CN101442989A

CN101442989A - 包括两性霉素b的组合物

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Publication number: CN101442989A
Application number: CNA2005800259782A
Authority: CN
Inventors: 萨玛·杜德都; 斯瑞尼维斯·帕拉科达特; 戴维德·莱彻卡-巴莱斯特洛斯; 丹弗斯·米勒; 艾兰·R·科格勒; 克里斯托弗尔·弗雷特斯; 特里克茜·唐; 理查德·马尔科姆森; 凯斯·华士考; 特瑞萨·斯温尼; 托马斯·E·特雷雷; 萨瓦杰纳·德维威蒂; 麦克·A·埃尔德恩
Original assignee: Nektar Therapeutics
Current assignee: Novartis AG; Nova Pharmaceutical Corp
Priority date: 2004-06-21
Filing date: 2005-06-21
Publication date: 2009-05-27
Anticipated expiration: 2025-06-21
Also published as: WO2006002140A9; BRPI0512326A; CN101442989B; WO2006002140A3; JP2008503586A; MXPA06015220A; US20060025355A1; IL179835A0; CA2567785A1; WO2006002140A2; US7326691B2; EP1773301A2; AU2005258040A1

Abstract

本发明提供包含颗粒的组合物，所述颗粒包含至少95wt％的两性霉素B，其中颗粒具有大约1.1μm到大约1.9μm范围的质量中位直径。另一种组合物也包含粒子，所述粒子包含至少大约95wt％的两性霉素B，其中至少粒子的大约80wt％具有大约1.1到大约1.9μm范围的几何直径。还有另一种包含粒子的组合物，所述粒子包含两性霉素B，其中所述的粒子具有小于大约1.9μm的质量中位直径，并且其中所述的两性霉素B具有至少大约20％的结晶度水平。单位剂量形式，输送系统，和方法可包括类似的组合物。

Description

包括两性霉素B的组合物

技术领域

本发明的一个或多个实施方案包括包含两性霉素B的组合物，制备和应用两性霉素B组合物的方法，和应用两性霉素B组合物的系统。

背景技术

肺部真菌感染，如侵入性肺部丝状真菌感染(IFPFI)，是免疫损害的病人致病或致死的主要原因。个体免疫系统可能被一些疾病，如获得性免疫缺陷综合征(AIDS)损害，和/或在免疫抑制治疗中被故意地损害。免疫抑制治疗通常是给药于进行癌症治疗的病人和/或进行移植过程的病人。免疫损害的病人对肺部和/或鼻真菌感染有高度的敏感性。严重免疫损害的病人，如长期患有中性粒细胞减少症或除了其他免疫抑制剂外要求21或更多连续天数的泼尼松剂量至少为1mg/kg/天的病人，尤其对肺部和/或鼻真菌感染敏感。在免疫损害的病人中，总体上真菌感染率范围为0.5至28％。在佛瑞德哈钦森癌症中心(FredHutchinson Cancer Center)，尸检患有特发性肺炎综合征(IPS)的骨髓移植病人，其中7.3％有IFPFI。在另一个Vogeser等人的研究中，在欧洲病人中1187例连续尸检发现IFPFI的4％比率，这些病人在1993年至1996年期间死于任何原因。这些欧洲病人的绝大多数曾经接受过(1)高剂量甾族化合物药量；(2)恶性肿瘤的治疗；(3)实体器官移植；(4)某种形式的骨髓移植。

在免疫损害的病人中，多数普通的肺部和/或鼻真菌感染是肺部和/或鼻曲霉病。曲霉病由曲霉真菌(Aspergillus spp.)引起的疾病，其主要通过肺侵入人体。曲霉病的发生率取决于中性粒细胞减少症持续的时间和深度，病人的因素(如，年龄，皮质甾类的使用，和先前的肺部和/或鼻疾病)，环境污染水平，诊断的判据，和明确致病原因的持久性。

其他的丝状真菌或者双态性真菌同样也能导致肺部真菌感染。这些其它的真菌通常是某地特有的或区域性的并且可包含，例如，芽生菌，播散性假丝酵母，球孢子菌(coccidioidomycosis)，隐球菌，组织胞浆菌，毛霉菌，和孢子丝菌。虽然典型地不影响肺部系统，但由假丝酵母(Candida spp.)引起的感染占免疫损害病人全部真菌感染的50％至67％，其通常为全身的而且大部分经常起因于经由内在设备或IV导管，外伤，或污染的实体器官移植等引起的感染。

两性霉素B是唯一认可的杀真菌化合物，其目前用于治疗曲霉病而且通常静脉内递送。两性霉素B是从结节链霉菌(Streptomycesnodosus.)菌株中获得的两性的多烯大环内酯。在商品中，两性霉素B表现为无定形和结晶两种形式。用脱氧胆酸钠制备的两性霉素B是最早用于销售的胃肠外用(parental)两性霉素B。系统静脉内治疗由于其剂量依赖毒性如肾脏毒性和肝毒而受到限制，所述的毒性妨碍治疗效果而且减少了两性霉素B预防应用的需要性。即使经过认可的治疗，曲霉病发生率在上升而且预计会在50％以上的接受治疗的感染者中导致死亡。

本技术领域还需要安全有效的两性霉素B组合物，制备和应用上述组合物的方法，和应用上述组合物的系统。例如，仍需要组合物和方法，该组合物和方法安全有效地治疗发生肺部和/或鼻真菌感染的病人和/或提供预防肺部和/或鼻真菌感染的发生。

发明内容

相应地，本发明的一个或多个实施方案包括含有两性霉素B的组合物，制备和应用两性霉素B组合物的方法，和应用两性霉素B组合物的系统。本发明实施方案的其他特点和优点将在下面的本发明说明中陈述，并且部分地将由本发明说明书而明显或可通过本发明的实施例得知。本发明的实施方案将通过在关于这个的书面说明书和权利要求中指出的组合物和方法来实现和获得。

一方面，本发明的一个或多个实施方案涉及一种包括含有至少约95wt％两性霉素B的粒子的组合物。该粒子具有约1.1μm至约1.9μm的质量中位直径范围。

另一方面，本发明的一个或多个实施方案涉及一种包括含有至少约95wt％两性霉素B的粒子的组合物。该粒子的至少约80wt％具有约1.1μm至约1.9μm的几何直径范围。

又一方面，本发明的一个或多个实施方案涉及一种包括包含两性霉素B的粒子的组合物。该粒子具有小于约1.9μm的质量中位直径，并且所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度。

还有另一个方面，本发明的一个或多个实施方案涉及一种包括有效量的两性霉素B和药学可接受的赋形剂的药物组合物。所述的药物组合物由包含两性霉素B的粒子制成，该两性霉素B具有约1.1μm至约1.9μm的质量中位直径范围。

另一方面，本发明的一个或多个实施方案涉及一种包括有效量的两性霉素B和药学可接受的赋形剂的药物组合物。所述的药物组合物由包含两性霉素B的粒子制成，并且包含两性霉素B的粒子的至少约80wt％具有约1.1μm至约1.9μm的几何直径范围。

又一方面，本发明的一个或多个实施方案涉及一种包括有效量的两性霉素B和药学可接受的赋形剂的药物组合物。所述的两性霉素B具有约20％至约99％的结晶度范围。

另一个方面，本发明的一个或多个实施方案涉及一种包括具有至少约20％结晶度的两性霉素B的干粉末。所述的干粉末包含具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径的粒子。

更进一步方面，本发明的一个或多个实施方案涉及一种包括装有药物组合物的容器的单位剂量形式。所述的药物组合物包含有效量的两性霉素B和药学可接受的赋形剂。所述的药物组合物由含有具有小于约1.9μm的质量中位直径的两性霉素B的粒子制成。

另一个方面，本发明的一个或多个实施方案涉及一种包括装有药物组合物的容器的单位剂量形式。所述的药物组合物包含有效量的两性霉素B和药学可接受的赋形剂。所述的药物组合物由包含两性霉素B的粒子制成，并且包含两性霉素B的粒子的至少约80wt％具有小于约1.9μm的几何直径。

还有另一个方面，本发明的一个或多个实施方案涉及一种包括装有药物组合物的容器的单位剂量形式。所述的药物组合物包含有效量的两性霉素B和药学可接受的赋形剂。所述的两性霉素B具有约20％至约90％的结晶度范围。

又一方面，本发明的一个或多个实施方案涉及一种包括吸入器和药物组合物的递送系统。所述的药物组合物包括含有两性霉素B和药学可接受的赋形剂的颗粒状物。所述的颗粒状物由含有具有小于约1.9μm的质量中位直径的两性霉素B的粒子制成。

更进一步方面，本发明的一个或多个实施方案涉及一种包括吸入器和药物组合物的递送系统。所述的药物组合物包括含有两性霉素B和药学可接受的赋形剂的颗粒状物。所述的颗粒状物由包含两性霉素B的粒子制成，其中包括两性霉素B的粒子的至少约80wt％具有小于约1.9μm的几何直径。

还有另一个方面，本发明的一个或多个实施方案涉及一种包括吸入器和药物组合物的递送系统。所述的药物组合物包括含有两性霉素B和药学可接受的赋形剂的颗粒状物，其中所述的两性霉素B具有约20％至约99％的结晶度范围。

又一方面，本发明的一个或多个实施方案涉及一种表征用于制备药物组合物的两性霉素B的方法。所述的方法包括测定两性霉素B组成的结晶度。所述的方法还包括在释放两性霉素B组合物以便和药学可接受的赋形剂制成药物组合物之前，保证结晶度比开始预定水平高。

另一个方面，本发明的一个或多个实施方案涉及一种表征用于制备药物组合物的两性霉素B的方法。所述的方法包括测定两性霉素B组合物的无定形度(amorphicity)。所述的方法还包括在释放两性霉素B组合物以便和药学可接受的赋形剂组成药物组合物之前，保证无定形度小于预定水平。

另一个方面，本发明的一个或多个实施方案涉及一种制备和表征干粉末药物组合物的方法。所述的方法包括混合两性霉素B组合物和药学可接受的赋形剂制成干粉末药物组合物。所述的方法还包括测定干粉末药物组合物的空气动力学质量中位直径。所述的方法进一步包括在释放干粉末药物组合物以便对病人给药之前，保证空气动力学质量中位直径低于预定水平。

还有另一个方面，本发明的一个或多个实施方案涉及一种制备和表征干粉末药物组合物的方法。所述的方法包括混合两性霉素B组合物和药学可接受的赋形剂制成干粉末药物组合物。所述的方法还包括测定干粉末药物组合物的均匀度。所述的方法进一步包括在释放干粉末药物组合物以便对病人给药之前，保证均匀度高于预定水平。

另一个方面，本发明的一个或多个实施方案涉及一种制备喷雾干燥粒子的方法。所述的方法包括将包含两性霉素B的粒子混悬在液体中制成原料。所述的粒子具有小于约3μm的质量中位直径。所述的方法还包括喷雾干燥所述的原料制造喷雾干燥粒子。

又一方面，本发明的一个或多个实施方案涉及一种制备喷雾干燥粒子的方法。所述的方法包括将包含两性霉素B的粒子混悬在液体中制成原料，其中两性霉素B具有至少约20％的结晶度。所述的方法进一步包括喷雾干燥所述的原料制造喷雾干燥粒子。

另一个方面，本发明的一个或多个实施方案涉及治疗和/或提供预防真菌感染的方法。所述的方法包括通过吸入有效量的包含两性霉素B的组合物对有需要的病人给药，其中组合物由包含两性霉素B的粒子制成，所述的两性霉素B具有约1.1μm至约1.9μm的质量中位直径范围。

又一方面，本发明的一个或多个实施方案涉及治疗和/或提供预防真菌感染的方法。所述的方法包括通过吸入有效量的包含两性霉素B的组合物对有需要的病人给药，其中组合物由包含两性霉素B的粒子制成，并且其中所述的包含两性霉素B的粒子的至少约80wt％具有约1.1μm至约1.9μm的几何直径范围。

另一个方面，本发明的一个或多个实施方案涉及治疗和/或提供预防真菌感染的方法。所述的方法包括通过吸入有效量的包含两性霉素B的组合物对有需要的病人给药，其中所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度。

更进一步方面，本发明的一个或多个实施方案涉及治疗和/或提供预防真菌感染的方法。所述的方法包括通过吸入有效量的包含两性霉素B的组合物对有需要的病人给药，其中所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度，并且两性霉素B具有至少约1周的肺实体组织保留半衰期，通过肺组织活组织检查测定。

另一个方面，本发明的一个或多个实施方案涉及治疗和/或提供预防真菌感染的方法。所述的方法包括通过吸入有效量的包含两性霉素B的组合物对有需要的病人给药。所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度，并且两性霉素B具有至少10小时的肺上皮内衬液保留半衰期，通过支气管气泡(bronchoralveolar)灌洗测定。

还有另一个方面，本发明的一个或多个实施方案涉及治疗和/或提供预防真菌感染的方法。所述的方法包括通过吸入包含在0.01mg/kg至7.0mg/kg范围的量的两性霉素B的组合物，对有需要的病人给药。所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度，并且两性霉素B的血浆浓度保持低于约1000ng/mL。

另一个方面，本发明的一个或多个实施方案涉及治疗和/或提供预防真菌感染的方法。所述的方法包括通过吸入包含在0.01mg/kg至7.0mg/kg范围的量的两性霉素B的组合物，对有需要的病人给药。所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度，并且两性霉素B的血浆浓度低至足够避免肾和/或肝毒性。

又一方面，本发明的一个或多个实施方案涉及治疗和/或提供预防真菌感染的方法。所述的方法包括通过吸入包含两性霉素B的组合物对有需要的病人给药。所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度。两性霉素B的肺浓度在至少一部分治疗时间段内达到最小抑制浓度的至少5倍量，通过支气管气泡灌洗测定。两性霉素B的血浆浓度保持小于约1000ng/ml。

另一个方面，本发明的一个或多个实施方案涉及治疗和/或提供预防真菌感染的方法。所述的方法包括通过吸入包含两性霉素B的组合物对有需要的病人给药。所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度。治疗时间范围为约15周至约20周。两性霉素B的肺浓度在至少一部分治疗时间段内达到最小抑制浓度的至少5倍量，通过支气管气泡灌洗测定。

更进一步方面，本发明的一个或多个实施方案涉及治疗和/或提供预防真菌感染的方法。所述的方法包括通过吸入包含在约2mg至约50mg范围的量的两性霉素B的组合物，对有需要的病人给药。所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度。所述的给药在小于约五分钟的时间内实施。

另一个方面，本发明的一个或多个实施方案涉及治疗和/或提供预防真菌感染的方法。所述的方法包括通过吸入有效量的包含两性霉素B的干粉末对有需要的病人给药。所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度，并且干粉末包括具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径的粒子。

附图说明

本发明的实施方案在下面的发明说明书中进一步被描述，关于附注的多个非限制性附图，其中：

图1表明给药本发明的药物组合物后预测的肺中两性霉素B的浓度；

图2表明给药本发明的药物组合物后预测的两性霉素B的血浆浓度；

图3A-3E剖视图简图，表现了可用于气雾化本发明的药物组合物的干粉末吸入器的操作过程；

图4是一个图表，表明本发明中两性霉素B粉末在安德森级联碰撞器(anderson cascade impactor，ACI)中的沉积作用的流速依赖性关系曲线；

图5是一个图表，表明本发明的利用Turbospin

DPI装置以60L/min发射的剂量(ED)的两性霉素B粉末的稳定性；

图6是一个图表，表明本发明的利用Turbospin

DPI装置以28.3L/min雾化的雾化特性与两性霉素B粉末的稳定性的曲线；

图7是一个图表，表明本发明的包含两性霉素B和不同卵磷脂的药物组合物雾化特性的曲线；

图8是一个图表，表明本发明的包含70wt％两性霉素B的药物组合物雾化特性的曲线，所述的两性霉素B是利用不同的被动DPI装置以56.6L/min雾化的；

图9表明每个收集器从本发明的粉末中获得的ED；

图10表明本发明粉末中每批平均ED；

图11表明本发明粉末的每收集器的空气动力学质量中位直径(MMAD)；

图12表明本发明粉末的每收集器的细粒剂量(FPD％<3.3μm)；

图13表明本发明粉末的每收集器的ED(mg/囊)；

图14表明本发明粉末的每收集器和每批的平均ED；

图15表明本发明粉末的每收集器的MMAD；

图16表明本发明粉末的每收集器的FPD％<3.3μm；

图17表明本发明两种粉末的ED(mg/囊)；

图18是一个图表，表明气管内给药或静脉内给药后，大鼠身体不同部位两性霉素B的浓度；

图19是一个图表，表明经肺给药14天后，狗肺中两性霉素B平均浓度-时间分布图；

图20是表明本发明一种形式的有效性的Kaplan-Meier存活曲线；

图21表明通过吸入递送，兔的肺组织中两性霉素B的组平均浓度；

图22表明通过吸入递送，兔的肺组织中两性霉素B的组平均浓度；

图23是一个表明本发明一种形式的有效性的Kaplan-Meier存活曲线，及

图24是一个曲线，对比本发明两种粉末的重量分析的和药物特异性的粒子大小分布。

详述

本发明可理解为，除非另有说明，不限于以特定的制剂组分，药物递送系统，制造技术，给药步骤，或其他同类的东西等，因为这些可变化。关于这一点，除非另有说明，供参考的化合物或组合物包括所述的化合物或组分本身，以及与其他化合物或成分混合的化合物，如化合物的混合物。

在进一步论述之前，下面术语的定义会帮助理解本发明的实施方案。

除非另有明确说明，如在本文中所应用的“一”，“一”，和“一”单数形式包括多于一个的参考。因此例如，“磷脂”包括单个磷脂以及二个或多个磷脂结合或混合，除非上下文另外明确指出。

在本文中所应用的“颗粒状物”指包含两性霉素B和至少一种药学可接受的赋形剂的粒子。所述的颗粒状物可呈现不同的形状和形式，如中空的和/或多孔的微结构。所述的中空的和/或多孔的微结构可表现为，限定，或包括空隙，孔隙，缺陷，空心，空间，间隙式的空间，孔径，穿孔，或空穴，并且可为球形的，塌陷的，变形的，或破裂的粒子。

当提及活性剂，该术语不仅包括特殊的分子本体，而且也包括其药学可接受的药理活性类似物，包括，但不限于，盐，酯，酰胺，酰肼，N-烷基衍生物，N-酰基衍生物，前药，共轭物，活性代谢物，和其他这样的衍生物，类似物，和相关化合物。因此，在本文中所应用的术语“两性霉素B”是指它本身或衍生物，类似物，或上面提到的相关化合物，只要这样的两性霉素B衍生物，类似物，或相关的化合物显示抗真菌活性。

在本文中所应用的术语“治疗”和“治疗”指症状严重性和/或频率的减少，症状和/或潜在原因的消除，症状和/或潜在原因发生的可能性的消除，及损害的改善或补救。因此，本文中提供的用活性剂“治疗”病人包括敏感个体的特殊状况，疾病或病症的预防以及临床症状个体的治疗。

在本文中所应用的“治疗有效量”指包括治疗有效量和预防有效量的量。

在本文中所应用的“治疗有效量”指对达到期望的治疗效果有效的量。所给活性剂的治疗有效量一般会根据如被治疗的病症或疾病的类型和严重性和病人的年龄，性别，及体重等因素而变化。

在本文中所应用的“预防有效量”指对达到期望的预防效果有效的量。因为预防药量在疾病开始之前对病人给药，所以一般预防有效量小于治疗有效量。

在本文中所应用的“质量中位直径”或“MMD”指多数粒子的中值直径，一般处在多分散粒子总体中，即，包含一个粒径范围。除非另作说明，本文记录的MMD值是通过激光衍射测定(Sympatec Helos，Clausthal-Zellerfeld，Germany)。一般，粉末样品直接加到SympatecRODOS干粉末分散设备的加料漏斗中。这可手工或通过从VIBRI振动投料元件的末端机器搅匀实现。样品经加压空气(2至3巴)作用分散成初级粒子，同时真空降低(吸力)最大化达到已知的分散压力。分散的粒子用632.8nm的激光束探测，在合适的角度，激光束贯穿分散粒子的轨迹。从粒子整体散射的激光光线被反向傅里叶透镜装置反射到同轴排列的光电倍增管检测元件上。散射的光线要求5ms的时间段。粒子大小的分布用专有的算法系统按照散射光线的空间的/光强的分布在后台计算。

在本文中所应用的“几何直径”指单个粒子的直径，通过显微镜测定，除非本文另作说明。

在本文中所应用的“空气动力学质量中位直径”或“MMAD”指多数粒子或颗粒状物的平均空气动力学尺寸，一般处在多分散总体中。所述的“空气动力学直径”指具有相同沉降速度的单位密度球形的直径，通常在空气中，作为粉末并且因此是有效的表征气雾化的粉末或其他分散的粒子或颗粒状物制剂的方法，依据其沉积行为。空气动力学直径包括粒子或颗粒状物的形状，密度，及粒子或颗粒状物的物理尺寸。除非另作说明，本文中所应用的MMAD指气雾化粉末的空气动力学粒子或颗粒状物尺寸分布的中值，通过级联碰撞测定。

在本文中所应用的“结晶度”指结晶形式的两性霉素B相对于两性霉素B总量的百分数。除非本文作相反的说明，本文中的结晶度是通过宽角X-射线粉末衍射测定。X-射线衍射粉末类型是用Shimadzu X-射线衍射仪模型XRD-6000测定，具有两秒的停留时间(固定时间扫描)，0.02°2θ的步长，3-42°2θ的扫描范围，0.5°的分散狭缝，1°的散射狭缝，及0.3mm接受狭缝，在实施例1中会描述的更加详细。

在本文中所应用的“无定形度”指无定形形式的两性霉素B相对于两性霉素B总量的百分数。除非本文作相反的说明，本文中的无定形水平是通过宽角X-射线粉末衍射测定。

在本文中所应用的术语“发射剂量”或“ED”指从吸入器装置在从粉末单元或储罐致动或分散事件后干粉末递送的指示。ED定义为通过吸入器递送的剂量与标定剂量(即，在发射前放入合适的吸入器装置的每单位剂量粉末的质量)的比率。所述的ED是试验测定量，并且可用模拟病人加药的体外装置来测定。如本文中所应用的，为了测定ED值，将一定剂量的干粉末(如上面定义的)放入Turbospin

DPI装置(PH&T，Italy)中，在美国专利4,069,819和4,995,385中叙述，其内容全文合并于此作为参考。起动Turbospin

DPI，分散粉末。得到的气雾剂云在启动2.5秒后从装置中用真空(30L/min)抽出，在那里被捕获到连接到装置接口管的配衡玻璃纤维滤片(Gelman，47mm直径)上。到达滤片的粉末量构成递送剂量。

如，装有5mg干粉末的囊放入吸入器装置，如果粉末分散导致在配衡滤片上粉末4mg的回收，如上所述的，那末所述的干粉末组合物的ED为80％[＝4mg(递送剂量)/5mg(标定剂量)]。

在本文中所应用的“被动干粉末吸入器”指一种吸入装置，所述的装置取决于患者的吸入力以分散和气雾化药物组合物，该药物组合物以在储存罐或单位剂量的形式装在装置中，并且所述的被动干粉末吸入器不包括含有提供分散和气雾化药物组合物的能量的设备的吸入装置，如加压空气和振动或旋转元件。

在本文中所应用的“主动干粉末吸入器”指所述的装置不仅仅依赖于患者的吸入力以分散和气雾化药物组合物，该药物组合物以在储存罐或单位剂量的形式装在装置中，并且所述的主动干粉末吸入器包括含有提供分散和气雾化药物组合物的能量的设备的吸入装置，如加压气体和振动或旋转元件。

在本文的发明内容中陈述了本发明若干实施方案的概述。为了简便起见，在本文中这一概述其内容全文并入作为参考。

本发明的一个或多个实施方案涉及令人吃惊的和意想不到的发现，即某些两性霉素B组合物具有降低了的毒性。虽然不希望受理论的束缚，某些因素看来似乎影响两性霉素B的毒性。这些因素包括，但不限于，两性霉素B的结晶度，两性霉素B粒子的尺寸，含有两性霉素B粒子的颗粒状物的均匀性，及含有两性霉素B粒子的颗粒状物的尺寸。视情况而定，这些因素的一个或多个看来似乎影响毒性。

在本发明的一个或多个实施方案中，组合物包括两性霉素B。两性霉素B是含有七个反式共轭双键和通过糖苷键与主环相连的3-氨基-3，6-二去氧甘露糖(海藻糖胺)部分的七烯(heptaene)大环内酯。两性霉素B原料药物物质可从丹麦的哥本哈根的Alpharma或康涅狄格州Woodbridge的Chemwerth公司获得。

在本发明的一个或多个实施方案中，组合物包括有抗真菌活性的两性霉素B的衍生物。两性霉素B的衍生物可是酯，酰胺，酰肼，N-烷基，和/或N-氨基酰基。如两性霉素B的酯衍生物包括，但不限于，甲基酯，胆碱酯，和二甲基氨基丙基酯。如两性霉素B的酰胺衍生物包括，但不限于，两性霉素B的伯酰胺，仲酰胺和叔酰胺。两性霉素B的酰肼衍生物包括，但不限于，N-甲基哌嗪酰肼。如两性霉素B的N-烷基衍生物包括，但不限于，两性霉素B甲基酯的N′，N′，N′-三甲基和N′，N′-二甲基氨基丙基琥珀酰亚胺基(succininimidyl)衍生物。如两性霉素B的N-氨酰基衍生物包括，但不限于，N-鸟氨酰基，N-二氨基丙酰基-，N-赖氨基(lisil)-，N-六甲基赖氨基，和N-哌嗪-丙酰基-，或N′，N′-甲基-1-哌嗪-丙酰基-两性霉素B甲酯。

包含两性霉素B的组合物可包括不同量的两性霉素B。如，两性霉素B的量可从至少约0.01wt％变化，如至少约1wt％，至少约10wt％，至少约50wt％，至少约90wt％，至少约95wt％，或至少约98wt％。

如上所述的，两性霉素B的结晶度看起来似乎是降低毒性的一个因素。例如，当经肺给药时，与更多无定形形式的两性霉素B相比，更多结晶形式的两性霉素B看起来似乎溶解较慢并具有较长的半衰期。虽然不希望受理论的束缚，缓慢的溶解性和较长的半衰期看起来似乎降低毒性。与之相反，虽然不希望受理论的束缚，无定形形式看起来似乎提高了可能对肺部组织有毒的可溶的聚集物。虽然不希望受理论的束缚，认为这一原理不限于肺。

期望的两性霉素B的结晶度取决于如剂量和治疗方法因素。两性霉素B的结晶度可为至少约10％，至少约20％，至少约30％，至少约40％，至少约50％，至少约60％，至少约70％，例如至少约80％，至少约90％，至少约95％，或至少约99％。因此，两性霉素B的结晶度可为约10％到100％，例如约20％到约99％，约50％到约99％，约70％到约99％，约70％到约98％，约80％到约98％，或约90％到约97％。

结晶度可用若干已知方法中的任一种测定。例如，结晶度可用X-射线衍射，拉曼和/或红外光谱，动态蒸汽吸着，溶液量热法热，或等温微量热法测定。如上面所述的，除非本文作相反说明，本文的结晶度应用实施例1所述的方法利用X-射线衍射测定。

在某些情况下，应用小直径的两性霉素B的粒子。在一个方案中，两性霉素B的粒子具有小于约3μm的质量中位直径，如小于约2.5μm，小于约2μm，小于约1.9μm，或小于约1.5μm。例如，两性霉素B的粒子可具有从约0.5μm到约3μm的质量中位直径，如约0.5μm到约1.8μm，约0.8μm到约2.5μm，约1.1μm到约1.9μm，约1.2μm到约1.8μm，或约1μm到约2μm。在一些方案中，至少约20％的两性霉素B粒子的尺寸小于约3μm，如至少约50％小于约3μm，至少约90％小于约3μm，或至少约95％小于约3μm，um是指直径大小。例如，粒子的60wt％，70wt％，80wt％或90wt％可具有从约1.1μm至1.9μm的质量中位直径。

