溶解于甲基叔丁基醚；

(d)收集沉淀出的雷帕霉素多晶型II；和

(e)使所述雷帕霉素多晶型II脱溶剂。

31.权利要求30的方法，其中所述脱溶剂在真空中进行。

32.权利要求32的方法，其中所述脱溶剂在高温下进行。

33.一种雷帕霉素多晶型II，所述雷帕霉素多晶型II的X射线衍射图如图1所示。

34.一种雷帕霉素多晶型II，所述雷帕霉素多晶型II的差示扫描量热温度记录图如图2所示。

35.一种药物组合物，所述药物组合物含有雷帕霉素多晶型II和药学上可接受载体。

36.一种药盒，所述药盒含有(i)雷帕霉素多晶型II和(ii)适合给予哺乳动物患者的载体。

37.一种制备含雷帕霉素多晶型II的药物组合物的方法，包括混合以下一种或多种成分：

(i)雷帕霉素多晶型II；

(ii)金属螯合剂；

(iii)pH调节剂；

(iv)表面活性剂；

(v)至少一种填充剂；

(vi)粘合剂；

(vii)崩解剂；和

(viii)润滑剂。