在一些方案中，两性霉素B有高的结晶度，并且两性霉素B粒子的尺寸小。结晶度可为上面论述中的任一值，并且粒子的尺寸可为上面论述中的任一值。例如，某一方案中，结晶度为至少约50％，并且质量中位直径小于约3μm。另一方案中，结晶度为至少约70％，并且质量中位直径小于约2.8μm。又一方案中，结晶度为至少约80％，并且质量中位直径小于约2.6μm。还有另一方案中，结晶度为至少约90％，并且质量中位直径小于约2.4μm。

结晶度可以处在上面论述的水平，并且两性霉素B粒子的尺寸可大于上面论述的尺寸。例如，结晶度可为至少约50％，并且质量中位直径可大于约3μm。相反地，两性霉素B粒子的尺寸可在上面论述的尺寸之内，并且结晶度可在上面论述的水平之外。例如，质量中位直径可小于约3μm，并且结晶度可小于约50％。

本发明的一个或多个实施方案的药物组合物可包括两性霉素B和，任选地，一种或多种其它活性成分和/或药学可接受的赋形剂。例如，药物组合物可包括纯的两性霉素B粒子，可包括纯的两性霉素B粒子和其它粒子，和/或可包括含有两性霉素B和一种或多种活性成分和/或一种或多种药学可接受的赋形剂的颗粒状物。

因此，本发明的一个或多个实施方案的药物组合物可以，如果期望，包括两性霉素B和一种或多种其它活性成分的组合。如其它活性成分包括，但不限于，可以通过肺或鼻途径递送的活性剂。例如，其他活性剂可以为长效剂和/或有效抗肺和/或鼻感染的活性剂如抗病毒剂，抗真菌剂，和/或抗生素。

如抗病毒剂包括，但不限于，阿昔洛韦，甘昔洛韦(gangcyclovir)，叠氮胸苷，阿糖胞苷(cytidine arabinoside)，利巴韦林，利福平(rifampacin)，金刚烷胺，碘代脱氧尿嘧啶核苷，膦甲酸钠(poscarnet)和三氟尿苷。

如抗真菌剂包括，但不限于，咯类(如，咪唑类，伊曲康唑，波扎康唑(pozaconazole))，米卡芬净(micafungin)，卡斯巴芬净(caspafungin)，水杨酸，硝酸奥昔康唑，环吡酮胺，酮康唑，咪康唑，和硝酸布康唑。

如抗生素包括，但不限于，青霉素和青霉素族的抗菌药，包括但不限于青霉素-G，青霉素-V，环己西林，氨苄西林，阿莫西林(amoxicillin)，环己西林，巴氨西林，海他西林，氯唑西林，双氯西林，甲氧西林，萘夫西林，苯唑西林，阿洛西林，羧苄西林，美洛西林，哌拉西林，替卡西林，和亚胺硫霉素(imipenim)；头孢菌素和头孢菌素族药物，包括但不限于头孢羟氨苄，头孢唑林，头孢氨苄(caphalexn)，头孢噻吩，头孢匹林，头孢霉定，头孢克洛，头孢孟多，头孢尼西，头孢辛(cefoxin)，头孢呋辛，头孢雷特，头孢替坦，头孢他唑(cefinetazole)，头孢哌酮，头孢噻肟，头孢唑肟，头孢伊唑(ceftizone)，拉氧头孢，头孢他啶，和头孢克肟；氨基糖苷类药物和氨基糖苷族药物，包括但不限于链霉素，新霉素，卡那霉素，庆大霉素，妥布霉素，阿米卡星，和奈替米星；大环内酯和大环内酯族药物，以阿奇霉素，克拉霉素，罗红霉素，红霉素，林可霉素，和克林霉素举例说明；四环素和四环素族药物，例如，四环素，土霉素，多美环素(democlocylin)，美他环素，强力霉素，和米诺环素；喹啉和类喹啉药物，像这样的，例如，萘啶酮酸(naladixic acid)，西诺沙星，诺氟沙星，环丙沙星，氧氟沙星(ofloxicin)，依诺沙星，和培氟沙星；抗生素肽，包括但不限于多粘菌素B，粘菌素，和杆菌肽(bacatracin)，以及其他抗生素肽如防卫素，马加宁，杀菌肽，和其它，作为天然存在或者作为工程化使这些肽抵抗病原特异性蛋白酶和其它失活酶作用的效果被提供；其他抗微生物药物，包括氯霉素，万古霉素，利福平，甲硝唑，伏立康唑，氟康唑，乙胺丁醇，吡嗪酰胺，磺胺类药，异烟肼，和红霉素。

当应用活性剂的混合物，所述的活性剂可以在混合物中提供，所述的混合物可以单一种类的药物组合物或分别地以独立种类的药物组合物。进一步，药物组合物可以和一种或多种其它的提供期望的分散稳定性或粉末分散性的活性或生物活性剂混合。

活性剂如两性霉素B的量，在药物组合物中可以变化。一般活性剂的量为占药物组合物总量的至少约5wt％，例如至少约10wt％，至少约20wt％，至少约30wt％，至少约40wt％，至少约50wt％，至少约60wt％，至少约70wt％，或至少约80wt％。一般活性剂的量在约0.1wt％至100wt％之间变化，例如约5wt％至约95wt％，约10wt％至约90wt％，约30wt％至约80wt％，约40wt％至约70wt％，或约50wt％至约60wt％。

如上面所述的，药物组合物可以包括一种或多种药学可接受的赋形剂。例如药学可接受的赋形剂包括，但不限于，脂类，金属离子，表面活性剂，氨基酸，糖，缓冲液，盐，聚合物，等等，及其混合物。

如脂类包括，但不限于，磷脂，糖脂，神经节苷脂GM1，神经鞘磷脂，磷脂酸，心磷脂；带有聚合物链如聚乙二醇的脂类，壳多糖，透明质酸，或聚乙烯吡咯烷酮；带有磺化的单-，二-和多糖的脂类；脂肪酸如棕榈酸，硬脂酸，及油酸；胆甾醇，胆甾醇酯，及胆甾醇半琥珀酸酯。

在一个或多个实施方案中，磷脂包括饱和磷脂，如一种或多种卵磷脂。典型的酰基链长度为16:0和18:0(即，棕榈酰和硬脂酰)。磷脂含量可以通过活性剂活性，递送方式，和其它因素确定。

天然或合成来源的磷脂可以以不同的量应用。当磷脂存在时，其量一般要足够用至少单个的磷脂分子层包裹活性剂。通常磷脂含量为约5wt ％到约99.9wt ％，如约20wt ％到约80wt ％。

通常，相容的磷脂包括这样的磷脂，所述的磷脂在高于约40℃，如高于约60℃，或高于约80℃，具有凝胶到液态结晶的相变。引入的磷脂可以相对地为长链(如，C₁₆-C₂₂)饱和脂类。在公开的稳定化的制剂中所用的典型磷脂包括，但不限于，磷酸甘油酯如二棕榈酰卵磷脂，二硬脂酰卵磷脂，二花生四烯酰卵磷脂，二山萮酰卵磷脂，二磷酰甘油，短链卵磷脂，氢化卵磷脂，E-100-3(从Lipoid KG，Ludwigshafen，Germany可得)，长链饱和磷酯酰乙醇胺，长链饱和磷酯酰丝氨酸，长链饱和磷酯酰甘油，长链饱和磷酯酰肌醇，含磷酸(phosphatic acid)，磷酯酰肌醇，和鞘磷脂。

如金属离子包括，但不限于，二价阳离子，包括钙，镁，锌，铁，等等。例如，当应用磷脂时，药物组合物也可以包括多价阳离子，如在WO 01/85136和WO 01/85137专利中公布的，其内容全文并入作为参考。一定量的多价阳离子存在可能有效增加磷脂的熔点(T_m)从而药物组合物显示至少约20℃的熔点，高于它的储存温度(Ts)，如，至少约40℃。多价阳离子与磷酯的摩尔比可以至少约0.05:1，如约0.05:1至约2.0:1或约0.25:1至约1.0:1。例如多价阳离子：磷酯的摩尔比为0.50:1。当金属离子是钙时，可以为氯化钙的形式。虽然金属离子，如钙，经常包含在磷脂中，但没有要求任一种。

如上所述的，药物组合物可以包括一种或多种表面活性剂。例如，一种或多种表面活性剂可以和一种或多种与组合物固体粒子或颗粒状物相关的表面活性剂在液相中。“相关”是指药物组合物可引入、吸附、吸收表面活性剂、被其包被或被其形成。表面活性剂包括，但不限于，氟化的或没有氟化的化合物，如饱和和不饱和脂类，非离子洗涤剂，非离子嵌段共聚物，离子表面活性剂，及其组合。应强调的是，除了前面提到的表面活性剂，合适的氟化表面活性剂与此处的教导相容，并且可以应用于提供期望的制剂。

如非离子洗涤剂包括，但不限于，脱水山梨醇酯包括脱水山梨醇三油酸酯(司盘^TM85)，脱水山梨醇倍半油酸酯，脱水山梨醇单油酸酯，脱水山梨醇单月桂酸酯，聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单月桂酸酯，及聚氧乙烯(20)脱水山梨醇单油酸酯，油基聚氧乙烯(2)醚，硬脂酰聚氧乙烯(2)醚，月桂基聚氧乙烯(4)醚，甘油酯，及蔗糖酯。利用McCutcheon’s Emulsifier and Detergents(McPublishing Co.，GlenRock，New Jersey)其它合适的非离子洗涤剂能够轻易的被识别，其内容全文并入作为参考。

如嵌段共聚物包括，但不限于，聚氧乙烯和聚氧丙烯的二嵌段和三嵌段共聚物，包括泊洛沙姆188(Pluronic^TMF-68)，泊洛沙姆407(Pluronic^TMF-127)，和泊洛沙姆338。

如离子表面活性剂包括，但不限于，磺基琥珀酸钠，和脂肪酸皂。

如氨基酸包括，但不限于，疏水性氨基酸。已知在本领域氨基酸作为药学可接受的赋形剂应用是在国际专利WO 95/3174，WO96/32096，及WO 96/32149中公开的，其内容全文并入作为参考。

糖的例子包括，但不限于，单糖，二糖，和多糖。例如，单糖如右旋糖(无水的和一水合物)，半乳糖，甘露醇，D-甘露糖，山梨醇，山梨糖等等；二糖如乳糖，麦芽糖，蔗糖，海藻糖，等等；三糖如棉子糖等等；及其他糖如淀粉(羟乙基淀粉)，环糊精和麦芽糖糊精。

缓冲液的例子包括，但不限于，tris或柠檬酸盐。

酸的例子包括，但不限于，羧酸。

盐的例子包括，但不限于，氯化钠，羧酸盐(如，柠檬酸钠盐，抗坏血酸钠盐，葡糖酸镁，葡糖酸钠，盐酸基丁三醇(tromethaminehydrochloride)，等)，碳酸铵，乙酸铵，氯化铵，等等。

有机固体的例子包括，但不限于，樟脑，等等。

本发明一个或多个实施方案的药物组合物可以包括生物相容的，如生物可降解聚合物，共聚物，或共混物或它们的其他组合。在这方面应用的聚合物包括聚交酯，聚交酯-乙交酯，环糊精，聚丙烯酸酯，甲基纤维素，羧甲基纤维素，聚乙烯醇，聚酐，聚内酰胺，聚乙烯吡咯烷酮，多糖(葡聚糖，淀粉，壳多糖，脱乙酰壳多糖，等)，透明质酸，蛋白质(白蛋白，骨胶原，明胶，等。)。本领域技术人员会明白，通过选择适当的聚合物，组合物的递送效率和/或分散的稳定性会满足活性制剂效果的最优化。

除了上面提到的药学可接受的赋形剂，为了提高颗粒状物的硬度，产率，发射剂量和沉积，半衰期和病人接受度，期望向药物组合物中添加其他的药学可接受的赋形剂。这些任选的药学可接受的赋形剂包括，但不限于：着色剂，矫味剂，缓冲剂，吸湿剂，抗氧化剂，及化学稳定剂。进一步，不同的药学可接受的赋形剂可以用以提供结构和形式于颗粒状物组合物(如，胶乳粒子)。在这方面，可以理解为硬化成分可以利用后生产方法如选择性的溶剂提取方法去除。

药物组合物也可以包括药学可接受的赋形剂的混合物。例如，碳水化合物和氨基酸混合物在本发明的范围之内。

本发明一个或多个实施方案的组合物可以呈现多种形式，如干粉末，胶囊，片剂，重新组成的粉末，悬浮液，或包含非水相的分散剂，如发射剂(如，含氯氟烃，氢氟烷烃(hydrofluoroalkane))。干粉末的含水量可以小于约15wt％，如小于约10wt％，小于约5wt％，小于约2wt％，小于约1wt％，或小于约0.5wt％。在国际专利WO 95/24183，WO 96/32149，WO 99/16419，WO 99/16420，及WO 99/16422中描述了这样的粉末，其内容全文并入作为参考。

本发明一个或多个实施方案涉及两性霉素B的均匀组合物，所述的两性霉素B被引入基质材料中，有少量的，如果有的话，未混合的两性霉素B粒子。例如，组合物的至少约40wt％，至少约50wt％，至少约60wt％，至少约70wt％，至少约80wt％，至少约90wt％，至少约95wt％，或至少约99wt％，可以包括含有两性霉素B和基质材料的颗粒状物。

然而在某种情况下，为了提供一种期望的给药两性霉素B的药物动力学分布曲线会想要不均匀的组合物，并且在这些情况中，会用到两性霉素B的大粒子(如，质量中位直径从约3μm到约10μm，或者更大)。

均匀的组合物可以包括两性霉素B的小粒子。具有小于约3μm的质量中位直径的两性霉素B粒子，如上面论述的，可以是分散的并且便于混合在基质材料中的两性霉素B的均匀组合物的生产。已经发现如果两性霉素B的质量中位直径大于约3μm，结果会是包含混合在基质材料中的两性霉素B和包含没有任何基质材料的两性霉素B的粒子的不均匀组合物。这些不均匀的组合物通常具有差的粉末流动性和分散性，结果导致剂量的变化。由两性霉素B的大粒子制成的组合物也会对大鼠产生毒性。值得注意的是，然而，不均匀分布可以通过雾化过程来改善，该过程可以为两性霉素B的大粒子提供均匀分布。

由上面看来，在某些方案中，药物组合物具有高均匀性，两性霉素B有高的结晶度，并且制成组合物的两性霉素B的尺寸小。均匀性，结晶度，和粒子尺寸可以为上面论述的那些中的任一个。例如，在一个方案中，结晶度至少约50％，并且质量中位直径小于约3μm。在另一个方案中，结晶度至少约70％，并且质量中位直径小于约2.8μm。在又一个方案中，结晶度至少约80％，并且质量中位直径小于约2.6μm。在还有一个方案中，结晶度至少约90％，并且质量中位直径小于约2.4μm。

然而，在某种情况下，均匀性高，并且结晶度的一个或多个及两性霉素B超出上述论述的范围。或者，在某种情况下，均匀性低，并且结晶度的一个或多个及两性霉素B在上述论述的范围之内。

在一方案中，药物组合物包括在磷脂基质中混合的两性霉素B。药物组合物可包括磷脂基质，所述的磷脂基质引入活性剂并且是中空和/或多孔微结构的粒子的形式，如在上述的国际专利WO 99/16419，WO 99/16420，WO 99/16422，WO 01/85136，和WO 01/85137中描述过，其内容全文并入作为参考。在向肺递送两性霉素B时应用中空和/或多孔微结构，因为在使用者的吸入期间中空和/或多孔微结构的密度，尺寸，和空气动力学性能促进向肺深处的运输。而且，以磷脂为基质的中空和/或多孔微结构减少了颗粒状物之间的吸引力，使药物组合物在气雾化过程中容易分散并且增加了药物组合物的流动性使其易于操作。

在一方案中，药物组合物由中空和/或多孔微结构组成，所述的微结构的松密度小于约1.0g/cm³，小于约0.5g/cm³，小于约0.3g/cm³，小于约0.2g/cm³，或小于约0.1g/cm³。通过提供低松密度的粒子或颗粒状物，能够装入单位剂量容器中的粉末的最小粉末质量是减少的，其排除了对载体粒子的需要。也就是，本发明一个或多个实施方案的相对低密度的粉末为可以相对低剂量的药物化合物的可重复给药而提供。此外，因为大的载体颗粒状物，如乳糖颗粒状物，由于其尺寸的原因会碰撞喉管和上部气道，所以载体粒子的排除会潜在地降低喉管的沉积和任何“卡住”效果或咳嗽。

在一方案中，药物组合物是干粉末的形式并且装入单位剂量的容器内，该容器插入或接近气使药物组合物雾化的单位剂量的气雾化仪器。该方案有助于干粉末形式在其单位剂量容器内长期稳定储存。在一些例子中，本发明一个或多个实施方案的药物组合物至少已经稳定储存约2年。在一些方案中，不需制冷就可以获得稳定性。在另一些方案中，在低温下，如，在2-8℃，可以用于延长稳定储存。在许多方案中，储存稳定性允许以外部粉末来源气雾化。

本文中揭示的药物组合物可以理解为包括一种结构的基质，所述的基质显示、限定或包含空隙，孔隙，缺陷，空心，空间，间隙式空间，孔径，穿孔或空穴。穿孔微结构的绝对形状(相对于表面几何形状)一般不严格要求并且所有提供期望特性的构型中的任何一个预期在本发明范围之内。相应地，一些实施方案包括近似的球形。然而，也包括塌陷的，变形的或破裂的粒子。

在一个方案中，两性霉素B被引入到形成分散颗粒状物的基质中，并且药物组合物包括分散颗粒状物的多数。所述的分散颗粒状物具有所需尺寸，所以可以有效地给药和/或应用在需要的地方。例如，对于气雾化的药物组合物，颗粒状物具有这样的尺寸，该尺寸允许颗粒状物气雾化并且在使用者吸入时递送到使用者的呼吸道。

在一些方案中，药物组合物包括颗粒状物，所述的颗粒状物的质量中位直径小于约20μm，如小于约10μm，小于约7μm，或小于约5μm。所述的颗粒状物的空气动力学质量中位直径为约1μm到约6μm，如约1.5μm到约5μm，或约2μm到约4μm。如果颗粒状物太大，已经发现在大鼠体内有毒性。如果颗粒状物太小，较大比例的颗粒状物会被呼出。

如上所述的，在一些实施方案中，药物组合物包括具有小的空气动力学质量中位直径的颗粒状物，所述的药物组合物有高的均匀性，两性霉素B具有高的结晶度，并且制成药物组合物的两性霉素B粒子的尺寸小。空气动力学质量中位直径，均匀度，结晶度，和两性霉素B粒子的尺寸可以为上面论述中的任一值。例如，在一个方案中，空气动力学质量中位直径小于约20μm，药物组合物的至少约60wt％包括两性霉素B和基质材料，结晶度至少约50％，并且质量中位直径小于约3μm。在另一个方案中，空气动力学质量中位直径小于约10μm，药物组合物的至少约70wt％包括两性霉素B和基质材料，结晶度至少约70％，并且质量中位直径小于约2.8μm。在又一个方案中，空气动力学质量中位直径小于约7μm，药物组合物的至少约80wt％包括两性霉素B和基质材料，结晶度至少约80％，并且质量中位直径小于约2.6μm。还有另一个方案，空气动力学质量中位直径小于约7μm，药物组合物的至少约90wt％包括两性霉素B和基质材料，结晶度至少约90％，并且质量中位直径小于约2.4μm。

然而，在某些情况下，空气动力学质量中位直径小并且均匀性，结晶度，及两性霉素B粒子的尺寸的一个或多个超出上面论述的范围。类似地，在其他情况下，空气动力学质量中位直径大并且均匀性，结晶度，及两性霉素B粒子的尺寸的一个或多个在上面论述的范围之内。

如上所述的，吸入大鼠体内的两性霉素B的颗粒状物或粒子毒性取决于多种因素。虽然不期望受理论束缚，这些因素看起来似乎包括，但不限于，两性霉素B的结晶度，用于组成吸入的颗粒状物或粒子的两性霉素B粒子的尺寸，吸入颗粒状物的均匀性，及吸入的粒子或颗粒状物的尺寸。

基质材料可以包括疏水性的或部分疏水性的材料。例如，基质材料可以包括脂类，如磷脂，和/或疏水性氨基酸，如亮氨酸或三-亮氨酸。磷脂基质的例子在国际专利WO 99/16419，WO 99/16420，WO99/16422，WO 01/85136，和WO 01/85137及美国专利申请5,874,064；5,855,913；5,985,309；和6,503,480；及在2003年12月31日提出的共同未定的和共同拥有的美国专利申请10/750,934中论述，其内容全文并入作为参考。疏水性氨基酸基质的例子在美国专利6,372,258和6,358,530及在2001年12月21日提出的美国专利申请10/032,239中论述，其内容全文并入作为参考。

当磷脂用作基质材料时，药物组合物也可以包括多价阳离子，如在国际专利WO 01/85136和WO 01/85137中揭示，其内容全文并入作为参考。

根据另一个实施方案，包含活性剂的组合物的释放动力学是被控制的。根据一个或多个实施方案，本发明的组合物提供活性剂的直接释放(immediate release)。或者，为了达到抗真菌剂的期望的释放速度，本发明其他实施方案的组合物可以作为引入到基质材料中的活性剂和未引入的活性剂的非均匀混合物的形式被供应。根据这个实施方案，当呼吸道给药时抗真菌剂在直接释放应用中有实用性，所述的抗真菌剂是利用本发明一个或多个实施方案的基于乳化的生产过程配制的。(a)低密度多孔粉末的高的比表面积；(b)其中引入的药物结晶的小的尺寸，及(c)颗粒状物的低表面能量可以促进迅速释放。

或者，为了影响活性剂的延迟释放，期望设计颗粒状物状基质。尤其想要活性剂从肺中迅速清除或持续释放时。例如，磷脂分子的相态行为性质受他们的化学结构性质和/或喷雾干燥原料中的制备方法和干燥条件和其他被利用的组合物成分影响。关于在一个小的单片的囊(SUV)或多片的囊(MLV)中增溶的活性剂的喷雾干燥，活性剂被封装在多个双层中并且经过延迟的时间后被释放。

相比之下，按照本文中所讨论的包括乳化液滴和分散的或溶解的活性剂的原料的喷雾干燥产生有较小的长程序的磷脂基质，因此便于快速释放。虽然不受任何特殊理论的束缚，可以认为这在某种程度上是因为活性剂从来没有正式地装封在磷脂中，而且因为一开始磷脂就作为单层(就脂质体来说不是双层)存在于乳化液滴表面。通过本发明一个或多个实施方案中的乳化为基础的生产过程制备的喷雾干燥颗粒状物，通常具有高的无序度。同样，所述的喷雾干燥颗粒状物典型地具有低的表面能量，已经发现喷雾干燥的DSPC颗粒状物(用反相气相色谱法测定)的值低至20mN/m。处理喷雾干燥磷脂颗粒状物的小角度X射线散射仪(SAXS)对脂类进行的研究也显示高的无序度，散射峰模糊，并且在一些情况下长度刻度只延长至一些最近的邻刻度之外。

值得注意的是，为了获得持续的活性剂释放，具有高的凝胶至液态结晶相变温度的基质本身并不足够。为了获得持续的释放也要求双层结构具有充分的序。为了促进快速释放可能用到高孔隙率(高表面积)，和药物和磷脂之间极小的相互作用的乳化剂系统。药物组合物的制备过程也可以包括加入其它成分(如，小聚合物例如Pluronic F-68；糖，盐，水溶助长剂)以打破双层结构。

为了获得持续释放，应用到双层形式的磷脂的引入，尤其当活性剂装封在里面时。在这种情况下，借助于二价抗衡离子或胆甾醇的引入，磷脂T_m的增加可以提供益处。同样，借助于离子对(带负电的活性剂+硬脂胺(steaylamine)，带正电的活性剂+磷脂酰甘油)的生成，磷脂和药物物质之间的相互作用的增加倾向于降低溶解速率。如果活性是两亲的，表面活性剂/表面活性剂的相互作用也可以减慢活性溶解。

二价抗衡离子(如，钙或镁离子)添加到长链饱和卵磷脂中，结果在两性离子前端的带负电的磷脂部分和带正电的金属离子之间产生相互作用。这导致了水的水合取代和磷脂脂类前端和酰基链的缩合。进一步，这导致了磷脂T_m的增加。前端水合的降低对和水接触的喷雾干燥磷脂粒子的分散性质的影响意义深远。通过水相，借助分子扩散，完全氢化的卵磷脂分子非常缓慢地扩散到分散的结晶中。这个过程非常缓慢由于磷脂在水中溶解非常缓慢(对于DPPC约10^-10mol/L)。现有技术试图克服这一现象，包括在磷脂存在下均匀化结晶。在这种情况下，均匀化结晶的高度剪切和曲率半径有利于磷脂在结晶体上的涂布。相反的，当与水相接触时本发明一个或多个实施方案的“干”磷脂粉末能快速分散，因此涂布分散的晶体而不需要应用高能量。

例如，重构后，喷雾干燥的DSPC/Ca混合物在气/水界面的表面张力在测定时迅速下降至平衡常数(约20mN/m)。相反地，经过数小时的时间DSPC脂质体表面张力(约50mN/m)下降的非常少，并且很可能这种降低是因为水解降解产物如磷脂中游离脂肪酸的存在。单-末端脂肪酸比疏水性母体化合物能更快地分散到气/水界面。因此向卵磷脂中添加钙离子能促进结晶药物的更快装封并且需要更低的能量。

在另一方案中，药物组合物包括低密度颗粒状物，该颗粒状物通过共同喷雾干燥纳米结晶和水包全氟化碳的乳剂获得。纳米结晶可以通过沉淀方法制备并且可以，如，尺寸在约45μm到约80μm之间变化。例如，全氟化碳的例子包括，但不限于，全氟己烷，全氟辛基溴，全氟辛基乙烷，全氟萘烷，全氟丁基乙烷。

此处论述的颗粒状物组合物优先选择“干”的状态。也就是，在一个或多个实施方案中，颗粒状物具有某一含水量，该含量允许粉末在室温或低温贮存过程中保持化学和物理稳定性并且保持分散。关于这一点，原始颗粒状物的尺寸，含量，纯度，和空气动力学颗粒状物的尺寸分布变化很小或没有变化。

同样地，颗粒状物的含水量一般小于约10wt％，如小于约6wt％，小于约3wt％，或小于约1wt％。含水量，至少部分地，受组合物的支配并且受应用的操作条件控制，如，进口温度，进料浓度，泵的速率，和发泡剂的类型，浓度和后干燥。结合水的减少对磷脂基粉末的分散性和流动性产生显著的提高，引起粉状的肺表面活性剂或颗粒状物组合物可能高效率递送，该组合物包括分散在磷脂中的活性剂。提高了的分散性允许使用简单的被动DPI装置有效递送这些粉末。

药物组合物的另一方案包括颗粒状物组合物，该颗粒状物组合物可以包括，部分或全部被涂布的并延长接触点的保留时间或增强通过粘液的渗透的带电物质。例如，已知阴离子电荷有利于粘膜粘着然而阳离子电荷可以用于结合形成的颗粒状物与带负电的生物活性剂如遗传物质。电荷可以通过聚阴离子或聚阳离子物质如聚丙烯酸，多赖氨酸，聚乳酸，和聚氨基葡糖的组合或并入而产生。

这些单位剂量的药物组合物可以包括容器。容器的例子包括，但不限于，囊，泡，小瓶，安瓿，或由金属，聚合物(如，塑料，弹性体)，玻璃，等等制成的容器密封系统。

容器可以插入到气雾化装置中。容器可以具有合适的形状，尺寸，和材料以容纳药物组合物并且在使用条件下提供药物组合物。例如，胶囊或泡可以包括壁，所述的壁的组成物质不和药物组合物发生不良反应。另外，壁还包括在药物组合物被气雾化时允许胶囊打开的物质。在一个方案中，壁包括凝胶，羟丙基甲基纤维素(HPMC)，聚乙二醇和HPMC的复合物，羟丙基纤维素，琼脂，铝箔，等等的一种或多种。另一个方案中，胶囊可以包括可伸缩连接的部分，如在美国专利4,247,066中论述的，其内容全文并入作为参考。胶囊的尺寸可以选择以便充分容纳药物组合物的剂量。尺寸通常从5号到000号且分别地外直径从约4.91mm到约9.97mm，高度从约11.10mm到约26.14mm，并且容积从约0.13mL到约1.37mL。合适的胶囊可以从市场获得，例如日本Nara的Shionogi Qualicaps Co.，South Carolina Greenwood的Capsugel。装填后，上面的部分放置到下面的部分上制成胶囊形状并且胶囊内装有粉末，如在美国专利4,846,876和6,357,490，和国际专利WO 00/07572中论述的，其内容全文并入作为参考。

在把上面的部分放置到下面的部分上后，胶囊可以任意包箍。

在一方案中，为了使包含结晶两性霉素B的药物组合物在病人吸入时间内递送到病人的肺部，该组合物是可气雾化的。在这种方式中，药物组合物中的两性霉素B直接递送到感染部位。这优于系统给药。因为活性剂常常有肾毒性或其他毒性，一般优先选择最少的系统暴露。因此，递送到肺部的活性剂的量优选限于最小的药物有效剂量。通过直接经肺给药活性剂，较大的量可以递送到需要治疗的部位同时显著减少系统暴露。进一步，通过主要地递送结晶形式的两性霉素B，感染部位的两性霉素B的期望浓度能维持一段时间而且肺内毒性作用发生的可能性降低。

本发明一个或多个实施方案的药物组合物缺少味道。从这方面考虑，虽然矫味剂可以任选地包含在组合物中，但是缺少味道的组合物甚至不需要矫味剂。

本发明一个或多个实施方案的粒子，颗粒状物，和组合物可以通过本领域内熟练技术人员已知的和可获得的不同方法和技术中的任一种制备。

如上所述的，两性霉素B的结晶度影响性能。熟练技术人员可以通过调整结晶条件来调整两性霉素B的结晶度。例如，结晶度可以通过改变溶剂，两性霉素B的浓度，pH，pH调整速率，纯度水平，温度，冷却/加热速率，退火时间，所用的晶粒，容积加入速率，搅拌速率，共溶剂类型/浓度，和结晶过程保留的时间而进行调整。

或者，结晶度可以通过重结晶来调整。重结晶技术在本领域内是已知的。典型的重结晶技术在下面论述。

重结晶过程中，两性霉素B优选避光保护。两性霉素B可以溶解在溶剂中。溶剂的例子包括溶剂系统，如包括甲醇，二甲基甲酰胺，和柠檬酸单水合物的一种溶剂。一旦固体基本上溶解，任选地过滤溶液。

过滤后，添加溶剂如二氯甲烷到滤液中。然后在搅拌条件下加入冷水。

通过调整溶液的pH，可以得到两性霉素B的沉淀，如pH调至～7，通过加碱，如三乙醇胺。虽然不希望受理论的束缚，但沉淀速率影响结晶度。较慢的沉淀通常产生较高的结晶度。

因此，为了得到较多的无定形两性霉素B，可以快速加入碱，例如在搅拌条件下一次性倾入。然后分离相应得到的无定形两性霉素B。例如，浆料离心后倾析出上层清液，可以得到无定形两性霉素B。所得产物可以洗涤，通过将滤饼重新悬浮在如冷甲醇中，接着离心和倾析。洗涤过程可以重复或可以包括附加洗涤步骤，如，使用室温的丙酮。

为了获得较多的结晶两性霉素B，可以缓慢加入碱，如，在搅拌条件下一滴一滴加入。然后加热产生的浆料，如，在44-46℃加热90分钟接着冷却，如，先在室温冷却30分钟接着在2-8℃冷却60分钟。然后准备分离结晶形式。例如，可以用真空过滤得到两性霉素B的结晶。所得产物可以洗涤，如，先用40％的冷甲醇接着用室温的丙酮。

一旦两性霉素B分离和洗涤后，可以进行干燥。例如，两性霉素B可以真空干燥，如，产物在避光保护条件下在室温真空干燥1-3天。为了促进残留溶剂的蒸发，在干燥过程中，可以任选地粉碎较大的块状，如通过使用抹刀。

如上所述的，通常想要较小的两性霉素B粒子的尺寸。许多情况下，块状形式的两性霉素B具有大于约3.0μm的质量中位直径，并且在许多情况下，大于约10μm。相应地，本发明一个或多个实施方案中，为了使质量中位直径减低到小于约3μm，块状两性霉素B在使用之前要接受尺寸减小加工。本领域内合适的尺寸减小加工是已知的并且包括超临界流体加工方法，该方法在国际专利WO 95/01221，WO96/00610，和WO 98/36825中论述，其内容全文并入作为参考，低温冷冻粉碎，湿法粉碎，超声，高压均化，微流体化，结晶法，和在美国专利5,858,410中论述的方法，其内容全文并入作为参考。

本发明一个或多个实施方案中，制备药物组合物的方法包括提供作为起始物质的两性霉素B的粒子，其中至少约50％的两性霉素B为结晶形。在其他方案中，至少约60％，至少约70％，至少约80％，至少约90％，至少约95％，或至少约99％的两性霉素B为结晶形。起始物质的两性霉素B粒子可以混悬在液态的任选地包括一种或多种药学可接受的赋性剂的原料中。然后干燥混悬的原料，如利用喷雾干燥，以制备包含结晶两性霉素B和一种或多种药学可接受的赋性剂的颗粒状物。在一个方案中，在制备的包含两性霉素B的颗粒状物中，制备的颗粒状物中的至少约70％的两性霉素B为结晶形。在另一方案中，制备的颗粒状物中的至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，或至少约99％的两性霉素B为结晶形。

在一个方案中，测定两性霉素B粒子的起始物质的结晶度。例如，在加入到原料中之前，测定物质的X-射线粉末衍射图。从这些数据，可以确定结晶度。或者，红外光谱，拉曼光谱，动力学蒸汽附着，溶液量热法热，或等温微观量热法可以用于测定结晶度，这些会被本领域技术人员承认。如果结晶度高于预定量，如高于一定百分比，那末起始物质被应用。如果结晶度低于预定量，起始物质可能，如，废弃或重结晶。

在其他方案中，测定两性霉素B粒子的无定形度。因此，一个方案中，制备药物组合物的方法包括提供作为起始物质的两性霉素B的粒子，其中小于约50％的两性霉素B为无定形。在其他方案中，小于约40％，小于约30％，小于约20％，小于约10％，小于约5％，或小于约1％的两性霉素B为无定形。起始物质的两性霉素B粒子可以混悬在液态的任选地包括一种或多种药学可接受的赋性剂的原料中。然后干燥混悬的原料，如利用喷雾干燥，以制备包含结晶两性霉素B和一种或多种药学可接受的赋性剂的颗粒状物。在一个方案中，在制备的包含两性霉素B的颗粒状物中，制备的颗粒状物中的至少约70％的两性霉素B为结晶形。在另一方案中，制备的颗粒状物中的至少约80％，至少约85％，至少约90％，至少约95％，或至少约99％的两性霉素B为结晶形。

可以用已知的技术测定无定形度。例如，无定形度的测定可以利用红外光谱，拉曼光谱，动力学蒸汽附着，差示扫描量热法，等等。如果无定形度低于预定量之，如低于一定百分比，那末起始物质被应用。如果无定形度高于预定量，则起始物质可能废弃或重结晶。

在又一个方案中，重结晶工艺可作为制备工艺的以部分被进行，代替或包括了结晶度的测定。重结晶工艺通过将两性霉素B溶解在合适的溶剂，如乙醇或其他极性溶剂中完成，并且缓慢干燥该溶液以便生成结晶两性霉素B或者使结晶两性霉素B从溶液中沉淀出来。在一个方案中，超临界流体被同时用于分散和提取结晶物质，如在国际专利WO 95/01221，WO 96/00610和WO 99/36825中所述的，其内容全文并入作为参考。在另一个方案中，多区域喷雾干燥工艺可以用于制备结晶两性霉素B，如在国际WO 01/00312中所述的，其内容全文并入作为参考。

另一方案包括测定制备的粒子或颗粒状物的结晶度，所述的粒子或颗粒状物包括结晶两性霉素B和任选的药学可接受的赋性剂和/或其他活性组分。如果制备的粒子或颗粒状物的结晶度高于预定百分比，如大于约70％，大于约80％，大于约90％，大于约95％，或大于约99％，那末制备的粒子或颗粒状物可以释放用于对病人给药。如果结晶度低于预定量，那末制备的粒子或颗粒状物被废弃或重新制备。

可以利用多种已知的技术制备药物组合物。例如，组合物可以用喷雾干燥，冷冻干燥，粉碎(如，湿法粉碎，干法粉碎)，等等的方法制备。

在喷雾干燥中，要进行喷雾干燥的制剂或原料能够为任一溶液，粗的混悬液，浆料，胶态分散液，或浆糊，其可以利用所选的喷雾干燥仪器雾化。在难溶解的情况时，原料可以包括上述的混悬液。或者，在原料中也可以用到稀释的溶液和/或一种或多种溶剂。在一个或多个实施方案中，原料包括胶态系统如乳液，反相乳液，微乳液，多相乳液，颗粒状物分散液，或浆料。

一个方案中，两性霉素B和基质材料被添加到含水的原料中制备原料溶液，混悬液，或乳液。然后喷雾干燥所述的原料制备包含基质物质和结晶两性霉素B的颗粒状物。本领域已知的合适的喷雾干燥工艺如国际专利WO 99/16419和美国专利6,077,543；6,051,256；6,001,336；5,985,248；和5,976,547中论述的，其内容全文并入作为参考。

无论选择何种组分，颗粒状物制备的第一步典型地包括原料的制备。如果以磷脂为基质的颗粒状物打算用作两性霉素B的载体，那末选择的活性剂可以加入到一种液体如水中以制备浓混悬液。两性霉素B的浓度和任一活性剂的浓度典型地取决于最终粉末中需要活性剂的量和应用的递送装置(如，用于细粒剂量的计量剂量吸入器(MDI)或干粉末吸入器(DPI))的效率。

任一附加的活性剂可以混合在单一的原料制剂中并且喷雾干燥以提供单一的包括多种活性剂的药物组合物。相反地，单独的活性剂可以被加入到单独的原料中，并且分别喷雾干燥以提供具有不同组合物的多个药物组合物。这些单独物质可以以任何所需比例被加入到混悬的媒介或干粉末分散室中并且置于上述的气雾剂递送系统中。

多价阳离子可以和混有磷脂乳液的两性霉素B混悬液混合，或在单独的容器中制备的水包油乳液混合。两性霉素B也可以在乳液中直接分散。

例如，多价阳离子和磷脂可以在热的蒸馏水(如，70℃)中均化，利用合适的高剪切机械搅拌器(如Uitra-Turrax model T-25搅拌器)在8000rpm混合2到5分钟。典型地，5至25g的碳氟化合物在混合过程中一滴一滴地加入到分散的表面活性剂的溶液中。然后利用高压搅拌器处理在水乳液中产生的包含多价阳离子的全氟化碳以降低颗粒状物的尺寸。典型地，在12,000到18,000PSI条件下，乳液被分别处理五次，并且保持温度在约50℃到约80℃。

当多价阳离子和水包油型乳液混合时，利用发泡剂可以提高喷雾干燥的药物组合物的分散稳定性和分散度，所述的发泡剂在国际专利WO 99/16419中论述，其内容全文并入作为参考。这个过程制备乳液，所述的乳液任意地被引入的表面活性剂稳定，所述的表面活性剂典型地包括分散在连续水相中的不与水混溶的发泡剂亚微小滴。发泡剂可以为氟化化合物(如，全氟己烷，全氟辛基溴，全氟辛基乙烷，全氟萘烷，全氟丁基乙烷)，在喷雾干燥过程中发泡剂蒸发，通常留下中空的，多孔的空气动力学的轻质颗粒状物。其它合适的液体发泡剂包括非氟化的油，氯仿，

碳氟化合物，乙酸乙酯，醇，烃，氮气，和二氧化碳气体。发泡剂可以用磷脂乳化。

虽然利用上述的发泡剂可以制备药物组合物，可以知道，在某种情况下，不需要添加发泡剂并且两性霉素B和/或药学可接受的赋形剂及表面活性剂的水相分散体可以直接喷雾干燥。在这样的情况下，药物组合物可具有一定的物理化学性质(如，高结晶度，高熔点，表面活性，等)，这使得药物组合物适合于这种技术的应用。

如需要的，辅助表面活性剂如泊洛沙姆188或司盘80可以分散到这种附加的溶液里面。而且，也可以添加药学可接受的赋形剂如糖和淀粉。

然后将原料送入喷雾干燥器里。典型地，原料被喷射到过滤的热空气气流里面，使溶剂蒸发并且将干燥的产品递送到收集器。用过的空气和溶剂一起排出。可以改良市售的由Büchi Ltd.或Niro Corp.制造的喷雾干燥仪器用于制备药物组合物。适于制备本发明一个或多个实施方案的干粉末的喷雾干燥方法和系统的例子，在美国专利6,077,543；6,051,256；6,001,336；5,985,248；和5,976,574中公开，其内容全文并入作为参考。

为了制备要求的颗粒状物尺寸，和制得的干燥颗粒状物的产率，可以调整喷雾干燥仪器的操作条件如进口和出口温度，进料速率，气雾化压力，干空气的流速，喷嘴的构造。此处论述的合适的仪器和生产条件的选择在熟练技术人员的范围之内并且可在恰当的实验条件下完成。典型的设置如下：空气进口温度在约60℃至约170℃之间；空气出口温度在约40℃至约120℃之间；进料速率在约3mL/min至15mL/min之间；抽出空气的速率为约300L/min；并且雾化空气速率在约25L/min至约50L/min之间。当然，这些设定会随着所用设备的类型而变化。任一事件中，这些方法及其相似方法的应用允许空气动力学的轻粒子的制备，所述的粒子具有合适的直径使气雾剂沉淀到肺中。

中空的和/或多孔的微结构可以通过喷雾干燥制备，如在国际专利WO 99/16419中揭示，其内容全文并入作为参考。喷雾干燥过程能够形成包含颗粒状物的药物组合物，所述的颗粒状物具有相对薄的多孔壁，且该壁限定大的内部空洞。在生产或解聚过程中喷雾干燥制备的颗粒状物不易于破裂，这是喷雾干燥方法优于其它过程的方面。

本发明一个或多个实施方案中应用的药物组合物可替换地通过冻干制备。冻干是冷冻干燥过程，在此过程中水分在冷冻后从组合物中蒸发。因为在水溶液中相对不稳定的生物制品和药品，不可以暴露在高温度下进行干燥，因此通常采用冻干工艺干燥，然后在干燥的状态储存，此状态下稳定性几乎没有问题。根据本发明一个或多个实施方案，这样的技术尤其适用于药物组合物中并入肽，蛋白质，遗传物质，和其他天然的或合成的大分子而不损害生理活性。包括细小的泡沫状结构的冻干饼可以用本领域已知的微粉化以便提供所需尺寸的颗粒状物。

本发明一个或多个实施方案的组合物可以通过已知的技术给药，如吸入，口服，肌肉内给药，静脉内给药，气管内给药，腹膜内给药，皮下给药，及透皮给药。

例如，本发明一个或多个实施方案的药物组合物在肺和/或鼻部真菌感染的治疗上是有效的，包括辅助治疗。两性霉素B作为抗菌剂治疗肺和/或鼻部真菌感染和/或防止肺和/或鼻部真菌感染的发生。两性霉素B被认为可以减缓敏感真菌的生长和倍增。如果两性霉素B的浓度足够高，也可以破坏真菌。两性霉素B看起来好像作用于真菌的细胞膜，改变细胞膜的完整性。

一个方案中，当吸入组合物时，其弥漫进入鼻腔和/或肺的气道中以获得有效的两性霉素B浓度，如在感染的分泌物和肺组织中，包括上皮内衬液，肺泡巨噬细胞，和嗜中性粒细胞。此外，吸入给药的组合物的剂量典型地比通过其它路径给药的剂量要小得多并且达到相似的抗真菌效果要求的剂量要小得多，这归因于吸入的组合物直接到达真菌感染部位的有效靶向。

本发明一个或多个实施方案中，包含两性霉素B的药物组合物，其中主要量的两性霉素为结晶形，对需要它的患者经肺给药。例如，患者可能已经被诊断为肺和/或鼻部真菌感染或患者被确定对肺和/或鼻部真菌感染敏感。肺和/或鼻部真菌感染的例子包括曲霉病，芽生菌病，播散性念珠菌病，球孢子菌病，隐球菌病，组织胞浆菌病，毛霉菌病，孢子丝菌病，一些由假丝酵母(Candida spp.)引起的感染，和其它本领域已知的感染。

因此，本发明一个或多个实施方案的药物组合物可以用于广泛的患者的治疗和/或提供预防。在此所述的适宜于接受治疗和/预防的患者可以为任一需要它的哺乳类患者，优选的哺乳动物为人类。患者的例子包括，但不限于，儿童患者，成人患者，和老人患者。所述的患者通常有获得真菌感染的风险。

在一个方案中，本发明一个或多个实施方案的药物组合物用于肺和/或鼻部真菌感染的预防，如对于免疫损害的患者，例如，遭受癌症的化疗或放疗的患者，器官移植接受者，遭受对免疫系统不良影响的疾患的患者如HIV，或其它使患者易经受肺和/或鼻部真菌感染的疾患。药物组合物也用于主动的肺和/或鼻部真菌感染的治疗，如曲霉病(通常主要归因于烟曲霉(Aspergillus Fumigatus)，黄色曲霉(Aspergillusflavus)，黑色曲霉(Aspergillus niger)，构巢曲霉(Aspergillus nidulans)，和土曲霉(Aspergillus terreus))，球孢子菌病，组织胞浆菌病，芽生菌病，和其它真菌病原。

在一个方案中，包括两性霉素B的气雾化的药物组合物以一种方式给药于患者的肺和/或鼻腔，产生比霉菌的最小抑制浓度(MIC)大的两性霉素B浓度。所述的MIC定义为抑制霉菌生长的最低的两性霉素B的浓度。所述的MIC可以用精确的浓度值或浓度范围表示。按照本发明一个或多个实施方案的给药方式，给药足够量的药物组合物以获得两性霉素B的靶向肺浓度，所述的浓度应落在MIC值的范围内或高于特定的MIC值。另一方案中，两性霉素B的靶向肺浓度超出了MIC值的范围。另一方案中，两性霉素B的靶向肺浓度超出了MIC值范围的最小值。另一方案中，两性霉素B的靶向肺浓度超出了MIC值的范围并且至少为MIC值范围的最大值的约2倍，如至少约3倍，至少约4倍，或至少约5倍。两性霉素B的靶向肺浓度可以是靶向肺浓度范围。在一个方案中，两性霉素B的靶向肺浓度围绕一个值上下波动，该值约2倍至约20倍于MIC值范围的中间值，如约3倍至约10倍于MIC值范围的中间值，或约5倍于MIC值范围的中间值。在一个方案中，两性霉素B的浓度和MIC的测定基于上皮内衬液中的浓度。在另一个方案中，两性霉素B的浓度和MIC的测定基于肺实体组织中的浓度。如在此用到的，除非另作说明，当特定的MIC值被测定时，MIC值应被看作特定的值，并且当MIC值的范围被测定时，MIC值应被看作一个中间值。可以通过本领域已知的方法测定MIC。

在一个方案中，为了使靶浓度维持一段期望的时间段，给药包含两性霉素B的药物组合物。例如，已经确定，维持两性霉素B靶浓度为至少约2倍，如至少约3倍于测定的MIC值的给药途径在治疗和/或提供预防肺和/或鼻部真菌感染方面有效。进一步确定，通过使两性霉素B的浓度维持在肺靶浓度至少约1周的时间，如至少约2周，或至少约3周，某些患者的肺和/或鼻部真菌感染能够有效地治疗。此外或或者，在免疫损害的患者体内，通过使两性霉素B的浓度维持在肺靶浓度一段上述的时间，患者发生肺和/或鼻部真菌感染的可能性会减低。很多种情况下，治疗的时间和/或预防的时间可能延长至多于约1个月，多于约2个月，多于约3个月(如，17周)，多于约4个月，或更长。

在一个方案中，给药结晶两性霉素B的方法有利于包含两性霉素B的药物组合物的肺保留特性。从这个方面，本发明一个或多个实施方案涉及以下发现，即药物组合物的两性霉素B具有两性霉素B肺保留半衰期为(1)至少约10小时，如至少约15小时或至少约20小时，在肺上皮液中，通过支气管气泡灌洗测定，和/或(2)至少约1周，如至少约2周，在肺组织中，通过肺组织匀浆测定。

由于两性霉素B具有长的肺保留半衰期并且在本发明一个或多个实施方案中由于低剂量可以应用，系统暴露(两性霉素B的血液/血浆浓度)保持足够低以避免肾和/或肝毒性的状态。例如，5mg剂量的两性霉素B被吸入后，两性霉素B的血液水平保持低于约1000ng/mL，如低于约750ng/mL，低于约500ng/mL，低于约250ng/mL，低于约100ng/mL，低于约80ng/mL，低于约60ng/mL，或低于约40ng/mL。

关于长的保留半衰期，一旦达到两性霉素B的肺组织靶浓度，需要有限的剂量维持两性霉素B的肺组织浓度。例如，为了维持靶点处两性霉素B的浓度，可每周给药一次药物组合物。

为了维持两性霉素B的浓度在靶浓度之内，必需的给药剂量和频率取决于组合物和组合物中两性霉素B的浓度。在每一个给药方法内，为了使肺的两性霉素B的浓度维持在某一靶范围内，测定剂量和频率。在一个方案中，可以每周给药两性霉素B。在这个方案中，每周两性霉素B从约2mg到约75mg，如约2mg到约50mg，约4mg到约25mg，约5mg到约20mg，和约7mg到约10mg。

可以在单次吸入中或在多次吸入中给药。通过增加药物组合物的给药频率可以减小肺两性霉素B浓度的波动，或者通过减少药物组合物的给药频率可以增加肺两性霉素B浓度的波动。因此，本发明一个或多个实施方案的药物组合物可以给药从约每天三次到约每月一次，如约每天一次到约每两周一次，约每两天一次到约每周一次，和约每周一次。

在一个方案中，对易发生免疫损害的患者预防性地给药药物组合物。例如，将要遭受药物免疫抑制治疗的患者，如希望骨髓移植的患者，可以用包含结晶两性霉素B的药物组合物进行预防性治疗，以便降低在免疫损害危险期中肺和/或鼻部真菌感染发生的可能性。这个方案中，在患者发生免疫损害之前，两性霉素B给药产生充分的时间段，允许肺两性霉素B浓度在免疫损害开始时或之前达到靶浓度。当药量每周给药一次时，预防时间段可能从约1周到约20周，取决于组合物和剂量。然而，在本发明一个或多个实施方案中，达到有效预防的两性霉素B浓度的时间可以缩短，通过在预防时间段的开始提供高剂量的两性霉素B和/或通过在预防时间段的开始更频繁地给药剂量(如，负荷剂量)。这个方案中，在治疗的第一个星期给药附加剂量。例如，在第1，2，3和4天给药剂量(或者在第一天给药4个剂量)并且然后在此后每第七天给药。这一早期的负荷允许更迅速达到两性霉素B的肺靶浓度。相应地，获得有效预防的时间可以减少并且患者可以更迅速的开始他或她的免疫损害时间段。在某些例子中，患者在1-4天之后开始免疫损害，伴随肺和/或鼻部真菌感染发生的可能性的显著降低。此外或或者，在免疫抑制之前的时间段中给药的剂量可以高于维持两性霉素B肺靶浓度的剂量(如，负荷剂量)。例如，一个方案中，初始的剂量至少是一旦达到两性霉素B肺靶浓度时给的稳定状态剂量的约两倍。

因此，在一个方案中，先给药负荷剂量的两性霉素B随后给药维持剂量的两性霉素B。两性霉素B的负荷剂量可以在一个范围内变化，例如，从约5mg到约75mg，如从约10mg到约50mg，从约15mg到约40mg，或从约20mg到约30mg，如约25mg。在一个规律的基数上给药维持剂量，例如，每周，在负荷剂量之后。维持剂量典型从约2mg到约20mg，如从约3mg到约15mg或从约4mg到约10mg，如约5mg。

当治疗已经被诊断患有肺和/或鼻部真菌感染的患者时，也希望提供早期负荷。通过早期负荷，与没有给药早期负荷相比更加迅速达到两性霉素B的肺靶浓度。因此，肺和/或鼻部真菌感染的治疗可以更加快速地开始或被提供。

在一个特殊的治疗方法中，提供肺和/或鼻部真菌感染的预防给遭受免疫抑制治疗的患者。根据这个方案，在开始阶段每周患者至少约两次吸入期间，对患者给药至少约5mg，如从约5mg到约10mg，的气雾化的两性霉素B。在开始阶段，气雾化的两性霉素B每周至少给药约三次。在一个方案中，开始阶段可以持续约一周到约三周。紧接着开始阶段之后，不大频繁地对患者给药相同的剂量。例如气雾化的两性霉素B可以每两周给药一次，和更优选地每周给药一次。紧接着开始阶段之后或接近开始阶段的末期时，可以开始免疫损害的治疗。继续第二个阶段的给药，这样两性霉素B的肺靶浓度可以持续整个免疫损害的危险期间并且如果需要或者如果肺和/或鼻部真菌感染发生可以持续更长。此外或或者，开始阶段的给药剂量比第二个阶段的给药剂量大。例如，在开始阶段，可以给药约10mg到约20mg的两性霉素B并且在第二个阶段给药较小的量，如从约5mg到约10mg。任选地，可以提供第三个剂量阶段，在此阶段不大频繁地给药剂量和/或在比第二个阶段时更小的量。第三个剂量阶段可以在接近免疫损害阶段的末期开始，如当免疫抑制治疗结束或严重性降低时开始。

在一个方案中，两性霉素B的浓度维持一个时间段，该浓度高于测定的最小抑制浓度。如在2003年12月31日提出的美国专利申请10/751,342中论述，其内容全文并入作为参考。两性霉素B的肺靶浓度可以为上皮内衬液中的两性霉素B浓度，也可以为肺实体组织中的两性霉素B浓度，并且优选后者。在一些方案中，两性霉素B的肺靶浓度为至少约4μg/g，如至少约9μg/g，并且可以从约4.5μg/g到约20μg/g，如约9μg/g到约15μg/g。

对于预防，两性霉素B的每剂量的量可以为有效防止肺和/或鼻部真菌感染的量并且一般从约0.01mg/kg到约5.0mg/kg，如约0.4mg/kg到约4.0mg/kg，或约0.7mg/kg到约3.0mg/kg。

在任一有效防止肺被真菌感染的方法中，对患者给药药物组合物。例证的预防方法包括给药本文描述的抗霉菌的干粉末，经过1至6周的时间过程每周给药1至21次，紧接着，如果需要，之后每周给药一次或两次。

本发明一个实施例中给药气雾化的主要为结晶的两性霉素B的例子在图1中描述，它显示了预防用负荷。在这个方法中，已经测定两性霉素B的MIC值从约0.5μg/g到约4μg/g，如区块300所示。中间MIC值300’为约2.25μg/g。曲线301表示依据特定给药方法预测的两性霉素B的肺靶浓度。就如看到的，两性霉素B的浓度达到两性霉素B的肺靶浓度范围302，该范围在MIC范围300之上，并且至少是中间MIC值300’的两倍。在这个方案中，两性霉素B的肺靶浓度范围302从4μg/g到50μg/g，更优选地从4.5μg/g到20μg/g。在具体方法中显示，两性霉素B的肺靶浓度范围302从9μg/g到15μμg/g，并且围绕一个浓度值波动，该值为MIC范围300的中点值300’的约5倍。

依据本发明一个或多个实施方案，在两性霉素B的肺靶浓度范围内两性霉素B肺浓度的维持有利于有效治疗和/或预防肺和/或鼻部真菌感染并且比传统治疗安全。图2显示在依据本发明一个或多个实施方案给药两性霉素B期间产生的预测的两性霉素B血浆浓度400。如所看到的，两性霉素B浓度显著低于血浆两性霉素B最小毒性浓度401，因此增加了给药的安全性。

为了治疗患有肺和/或鼻部真菌感染的患者，给药的两性霉素B每单位剂量的量可以是有效治疗感染的量。治疗感染的两性霉素B的量通常比用于预防目的的量要高，并且可以典型地从约0.01mg/kg到约7.0mg/kg，如约0.2mg/kg到约6.0mg/kg，或约0.8mg/kg到约5.0mg/kg。在典型的治疗方法中，依据本发明一个或多个实施方案的抗霉菌粉末可以每天给药约1到约8次，优选约2次到约6次，经过从约7到约28天的过程。

在治疗呼吸道霉菌的疾患中，药物组合物被典型地给药，剂量为真菌病原引起的MIC的约3到约10倍或更多倍。通常给患者的两性霉素B的剂量从每天约2mg到约400mg，如从每天10mg到约200mg，取决于被治疗的疾患，患者的年龄和体重，等等。

虽然不希望受理论的束缚，通过提供依据本发明一个或多个实施方案的两性霉素B，两性霉素B的局部毒性能够被降低，通过减小两性霉素B的溶解速率和/或通过增加穿过肺的沉淀并且避免上部肺的局部毒性。因此，结晶两性霉素B的给药被认为比大部分为无定形形式的两性霉素B的给药更安全。进一步，由较小的两性霉素B的粒子制备的较小的吸入的颗粒状物的给药易于增加安全性。

当大剂量给药时，安全性成为比较重要的问题。因此，对于较高的剂量，建议使用较高结晶度的两性霉素B，较小的两性霉素B粒子尺寸，和较小的吸入粒子或颗粒状物尺寸。例如，对于大于50mg的剂量，熟练技术人员会想要使用一种组合物，该组合物中两性霉素B的结晶度至少为约90％，两性霉素B的质量中位直径小于约2.8μm，并且吸入粒子或颗粒状物具有小于约2.8μm的MMAD。

当包含两性霉素B的粒子或颗粒状物对肺给药，已经确定期望控制固体粒子或颗粒状物在肺中的溶解速率。当溶解速率不希望地高时，可溶性的，超分子聚集物在肺内局部部位形成。这些可溶性的聚集物在一些情况下对肺组织有毒性。然而，当溶解速率足够低时，可溶性的毒性聚集物生成的可能性也比较低。虽然不希望受理论的束缚，与在无定形形式的两性霉素B相比，提供包含结晶两性霉素B的固体粒子或颗粒状物被认为降低溶解速率。进一步，已经发现结晶形式的两性霉素B的肺浓度可以维持在一个浓度，该浓度足够高以提供肺和/或鼻部真菌感染的治疗效果并且显著降低或防止毒性可溶性聚集物的生成。

因此，在一个方案中，药物组合物以干粉末形式递送到患者的肺部。相应地，包含干粉末的药物组合物可以有效地递送到肺深处或另一个靶部位。干粉末形式的药物组合物包括具有一种尺寸的粒子或颗粒状物，选择该尺寸以允许穿透到肺气泡内。

在某些情况下，期望单次吸入递送单位剂量，如5mg剂量，或10mg或更多的两性霉素B到肺部。上面所述的磷脂中空和/或多孔的干燥粉末粒子允许约5mg的剂量或更多，经常多于约10mg，并且有时多于约25mg，在单次吸入中并且以一种有利的方法被递送。或者，一个剂量可以经过两次或多次吸入被递送。例如，10mg的剂量可以通过装载两个单位剂量，每个为5mg被递送，并且两个单位剂量被分别吸入。

分散剂或粉末状药物组合物可以利用气雾化装置给药。气雾化装置可为喷雾器，剂量计量吸入器，液体剂量滴注装置，或干粉末吸入器。粉末药物组合物可以被递送，通过国际专利WO 99/16420中描述的喷雾器，通过国际专利WO 99/16422中描述的剂量计量吸入器，通过国际专利WO 99/16421中描述的液体剂量滴注装置，和通过干粉末吸入器，所述的干粉末吸入器在2001年6月22日提出的美国专利申请09/888,311，在国际专利WO 99/16419，在国际专利WO 02/83220，在美国专利6,546,929及在2003年7月8日提出的美国专利申请10/616,448中被描述，其内容全文并入作为参考。因此，吸入器包括装粒子或颗粒状物和推进剂的容器，并且其中吸入器包括与容器内部连通的计量阀。推进剂可以为氢氟烷烃。

本发明一个或多个实施方案的药物组合物典型地提高了发射剂量效率。相应地，药物组合物的高剂量可以利用多种气雾化装置和技术被递送。

这些粉末的发射剂量(ED)可以大于约30％，如大于约40％，大于约50％，大于约60％，或大于约70％。

干粉末气雾化仪器的例子在图3A中示意地表示，该干粉末气雾化仪器在气雾化本发明一个或多个实施方案的药物组合物100时特别有用。气雾化仪器200包括限定室210的壳205，该室有一个或多个空气入口215和一个或多个空气出口220。室210是依一定的尺寸制造以便能够接收装有气雾化的包含两性霉素B的药物组合物的囊225。穿孔机械230包括在室210内部可运动的穿孔构件235。接近或邻近出口220是末端部分240，该末端部分依一定的尺寸和形状制造以便被使用者的嘴或鼻容纳，这样使用者可以通过在末端部分240的开口245吸入，该开口245和出口220相通。

干粉末气雾化仪器200利用通过室210的空气气流来气雾化囊225中的药物组合物。例如，图3A-3E说明了一个方案的气雾化仪器200的操作流程，通过进口215的空气气流用于气雾化药物组合物并且气雾化的药物组合物流经出口220，因此气雾化的药物组合物可以通过在末端部分240的开口245被递送到使用者。图3A表明干粉末气雾化仪器200在它的开始状态。囊225被放置在室210内并且药物组合物被装在囊225中。

为了使用气雾化仪器200，囊225中的药物组合物被暴露以允许被气雾化。在图3A-3E方案中，穿孔机械230在室210内被推进，通过对穿孔机械230施加力250。举例子，为了使穿孔机械230滑入壳205内，使用者按压穿孔机械230的表面255，这样穿孔构件235在室210内接触囊225，如图3B所示。通过不断施加力250，穿孔构件235被推进并且通过囊225的壁，如图3C所示。穿孔构件可以包括一个或多个尖端252以便有利于推进通过囊225的壁。然后穿孔机械230退回到图3D所示的位置，留下通过囊225壁的开口260以便暴露在囊225中的药物组合物。

然后空气或其他气体通过进口215流入，如图3E用箭头265所示。空气流使药物组合物气雾化。当使用者通过末端部分240吸入270时气雾化的药物组合物被递送到使用者的呼吸道。在一个方案中，空气气流265通过使用者的吸入270被产生。在另一个方案中，压缩的空气或其他气体被抽到入口215中以便产生气雾化空气流265。

在美国专利4,069,819和4,995,385中描述了干粉末气雾化仪器200的特殊方案，其内容全文并入作为参考。在这样的装置中，室210包括通常位于吸入方向的纵轴，并且囊225可纵向插入室210内，这样囊的纵轴可以与室210的纵轴平行。室210是依一定的尺寸制造以便能够以某种方式容纳装有药物组合物的囊225，该方式允许囊在室210内移动。进口215包括多个切线定位的缝。当使用者通过末端片吸入时，外部的空气被促使流过切线定位的缝。空气流在室210内产生漩涡空气流。漩涡空气流使囊225接触壁并且然后以某种方式在室210内移动，这导致药物组合物推出囊225并且输入到漩涡空气流中。这个方案在连续气雾化药物组合物的高剂量方面特别有效。一个方案中，囊225在室210内以某种方式旋转，此处囊的纵轴与室的纵轴保持在小于80度的角度，并且优选小于45度。囊225在室210内的运动可能由于室210的宽度小于囊225的长度引起的。在一个特定的方案中，室210包括在边缘终止的锥形部件。漩涡空气流在室210内时，囊225的前端接触并且停在壁上而且囊225的侧壁接触边缘并且沿着边缘滑动和/或旋转。囊的这种运动有效地强迫大量的药物组合物通过囊225后部的一个或多个开口260。

在另一个被动干粉末吸入器方案中，干粉末气雾化仪器200的构造不同于图3A-3E中显示的。例如，接收囊225的室210是依一定的尺寸和形状制造，这样囊225垂直于吸入的方向，如在美国专利3,991,761中所论述的，其全文内容并入作为参考。如在美国专利3,991,761中也论述了穿孔机械230可以穿孔囊225的两端。在另一个方案中，室以某种方式接收囊225，其中空气相通过囊225，如在美国专利4,388,931和5,619,985中论述的例子。在另一个方案中，药物组合物的气雾化可以通过加压的通过进口的空气流完成，如在美国专利5,458,135；5,785，049；和6,257,233中论述的例子，或推进剂，如在国际专利WO 00/72940和美国专利4,114,615中所论述的，其内容全文并入作为参考。干粉末吸入器的这些类型一般被归入主动干粉末吸入器类型。

此处揭示的药物组合物也可以经由气雾化对病人的肺和/或鼻空气通道给药，如用剂量计量吸入器。这种稳定制剂的应用为优越的剂量再现性提供了保证并且提高了肺部沉淀，如在国际专利WO 99/16422中论述的，其内容全文并入作为参考。MDI在本技术领域是众所皆知的并且能够用于两性霉素B的给药。呼吸触动的MDI，以及包括其他曾经，或将要提出的改进的类型的那些仪器，也可以和本发明一个或多个实施方案的药物组合物配合。

本技术领域已知的喷雾器能够很容易地应用在申请的分散体的给药方面，不需要不适当的试验研究。呼吸触动的喷雾器，以及包括其他曾经，或将要提出的改进的类型的那些仪器，也可以和稳定的分散体配合，其包括在本发明一个或多个实施方案范围中。除了上述的实施方案，本发明一个或多个方案的稳定分散体也可以和喷雾器共同使用，所述的喷雾器在国际专利99/16420中公开，其内容全文并入作为参考，为了提供一种气雾化药物，该药物可以对需要的患者的肺和/或鼻空气通道给药。

除了DPI，MDI和喷雾器，本发明一个或多个实施方案的稳定化分散体可以和液体剂量吸入器或LDI技术合用，例如，所述的LDI技术在国际专利WO 99/16421中论述，其内容全文并入作为参考。液体剂量吸入器包括稳定化分散体对肺的直接给药。从这方面考虑，生物活性化合物的直接肺和/经鼻给药在治疗疾病方面特别有效，尤其当肺疾病部位的差的血管循环降低静脉内药物递送的效果时。关于LDI，稳定化分散体优选地和部分液体通风或全体液体通风合用。而且，本发明一个或多个实施方案可以进一步包括在给药之前，给药过程中或给药之后向药物微观分散体中添加治疗有益量的生理可接受的气体(如一氧化氮或氧气)。

给药时间特殊地短。对于独立的胶囊(如，5mg剂量)，总的给药时间通常小于约1分钟。两个胶囊的剂量(如，10mg)通常用约1分钟。五个胶囊的剂量(如，25mg)用约3.5分钟。因此，给药时间应小于约5分钟，如小于约4分钟，小于约3分钟，小于约2分钟，或小于约1分钟。

参考下面的实施例可以更充分地理解前面的说明。这样的实施例，然而，仅仅是操作本发明一个或多个实施方案的方法的代表并且不应被认为是本发明范围的限制。

实施例1

两性霉素B的结晶度在不同批间的变化

这个实施例包括通过定量X-射线粉末衍射方法测定两性霉素B几个批次的结晶度百分比值。这个实施例表明两性霉素B不同批次的结晶度范围。

仪器和材料

仪器

样品容器

Shimadzu X-射线衍射仪型号XRD-6000

材料

硅参考标准，NIST(国家标准和技术研究所)640c

氟化锂，粒径<5μm

两性霉素B结晶标准，过筛<48μm

两性霉素B“无定形”，过筛<48μm

赋形剂粉末(DSPC/氯化钙，摩尔比为2:1)

方法

用硅参考标准完成Shimadzu X-射线衍射仪模型XRD-6000的校准验证。在校准验证过程中，散射狭缝定在1°，扫描狭缝定在1.0°，和接受狭缝定在0.15mm。

一旦衍射仪被校准后，关于校准标准和大量未知的结晶度(约60mg的样品大小)的X-射线粉末衍射数据被获得。为了获得这些数据用到下面的设定：

停滞时间：两秒(固定时间扫描)

步径：0.02°2θ

扫描范围：3-42°2θ

狭缝：0.5°发散狭缝，1°扫描狭缝，和0.3mm接受狭缝

为了测定样品中两性霉素B的结晶度而作出标准曲线，使用内部标准。内部标准是LiF。结晶和宽角度X-射线无定形标准的物理混合物被制备。以后在这个实施例中，宽角度X-射线无定形标准用“无定形”来指代。然后这些物理混合物用20wt％的LiF掺杂。

从高度结晶的两性霉素B的几个批次中选择结晶标准。以X-射线粉末衍射图的定量对比为基础，选择具有最小无定形背景的材料。通过冷冻粉碎结晶材料(即两性霉素B的相同批次用于无定形和结晶两性霉素B的标准)制定无定形标准。在物理混合物的配制之前两个标准过筛以使小于48μm。物理混合物在40±5％RH(20-25℃)的条件下配制。所有称量在分离度至少0.01mg的分析天平上进行。

数据分析

从每一个掺杂LiF的物理混合物的衍射图，结晶两性霉素B衍射峰的积分强度对LiF峰的比例被计算。积分强度比例，II R，被给出：

IIR = \frac{I_{Amb, Cr}}{I_{LiF}} |

其中I_AmB，Cr和I_LiF分别是结晶两性霉素B和LiF的选择参照峰的积分强度。为LiF选择独立的衍射峰(38至39.5°2θ)，并且为两性霉素B选择窄角度范围(12.75-16.25°2θ)。只有一对两性霉素B的峰被应用，因为它消除了拉/推曲线基线的需要，并且这些峰对原始结晶度敏感。峰用Jade软件(MDI Inc.)积分，版本7.1.2。

结果和讨论

表1表明两性霉素B几个批次的结晶度结果。药物物质方法的最大差异为约±10％结晶，并且取决于结晶度百分比。虽然不希望受理论的束缚，由于所选标准的非常不同的松密度，结果中的不确定性归因于压缩中的变化，该压缩是为了填充样品容器。通过应用较低的样品质量(导致样品压缩的较少需要)，可能获得准确度的提高。

表1

实施例2

喷雾干燥的两性霉素B颗粒状物的制备

两性霉素B颗粒状物通过两个步骤过程制备。在第一步中，10.52g的两性霉素B(Alpharma，Copenhagen，Denmark)，10.12g的二硬脂酰基卵磷脂(DSPC)(Genzyme，Cambridge，MA)，和0.84g的氯化钙(JTBaker，Phillipsburg，NJ)分散在1045g的热去离子水(T＝70℃)中，用Ultra-Turrax混合器(型号T-25)以10,000rpm混合2至5分钟。混合持续到目测DSPC和两性霉素B似乎分散为止。

然后在混合过程中以约50-60mL/min的速率缓慢添加381g的全氟辛基乙烷(PFOE)。添加完成以后，乳液/药物分散体以12,000rpm再混合至少5分钟以上。然后粗乳液以12,000-18,000psi经过高压混匀仪(Avestin Ottawa，Canada)3次，紧接着以20,000-23,000psi经过两次。

得到的细乳液在第二个步骤中作为原料使用，即，在Niro MobileMinor上喷雾干燥。应用到下面的喷雾条件：整体流速＝70SCFM，进口温度＝110℃，出口温度＝57℃，进料泵＝38mL/min，雾化压力＝105psig，雾化流速＝12SCFM。

利用圆柱形分离器自由流动的浅黄色的粉末被收集。收集效率为60％。两性霉素B颗粒状物的几何直径通过激光衍射(Sympatec Helos，Clausthal-Zellerfeld，Germany)确定，在那里2.44μm的体积重量平均直径(VMD)被发现。扫描电子显微镜(SEM)分析表明准备制成小的多孔的颗粒状物的粉末具有高的表面硬度。没有证据显示每个收集器的粉末在5SEM中看到未并入的两性霉素B晶体。干颗粒状物的差异扫描量热分析揭示二硬脂酰基卵磷脂的T_m在粉末为78℃，这与喷雾干燥纯的二硬脂酰基卵磷脂时观察到的相似。

实施例3

喷雾干燥的两性霉素B颗粒状物的气溶胶性质

实施例2制备得到的干的两性霉素B颗粒状物手工装入#2 HPMC胶囊(Shionogi，Japan)中，胶囊在室温条件下已经过夜给平衡到15-20％RH。约用了10mg的装量，这个量占#2 HPMC胶囊装量体积的约1/2。

在安德森级联碰撞仪上(ACI)重力学分析测定空气动力学颗粒状物尺寸的分布。颗粒状物尺寸分布用Turbospin

DPI装置以28.3L/min(即，舒适的吸入效果)和56.6L/min(即，强烈的吸入效果)流速测定，所述的Turbospin

DPI装置在美国专利4,069,819和4,995,385中都有论述，其全文内容并入作为参考。通过这个装置抽取2升的总体积。在较高的流速，两个ACI被平行使用，以28.3L/min的标准流速和56.6L/min的通过装置的总流速。在两种情形下，设置状况表明ACI碰撞仪的盘被校准。良好的气雾化特性已经被观察到，有证据表明为MMAD小于2.6μm并且FPF_<3.3μm大于72％。流速对性能的影响也用Turbospin

(PH&T，Italy)DPI装置测定(图4)，在两个ACI内以56.6L/min速率平行操作。在高流速时没有观察到沉淀分布方面的显著差别，证明最小流速依赖性能。上面论述的实施例表明目前粉末的气雾化性能不取决于流速，这产生更易重现的患者给药。

实施例4

储存对两性霉素B颗粒状物气雾化的影响

在实施例2中制备得到的干燥的两性霉素B颗粒状物手工装入#2HPMC胶囊(Shionogi，Japan)中，并且胶囊在室温条件下已经过夜以平衡到15-20％RH。约用了10mg的装量，这个量占#2 HPMC胶囊装量体积的约1/2。装好的胶囊放入分别标记的玻璃瓶中，玻璃瓶包裹在用箔分层密封的盒子中并且接着在25℃/60RH或40℃/60RH的条件下储存。

用Turbospin

(PH&T，Italy)DPI装置完成发射剂量(ED)的测定，操作流速为它的最佳样品流速60L/min，并且所用的总体为2升，Turbospin

(PH&T，Italy)DPI装置在美国专利4,069,819和4,995,385中论述。每个储存变化用10个测量来确定。

DPI装置以28.3L/min的流速测定并且所用的总体积为2升。

良好的气雾化特性已经被观察到，有证据表明平均ED为93％±5.3％，MMAD＝2.6μm并且FPF_<3.3μm＝72％(图5和6)。经过高温高湿条件储存后没有观察到气雾化特性(ED，MMAD或FPF)方面的显著变化，证明了良好的稳定性特征。目前USP对ED特性的要求限定递送剂量的>90％应在标签声称剂量的±25％之内，并且递送剂量的小于10％超过标签声称剂量的±25％但在±35％之内。FDA公布的最新指导原则提出限定要严格，如递送剂量的>90％应在标签声称剂量的±20％之内，并且所有均在标签声称剂量的±25％之内。统计学上来讲，为了符合FDA提出的规范要求RSD％为6％。

上面实施例中的结果不仅在目前指导原则之内，而且也在提出的指导原则限定之内。相应地，化合物有好的分散性，气雾化特征，和稳定性。

实施例5

应用不同卵磷脂的喷雾干燥的两性霉素B颗粒状物

应用不同的卵磷脂(PC)作为表面活性剂，按实施例2中所述的两步工艺流程制备包含约50wt％的两性霉素B的喷雾干燥的颗粒状物。应用二棕榈酰卵磷脂(DPPC)(Genzyme，Cambridge，MA)，二硬脂酰卵磷脂(DSPC)(Genzyme，Cambridge，MA)，和SPC-3(LipoidKG，Ludwigshafen，Germany)制备组合物。用其中论述的相同的仪器和操作流程条件制备送料溶液。所述的50wt％的两性霉素B组合物如下：

两性霉素B 0.733g

PC 0.714g

CaCl₂ 60mg

PFOB 32g

去离子水 75g

所得的多-颗粒状物乳液作为第二个操作步骤的原料应用，即在B-191 Mini Spray-Drier(Büchi，Flawil，Switzerland)上喷雾干燥。应用到下面标定的喷雾条件：抽吸＝100％，进口温度＝85℃，出口温度＝60℃，进料泵＝1.9mL/min，气雾化压力＝60-65psig，气雾化流速＝30-35cm。为了维持30-31mbar的排气袋压力，调整抽吸速率(69-75％)。用标准圆柱形分离器收集自由流动的浅黄色的粉末。两性霉素B颗粒状物的几何直径通过激光衍射(Sympatec Helos，Clausthal-Zellerfeld，Germany)确定，在那里体积重量平均直径(VMD)从2.65μμm到2.75μm变化。扫描电子显微镜(SEM)分析表明准备制成小的多孔的颗粒状物的粉末有高的表面硬度。

应用安德森级联碰撞仪(ACI)重力学分析测定空气动力学颗粒状物尺寸的分布，见图7。颗粒状物尺寸分布用Turbospin

DPI装置以56.6L/min流速(即，强烈的吸入效果)测定。通过这个装置抽取2升的总体积。

平行使用两个装置，以28.3L/min的标准流速和56.6L/min的通过装置的总流速。在用3种类型的卵磷脂制备的两性霉素B中发现相同的空气动力学特征，即MMAD小于2.5μm并且FPF_<3.3μm大于72％。上面论述的实施例表明制备两性霉素B的组合物技术的可变性不依赖于应用的卵磷脂的类型。

实施例6

70wt％两性霉素B喷雾干燥颗粒状物的制备

按实施例2中所述的两步骤工艺流程制备两性霉素颗粒状物。用其中论述的相同的仪器和操作流程条件制备送料溶液。70wt％的两性霉素B组合物如下：

两性霉素B 0.70g

DSPC 0.265g

CaCl₂ 24mg

PFOB 12g

去离子水 35g

所得的多-颗粒状物乳液作为第二个操作步骤的原料应用，即在B-191 Mini Spray-Drier(Büchi，Flawil，Switzerland)上喷雾干燥。应用到下面的喷雾条件：抽吸＝100％，进口温度＝85℃，出口温度＝60℃，进料泵＝1.9mLmin^-1，气雾化压力＝60-65psi，气雾化流速＝30-35cm。为了维持30-31mbar的排气袋压力，调整抽吸速率(69-75％)。用标准圆柱形分离器收集自由流动的浅黄色的粉末。两性霉素B颗粒状物的几何直径通过激光衍射(Sympatec Helos，Clausthal-Zellerfeld，Germany)确定，在那里2.96μm的体积重量平均直径(VMD)被测定。扫描电子显微镜(SEM)分析表明准备制成小的多孔的颗粒状物的粉末有高的表面硬度。上面论述的实施例表明目前的粉末工艺技术的可变性以利用此处叙述的多-颗粒状物方法制备高含量的两性霉素B。

实施例7

喷雾干燥的两性霉素B颗粒状物的气雾化特性

在实施例6中制备得到的干燥的两性霉素B颗粒状物手工装入#2HMPC(Shionogi，Japan)或#3HMPC(Capsugel，Greenwood，SC)胶囊中，并且胶囊在室温条件下已经过夜给平衡到15-20％RH。约用了10mg的装量，这个量占#2 HMPC胶囊装量体积的约1/2或#3 HMPC胶囊装量体积的约5/8。用

DPI(PH&T，Italy)，(Aventis，UK)，和

(Novartis，Switzerland)DPI装置观察气雾化特性。

使用#3 HMPC胶囊，而

和

装置使用尺寸为#2HMPC的胶囊。

应用安德森级联碰撞仪(ACI)重力学分析测定空气动力学颗粒状物尺寸的分布，见图8。颗粒状物尺寸分布在流速为56.6L/min时测定，当用

和

装置测定时显示强烈的吸入效果，并且当用

装置测定时显示舒适的吸入效果。通过这个装置抽取2升的总体积。平行使用两个ACI，以28.3L/min的标准流速和56.6L/min的通过装置的总流速。在所有的装置中发现相同的空气动力学特性，有证据表明MMAD小于2.5μm并且FPF_<3.3μm大于71％。上面论述的实施例表明目前粉末的气雾化特性不依赖于具有中等或低阻力设计的装置，并且不依赖于胶囊的尺寸，这证明了测试的两性霉素B粉末的分散性。

实施例8

喷雾干燥的两性霉素B颗粒状物的气雾化特性

这个实施例进一步测定了两性霉素B颗粒状物的试验批次的气雾化特性。

下面的两性霉素B颗粒状物用实施例2中的工艺制备，其中两性霉素B从Alpharma中获得。

● 4000T

● 4001T

图9和10分别表明了每收集器和每批次的发射剂量(ED)(mg/胶囊)和平均ED。为了测定ED，应用美国专利申请10/298,177中叙述的吸入装置，在此该专利内容全文并入作为参考。

图11和12分别表明了每收集器的空气动力学质量中位直径(MMAD)和细粒剂量(FPD％<3.3μm)。

下面的两性霉素B颗粒状物用实施例2中的工艺制备，其中两性霉素B从Chemwerth中获得。

● 4024T

● 4025T

● 4026T

● 4027T

● 4028T

● 4029T

● 4030T

图13和14分别表明了每收集器和每批次的发射剂量(ED)(mg/胶囊)和平均ED。

图15和16分别表明了每收集器的空气动力学质量中位直径(MMAD)和FPD％<3.3μm。

如下面更详细地描述，利用处理的两性霉素B制备下面的两性霉素B颗粒状物：

● N020226(来源于高结晶的API)

● N020227(来源于高无定形的API)

这些两性霉素B颗粒状物是利用实施例2中工艺流程的变化制备，其中两性霉素B初始由Alpharma生产加工。在喷雾干燥之前，然而，两性霉素B进行处理，为了得到(i)高无定形的；或(ii)高结晶的API批料(如通过X-射线粉末衍射测定)。

特殊地，下面提供重新处理两性霉素B的生产过程。如下面的流程图和紧接着的说明所示，结晶形和无定形都是从相同的起始原料制备。

重新处理两性霉素B药物物质(API)的生产过程的说明

溶解和过滤

在室温搅拌条件下向1130ml的甲醇中添加约20g的两性霉素B。在不断搅拌下，向两性霉素B混悬液中添加约450mL的二甲基甲酰胺，紧接着添加39g的柠檬酸单水合物。一旦所有固体基本被溶解后，通过过滤使溶液澄清。

向滤液中添加约208mL的二氯甲烷。盛有产物的容器在重新处理过程中要避光保护。然后再向滤液中添加约450mL的冷水(2-8℃)，并且搅拌溶液持续15分钟。

pH的调整和沉淀/结晶

通过利用40％的三乙醇胺(～140ml)调整溶液的pH至7，得到两性霉素B的沉淀。对于无定形，在搅拌条件下一次性倾析添加碱。然后无定形准备分离，按下面所述的方法。

对于结晶形，在搅拌条件下一滴一滴地添加碱，该过程持续30分钟以上。然后加热浆至44-46℃持续90分钟，紧接着冷却至室温持续30分钟。最后，在2-8℃冷却浆持续60分钟。然后准备分离结晶形。

结晶形的收集和洗涤

结晶形的两性霉素B用大的内覆盖滤纸的不锈钢布氏漏斗通过真空过滤得到。产物用170mL的冷的40％甲醇(2-8℃)洗涤，接着用100mL的丙酮(室温)洗涤。

无定形的收集和洗涤

离心浆，接着倾析上清液，得到两性霉素B的无定形。将饼混悬在600mL的冷的40％甲醇(2-8℃)中，接着离心，倾析，通过上面的操作完成产物的洗涤。用600mL丙酮(室温)重复操作洗涤过程。

结晶形和无定形的干燥

包含洗涤的结晶两性霉素B的滤纸放在不锈钢制的托盘中，托盘放入真空室内。同样地，把洗涤的无定形的两性霉素B从离心管中取出并且铺展在覆盖在不锈钢制的托盘中的滤纸上，托盘放入真空室内。干燥过程在室温持续1-3天，同时产品避光保护。有时，为了促进残留溶剂的蒸发，在干燥过程中，使用抹刀粉碎较大的块状。最终的两性霉素B产物转移至琥珀色玻璃瓶在2-8℃储存。

如上所述的，然后利用实施例2中的生产流程制备两性霉素B颗粒状物。图17显示了N020226和N020227的发射剂量(ED)(mg/胶囊)。已发现N020226和N020227的空气动力学质量中位直径分别为2.4μm和2.6μm。已发现N020226和N020227的FPD％分别为55％和47％。

实施例9和比较例1

气管内给药和静脉内给药的对照

该实施例包括测定两性霉素B在血浆，肺泡液，和肺组织中的浓度，在气管内给药两性霉素B的溶液、或静脉内给药一种商品两性霉素B去氧胆酸盐溶液之后。

材料和方法

该实施例中用到预先插套管的(颈静脉插管[JVC])Sprague-Dawely大鼠(Hilltop Lab Animals Inc，Scottdale，PA)，这些大鼠的体重在334-366g之间。两性霉素B通过气管内灌输或静脉内注射给药。研究方案如表2所示。

表2

组	给药途径	数量/动物性别	剂量	剂量体积(mL)	血液，肺组织，BAL收集(天)
组	给药途径	数量/动物性别	剂量	剂量体积(mL)	血液，肺组织，BAL收集(天)	两性霉素B粉末	气管内(IT)	32M	4.0mg(～11mg/kg)	0.3	0.5，1，2，4，6，8，11，和14
两性霉素B去氧胆酸盐制剂	静脉内(IV)	24M	0.5mg(～1.4mg/kg)	1.0	0.5，1，2，4，6，8，11，和14	两性霉素B粉末	气管内(IT)	32M	4.0mg(～11mg/kg)	0.3	0.5，1，2，4，6，8，11，和14

BAL＝支气管气泡灌洗

M＝雄性

在磷酸盐缓冲液(PBS)中制备用于气管内灌输的两性霉素B的溶液，浓度为13.3mg的两性霉素B/mL。两性霉素B去氧胆酸盐制剂是以50mg两性霉素B冻干块形式提供，该冻干块重新组成以制备含两性霉素B1mg/mL的溶液。

研究的终点和流程包括在剂量给药之前称重，为了药物浓度分析的血液采集，BAL，和组织收集以及全部验尸观察。

血液，BAL，和肺组织样品在给药后12小时，1，2，4，6，8，11，和14天收集。在每一个样品收集时间，从IT组选择四只(4)动物，并且从IV选择三只(3)动物，这些选出的动物被处死并且取血液，肺泡液和肺组织的样品。

通过加拿大Montreal的MDS Pharma装置分析血浆和肺泡样品的两性霉素B的浓度。通过MedTox Laboratories，St.Paul，Minnesota分析肺组织样品的两性霉素B的浓度。

结果

全部验尸观察

通过气管内灌输两性霉素B的大鼠显示肺毒性全部迹象。观察包括肺水肿，肺出血，和肺组织斑点。

BAL，肺组织，和血浆中两性霉素B的浓度

图18表示了BAL，肺组织，和血浆中两性霉素B的浓度，和估计的在气管内给药100和静脉内给药200递送两性霉素B后的ELF两性霉素B的浓度。如所看到的，当呼吸道给药时，系统中显现少量的两性霉素B。相反地，静脉内给药后血液中显现高的两性霉素B浓度，一直到给药后4天。图18也表明，气管内给药100时肺两性霉素B的浓度比静脉内给药200时的高。在试验进行中，气管内给药肺两性霉素B的浓度高于静脉内给药肺两性霉素B的浓度的许多倍，而气管内给药两性霉素B的血浆浓度比静脉内给药两性霉素B的血浆浓度低。

结果和讨论

通过气管内液体灌输给药两性霉素B的大鼠显示毒性的全部迹象。观察包括肺水肿，肺出血，和肺组织斑点。

两性霉素B不是在任何一个取自接受试验物品的动物的血浆样品中都可以测量，所述的动物经气管内给药。在气管给药两性霉素B的动物的BAL和肺组织中发现可测量的浓度。IT剂量后，测量动物BAL中的药物，测量两天，并且4只动物中的一只在剂量后测定8天。IT剂量后，在14天测定所有动物肺组织中的药物。

在所有静脉内给药两性霉素B的动物体内，测量血浆中的药物直到剂量之后两天，但是动物并不是在任一个时间点上都有可测量的药物，并且只有一个动物在剂量后12小时在BAL中有可测量的两性霉素B的浓度。

总之，11mg/kg的两性霉素B的气管内递送产生局部肺毒性，两性霉素B溶液的浓度为13.3mg/mL。气管内给药在剂量给药后14天也产生高于定量限制的浓度。相反地，静脉内给药两性霉素B在动物肺组织中两性霉素B的浓度低于定量限制。

实施例10和比较例2

气雾化给药和静脉内给药的对照

气雾化的两性霉素B粉末对狗经肺给药14天。两性霉素B以每日剂量递送直到11.5mg/kg。对有意识的狗用面罩递送两性霉素B粉末的剂量，该面罩包括单向的排除呼出的空气的阀门和连接中央保留室的吸入管，保留室内装气雾化的粉末。配制的两性霉素B粉末的可吸入干粉末气雾剂是用分散的粉末通过旋转刷蒸汽发生器制造并且递送到中央室吸入暴露30分钟。

图19表明给药后狗101体内平均肺两性霉素B浓度-时间分布图。如看到的，给药后两性霉素B在肺内滞留数天，观察到的两性霉素B半衰期约为19天。相反地，静脉内给药201没有很好保留，观察到的半衰期约为28小时。

实施例11

预防给药增加存活率

概述

这个实施例包括测定经吸入预防性地给药的两性霉素B在免疫抑制的兔模型体内是否有效抗烟曲霉(Aspergillus fumigatus)。这个研究的一个目的是测定在烟曲霉(Aspergillus fumigatus)接种之前通过吸入的两性霉素B单独给药是否能增加存活时间和/或降低整体死亡率。

这个研究有三组，每组10只动物。第一组接受静脉内阿糖孢苷的免疫抑制方法和甲基氢化泼尼松和一种假盐接种。第二组接受免疫抑制方法和5×10⁷烟曲霉的分生孢子。第三组接受免疫抑制方法和吸入的估计1.5mg/kg的两性霉素B的剂量，在接种5×10⁷烟曲霉的分生孢子的前一天吸入两性霉素B。两性霉素B干粉末制剂和烟曲霉经气管内的管对麻醉兔给药。免疫抑制剂通过静脉注射给药。防止细菌感染的抗生素通过静脉内注射或在饮水中给药。

本研究中完成的评估包括死亡率和发病率，每日临床观察，体重，临床病理学(血液学和临床化学)，整体尸体解剖，肺重，可见的肺损伤斑点，BAL内的霉菌菌落形成单位(CFU)测定，血液，和肺组织样品，及肺组织的组织病态的评估。

直到计划的研究结束在第14天存活动物的百分比如下所示：第一组为60％，第二组为20％，和第三组为70％。第一组和第三组中动物的平均存活时间为13天并且两组死亡或处死的平均天数为第14天。相反，第二组的动物的平均存活时间为10天并且死亡或处死的平均天数为第10天。在接种烟曲霉之前给药两性霉素B(第3组)的动物与只给药烟曲霉的动物(第二组)相比，Kaplan-Meier(KM)分析表明在存活方面有显著(p<0.05)的增加。与第二组相比，第一组(对照组)动物的存活也显著增加。当第一组与第三组相比较，没有显著的区别。

在第二组和第三组中观察到的呼吸影响的临床迹象，包括喘气，喘息，或罗音。在第一组动物中没有观察到这些迹象。在研究的第7天开始第二组中的七只动物中显示喘气，喘息，或罗音。第二组所有显示呼吸影响迹象的动物在显示迹象的一天之内或者死亡或者变得垂死。在第三组，观察到五只动物喘息，喘气，或有罗音。然而，虽然呼吸迹象的早期发生也是在第7天，但是显示呼吸影响迹象的动物中只有两只变得垂死。其他3只动物存活直到它们的常规尸体解剖，并且三只中的两只(都有罗音)在第14天停止显示呼吸影响的迹象。

在所有组中观察到体重方面的影响。到约第8天时所有组显示体重降低。到第8天时所有组显示约6％的体重降低。在开始的减少之后，第一组和第二组中剩余动物的体重在继续的研究中持续稳定。相对地，第3组中动物的平均组体重继续降低并且到第14天时比原来的体重降低了18％，比第一组体重的平均数低10％。

可以看到在所有组测定的血液和临床化学参数方面的影响。血液参数方面看到的主要影响为白血细胞(WBC)降低的水平，包括降低分叶核中性粒细胞(ANS)和血小板(PLC)。这些影响在所有组中都可以看到。

第二组和第三组中注意到在红血球细胞，血红蛋白，血细胞比容，总蛋白，白蛋白，天冬氨酸转氨酶，丙氨酸转氨酶，总胆红素，直接胆红素，胆固醇，球蛋白，和甘油三酯等水平方面附加的影响。在第二组和第三组中看到的红血球细胞(RBC)水平，血红蛋白(HGB)，血细胞比容(HGB)的降低是贫血的特征并且与在肺中显微镜观察的出血是一致的。在第二组和第三组中看到的总蛋白(TPR)，白蛋白(ALB)的降低水平是持续的伴随着天冬氨酸转氨酶(AST)，丙氨酸转氨酶(ALT)，总胆红素(TBI)和直接胆红素(DBI)及胆固醇(CHO)的降低水平，并且伴随着肝脏的影响。升高的球蛋白(GLO)可能是对显微镜观察的肺中真菌感染和/或炎症起反应的结果。增加的甘油三酯(TRI)水平与研究中观察到随着食物消耗和体重的降低看到脂肪移动是一致的。

对在第14天存活的动物进行整体尸体解剖，同样对处死的动物也进行整体尸体解剖，处死的动物在处死之前变得垂死。在尸体解剖过程中，计数每只动物肺损伤的个数。在第一组中，没有可见的肺损伤。第二组中，适用于整体尸体解剖的八只动物中的七只(88％)有可见的肺损伤并且这些八只动物中的六只(75％)有多于20的大的可见肺损伤。在第三组中，十只动物中的八只(80％)有可见肺损伤，然而，与第二组相反，只有十只动物中的两只(20％)有多于20的大的可见肺损伤。

完成在整体尸体解剖时取的支气管气泡灌洗液，血液，和肺组织样品的显微镜评估。从第一组的任何一个样品中都没有检测到菌落形成单位(CFU)。对于第二组，从十只动物中的八只获取用于培养的样品。发现十只动物中的两只死亡，没有从这两只动物获取样品。动物中的六只估计(75％)有一个或更多的对真菌呈阳性的组织。对于第三组，从十只动物中的八只获取用于培养的样品，其中的四只(44％)有一个或更多的对真菌呈阳性的组织。

与第一组对比，第二组和第三组中绝对肺的重和肺重比体重增加。

肺组织的组织病态的评估显示，在评估的对照组兔子的任何一个肺组织中没有霉菌菌丝出现。在评估的第二组动物的44％中出现霉菌菌丝并且在评估的第三组动物的50％中出现霉菌菌丝。显微镜观察在任何一组的组织之间没有区别。有霉菌菌丝的兔子的肺部位也有组合的次级变化，变化包括水肿，坏死，出血，肺泡巨噬细胞扩增，间质炎症，和/或血管周围性炎症。在严重度或普遍性变化的出现是相似的。获得的组织片段的显微镜的评估能够证实约一半被评估的动物的真菌感染。在第二组或第三组中，组织或霉菌菌丝之间没有显微镜观察的区别。

总之，在死亡率数据以及支持的临床观察，微生物数据，和肺损伤的基础上，在用于本研究的免疫抑制的兔模型内两性霉素B提供预防性的抗烟曲霉致死亡的效果。

研究设计

在这个实验中，有三个研究组，每组10只动物。第一组接受静脉内阿糖孢苷的免疫抑制方法和甲基氢化泼尼松和一种假盐接种。第二组接受免疫抑制方法和5×10⁷烟曲霉的分生孢子。第三组接受免疫抑制方法并且在接种5×10⁷烟曲霉的分生孢子的前一天接受估计1.5mg/kg的两性霉素B肺剂量。整个设计在下面的表3中给出。

表3

组	免疫抑制方法	两性霉素B的靶剂量(mg/kg)	烟曲霉(分生孢子/动物)
组	免疫抑制方法	两性霉素B的靶剂量(mg/kg)	烟曲霉(分生孢子/动物)	1	是	无	0^a
2	是	无	5×10⁷	1	是	无	0^a
2	是	无	5×10⁷	3	是	1.5^b	5×10⁷

^a接种稀释液(0.9％氯化钠溶液的0.025％的吐温20溶液)

^b在第一天用于治疗的两性霉素B

哺乳动物试验系统和动物饲养

在研究开始时应用双导管插入的新西兰白SPF兔，导管有导管入口(VAP)，并且兔称重在2.5至4.0kg之间。兔用计算机控制的体重分层程序被随机分配成治疗组。

每组的数量/性别

每组10/雌性；3组

免疫抑制和中性粒细胞减少症

兔体内的免疫抑制条件模仿人类患者的条件，如下表4所示。

表4

药物	目的	剂量水平	给药途径	频率	研究天数
药物	目的	剂量水平	给药途径	频率	研究天数	阿糖孢苷	免疫抑制	44mg/kg	IV	sid	-1，1，2，3，4
阿糖孢苷	维持中性粒细胞减少	40mg/kg	IV	sid	7，8，12，13	阿糖孢苷	免疫抑制	44mg/kg	IV	sid	-1，1，2，3，4
阿糖孢苷	维持中性粒细胞减少	40mg/kg	IV	sid	7，8，12，13	甲泼尼龙	抑制巨噬细胞生成	5mg/kg	IV	sid	-1，1
头孢他啶	防止细菌感染	75mg/kg	IV	bid	3到13	甲泼尼龙	抑制巨噬细胞生成	5mg/kg	IV	sid	-1，1
头孢他啶	防止细菌感染	75mg/kg	IV	bid	3到13	庆大霉素	防止细菌感染	5mg/kg	IV	qod	3，5，7，9，11，13
万古霉素	防止细菌感染	15mg/kg	IV	sid	3到13	庆大霉素	防止细菌感染	5mg/kg	IV	qod	3，5，7，9，11，13
万古霉素	防止细菌感染	15mg/kg	IV	sid	3到13	万古霉素	防止细菌感染	50mg/L	喝水	sid	3到13

iv＝静脉内

sid＝每日一次剂量

bid＝每日两次剂量

qod＝每隔一天

小的动物气雾化递送系统的体外递送效率测定

通过吸入(IH)路径用气管内管道对麻醉的兔递送干粉末两性霉素B，气管内管道连接到小的动物气雾化递送系统，该系统包括连接到小的动物通风装置的气雾化递送装置，气雾化递送装置如在美国专利6,257,233中公开，其内容全文并入作为参考。在这个方面，来源于泡罩容器的粉末从吸入器被推入室内。小的动物通风装置推动分散的粉末进入气管内管道。通过测定在过滤器上收集的粉末的重量分析物质测量对动物的递送效率，过滤器连接在气管内管道的末端。在过滤器上收集的质量规范化到实际的泡罩容器填充重量。递送效率用于计算体内试验的估计剂量(mg)。

治疗组

下面的表5概述了治疗方法。

表5

组编号	试验物品	给药途径	泡罩的平均数	AmB的靶剂量(mg/kg)	预计递送剂量(mg/kg)	动物数量/性别
组编号	试验物品	给药途径	泡罩的平均数	AmB的靶剂量(mg/kg)	预计递送剂量(mg/kg)	动物数量/性别	1	NA	NA	0	0	0	10/F
2	NA	NA	0	0	0	10/F	1	NA	NA	0	0	0	10/F
2	NA	NA	0	0	0	10/F	3	AmB	吸入	20	1.5	0.6	10/F

图20显示了中性粒细胞减少症的兔的Kaplan-Meier存活曲线。兔为免疫抑制的并且主动暴露给烟曲霉600，这些兔只有50％存活9天以上。相对地，兔为免疫抑制的并且主动暴露给烟曲霉，并且给药两性霉素B601，这些兔全部存活9天以上。曲线602显示了仅仅免疫抑制的兔的对照组。在更长的时期，小于25％的未治疗的暴露的兔600存活14天以上，而约70％的治疗的并且暴露的兔602存活14天以上。

实施例12

兔通过吸入递送的两性霉素B的药物动力学

这个实施例包括在通过吸入途径给药单次的两性霉素B粉末后，测量两性霉素B在兔的血浆，支气管气泡灌洗(BAL)液，和肺组织中的浓度。这个实施例仅仅描述在肺组织和血浆中获得的结果。

材料和方法

利用实施例2中描述的过程，两性霉素B(AmB)配制成含有50wt％活性成分的可吸入粉末。制剂的批次号码为N020042。试验粉末手工装入泡罩容器内并且在340℉密封并且接触时间为1.0秒，每个泡罩容器填充重量为约1.5mg。

通过吸入(IH)路径用气管内管道对麻醉的兔递送试验物质，气管内管道连接到小的动物气雾化递送系统，该系统包括连接到小的动物通风装置的气雾化递送装置，气雾化递送装置如在美国专利6,257,233中公开，其内容全文并入作为参考。试验吸入在独立的吸入暴露中给药。

这个研究包括两个组，每组有48只兔。通过吸入，第一组和第二组分别接受靶剂量为0.25mg/kg和1.5mg/kg的两性霉素B。给药后，在下面的每一个时间点处死四只动物：0.16，0.3，1，1.3，2，3，4，5，14，21，28，和45天。收集血浆和肺组织并且用LC/MS分析两性霉素B的含量。血浆中的检测的测量限制(LOQ)为5ng/ml并且在肺组织中为20ng/ml。

结果和讨论

这个实施例的一个目的是，在通过吸入两性霉素B粉末的单独给药后，测量两性霉素B在兔的血浆，BAL液，和肺组织中的浓度。检验了两个靶肺剂量，两个靶肺剂量为0.25和1.5mg/kg。这个实施例仅仅描述在肺组织和血浆中获得的结果。

血浆中的检测的测量限制(LOQ)为5ng/ml。所有动物的两性霉素B的血浆浓度，在所有的时间点，和在两个实验剂量都低于LOQ。因此，在两性霉素B的IH给药后，有很少的系统暴露。

然而，两性霉素B的IH给药导致在肺内药物高的和持久的浓度。药物浓度可以快速达到。通过第一个4小时的样品时间获得4.2和24.2μg/g的组平均浓度。在给药0.25和1.5mg/kg的剂量后，在32和24小时分别观察到第一组和第二组的Tmax。组平均Cmax值为8.0和46.6μg/g，对应的剂量分别为0.25和1.5mg/kg。Cmax值与剂量成正比。

IH给药后，药物浓度维持数周。如图21和22所示，两性霉素B的组平均浓度在最后样品时间仍旧升高，即，给药后45天。当给药剂量为0.25mg/kg时，两性霉素B从肺消除的半衰期(t_1/2)为292小时，当给药剂量为1.5mg/kg时，半衰期为254小时。

这个实施例的结果证明了对兔IH给药两性霉素B，导致血浆中两性霉素B的浓度一致低于LOQ(<5ng/ml)。这些结果进一步在肺组织中获得高的和持久的两性霉素B浓度。

实施例13

在兔中的用于预防的吸入两性霉素B的效率

这个实施例包括：(1)确定上皮内衬液(ELF)或肺实质中两性霉素B(AmB)的浓度是否与保护抗烟曲霉致病非常相关；和(2)确定有效预防剂量。

材料和方法

应用实施例14中批次号码为N020042的两性霉素B的可吸入粉末。试验粉末手工装入泡罩容器内并且在340℉密封并且接触时间为1.0秒，每泡罩容器的约装量为约1.5mg。

在研究开始时应用双导管插入的新西兰白SPF兔，导管的导管入口导入股静脉，并且兔的重量在约2.5至4.0kg之间，兔从CovanceResear Products，Denver PA获得。

烟曲霉，NIH菌株4215，从美国Type Culture Collection(ATCC)获得。在Sabouraud葡萄糖长颈瓶上制备烟曲霉的接种物。用含0.9％氯化钠的溶液配制的0.025％的吐温20溶液收获分生孢子，转移至锥形管内，洗涤，并且计数。用相同的溶液调整浓度至300μL含5×10⁷分生孢子。攻击组的动物接种相同的体积。在麻醉的兔身上操作接种。应用气管内管道对兔插管并且然后用结核菌素注射气管内管给药分生孢子，结核菌素注射管通过气管内管道连接到插导管。

本研究包括6组，每组包括10只兔子。这些组在下面的表6中描述。所有组为免疫抑制并且用防止细菌感染的抗生素治疗。在下面的表7中详细说明了免疫抑制和抗菌保护的方法。第一组既不用烟曲霉攻击也不用两性霉素B治疗。第二组用烟曲霉攻击但不用两性霉素B治疗。第三组用0.5mg两性霉素B/kg在用烟曲霉攻击的前12天治疗。第四组用0.15mg两性霉素B/kg在烟曲霉变化的前一天治疗。第五组用0.5mg两性霉素B/kg在烟曲霉攻击的前一天治疗。第六组用1.5mg两性霉素B/kg在烟曲霉攻击的前一天治疗。

表6

组	说明	免疫抑制	烟曲霉接种	AmB治疗(mg/kg)	AmB治疗(天)
组	说明	免疫抑制	烟曲霉接种	AmB治疗(mg/kg)	AmB治疗(天)	1	免疫抑制无接种	是	否	0	NA^*
2	免疫抑制接种/无治疗	是	是	0	NA	1	免疫抑制无接种	是	否	0	NA^*
2	免疫抑制接种/无治疗	是	是	0	NA	3	免疫抑制接种/天-12高剂量	是	是	1.5	天-12
4	免疫抑制接种/天-1低剂量	是	是	0.15	天-1	3	免疫抑制接种/天-12高剂量	是	是	1.5	天-12
4	免疫抑制接种/天-1低剂量	是	是	0.15	天-1	5	免疫抑制接种/天-1中等剂量	是	是	0.5	天-1
6	免疫抑制接种/天-1高剂量	是	是	1.5	天-1	5	免疫抑制接种/天-1中等剂量	是	是	0.5	天-1

^*NA＝不可获得

表7

药物	目的	剂量水平(mg/kg)	给药途径	频率	研究天数^B
药物	目的	剂量水平(mg/kg)	给药途径	频率	研究天数^B	阿糖孢苷	免疫抑制	44mg/kg	IV	sid	-1，1，2，3，4
阿糖孢苷	维持中性粒细胞减少	40mg/kg	IV	sid	7，8，12，13	阿糖孢苷	免疫抑制	44mg/kg	IV	sid	-1，1，2，3，4
阿糖孢苷	维持中性粒细胞减少	40mg/kg	IV	sid	7，8，12，13	甲泼尼龙	抑制巨噬细胞功能	5	IV	sid	-1，1
头孢他啶	防止细菌感染	75	IV	bid	3到13	甲泼尼龙	抑制巨噬细胞功能	5	IV	sid	-1，1
头孢他啶	防止细菌感染	75	IV	bid	3到13	庆大霉素	防止细菌感染	5	IV	qod	3，5，7，9，11，13
万古霉素	防止细菌感染	15	IV	sid	3到13	庆大霉素	防止细菌感染	5	IV	qod	3，5，7，9，11，13
万古霉素	防止细菌感染	15	IV	sid	3到13	万古霉素	防止细菌感染	50mg/L^A	喝水	sid	3到13
两性霉素	疗法	低，中，高剂量	吸入	sid	-12或-1	万古霉素	防止细菌感染	50mg/L^A	喝水	sid	3到13

A：饮水的mg/升

B：研究天数＝接种烟曲霉的天数

结果

图23表明了存活数据。第一组为免疫抑制，但是既不用两性霉素B治疗也不用烟曲霉攻击。除了一只兔外这组其他所有的兔存活至这个研究结束，在第14天的存活率为90％。

第二组为免疫抑制，不用两性霉素B治疗但是用烟曲霉攻击。这个组所有的兔都死亡，存活率为0％。平均存活时间为6天。

第三组为免疫抑制，在第-12天用1.5mg两性霉素B/kg治疗，并且用烟曲霉攻击。这个组所有的兔都死亡，存活率为0％。平均存活时间为10天。

第四组为免疫抑制，在第-1天用0.15mg两性霉素B/kg治疗，并且用烟曲霉攻击。这个组有九只兔死亡，存活率为10％。平均存活时间为9天。

第五组为免疫抑制，在第-1天用0.5mg两性霉素B/kg治疗，并且用烟曲霉攻击。这个组中九只兔死亡，存活率为10％。平均存活时间为10.5天。

第六组为免疫抑制，在第-1天用1.5mg两性霉素B/kg治疗，并且用烟曲霉攻击。这个组有九只兔死亡，存活率为10％。平均存活时间为10天。

用Logrank试验进行的第2组与第3组，第2组与第4组，第2组与第5组，及第2组与第6组的双统计学比较显示，吸入的两性霉素B具有显著(P<0.001)的抗烟曲霉攻击的保护。应用相同的实验剂量，第3组，第4组，第5组，和第6组的双统计学比较在从不同的治疗中得到的存活曲线方面没有显示任何区别。

结果和讨论

这个实施例测验了吸入的两性霉素B对接种了烟曲霉的孢子的兔的保护效果。第二组接种烟曲霉但未治疗，该组与任何治疗组的存活曲线的比较显示，用吸入的两性霉素B进行的治疗在免疫抑制的兔体内有保护作用。这在所有实验剂量(0.15，0.5，和1.5mg/kg)上都是成立的。当兔在烟曲霉攻击前治疗1或12天时，这也是成立的。

实施例14

大鼠一个月吸入毒性研究

这个实施例包括在吸入给药后测量大鼠体内两性霉素B的粉末制剂的毒性，和在约一个月的恢复期间之后，评估任何效果的可逆性。这个实施例包括寻找呼吸道内的局部诱导的毒性和系统毒性。

包含50wt％活性成分的两性霉素B粉末利用实施例2中描述的工艺制备。得到的粉末具有的特性在下表8中显示。

表8

API批次编号	Mfg.	API，％结晶	API粒子尺寸，x50(μm)	粉末批次编号	粉末，结晶％	粉末MMAD，重量分析(μm)	粉末MMAD，药物特异(μm)
API批次编号	Mfg.	API，％结晶	API粒子尺寸，x50(μm)	粉末批次编号	粉末，结晶％	粉末MMAD，重量分析(μm)	粉末MMAD，药物特异(μm)	101677	Chemwerth	90	1.25	4001T	95	2.2	2.3

大鼠(198M和198F)被分配为6个剂量组并且按下面表9中显示的治疗。

表9

^*包括约50wt％两性霉素B的干粉末制剂

恢复动物在给药后保持约一个月的恢复阶段

动物410M过早地在第一天死亡并且被701M替代。下面用事先的检眼镜检查，动物345F，436F，和541F分别被711F，712F，和713F替代。

用仅暴露嘴技术对动物给药60分钟，有5次，每周一次。恢复动物在给药后保持约一个月的恢复阶段。

完成了下面的研究：临床观察，体重，食物消耗，眼科学，血液学，临床化学，尿分析，组织病理学，和毒性动力学。

载体制剂气雾剂的全组平均暴露室浓度为2.35mg/L。第3组，第4组和第5组第一天的两性霉素B制剂的全组平均暴露室浓度为0.06，0.39，和0.91mg/L，后来天的浓度分别为0.02，0.06，和0.16mg/L。第一天，第3组，第4组和第5组的单独两性霉素B的全组平均暴露室浓度(分析测定)为0.0290，0.152，和0.389mg/L，后来天的单独两性霉素B的全组平均暴露室浓度分别为0.00847，0.0214，和0.0519mg/L。第六组的两性霉素B制剂的全组平均暴露室浓度为2.22mg/L或单独两性霉素B的全组平均暴露室浓度为0.694mg/L。

载体制剂的全组(混合性别)平均估计达到的剂量为73.56mg/kg/剂量。第3组，第4组和第5组第一天的两性霉素B制剂的全组(混合性别)平均估计达到的剂量为1.89，12.27，和28.45mg/kg/剂量，后来天的分别为0.528，1.74，和4.87mg/kg/剂量。第一天，第3组，第4组和第5组的单独两性霉素B的全组(混合性别)平均估计达到的剂量为0.914，4.78，和12.36mg/kg/剂量，后来天的单独两性霉素B的全组平均估计达到的剂量分别为0.256，0.646，和1.58mg/kg/剂量。第六组的两性霉素B制剂的全组平均估计达到的剂量为68.24mg/kg/剂量或单独两性霉素B的全组平均估计达到的剂量为21.64mg/kg/剂量。

粒子尺寸分布数据显示64.7％的载体气雾剂粒子小于3.5μm，并且空气动力学质量中位直径(MMAD)(±几何标准偏差(GSD))为1.61μm(3.244)，第一天，第3组81.2％的两性霉素B制剂颗粒状物，第4组60.6％的两性霉素B制剂颗粒状物，和第5组70.7％的两性霉素B制剂颗粒状物小于3.5μm，以后天的第3组，第4组，和第5组分别68.2％，59.0％，和83.6％的两性霉素B制剂颗粒状物小于3.5μm，并且第3组，第4组，和第5组第一天的MMAD和(GSD)分别为1.35μm(2.382)，1.46μm(4.508)，和1.43μm(2.560)，后来天的MMAD和(GSD)分别为1.42μm(3.572)，1.89μm(2.710)，和0.81μm(4.329)。

对于单独的两性霉素B(分析测定)，第一天，第3组68.1％的颗粒状物，第4组58.1％的颗粒状物，和第5组68.6％的颗粒状物小于3.5μm，以后天的第3组，第4组，和第5组分别66.2％，55.6％，和71.1％的颗粒状物小于3.5μm，并且第3组，第4组，和第5组第一天的MMAD和GSD分别为1.69μm(2.755)，1.71μm(3.351)，和1.55μm(2.652)，后来天的MMAD和GSD分别为1.47μm(3.599)，2.29μm(2.525)，和1.06μm(6.077)。

粒子尺寸数据显示第6组57.8％的两性霉素B制剂颗粒状物小于3.5μm，并且MMAD(±GSD)为2.11μm(3.089)。对于单独的两性霉素B(分析测定)，54.3％的颗粒状物小于3.5μm，并且MMAD(±GSD)为2.29μm(2.966)。

实验的颗粒状物考虑适合呼吸的颗粒状物。

在体重，食物消耗，眼科学，血液学，临床化学，或器官重量方面没有不利的影响。

在研究中有181例死亡，其中大多数和象征着呼吸损伤的临床迹象有关，呼吸损伤的临床迹象包括喘息，噼啪声，和喘气呼吸，是在所有两性霉素B治疗组的动物中观察到。一例死亡过早地发生，因此不认为这例死亡和治疗有关。

和两性霉素B给药相关的肺中尸体解剖研究结果包括块状物，粘附，不正常的内含物，增大的面积/焦点，浅色焦点，实变，还有暗色焦点，和暗色，变色的或多孔肺。在第六组(高剂量)的两个动物的气管或支气管中注意到不正常的内含物。紧接着约一个月的恢复阶段，第三组(低剂量)一只雌性动物中发现肺粘附。

通过显微镜观察，在给药两性霉素B的动物肺内的发现包括肺炎，胸膜炎，叶段不张，支气管/细支气管内腔渗出液，支气管粘膜增生，增加的炎性细胞浸润，肺泡发炎，和嗜曙红细胞浸润，除此之外还有机能性充血/出血。在主要研究中，在第3组至第6组的110只动物中的17只中，发现肺炎/胸膜炎，不张或肺泡发炎。

在肺中发现，尸体解剖和组织学之间有关联，特别是在粘附和胸膜炎之间；并且在块状物，实变，增大的面积/焦点，或不正常的内含物和肺炎之间。次于肺炎，其他发现包括脾和肝中伴随发炎的坏死，胸骨和股骨内增加的粒细胞生成，淋巴结样组织萎缩，周围肝细胞空泡形成和肾上腺皮质细胞弥漫性增生。

在两性霉素B治疗组之间，这些发现的发生率或严重性方面没有显著的区别。

接着约一个月的恢复阶段，在给药两性霉素B的一些动物中仍旧呈现极微的或轻微的支气管粘膜增生。动物344的肺中有慢性发炎和胸膜炎，344为恢复研究中第3组和第4组18只动物中的一只。炎症特征为淋巴细胞集中和着色巨噬细胞的聚集。

毒性动力学分析揭示最大血浆浓度一般随着剂量而增加，并且一般在给药中止的4小时之内达到。在空气或载体对照样品中检测不到两性霉素B的可量化水平。

总之，仅仅嘴部给药两性霉素B，两性霉素B的剂量达到21.64mg/kg/剂量，产生象征着呼吸损伤的临床迹象和所有两性霉素B治疗组许多动物的过早死亡，包括第5组和第6组的所有动物。在所有剂量，两性霉素B的吸入给药与气管粘膜增生有关，与腔渗出液和/或弥漫性炎症细胞浸润有关；并且在肺内两性霉素B的吸入给药与肺炎，胸膜炎，叶段不张，支气管/细支气管内腔渗出液，支气管粘膜增生及增加的炎性细胞浸润，肺泡发炎和嗜曙红细胞浸润有关，除此之外还与机能性充血/出血有关。约一个月的恢复阶段后，气管粘膜增生和肺的发炎的发生率和严重性方面有下降。

实施例15

每日或每周给药干粉末对大鼠的毒理学研究

这个实施例包括测定大鼠体内两性霉素B两个不同干粉末批次的毒性，在吸入给药两个不同的剂量方法之后。获得的信息用于为随后的毒性研究选择剂量水平和/或剂量方法。

包含50wt％活性成分的两性霉素B粉末利用实施例2中描述的工艺制备。得到的粉末具有的特性在下表10中显示。此外，如图24所示，应用吸入装置，通过药物-特性气雾剂粒子尺寸对重量粒子尺寸分析测量，粉末是不均匀的，吸入装置在美国专利申请10/298,177中陈述，其内容全文并入作为参考。

表10

API批次编号	Mfg.	API，％结晶	API粒子尺寸，x50(μm)	粉末批次编号	粉末，结晶％	粉末MMAD，重量分析(μm)	粉末MMAD，药物特征(μm)
API批次编号	Mfg.	API，％结晶	API粒子尺寸，x50(μm)	粉末批次编号	粉末，结晶％	粉末MMAD，重量分析(μm)	粉末MMAD，药物特征(μm)	100370	Alpharma	11	NA	4001T	NA	NA	2.8
100581	Alpharma	48	3.53	4019T	56	2.3	2.8	100370	Alpharma	11	NA	4001T	NA	NA	2.8

NA＝不可获得

90只雄性大鼠被分配为10个剂量组并且治疗，如下表11所示。

剂量组/治疗	第一天靶制剂剂量水平(mg/kg)	第2和3天制剂剂量水平(mg/kg)	第8和15天制剂剂量水平(mg/kg)	动物数量
剂量组/治疗	第一天靶制剂剂量水平(mg/kg)	第2和3天制剂剂量水平(mg/kg)	第8和15天制剂剂量水平(mg/kg)	动物数量	1.载体对照	80	80	N/A	1-9
2.低剂量^A	30^*	6^*	N/A	10-18	1.载体对照	80	80	N/A	1-9
2.低剂量^A	30^*	6^*	N/A	10-18	3.高剂量^A	80^*	80^*	N/A	19-27
4.低剂量2^B	30^*	6^*	N/A	28-36	3.高剂量^A	80^*	80^*	N/A	19-27
4.低剂量2^B	30^*	6^*	N/A	28-36	5.高剂量2^B	80^*	80^*	N/A	37-45
6.载体对照2	80	N/A	80	46-54	5.高剂量2^B	80^*	80^*	N/A	37-45
6.载体对照2	80	N/A	80	46-54	7.低剂量3^A	30^*	N/A	6^*	55-63
8.高剂量3^A	80^*	N/A	80^*	64-71，91	7.低剂量3^A	30^*	N/A	6^*	55-63
8.高剂量3^A	80^*	N/A	80^*	64-71，91	9.低剂量4^B	30^*	N/A	6^*	73-81
10.高剂量4^B	80^*	N/A	80^*	82-90	9.低剂量4^B	30^*	N/A	6^*	73-81

^*＝包含50wt％两性霉素B的干粉末制剂

A＝用两性霉素B批次4001T给药

B＝用两性霉素B批次4019T给药

N/A＝不可应用的

动物72(第9组)在给药开始之前被动物91替代

用仅暴露嘴技术对动物给药，按上表11每天给药一次，每次1小时。

完成了下面的研究：临床观察，体重，血液学，临床化学，器官重量，组织病理学，毒性动力学，和生物分析化学。

第1组和第6组的载体制剂气雾剂的全组平均暴露浓度分别为2.23和2.11mg/L。第2组，第4组，第7组，和第9组第一天的两性霉素B制剂的全组平均暴露室浓度分别为1.01，0.88，1.01，和0.88mg/L，并且这四组以后天的两性霉素B制剂的全组平均暴露室浓度分别为0.18，0.17，0.17，和0.18mg/L。第3组，第5组，第8组，和第10组两性霉素B制剂的全组平均暴露室浓度分别为2.25，2.33，2.51，和2.41mg/L。

第2组，第4组，第7组，和第9组第一天的单独两性霉素B(分析测定)的全组平均暴露室浓度分别为0.353，0.306，0.353，和0.306mg/L，并且这四组以后天的单独两性霉素B(分析测定)的全组平均暴露室浓度分别为0.0684，0.0598，0.0615，和0.0783mg/L。第3组，第5组，第8组，和第10组单独两性霉素B(分析测定)的全组平均暴露室浓度分别为0.856，0.927，0.963，和0.987mg/L。

第1组和第6组载体制剂的全组平均估计达到剂量分别为72.79和66.34mg/kg/天。第2组，第4组，第7组，和第9组第一天的两性霉素B制剂的全组平均估计达到剂量分别为33.44，29.14，33.44，和28.95mg/kg，并且这四组以后天的两性霉素B制剂的全组平均估计达到剂量分别为2.25，5.55，5.22，和5.49mg/kg。第3组，第5组，第8组，和第10组两性霉素B制剂的全组平均估计达到剂量分别为74.85，75.00，77.18，和77.41mg/kg/剂量。

第2组，第4组，第7组，和第9组第一天的单独两性霉素B(分析测定)的全组平均估计达到剂量分别为11.69，10.13，11.69，和10.07mg/kg，并且这四组以后天的单独两性霉素B(分析测定)的全组平均估计达到剂量分别为2.25，1.96，1.89，和2.38mg/kg。第3组，第5组，第8组，和第10组单独两性霉素B(分析测定)的全组平均估计达到剂量分别为24.45，29.97，29.91，和30.60。

粒子分布数据显示第1组69.7％的载体气雾剂粒子和第6组77.6％载体气雾剂粒子小于3.5μm，并且这两组的空气动力学质量中位直径(MMAD)(±几何标准偏差(GSD))分别为1.38μm(2.880)和1.43μm(2.881)。第一天，第2组63.0％的两性霉素B制剂颗粒状物，第4组69.2％的两性霉素B制剂颗粒状物，第7组63.0％的两性霉素B制剂颗粒状物，和第9组69.2％的两性霉素B制剂颗粒状物小于3.5μm，伴随着这些组第一天的MMAD(GSD)分别为1.36μm(4.603)，1.54μm(2.502)，1.36μm(4.603)，和1.54μm(2.502)。以后的天，第2组，第4组，第7组，和第9组分别77.2％，69.8％，71.3％，和61.3％的两性霉素B制剂颗粒状物小于3.5μm，伴随着这些组的MMAD(GSD)分别为0.79μm(4.541)，1.75μm(2.455)，1.56μm(3.618)，和2.16μm(3.228)。第3组，第5组，第8组，和第10组分别69.2％，63.4％，64.7％，和61.8％的两性霉素B制剂颗粒状物小于3.5μm，伴随着这些组的MMAD(GSD)分别为0.95μm(4.344)，1.44μm(4.312)，1.10μm(4.759)，和1.52μm(4.233)。

对于单独的两性霉素B(分析测定)，第一天，第2组，第4组，第7组，和第9组分别56.4％，61.9％，56.4％，和61.9％的气雾化粒子小于3.5μm，伴随着这些组的MMAD(GSD)分别为1.58μm(3.563)，1.71μm(3.309)，1.58μm(3.563)，和1.71μm(3.309)。以后的天，第2组，第4组，第7组，和第9组分别66.8％，57.4％，62.0％，和63.0％的气雾化粒子小于3.5μm，伴随着这些组的MMAD(GSD)分别为1.09μm(4.181)，1.95μm(3.386)，1.42μm(3.372)，和1.83μm(3.075)。

对于第3组，第5组，第8组，和第10组，分别61.9％，57.6％，63.8％和61.5％的单独的两性霉素B(分析测定)小于3.5μm，伴随着这些组MMAD(GSD)分别为1.30μm(4.208)，1.77μm(3.782)，1.20μm(4.608)，和1.58μm(4.097)。

与两性霉素B的吸入相关的尸体解剖研究的结果包括肺中暗色焦点，暗色，变红或多孔肺，气管内不正常的内含物和扩大的支气管的和颈淋巴结。另外，过早杀死的动物中注意到肿胀的胃和肠。

组织学评估揭示了：在大多数的用两性霉素B两个批次治疗的动物中有弥漫性粘膜增生，通过吸入在两个给药方法给药两性霉素B两个批次。与第一个给药方法(在第1，2，和3天吸入给药两性霉素B)相比，第二个给药方法(在第1，8，和15天吸入给药两性霉素B)的粘膜增生的严重性增加。在批次4001T(A)和批次4019 T(B)之间，这个研究结果的发生率和严重性方面没有显著的差异。

通过吸入给药两性霉素B，预料在气管内有粘膜下炎症细胞浸润和腔渗出液。这些研究结果通常在动物的气管内看到，这些动物用第二个给药方法(在第1，8，和15天吸入给药两性霉素B)治疗。在第一个给药方法组，这些研究结果的发生率比较低，并且缺乏清楚的剂量-响应关系，认为这些情况归因于这个方法(在第1，2，和3天吸入给药两性霉素B，在第4天处死动物)的短的持续时间。

在肺中显示支气管内腔渗出液，支气管肺炎，和支气管周的/细支气管周的发炎或炎症细胞浸润，并且也是给药两性霉素B的预料的研究结果。在有支气管肺炎的动物中，也有支气管渗出液出现，并且认为支气管肺炎由于次级感染引起的，次级感染由较大的气道插头产生。第一给药方法组中肺的支气管腔渗出液的较低发认为由于该方法的短持续时间。与低剂量组相比，在高剂量组，肺的研究结果的发生通常比较高。

毒性动力学分析揭示血浆浓度随着剂量而增加。在载体对照样品中检测不到两性霉素B的可量化水平。

总之，仅嘴给药的方式给药两性霉素B(单独)，两性霉素B的剂量达到30.60mg/kg/剂量，产生象征着呼吸损伤和/或发炎的临床迹象和3只动物的过早死亡。在所有剂量的两性霉素B的吸入给药与肺内的气管弥漫性粘膜增生，粘膜下炎症细胞浸润，气管和支气管内腔渗出液，支气管肺炎以及支气管周的/细支气管周的发炎或炎症细胞浸润有关。对于第二个给药方法(在第1，8，和15天吸入给药两性霉素B)，这些研究结果的严重性是增加的。肺的研究结果与肺重量的明显的剂量-相关增加有关联，这对于用第二个方法的动物来说，更加显著。这个增加在用两性霉素B批次4001T治疗的动物中是非常显著的。

实施例16

每天或每周给药在大鼠体内两种干粉末的毒性

这个实施例包括测定在大鼠体内两性霉素B两种不同批次的干粉末的毒性，在用两个不同的给药方法吸入给药之后。

包含50wt％活性成分的两性霉素B粉末利用实施例8中描述的工艺制备。得到的粉末具有的特性在下表12中显示。

表12

API，％结晶	API粒子尺寸，x50(μm)	ABIP批次	ABIP，结晶％	ABIP MMAD，重量分析(μm)	ABIP MMAD，药物特征(μm)
API，％结晶	API粒子尺寸，x50(μm)	ABIP批次	ABIP，结晶％	ABIP MMAD，重量分析(μm)	ABIP MMAD，药物特征(μm)	94	NA	N020226	100	2.3	2.3
6	3.05	N020227	4	2.5	3.2	94	NA	N020226	100	2.3	2.3

NA＝不可获得

120只雄性大鼠被分配为10个剂量组并且治疗，如下表13所示：

表13

^*＝包含50wt％两性霉素B的干粉末制剂

A＝用两性霉素B批次N020226(高结晶度)给药

B＝用两性霉素B批次N020227(高无定形度)给药

N/A＝不可获得的

备用的动物标号121-126

按照上表13用仅暴露嘴给药技术对动物给药，每天一次，每次一小时。

完成了下面的研究：临床观察，体重，测量呼吸过程，血液学，临床化学，组织病理学，毒性动力学，和生物分析化学。

第1组和第6组第一天载体制剂的全组平均暴露室浓度为0.91mg/L并且以后天的载体制剂的全组平均暴露室浓度分别为0.22和0.17mg/L。第2组，第4组，第7组，和第9组第一天的两性霉素B制剂的全组平均暴露室浓度分别为0.31，0.36，0.31，和0.36mg/L，并且这四组以后天的两性霉素B制剂的全组平均暴露室浓度分别为0.056，0.078，0.073，和0.088mg/L，并且第3组，第5组，第8组，和第10组第一天两性霉素B制剂的全组平均暴露室浓度分别为1.04，0.94，1.04，和0.94mg/L，并且这四组以后天的两性霉素B制剂的全组平均暴露室浓度分别为0.18，0.21，0.18，和0.19mg/L。

第2组，第4组，第7组，和第9组第一天的单独两性霉素B(分析测定)的全组平均暴露室浓度分别为0.125，0.124，0.125，和0.124mg/L，并且这四组以后天的单独两性霉素B(分析测定)的全组平均暴露室浓度分别为0.0166，0.0249，0.0277，和0.0278mg/L，并且第3组，第5组，第8组，和第10组单独两性霉素B(分析测定)第一天的全组平均暴露室浓度分别为0.455，0.330，0.455，和0.330mg/L，并且这四组以后天的单独两性霉素B(分析测定)的全组平均暴露室浓度分别为0.0686，0.0717，0.0724，和0.0687mg/L。

第1组和第6组第一天载体制剂的全组平均估计达到剂量分别为29.29和29.40mg/kg并且这两组以后天的载体制剂的全组平均估计达到剂量分别为6.87和4.98mg/kg。第2组，第4组，第7组，和第9组第一天的两性霉素B制剂的全组平均估计达到剂量分别为10.03，11.63，9.93，和11.65mg/kg，并且这四组以后天的两性霉素B制剂的全组平均估计达到剂量分别为1.80，2.50，2.19，和2.66mg/kg，并且第3组，第5组，第8组，和第10组第一天两性霉素B制剂的全组平均估计达到剂量分别为33.48，30.54，33.83，和30.58mg/kg，并且这四组以后天的两性霉素B制剂的全组平均估计达到剂量分别为5.75，6.76，5.47，和5.81mg/kg。

第2组，第4组，第7组，和第9组第一天的单独两性霉素B(分析测定)的全组平均估计达到剂量分别为4.04，4.01，4.00，和4.01mg/kg，并且这四组以后天的单独两性霉素B(分析测定)的全组平均估计达到剂量分别为0.53，0.79，0.83，和0.84mg/kg，并且第3组，第5组，第8组，和第10组第一天单独两性霉素B(分析测定)第一天的全组平均估计达到剂量分别为14.65，10.72，14.80，和10.74mg/kg，并且这四组以后天的分别为2.19，2.31，2.20，和2.21mg/kg。

粒子尺寸分布数据显示第1组和第6组第一天70.8％的载体气雾剂粒子小于3.5μm，并且以后天的第1组77.1％的载体气雾剂粒子和第6组75.6％载体气雾剂粒子小于3.5μm，伴随着第一天空气动力学质量中位直径(MMAD)(±几何标准偏差(GSD))为1.56μm(2.832)，并且伴随着以后天这两组的空气动力学质量中位直径(MMAD)(±几何标准偏差(GSD))分别为0.84μm(3.446)和1.24μm(2.948)。第一天，第2组，第4组，第7组，和第9组分别65.1％，75.7％，65.1％，和75.7％的两性霉素B制剂气雾剂粒子小于3.5μm，伴随着这些组第一天的MMAD和(GSD)分别为1.77μm(3.787)，2.06μm(2.805)，1.77μm(3.787)，和2.06μm(2.805)，并且以后的天，第2组，第4组，第7组，和第9组分别52.2％，79.4％，65.8％，和75.2％的两性霉素B制剂气雾剂粒子小于3.5μm，伴随着这些组后来天的MMAD和(GSD)分别为2.88μm(2.269)，1.81μm(2.540)，1.97μm(2.719)，和2.14μm(2.288)。第一天，第3组，第5组，第8组，和第10组分别72.0％，78.9％，72.0％，和78.9％的两性霉素B制剂颗粒状物小于3.5μm，伴随着这些组第一天的MMAD和(GSD)分别为2.07μm(2.368)，1.87μm(2.464)，2.07μm(2.368)，和1.87μm(2.464)，并且第3组，第5组，第8组，和第10组后来天分别68.6％，76.0％，72.4％，和77.5％的两性霉素B制剂颗粒状物小于3.5μm，伴随着这些组后来天的MMAD和(GSD)分别为1.67μm(3.466)，1.77μm(2.378)，1.42μm(2.965)，和1.40μm(2.911)。

对于单独的两性霉素B(分析测定)，第一天，第2组，第4组，第7组，和第9组分别70.4％，72.6％，70.4％，和72.6％的颗粒状物小于3.5μm，伴随着这些组第一天的MMAD和(GSD)分别为1.80μm(2.563)，2.06μm(2.702)，1.80μm(2.563)，和2.06μm(2.702)。以后的天，第2组，第4组，第7组，和第9组分别68.0％，75.3％，77.3％，和63.0％的颗粒状物小于3.5μm，伴随着这些组以后天的MMAD(GSD)分别为2.05μm(2.230)，2.01μm(2.752)，1.99μm(2.005)，和2.60μm(2.463)。第一天，第3组，第5组，第8组，和第10组，分别55.4％，69.9％，68.0％和69.6％的颗粒状物小于3.5μm，伴随着这些组第一天的MMAD和(GSD)分别为2.74μm(2.116)，2.03μm(2.788)，2.05μm(2.230)，和2.03μm(2.788)，并且以后的天，第3组，第5组，第8组，和第10组，分别67.9％，63.6％，67.8％和63.3％的颗粒状物小于3.5μm，伴随着这些以后天的MMAD和(GSD)分别为1.81μm(2.428)，1.94μm(3.310)，1.92μm(2.402)，和2.04μm(3.236)。

毒性动力学分析揭示两性霉素B的血浆浓度一般随着剂量增加。在载体对照样品中检测不到两性霉素B的可量化水平。

没有显著的尸体解剖研究结果与两性霉素B的吸入相关。

组织学评估揭示了在用两个给药方法的两性霉素B两个批次干粉末治疗的许多动物中有弥漫性粘膜增生。与两性霉素B N020226(高结晶体)相比，两性霉素B N020227(高无定形)的肥大的发生率和严重性增加。当与第一个给药方法(在第1，2，和3天)相比时，第二个给药方法(在第1，8，和15天)时，发现肥大的发生率和严重性看上去有小幅度的增加。

当吸入两性霉素B时，也预期到弥漫性气管炎症。与两性霉素BN020226(高结晶体)相比，两性霉素B N020227(高无定形)的损害的发生率和严重性是增加的。与第一个给药方法(每日的)相比时，第二个给药方法(每周的)时，发现损害的发生率是降低的。

只在用两性霉素B N020227(高无定形)治疗的动物中发现气管和支气管腔渗出液。

总之，仅仅嘴给药两性霉素B(单独)，两性霉素B的剂量达到14.80mg/kg/剂量，产生象征着呼吸损伤的临床迹象。两性霉素B干粉末制剂B N020226(高结晶体)和B N020227(高无定形)的吸入，在第1，2，和3天或第1，8，15天，与气管和支气管粘膜增生，气管发炎，支气管粘膜炎症细胞浸润及气管和支气管腔渗出液有关。与两性霉素B N020226(高结晶体)相比，用两性霉素B N020227(高无定形)时，发生率和严重性的研究结果是增加的。与第一个给药方法(在第1，2，和3天)相比，在第二个给药方法(在第1，8，和15天)时，虽然气管发炎的严重性和发生率是降低的，但是在肥大的发生率和严重性方面有小幅度的增加。在两者之中的任一给药方法，用两性霉素BN020227(高无定形)治疗的高剂量和低剂量组之间，几乎无差别。用两性霉素B N020226(高结晶体)治疗的组，对于两个给药方法，低剂量组的结果比较不严重，并且发生率降低。

实施例17

每天和每周给药两种干粉末在犬体内的毒性

这个实施例包括测定两性霉素B两个不同批次干粉末在比格尔犬体内的毒性，在通过吸入途径每周给药之后。

包含50wt％活性成分的两性霉素B粉末利用实施例8中描述的工艺制备。得到的粉末具有的特性在下表14中显示。

表14

API，结晶％	API粒子尺寸，x50(μm)	粉末批次数	粉末，结晶％	粉末MMAD，重量分析(μm)	粉末MMAD，药物特征(μm)
API，结晶％	API粒子尺寸，x50(μm)	粉末批次数	粉末，结晶％	粉末MMAD，重量分析(μm)	粉末MMAD，药物特征(μm)	94	NA	N020226	100	2.3	2.3
6	3.05	N020227	4	2.5	3.2	94	NA	N020226	100	2.3	2.3

NA＝不可获得

四只雄性和4只雌性比格尔犬被分配为4个剂量组并且治疗，如下表15所示。

表15

剂量组/治疗	第一天靶制剂剂量水平(mg/kg)	第8和15天制剂剂量水平(mg/kg)	动物标号/命名
剂量组/治疗	第一天靶制剂剂量水平(mg/kg)	第8和15天制剂剂量水平(mg/kg)	动物标号/命名	1.载体对照	30	6	1M，5F
2.低剂量^A	10^*	2^*	2M，6F	1.载体对照	30	6	1M，5F
2.低剂量^A	10^*	2^*	2M，6F	3.高剂量^A	30^*	6^*	3M，7F
4.高剂量^B	30^*	6^*	4M，8F	3.高剂量^A	30^*	6^*	3M，7F

^*＝包含50wt％两性霉素B的干粉末制剂

^A＝用两性霉素B批次N020226(高结晶度)给药

^B＝用两性霉素B批次N020227(高无定形度)给药

动物按上表15用密闭接合的面罩(与嘴管相联)系统给药，每天一次，每次30分钟。

完成了下面的研究：临床观察，体重，食物消耗，血液学，临床化学，呼吸过程测量(潮流气量，呼吸速率，每分钟呼吸体积)，组织病理学，毒性动力学，和生物分析化学。

第一天载体制剂的全组平均暴露室浓度为1.34mg/L并且后来的全组平均暴露室浓度为0.31mg/L。第一天，第2组，第3组，和第4组的两性霉素B制剂的全组平均暴露室浓度分别为0.73，1.80，和1.58mg/L，并且后来这些组的两性霉素B制剂的全组平均暴露室浓度分别为0.13，0.33，和0.33mg/L。第2组，第3组，和第4组第一天的单独的两性霉素B(分析测量)的全组平均暴露室浓度分别为0.236，0.521，和0.796mg/L并且后来这些组的单独的两性霉素B(分析测量)的全组平均暴露室浓度分别为0.0427，0.120，和0.154mg/L。

第一天载体制剂的全组平均(性别混合)估计达到的剂量水平为29.3mg/kg并且后来的全组平均(性别混合)估计达到的剂量水平为6.9mg/kg。第一天，第2组，第3组，和第4组的两性霉素B制剂的全组平均(性别混合)估计达到的剂量水平分别为16.3，45.1，和33.0mg/kg并且后来这些组的两性霉素B制剂的全组平均(性别混合)估计达到的剂量水平分别为2.9，8.1，和6.7mg/kg。第一天，第2组，第3组，和第4组单独的两性霉素B(分析测量)制剂的全组平均(性别混合)估计达到的剂量水平分别为5.3，13.0，和16.0mg/kg并且后来这些组的单独的两性霉素B制剂的全组平均(性别混合)估计达到的剂量水平分别为0.96，3.0，和3.2mg/kg。

粒子尺寸分布数据显示，第一天81.1％的载体气雾剂粒子小于5μm并且后来78.9％的载体气雾剂粒子小于5μm，伴随着第一天0.84μm(4.553)的空气动力学质量中位直径(MMAD)(±几何标准偏差(GSD))和后来1.41μm(3.104)的空气动力学质量中位直径(MMAD)(±几何标准偏差(GSD))。第一天，第2组，第3组，和第4组分别69.0％，83.1％，和43.3％的两性霉素B制剂颗粒状物小于5μm，并且后来这些组分别85.9％，67.6％，和57.3％的两性霉素B制剂颗粒状物小于5μm，伴随着第一天这些组的分别1.96μm(2.406)，1.17μm(2.725)，和3.26μm(2.789)的MMAD和(GSD)，和后来这些组的分别0.69μm(4.623)，1.62μm(3.317)，和2.85μm(2.692)的MMAD和(GSD)。第一天，第2组，第3组，和第4组分别57.7％，73.6％，和46.2％的单独的两性霉素B(分析测量)颗粒状物小于5μm，并且后来这些组分别72.6％，63.6％，和62.8％的单独的两性霉素B分析测量)颗粒状物小于5μm，伴随着第一天这些组的分别2.20μm(2.644)，1.79μm(2.378)，和3.32μm(2.482)的MMAD和(GSD)，和后来这些组的分别1.96μm(2.507)，2.00μm(2.526)，和2.48μm(2.168)的MMAD和(GSD)。

在体重，血液学，临床化学，食物消耗或呼吸过程测量常数方面没有观察到显著的变化。

所有尸体解剖的研究结果象征着在这个生长时期的犬体内自然地发生的背景研究结果。没有尸体解剖研究结果由两性霉素B的给药引起的。

所有组织病理学的研究结果象征着在这个生长时期的犬体内自然地发生的背景研究结果。没有组织病理学研究结果由两性霉素B的给药引起的。

毒性动力学分析表明在所有治疗动物(除了第4组动物4M)的血浆中检测到两性霉素B的可量化水平。在所有剂量治疗组中检测的水平相当。在载体对照样品中检测不到两性霉素B的可量化水平。

总之，通过吸入对比格尔犬给药两性霉素B制剂(或分析测量的两性霉素B))，每周给药一次，剂量达到8.2(3.2)mg/kg，在所有给药剂量的组中(包括载体对照)，吸入给药与流涎症有关。在第2组和第4组个别的动物体内也观察到包括变红的齿龈的非主要的临床迹象，同时在第2组的一只动物体内也观察到变红的耳朵。对于第3组的一只动物，注意到呕吐的和反胃的食物。在体重，食物消耗，血液学，临床化学，或呼吸过程测量曲线方面没有观察到变化。没有尸体解剖或组织病理学研究结果由两性霉素B的给药引起的。粒子尺寸分布测量揭示，与两性霉素B批次N020226(高结晶体)相比，在高剂量水平时两性霉素B批次N020227(高无定形)有显著地比较大的粒子尺寸。

实施例18

大鼠体内14天的吸入毒性研究

这个实施例包括14天的两性霉素B制剂的毒理学研究，两性霉素B利用实施例2中的方法制备。用仅仅暴露嘴技术对八十只大鼠给药，在0mg/kg(空气对照或只有载体)，2.5mg/kg，10mg/kg或25mg/kg的靶剂量每天给药60分钟，至少给药14天。

恢复的动物在给药后保留14天的恢复阶段。在研究的第1天和第14天，在给药之前，给药后2小时，和给药后4小时从指定的仅仅给药载体的动物和高剂量组动物(25mg/kg)获得用于毒性动力学分析的血液样品。在14天的恢复阶段过程中，在恢复的第7天和第14天，从雄性动物也获得用于毒性动力学分析的血液样品，并且由于雌性动物的体重比较低，只在恢复的第14天从雌性动物获得用于毒性动力学分析的血液样品。

在14天的治疗阶段(第15天)的结束或14天的恢复阶段的结束(第29天)时，所有研究的动物遭受详细的尸体解剖过程。在尸体解剖过程中，从每一个动物身上得到用于毒性动力学分析的肺组织样品。血浆中两性霉素B的浓度利用液相色谱-质谱分光光度计串联(LC-MS/MS)的方法(较低的定量限度[LLQ]＝10ng/mL)测定，并且肺组织中两性霉素B的浓度利用高效液相色谱(HPLC)和可见光检测器(LLQ＝4μg/g)测定。

两性霉素B在所有取样动物的血浆和肺组织中检测到，取样的动物接受了两性霉素B粉末。对于两种性别的动物，血浆或肺中依赖于剂量的浓度-时间量变曲线是相似的。

给药14天后，两性霉素B在血浆中没有明显的蓄积，并且通过发表的静脉(IV)给药后两性霉素B的消除半衰期可以预料两性霉素B在血浆中是降低的。血浆C_max值为给药类似IV剂量的脂质体两性霉素B时发现的血浆C_max的1/1000或1/3000。

肺浓度随着剂量的增加而增加，但是不成比例。在给药结束时平均肺浓度比那些报道的肺中两性霉素B的浓度高10至30倍，这些报道的肺浓度是在静脉给药类似剂量的两性霉素B脂质体后的浓度。在这个实施例中，肺组织暴露显著地比以前长期静脉给药后报道的大。在恢复期间，肺组织浓度按比率降低，这个比率暗示了分别在1.1和12.4mg/kg剂量水平时，两性霉素B消除半衰期的值为22和34天，与报道的肺中两性霉素B相似，在IV和吸入给药两性霉素B脂质体后。

实施例19

犬体内14天的吸入毒性研究

这个实施例包括评定连续14天吸入给药后两性霉素B制剂在犬体内的肺和系统毒性，该两性霉素B制剂利用实施例2中的方法制备，和经过14天的恢复阶段后高剂量时28只犬(14M，14F)体内任何效果的可反转性。

用密闭的面罩系统在1.4，5.6，和11.5mg/kg的剂量给药活性药物，每天给药30分钟。在研究的第一天和第14天，在暴露之前，暴露后2，4，8，12，和24小时从指定的给药载体的动物和高剂量组动物获得用于毒性动力学分析的血液样品并且在14天的恢复阶段过程中的每一天，也从上述的动物获得用于毒性动力学分析的血液样品。用于主要研究的动物在第15天，恢复的动物在第29天被处死并且进行尸体解剖，在尸体解剖过程中得到每个动物的用于毒性动力学分析的右前叶。血浆中两性霉素B的浓度利用液相色谱-质谱分光光度计串联(LC-MS/MS)的方法(较低的定量限度[LLQ]＝10ng/mL)测定，并且肺组织中两性霉素B的浓度利用高效液相色谱(HPLC)和可见光检测器(LLQ＝4μg/g)测定。

给药14天后，两性霉素B在血浆中蓄积，并且通过本实施例观察得的血浆消除半衰期值预料两性霉素B在血浆中是降低的。接受11.5mg/kg两性霉素B的犬的平均血浆C_max值是报道的接受静脉给药两性霉素去氧胆酸盐的犬的平均血浆C_max值的1/25，并且是在相同时期接受每天IV给药两性霉素B脂质体的犬的平均血浆C_max的1/1000。

两性霉素B肺浓度随着剂量的增加而增加，但是不成比例。在暴露时期结束时平均两性霉素B肺浓度比那些报道的平均两性霉素B肺浓度高22至40倍，那些报道的平均两性霉素B肺浓度是在IV给药两性霉素B去氧胆酸盐或两性霉素B脂质体后的平均肺浓度。在这个对犬的研究中，肺组织暴露显著地比以前报道的长期IV给药后大。在恢复期间，肺组织浓度按比率降低，这个比率暗示了表观的18.8天的消除半衰期，与报道的通过IV和吸入对大鼠给药两性霉素B脂质体后的消除半衰期相似。

实施例20

药物产物稳定性研究

对两性霉素B粉末的稳定性进行评价，如下表16所示。在所有情况下，粉末都装在HPMC胶囊中。胶囊放在25cc HDPE瓶中。每个瓶子放在双层袋中并且干燥剂放入外袋中。

表16

批次数	浓度(wt％)	批次靶填充重量(mg粉末每胶囊)	2-8℃获取的数据(mos.)
批次数	浓度(wt％)	批次靶填充重量(mg粉末每胶囊)	2-8℃获取的数据(mos.)	10017	5	9.43	18
10029	50	9.52	18	10017	5	9.43	18
10029	50	9.52	18	10247	50	10.62	9

这个稳定性观察的摘要和结论在下面提供。

外观

在所有试验点和所有状态，三批全部符合外观标准。

含量

5wt％的两性霉素B：对于批次10017，开始时的结果是每mg粉末含两性霉素B 0.053mg。在18个月以后，在两个贮藏条件下，结果从每mg粉末含两性霉素B 0.049至0.053mg。

50wt％的两性霉素B：对于批次10029，开始时的结果是每mg粉末含两性霉素B 0.507mg。在18个月以后，在两个贮藏条件下，结果从每mg粉末含两性霉素B 0.469至0.508mg。

对于批次10247，开始时的结果是每mg粉末含两性霉素B 0.470mg。在2-8℃贮藏9个月以后，结果从每mg粉末含两性霉素B 0.448至0.446mg。在25℃/60％RH的贮藏条件下，在1月，3月，和6月的结果分别为每mg粉末含两性霉素B 0.441，0.399，和0.385mg。

水分

开始时，三个批次的结果在3-5wt％之间变化。在正常和加速贮藏条件下贮藏后，含水量在3-6wt％之间变化。

发射剂量

开始时，所有批次的平均ED在89-94％(8.9mg/胶囊至10.0mg/胶囊)之间变化。在正常和加速贮藏条件下贮藏后，结果在88-96％(8.8mg/胶囊至10.2mg/胶囊)之间变化。

全氟碳化合物残留(PFOB)

在装入胶囊之前，在大量粉末上完成PFOB的检测。所有检验批次的大量粉末的结果<0.1wt％。在12月时间点上检测批次10017和10029的PFOB，两批的水平<0.05-0.1wt％。

需氧计数和特定病原

在开始的试验点，对所有批次进行了微生物限制试验。在25℃/60％RH的贮藏条件下，贮藏12个月后，对批次10017和10029进行了微生物限制试验，并且结果符合验收标准。

纯度

所有批次开始时标准化范围的主要峰纯度在93.6-96.4％之间变化。在正常和加速贮藏条件下贮藏后，主要峰纯度在94.0-96.5％之间变化。

气雾剂粒子尺寸

MMAD：开始时批次的空气动力学质量中位直径(MMAD)结果在2.7-3.0μm之间变化。在正常和加速贮藏条件下贮藏后，MMAD在2.6-3.1μm之间变化。

结论

文中显示的稳定性结果证明在包装并在2-8℃贮藏时，5wt％的两性霉素B粉末(10mg)和50wt％的两性霉素B粉末(10mg)是稳定的并且显示可接受的产物特性，产物特性包括外观，两性霉素B含量，纯度，含水量，微生物特性，和气雾剂特性。

实施例21

在高湿条件暴露后的特性

这个实施例包括明确合适的时间段，合适的时间段是指在70％RH的条件下，胶囊在袋外的时间，并且胶囊仍旧符合发射剂量验收标准(ED％≥85％并且ED≥8.5mg)。

检查了两种制剂：5wt％的两性霉素B粉末(批次X1429)和50wt％的两性霉素B粉末(批次N020242)。制剂装在放在袋中的胶囊内。为了测量ED，应用吸入器装置，该装置在美国专利申请10/298,177中描述，其内容全文并入作为参考。该装置在25℃/70％RH的条件下平衡。

在启动之前，胶囊以特定的间隔暴露在25℃/70％RH的条件下。在10个时间点测量ED，每个制剂共测10个ED启动，如下表17所示。

表17

起动#	靶时间点(min)
起动#	靶时间点(min)	1	2
2	10	1	2
2	10	3	20
4	30	3	20
4	30	5	36
6	42	5	36
6	42	7	48
8	54	7	48
8	54	9	60
10	66	9	60

批次N020242的结果在下表18中显示。

表18

ED(％RSD)＝8.66mg(4)

ED范围＝8.28-9.43mg

％ED(％RSD)＝85％(4)

％ED范围＝81-93％

样品#	靶时间点(min)	收集的粉末量(mg)	ED(％)
样品#	靶时间点(min)	收集的粉末量(mg)	ED(％)	1	2	8.54	83
2	10	8.37	82	1	2	8.54	83
2	10	8.37	82	3	20	8.28	81
4	30	8.67	85	3	20	8.28	81
4	30	8.67	85	5	36	8.31	82
6	42	8.69	85	5	36	8.31	82
6	42	8.69	85	7	48	8.83	87
8	54	8.60	85	7	48	8.83	87
8	54	8.60	85	9	60	9.43	93
10	66	8.83	86	9	60	9.43	93

批次X1429的结果在下表19中显示。

表19

ED(％RSD)＝9.16(2)

ED范围＝8.88-9.35mg

％ED(％RSD)＝89％(2)

％ED范围＝86-91％

样品#	靶时间点(min)	收集的粉末量(mg)	ED(％)
样品#	靶时间点(min)	收集的粉末量(mg)	ED(％)	1	2	9.09	87
2	10	9.09	89	1	2	9.09	87
2	10	9.09	89	3	20	9.24	90
4	30	9.03	87	3	20	9.24	90
4	30	9.03	87	5	36	9.29	90
6	42	8.88	86	5	36	9.29	90
6	42	8.88	86	7	48	9.35	91
8	54	9.20	89	7	48	9.35	91
8	54	9.20	89	9	60	9.31	91
10	66	9.11	89	9	60	9.31	91

上面的数据表明ED特性和增加的高湿度的暴露之间没有相关。在高湿环境中，平均ED特性降低，但是仍旧符合验收标准。批次N020242(50wt ％的两性霉素B制剂)的平均ED特性符合验收标准，但是不是所有单一的ED≥85％和≥8.5mg。

选择的实施例的摘要

选择的实施例的摘要在下表20所示。

表20

表20(继续)

表20(继续)

表20(继续)

表20(继续)

表20(继续)

虽然本发明的数个实施例已经尽量描述的很详细，并且考虑到一定的优先的方案，其他方案也是可能的，并且显示的方案的改变，变更和等效的对本领域熟练技术人员来说显而易见，在本领域熟练技术人员阅读说明书和研究绘图之后。例如，在气雾剂装置中相关元件相对位置可以改变，并且弹性部件可以被更加刚性的或其他可移动的部件替代，以模仿弹性部件的作用。而且，通道不需要必须为大致上线性，如附图中所示，但是例如可以为曲线型或角型。同样，本文方案的各种特征可以多种方法混合，提供本发明附加的实施方案。进一步，为了描述清楚应用了一定的术语，并非限制本发明。因此，呈送的与这个公开相关的任何权利要求不应该限于本文优先方案的描述，并且应该包括所有这样的改变，变更和等效，因为改变，变更和等效落入本发明的实质和范围。

Claims

1.组合物，其包括：

包括至少约95wt％两性霉素B的粒子，

其中所述的粒子具有约1.1μm至约1.9μm的质量中位直径。

2.如权利要求1所述的组合物，其中所述的质量中位直径为约1.2μm至约1.8μm。

3.如权利要求1所述的组合物，其中所述的粒子的至少约80wt％具有约1.1μm至约1.9μm的几何直径。

4.如权利要求1所述的组合物，其中所述的粒子的至少约90wt％具有约1.1μm至约1.9μm的几何直径。

5.如权利要求1所述的组合物，其中所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度。

6.如权利要求1所述的组合物，其中所述的两性霉素B具有至少约70％的结晶度。

7.如权利要求1所述的组合物，其中所述的两性霉素B具有至少约90％的结晶度。

8.如权利要求1所述的组合物，其中所述的两性霉素B具有约50％至约99％的结晶度。

9.组合物，其包括：

包括至少约95wt％两性霉素B的粒子，

其中所述的粒子的至少约80wt％具有约1.1μm至约1.9μm的几何直径。

10.如权利要求9所述的组合物，其中所述的粒子的至少约90wt％具有约1.1μm至约1.9μm的几何直径。

11.如权利要求9所述的组合物，其中所述的粒子具有约1.1μm至约1.9μm的质量中位直径。

12.如权利要求9所述的组合物，其中所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度。

13.如权利要求9所述的组合物，其中所述的两性霉素B具有至少约70％的结晶度。

14.如权利要求9所述的组合物，其中所述的两性霉素B具有至少约90％的结晶度。

15.如权利要求9所述的组合物，其中所述的两性霉素B具有约50％至约99％的结晶度。

16.组合物，其包括：

包括两性霉素B的粒子，

其中所述的粒子具有小于约1.9μm的质量中位直径，及

其中所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度。

17.如权利要求16所述的组合物，其中所述的质量中位直径为约0.5μm至约1.8μm。

18.如权利要求16所述的组合物，其中所述的粒子的至少约80wt％具有小于约3μm的几何直径。

19.如权利要求16所述的组合物，其中所述的粒子的至少约90wt％具有小于约3μm的几何直径。

20.如权利要求16所述的组合物，其中所述的两性霉素B具有至少约70％的结晶度。

21.如权利要求16所述的组合物，其中所述的两性霉素B具有至少约90％的结晶度。

22.如权利要求16所述的组合物，其中所述的粒子中两性霉素B的结晶度为约50％至约99％。

23.药物组合物，其包括：

有效量的两性霉素B，及

药学可接受的赋形剂，

其中所述的药物组合物由包括两性霉素B的粒子组成，该粒子的质量中位直径为约1.1μm至约1.9μm。

24.如权利要求23所述的药物组合物，其中所述的药物组合物由包括两性霉素B的粒子制成，该粒子的质量中位直径为约1.2μm至约1.8μm。

25.如权利要求23所述的组合物，其中所述的粒子的至少约80wt％具有约1.1μm至约1.9μm的几何直径。

26.如权利要求23所述的组合物，其中所述的粒子的至少约90wt％具有约1.1μm至约1.9μm的几何直径。

27.如权利要求23所述的药物组合物，其中所述的两性霉素B具有至少约50％的结晶度。

28.如权利要求23所述的药物组合物，其中所述的两性霉素B具有至少约70％的结晶度。

29.如权利要求23所述的药物组合物，其中所述的两性霉素B具有至少约80％的结晶度。

30.如权利要求23所述的药物组合物，其中所述的药物组合物包括粒子。

31.如权利要求30所述的药物组合物，其中所述的粒子具有约1μm至约6μm的空气动力学质量中位直径。

32.如权利要求23所述的药物组合物，其中所述的药物组合物的至少约80wt％包括含有两性霉素B和药学可接受的赋形剂的粒子。

33.如权利要求23所述的药物组合物，其中所述的药物组合物包括具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径的粒子，并且其中所述的两性霉素B具有至少约70％的结晶度。

34.如权利要求23所述的药物组合物，其中所述的药学可接受的赋形剂包括选自碳水化合物，脂类，氨基酸，缓冲剂和盐中的至少一种。

35.如权利要求23所述的药物组合物，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂。

36.如权利要求23所述的药物组合物，其中所述的药学可接受的赋形剂包括金属离子。

37.如权利要求23所述的药物组合物，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂和金属离子。

38.如权利要求23所述的药物组合物，其中所述的药物组合物包括中空的和/或多孔的粒子。

39.如权利要求23所述的药物组合物，其中所述的药物组合物包括包含两性霉素B的粒子，所述两性霉素B处在由药学可接受的赋形剂制成的基质中。

40.如权利要求39所述的药物组合物，其中所述的药学可接受的赋形剂包括至少一种磷脂。

41.如权利要求23所述的药物组合物，其中所述的药物组合物包括干粉末。

42.如权利要求23所述的药物组合物，其中所述的药物组合物进一步包括推进剂。

43.如权利要求42所述的药物组合物，其中所述的推进剂包括至少一种氢氟烷烃。

44.如权利要求23所述的药物组合物，其中所述的药物组合物包括具有约1μm至约6μm的空气动力学质量中位直径的粒子，其中所述的两性霉素B具有至少约70％的结晶度，其中所述的药物组合物的至少约80wt％包括包含两性霉素B的粒子，该两性霉素B处在由药学可接受的赋形剂制成的基质中，并且其中所述的药学可接受的赋形剂包括至少一种磷脂。

45.药物组合物，其包括：

有效量的两性霉素B，及

药学可接受的赋形剂，

其中所述的药物组合物由包括两性霉素B的粒子制成，并且其中所述的包括两性霉素B的粒子的至少约80wt％具有约1.1μm至约1.9μm的几何直径。

46.如权利要求45所述的组合物，其中所述的粒子的至少约90wt％具有约1.1μm至约1.9μm的几何直径。

47.如权利要求45所述的药物组合物，其中所述的药物组合物由包含两性霉素B的粒子制成，该粒子具有约1.2μm至约1.8μm的质量中位直径。

48.如权利要求45所述的药物组合物，其中所述的两性霉素B具有至少约50％的结晶度。

49.如权利要求45所述的药物组合物，其中所述的两性霉素B具有至少约70％的结晶度。

50.如权利要求45所述的药物组合物，其中所述的两性霉素B具有至少约80％的结晶度。

51.如权利要求45所述的药物组合物，其中所述的药物组合物包括粒子。

52.如权利要求51所述的药物组合物，其中所述的粒子具有约1μm至约6μm的空气动力学质量中位直径。

53.如权利要求45所述的药物组合物，其中所述的药物组合物的至少约80wt％包括含有两性霉素B和药学可接受的赋形剂的粒子。

54.如权利要求45所述的药物组合物，其中所述的药物组合物包括具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径的粒子，并且其中所述的两性霉素B具有至少约70％的结晶度。

55.如权利要求45所述的药物组合物，其中所述的药学可接受的赋形剂包括选自碳水化合物，脂类，氨基酸，缓冲剂和盐中的至少一种。

56.如权利要求45所述的药物组合物，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂。

57.如权利要求45所述的药物组合物，其中所述的药学可接受的赋形剂包括金属离子。

58.如权利要求45所述的药物组合物，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂和金属离子。

59.如权利要求45所述的药物组合物，其中所述的药物组合物包括中空的和/或多孔的粒子。

60.如权利要求45所述的药物组合物，其中所述的药物组合物包括包含两性霉素B的粒子，该两性霉素B处在由药学可接受的赋形剂制成的基质中。

61.如权利要求60所述的药物组合物，其中所述的药学可接受的赋形剂包括至少一种磷脂。

62.如权利要求45所述的药物组合物，其中所述的药物组合物包括干粉末。

63.如权利要求45所述的药物组合物，其中所述的药物组合物进一步包括推进剂。

64.如权利要求63所述的药物组合物，其中所述的推进剂包括至少一种氢氟烷烃。

65.如权利要求45所述的药物组合物，其中所述的药物组合物包括具有约1μm至约6μm的空气动力学质量中位直径的粒子，其中所述的两性霉素B具有至少约70％的结晶度，其中所述的药物组合物的至少约80wt％包括包含两性霉素B的粒子，该两性霉素B处在包括药学可接受的赋形剂的基质中，其中所述的药学可接受的赋形剂包括至少一种磷脂。

66.药物组合物，其包括：

有效量的两性霉素B，及

药学可接受的赋形剂，

其中所述的两性霉素B具有约20％至约99％的结晶度。

67.如权利要求66所述的药物组合物，其中所述的两性霉素B具有约70％至约98％的结晶度。

68.如权利要求66所述的药物组合物，其中所述的药物组合物由具有小于约3μm的质量中位直径的包含两性霉素B的粒子制成。

69.如权利要求66所述的药物组合物，其中所述的药物组合物由具有小于约2μm的质量中位直径的包含两性霉素B的粒子制成。

70.如权利要求66所述的药物组合物，其中所述的药物组合物由包括两性霉素B的粒子制成，并且其中该粒子的至少约80wt％具有小于约3μm的几何直径。

71.如权利要求66所述的药物组合物，其中所述的药物组合物由包含两性霉素B的粒子制成，并且其中该粒子的至少约90wt％具有小于约3μm的几何直径。

72.如权利要求66所述的药物组合物，其中所述的药物组合物包括粒子。

73.如权利要求72所述的药物组合物，其中所述的粒子具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径。

74.如权利要求72所述的药物组合物，其中所述的粒子具有约1μm至约6μm的空气动力学质量中位直径。

75.如权利要求66所述的药物组合物，其中所述的药物组合物的至少约80wt％包括含有两性霉素B和药学可接受的赋形剂的粒子。

76.如权利要求66所述的药物组合物，其中所述的药学可接受的赋形剂包括选自碳水化合物，脂类，氨基酸，缓冲剂和盐中的至少一种。

77.如权利要求66所述的药物组合物，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂。

78.如权利要求66所述的药物组合物，其中所述的药学可接受的赋形剂包括金属离子。

79.如权利要求66所述的药物组合物，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂和金属离子。

80.如权利要求66所述的药物组合物，其中所述的药物组合物包括中空的和/或多孔的粒子。

81.如权利要求66所述的药物组合物，其中所述的药物组合物包括包含两性霉素B的粒子，该两性霉素B处在包括药学可接受的赋形剂的基质中。

82.如权利要求81所述的药物组合物，其中所述的药学可接受的赋形剂包括至少一种磷脂。

83.如权利要求66所述的药物组合物，其中所述的药物组合物包括干粉末。

84.如权利要求66所述的药物组合物，其中所述的药物组合物进一步包括推进剂。

85.如权利要求84所述的药物组合物，其中所述的推进剂包括至少一种氢氟烷烃。

86.如权利要求66所述的药物组合物，其中所述的药物组合物包括具有约1μm至约6μm的空气动力学质量中位直径的粒子，并且其中所述的药物组合物的至少约80wt％包括包含两性霉素B的粒子，该两性霉素B处在包括药学可接受的赋形剂的基质中，并且其中所述的药学可接受的赋形剂包括至少一种磷脂。

87.干粉末，其包括：

具有至少约20％的结晶度的两性霉素B，

其中所述的干粉末包括具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径的粒子。

88.如权利要求87所述的干粉末，其中所述的两性霉素B具有约70％至约90％的结晶度。

89.如权利要求87所述的干粉末，其中所述的干粉末包括具有约1μm至约6μm的空气动力学质量中位直径的粒子。

90.如权利要求87所述的干粉末，其中所述的药物组合物由包括两性霉素B的粒子组成，该两性霉素B具有小于约3μm的质量中位直径。

91.如权利要求87所述的干粉末，其中所述的药物组合物由包括两性霉素B的粒子组成，并且其中所述的包括两性霉素B的粒子的至少约80wt％具有小于约3μm的几何直径。

92.如权利要求87所述的干粉末，其中所述的药物组合物的至少约80wt％包括含有两性霉素B和药学可接受的赋形剂的粒子。

93.如权利要求87所述的干粉末，其进一步包括药学上可接受的赋形剂。

94.如权利要求93所述的干粉末，其中所述的药学可接受的赋形剂包括选自碳水化合物，脂类，氨基酸，缓冲剂和盐中的至少一种。

95.如权利要求93所述的干粉末，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂。

96.如权利要求93所述的干粉末，其中所述的药学可接受的赋形剂包括金属离子。

97.如权利要求93所述的干粉末，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂和金属离子。

98.如权利要求87所述的干粉末，其中所述的干粉末包括中空的和/或多孔的粒子。

99.如权利要求87所述的干粉末，其中所述的干粉末包括包含两性霉素B的粒子，该两性霉素B处在包括药学可接受的赋形剂的基质中。

100.单位剂量形式，其包括：

装有药物组合物的容器，该药物组合物包括：

有效量的两性霉素B，及

药学可接受的赋形剂，

其中所述的药物组合物由包括两性霉素B的粒子制成，该粒子具有小于约1.9μm的质量中位直径。

101.如权利要求100所述的单位剂量形式，其中所述的容器包括胶囊。

102.如权利要求100所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物由包括两性霉素B的粒子组成，该粒子具有约0.5μm至约1.8μm的质量中位直径。

103.如权利要求100所述的单位剂量形式，其中所述的包括两性霉素B的粒子的至少约80％具有小于约1.9μm的几何直径。

104.如权利要求100所述的单位剂量形式，其中所述的包括两性霉素B的粒子的至少约90％具有小于约1.9μm的几何直径。

105.如权利要求100所述的单位剂量形式，其中所述的两性霉素B具有至少约50％的结晶度。

106.如权利要求100所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物包括粒子。

107.如权利要求106所述的单位剂量形式，其中所述的粒子具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径。

108.如权利要求106所述的单位剂量形式，其中所述的粒子具有约1μm至约6μm的空气动力学质量中位直径。

109.如权利要求100所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物的至少约80wt％包括含有两性霉素B和药学可接受的赋形剂的粒子。

110.如权利要求100所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物包括具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径的粒子，并且其中所述的两性霉素B具有至少约70％的结晶度。

111.如权利要求100所述的单位剂量形式，其中所述的药学可接受的赋形剂包括选自碳水化合物，脂类，氨基酸，缓冲剂和盐中的至少一种。

112.如权利要求100所述的单位剂量形式，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂。

113.如权利要求100所述的单位剂量形式，其中所述的药学可接受的赋形剂包括金属离子。

114.如权利要求100所述的单位剂量形式，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂和金属离子。

115.如权利要求100所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物包括中空的和/或多孔的粒子。

116.如权利要求100所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物包括包含两性霉素B的粒子，该两性霉素B处在包括药学可接受的赋形剂的基质中。

117.如权利要求100所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物包括具有约1μm至约6μm的空气动力学质量中位直径的粒子，其中所述的两性霉素B具有至少约70％的结晶度，其中所述的药物组合物的至少约80wt％包括包含两性霉素B的粒子，该两性霉素B处在包括药学可接受的赋形剂的基质中，并且其中所述的药学可接受的赋形剂包括至少一种磷脂。

118.单位剂量形式，其包括：

装有药物组合物的容器，该药物组合物包括：

有效量的两性霉素B，及

药学可接受的赋形剂，

其中所述的药物组合物由包括两性霉素B的粒子制成，并且其中粒子的至少约80wt％包括两性霉素B，该粒子具有小于约1.9μm的几何直径。

119.如权利要求118所述的单位剂量形式，其中所述的容器包括胶囊。

120.如权利要求118所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物由包括两性霉素B的粒子组成，该粒子具有约0.5μm至约1.8μm的质量中位直径。

121.如权利要求118所述的单位剂量形式，其中所述的包括两性霉素B的粒子的至少约90％具有小于约1.9μm的几何直径。

122.如权利要求118所述的单位剂量形式，其中所述的包括两性霉素B的粒子的至少约95％具有小于约1.9μm的几何直径。

123.如权利要求118所述的单位剂量形式，其中所述的两性霉素B具有至少约50％的结晶度。

124.如权利要求118所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物包括粒子。

125.如权利要求124所述的单位剂量形式，其中所述的粒子具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径。

126.如权利要求124所述的单位剂量形式，其中所述的粒子具有约1μm至约6μm的空气动力学质量中位直径。

127.如权利要求118所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物的至少约80％包括含有两性霉素B和药学可接受的赋形剂的粒子。

128.如权利要求118所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物包括具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径的粒子，并且其中所述的两性霉素B具有至少约70％的结晶度。

129.如权利要求118所述的单位剂量形式，其中所述的药学可接受的赋形剂包括选自碳水化合物，脂类，氨基酸，缓冲剂和盐中的至少一种。

130.如权利要求118所述的单位剂量形式，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂。

131.如权利要求118所述的单位剂量形式，其中所述的药学可接受的赋形剂包括金属离子。

132.如权利要求118所述的单位剂量形式，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂和金属离子。

133.如权利要求118所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物包括中空的和/或多孔的粒子。

134.如权利要求118所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物包括包含两性霉素B的粒子，该两性霉素B处在包括药学可接受的赋形剂的基质中。

135.如权利要求134所述的单位剂量形式，其中所述的药学可接受的赋形剂包括至少一种磷脂。

136.如权利要求118所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物包括干粉末。

137.如权利要求118所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物包括具有约1μm至约6μm的空气动力学质量中位直径的粒子，其中所述的两性霉素B具有至少约70％的结晶度，其中所述的药物组合物的至少约80wt％包括包含两性霉素B的粒子，该两性霉素B处在包括药学可接受的赋形剂的基质中，并且其中所述的药学可接受的赋形剂包括至少一种磷脂。

138.单位剂量形式，其包括：

装有药物组合物的容器，该药物组合物包括：

两性霉素B；及

药学可接受的赋形剂，

其中两性霉素B具有约20％至约99％的结晶度。

139.如权利要求138所述的单位剂量形式，其中所述的两性霉素B具有约70％至约98％的结晶度。

140.如权利要求138所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物由包括两性霉素B的粒子组成，该粒子具有小于约3μm的质量中位直径。

141.如权利要求138所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物由包括两性霉素B的粒子组成，并且其中所述的包括两性霉素B的粒子的至少约80％具有小于约3μm的几何直径。

142.如权利要求138所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物包括粒子。

143.如权利要求142所述的单位剂量形式，其中所述的粒子具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径。

144.如权利要求142所述的单位剂量形式，其中所述的粒子具有约1μm至约6μm的空气动力学质量中位直径。

145.如权利要求138所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物的至少约80wt％包括含有两性霉素B和药学可接受的赋形剂的粒子。

146.如权利要求138所述的单位剂量形式，其中所述的药学可接受的赋形剂包括选自碳水化合物，脂类，氨基酸，缓冲剂和盐中的至少一种。

147.如权利要求138所述的单位剂量形式，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂。

148.如权利要求138所述的单位剂量形式，其中所述的药学可接受的赋形剂包括金属离子。

149.如权利要求138所述的单位剂量形式，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂和金属离子。

150.如权利要求138所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物包括中空的和/或多孔的粒子。

151.如权利要求138所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物包括包含两性霉素B的粒子，该两性霉素B处在包括药学可接受的赋形剂的基质中。

152.如权利要求151所述的单位剂量形式，其中所述的药学可接受的赋形剂包括至少一种磷脂。

153.如权利要求138所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物包括干粉末。

154.如权利要求138所述的单位剂量形式，其中所述的药物组合物包括具有约1μm至约6μm的空气动力学质量中位直径的粒子，并且其中所述的药物组合物的至少约80wt％包括包含两性霉素B的粒子，该两性霉素B处在包括药学可接受的赋形剂的基质中，并且其中所述的药学可接受的赋形剂包括至少一种磷脂。

155.递送系统，其包括：

吸入器；及

包含粒子的药物组合物，包括：

两性霉素B，和

药学可接受的赋形剂，

其中所述的粒子由包含两性霉素B的粒子制成，该粒子具有小于约1.9μm的质量中位直径。

156.如权利要求155所述的递送系统，其中所述的吸入器包括干粉末吸入器。

157.如权利要求155所述的递送系统，其中所述的吸入器包括含有所述的粒子和推进剂的容器，并且其中所述的吸入器包括与所述的容器内部相通的计量阀。

158.如权利要求155所述的递送系统，其中所述的吸入器包括喷雾器，并且其中所述的粒子悬浮在液体中。

159.如权利要求155所述的递送系统，其中所述的粒子由包括两性霉素B的粒子组成，该粒子具有约0.5μm至约1.8μm的质量中位直径。

160.如权利要求155所述的递送系统，其中所述的包括两性霉素B的粒子的至少约80wt％具有小于约1.9μm的几何直径。

161.如权利要求155所述的递送系统，其中所述的两性霉素B具有至少约50％的结晶度。

162.如权利要求155所述的递送系统，其中所述的两性霉素B具有约70％至约99％的结晶度。

163.如权利要求155所述的递送系统，其中所述的粒子具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径。

164.如权利要求155所述的递送系统，其中所述的粒子具有约1μm至约6μm的空气动力学质量中位直径。

165.如权利要求155所述的递送系统，其中所述的药物组合物的至少约80wt％包括含有两性霉素B和药学可接受的赋形剂的粒子。

166.如权利要求155所述的递送系统，其中所述的粒子具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径，并且其中所述的两性霉素B具有至少约70％的结晶度。

167.如权利要求155所述的递送系统，其中所述的药学可接受的赋形剂包括选自碳水化合物，脂类，氨基酸，缓冲剂和盐中的至少一种。

168.如权利要求155所述的递送系统，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂。

169.如权利要求155所述的递送系统，其中所述的粒子包括两性霉素B，该两性霉素B处在包括药学可接受的赋形剂的基质中。

170.如权利要求155所述的递送系统，其中所述的粒子具有约1μm至约6μm的空气动力学质量中位直径，其中所述的药物组合物的至少约80wt％包括包含两性霉素B的粒子，该两性霉素B处在包括药学可接受的赋形剂的基质中，并且其中所述的药学可接受的赋形剂包括至少一种磷脂。

171.递送系统，其包括：

吸入器；和

包括粒子的药物组合物，包括：

两性霉素B，及

药学可接受的赋形剂，

其中粒子由包括两性霉素B的粒子制成，并且其中所述的包括两性霉素B的粒子的至少约80wt％具有小于约1.9μm的几何直径。

172.如权利要求171所述的递送系统，其中所述的吸入器包括干粉末吸入器。

173.如权利要求171所述的递送系统，其中所述的吸入器包括含有所述的粒子和推进剂的容器，并且其中所述的吸入器包括与所述的容器内部相通的计量阀。

174.如权利要求171所述的递送系统，其中所述的吸入器包括喷雾器，并且其中所述的粒子悬浮在液体中。

175.如权利要求171所述的递送系统，其中所述的粒子由包括两性霉素B的粒子组成，该粒子具有约0.5μm至约1.8μm的质量中位直径。

176.如权利要求171所述的递送系统，其中所述的包括两性霉素B的粒子的至少约80wt％具有小于约1.9μm的几何直径。

177.如权利要求171所述的递送系统，其中所述的两性霉素B具有至少约50％的结晶度。

178.如权利要求171所述的递送系统，其中所述的两性霉素B具有约70％至约99％的结晶度。

179.如权利要求171所述的递送系统，其中所述的粒子具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径。

180.如权利要求171所述的递送系统，其中所述的粒子具有约1μm至约6μm的空气动力学质量中位直径。

181.如权利要求171所述的递送系统，其中所述的药物组合物的至少约80wt％包括含有两性霉素B和药学可接受的赋形剂的粒子。

182.如权利要求171所述的递送系统，其中所述的粒子具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径，并且其中所述的两性霉素B具有至少约70％的结晶度。

183.如权利要求171所述的递送系统，其中所述的药学可接受的赋形剂包括选自碳水化合物，脂类，氨基酸，缓冲剂和盐中的至少一种。

184.如权利要求171所述的递送系统，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂。

185.如权利要求171所述的递送系统，其中所述的粒子包括在基质中的两性霉素B，该基质包含药学可接受的赋形剂。

186.如权利要求171所述的递送系统，其中所述的粒子具有约1μm至约6μm的空气动力学质量中位直径，并且其中所述的药物组合物的至少约80wt％包括包含两性霉素B的粒子，该两性霉素B处在包括药学可接受的赋形剂的基质中，并且其中所述的药学可接受的赋形剂包括至少一种磷脂。

187.递送系统，其包括：

吸入器；和

包括粒子的药物组合物，包括：

具有约20％至约99％结晶度的两性霉素B，及

药学可接受的赋形剂。

188.如权利要求187所述的递送系统，其中所述的吸入器包括干粉末吸入器。

189.如权利要求187所述的递送系统，其中所述的吸入器包括含有所述的粒子和推进剂的容器，并且其中所述的吸入器包括与所述的容器内部相通的计量阀。

190.如权利要求187所述的递送系统，其中所述的吸入器包括喷雾器，并且其中所述的粒子悬浮在液体中。

191.如权利要求187所述的递送系统，其中所述的两性霉素B具有约70％至约98％的结晶度。

192.如权利要求187所述的递送系统，其中所述的粒子由包括两性霉素B的粒子制成，该粒子具有小于约3μm的质量中位直径。

193.如权利要求187所述的递送系统，其中所述的粒子由包括两性霉素B的粒子制成，所述的粒子具有小于约2μm的质量中位直径。

194.如权利要求187所述的递送系统，其中所述的粒子由包括两性霉素B的粒子制成，其中所述的包括两性霉素B的粒子的至少约80％具有小于约3μm的几何直径。

195.如权利要求187所述的递送系统，其中所述的粒子具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径。

196.如权利要求187所述的递送系统，其中所述的粒子具有约1μm至约6μm的空气动力学质量中位直径。

197.如权利要求187所述的递送系统，其中所述的药物组合物的至少约80wt％包括含有两性霉素B和药学可接受的赋形剂的粒子。

198.如权利要求187所述的递送系统，其中所述的粒子具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径，并且其中所述的粒子由包括两性霉素B的粒子组成，该粒子具有小于约3μm的质量中位直径。

199.如权利要求187所述的递送系统，其中所述的药学可接受的赋形剂包括选自碳水化合物，脂类，氨基酸，缓冲剂和盐中的至少一种。

200.如权利要求187所述的递送系统，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂。

201.如权利要求187所述的递送系统，其中所述的粒子包括在基质中的两性霉素B的粒子，该基质包含药学可接受的赋形剂。

202.如权利要求187所述的递送系统，其中所述的粒子具有约1μm至约6μm的空气动力学质量中位直径，并且其中所述的药物组合物的至少约80wt％包括包含两性霉素B的粒子，该两性霉素B在包含药学可接受的赋形剂的基质中，并且其中所述的药学可接受的赋形剂包括至少一种磷脂。

203.表征用于制备药物组合物的两性霉素B的方法，其包括：

测定两性霉素B组成的结晶度；及

在释放所述的两性霉素B组成用于和药学可接受的赋形剂组成药物组合物之前，保证所述的结晶度比第一预定水平高。

204.如权利要求203所述的方法，其中测定结晶度包括在所述的两性霉素B组成的至少一部分进行X-射线粉末衍射。

205.如权利要求203所述的方法，其中测定结晶度包括在所述的两性霉素B组成的至少一部分进行红外光谱。

206.如权利要求203所述的方法，其中测定结晶度包括在所述的两性霉素B组成的至少一部分进行动态蒸汽吸附。

207.如权利要求203所述的方法，其中所述的第一预定水平为至少约50％。

208.如权利要求203所述的方法，其中所述的第一预定水平为至少约70％。

209.如权利要求203所述的方法，其中所述的第一预定水平为至少约90％。

210.如权利要求203所述的方法，其进一步包括如果所述的结晶度等于或低于所述的第一预定水平，对所述的两性霉素B组成重结晶。

211.如权利要求203所述的方法，其进一步包括如果所述的结晶度等于或低于所述的第一预定水平，废弃所述的两性霉素B组成。

212.如权利要求203所述的方法，其进一步包括组合所述的两性霉素B组成和药学可接受的赋形剂以组成药物组合物。

213.如权利要求212所述的方法，其中组合所述的两性霉素B组成和所述的药学可接受的赋形剂以组成药物组合物包括喷雾干燥。

214.如权利要求212所述的方法，其进一步包括测定所述的药物组合物的结晶度。

215.如权利要求214所述的方法，其进一步包括，如果所述的结晶度高于第二预定水平，则释放所述的药物组合物用于对病人给药。

216.如权利要求215所述的方法，其中所述的第二预定水平为至少约50％。

217.表征用于制备药物组合物的两性霉素B的方法，其包括：

测定两性霉素B组成的无定形度；及

在释放所述的两性霉素B组成用于和药学可接受的赋形剂组成药物组合物之前，保证所述的无定形度小于预定水平。

218.如权利要求217所述的方法，其中测定无定形度包括在所述的两性霉素B组成的至少一部分进行X-射线粉末衍射。

219.如权利要求217所述的方法，其中测定无定形度包括在所述的两性霉素B组成的至少一部分进行红外光谱。

220.如权利要求217所述的方法，其中测定无定形度包括在所述

的两性霉素B组成的至少一部分进行动态蒸汽吸附。

221.如权利要求217所述的方法，其中所述的第一预定水平低于约50％。

222.如权利要求217所述的方法，其中所述的第一预定水平低于约30％。

223.如权利要求217所述的方法，其中所述的第一预定水平低于约10％。

224.如权利要求217所述的方法，其中组合所述的两性霉素B组成和所述的药学可接受的赋形剂以组成药物组合物包括喷雾干燥。

225.如权利要求217所述的方法，其进一步包括测定所述的药物组合物的无定形度。

226.如权利要求225所述的方法，其进一步包括，如果所述的无定形度高于第二预定水平，则释放所述的药物组合物对病人给药。

227.如权利要求226所述的方法，其中所述的第二预定水平低于约50％。

228.制备和表征干粉末药物组合物的方法，其包括：

组合两性霉素B组成和药学可接受的赋形剂以组成干粉末药物组合物；

测定所述的干粉末药物组合物的空气动力学质量中位直径；及

在释放所述的干粉末药物组合物用于对病人给药之前，保证空气动力学质量中位直径低于预定水平。

229.如权利要求228所述的方法，其中空气动力学质量中位直径由级联碰撞测定。

230.如权利要求228所述的方法，其中所述的预定水平低于约10μm。

231.如权利要求228所述的方法，其中所述的预定水平低于约5μm。

232.制备和表征干粉末药物组合物的方法，其包括：

组合两性霉素B组成和药学可接受的赋形剂以制成所述的干粉末药物组合物；

测定所述的干粉末药物组合物的均匀度；及

在释放所述的干粉末药物组合物用于对病人给药之前，保证所述的均匀度高于预定水平。

233.如权利要求232所述的方法，其中测定均匀度包括测定含有粒子的干粉末药物组合物的重量百分比，该粒子包括两性霉素B和药学可接受的赋形剂。

234.如权利要求232所述的方法，其中如果所述的重量百分比在高于至少80wt％以上的水平之上，则所述的干粉末药物组合物释放给药。

235.如权利要求232所述的方法，其中如果所述的重量百分比在高于至少90wt％之上的水平之上，则所述的干粉末药物组合物释放给药。

236.制备喷雾干燥粒子的方法，其包括：

将包含两性霉素B的粒子混悬在液体中制成原料，其中所述的粒子具有小于约3μm的质量中位直径；及

喷雾干燥所述的原料以制造所述的喷雾干燥粒子。

237.如权利要求236所述的方法，其中所述的包括两性霉素B的粒子具有在约1μm至约2μm之间的质量中位直径值。

238.如权利要求236所述的方法，其中所述的包括两性霉素B的粒子具有至少约50％的结晶度。

239.如权利要求236所述的方法，其中所述的喷雾干燥粒子具有小于约10μm的质量中位直径。

240.如权利要求236所述的方法，其中所述的喷雾干燥粒子的至少约80wt％包括两性霉素B和药学可接受的赋形剂。

241.如权利要求236所述的方法，其中所述的喷雾干燥粒子具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径，并且其中所述的包括两性霉素B的粒子具有至少约50％的结晶度。

242.如权利要求236所述的方法，其中所述的原料进一步包括药学可接受的赋形剂。

243.如权利要求236所述的方法，其中喷雾干燥所述的原料进一步包括喷雾干燥含有药学可接受的赋形剂的附加原料。

244.如权利要求236所述的方法，其中所述的喷雾干燥粒子进一步包括药学可接受的赋形剂。

245.如权利要求236所述的方法，其进一步包括收集所述的喷雾干燥粒子。

246.如权利要求236所述的方法，其进一步包括向所述的原料中添加乳化剂。

247.如权利要求246所述的方法，其中所述的乳化剂包括卵磷脂。

248.如权利要求247所述的方法，其中所述的卵磷脂包括二硬脂酰卵磷脂。

249.如权利要求236所述的方法，其进一步包括向所述的原料中添加发泡剂。

250.如权利要求236所述的方法，其中所述的喷雾干燥粒子包括在磷脂基质中的两性霉素B。

251.如权利要求236所述的方法，其中所述的喷雾干燥粒子为中空的和/或多孔的粒子。

252.如权利要求251所述的方法，其中所述的原料进一步包括疏水性氨基酸。

253.制备喷雾干燥粒子的方法，其包括：

将包含两性霉素B的粒子混悬在液体中制成原料，其中所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度；及

喷雾干燥所述的原料以制造所述的喷雾干燥粒子。

254.如权利要求253所述的方法，其中所述的两性霉素B具有至少约50％的结晶度。

255.如权利要求253所述的方法，其中所述的包括两性霉素B的粒子具有小于约3μm的质量中位直径。

256.如权利要求253所述的方法，其中所述的包括两性霉素B的粒子的至少约80wt％具有小于约3μm的几何直径。

257.如权利要求253所述的方法，其中所述的喷雾干燥粒子具有小于约10μm的质量中位直径。

258.如权利要求253所述的方法，其中所述的喷雾干燥粒子的至少约80wt％包括两性霉素B和药学可接受的赋形剂。

259.如权利要求253所述的方法，其中所述的喷雾干燥粒子具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径，并且其中所述的包括两性霉素B的粒子具有至少约50％的结晶度。

260.如权利要求253所述的方法，其中所述的原料进一步包括药学可接受的赋形剂。

261.如权利要求253所述的方法，其中喷雾干燥所述的原料进一步包括喷雾干燥含有药学可接受的赋形剂的附加原料。

262.如权利要求253所述的方法，其中所述的喷雾干燥粒子进一步包括药学可接受的赋形剂。

263.如权利要求253所述的方法，其进一步包括收集所述的喷雾干燥粒子。

264.如权利要求253所述的方法，其进一步包括向所述的原料中添加乳化剂。

265.如权利要求264所述的方法，其中所述的乳化剂包括卵磷脂。

266.如权利要求265所述的方法，其中所述的卵磷脂包括二硬脂酰卵磷脂。

267.如权利要求253所述的方法，其进一步包括向所述的原料中添加发泡剂。

268.如权利要求253所述的方法，其中所述的喷雾干燥粒子包括在磷脂基质中的两性霉素B。

269.如权利要求253所述的方法，其中所述的喷雾干燥粒子为中空的和/或多孔的粒子。

270.如权利要求269所述的方法，其中所述的原料进一步包括疏水性氨基酸。

271.治疗和/或提供预防真菌感染的方法，其包括：

通过吸入有效量的包含两性霉素B的组合物对有需要的病人给药，其中所述的组合物由包含两性霉素B的粒子制成，该粒子具有约1.1μm至约1.9μm的质量中位直径。

272.如权利要求271所述的方法，其中给药足够量的所述的组合物以维持至少约4周的靶肺两性霉素B浓度，该浓度是测定的最小抑制浓度的至少约5倍。

273.如权利要求272所述的方法，其中所述的最小抑制浓度是肺上皮内衬内的最小抑制浓度。

274.如权利要求272所述的方法，其中所述的最小抑制浓度是肺实体组织内的最小抑制浓度。

275.如权利要求272所述的方法，其中所述的靶肺两性霉素B浓度维持至少约8周。

276.如权利要求272所述的方法，其中所述的靶肺两性霉素B浓度为至少约4μg/g。

277.如权利要求272所述的方法，其中所述的靶肺两性霉素B的浓度为约4.5μg/g至约20μg/g，并且其中所述的给药包括周期性地释放所述的药物组合物以维持所述的肺两性霉素B的浓度在所述的靶两性霉素B肺浓度范围之内。

278.如权利要求272所述的方法，其中所述的给药包括在给药第1周期间释放所述的组合物的1个剂量。

279.如权利要求271所述的方法，其中所述的给药包括在给药第1周期间释放所述的药物组合物的至少2个剂量。

280.如权利要求271所述的方法，其中所述的给药包括第一给药周期和第二给药周期，并且其中与所述的第二给药周期相比，在所述的第一周期期间更加频繁或以更高剂量给药所述的组合物。

281.如权利要求271所述的方法，其中所述的包含两性霉素B的粒子具有约1.2μm至约1.8μm的质量中位直径。

282.如权利要求271所述的方法，其中所述的包含两性霉素B的粒子的至少约80wt％具有小于约1.9μm的几何直径。

283.如权利要求271所述的方法，其中所述的两性霉素B具有至少约50％的结晶度。

284.如权利要求271所述的方法，其中所述的组合物包括粒子。

285.如权利要求284所述的方法，其中所述的粒子具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径。

286如权利要求284所述的方法，其中所述的粒子具有约1μm至约6μm之间的空气动力学质量中位直径。

287.如权利要求271所述的方法，其中所述的组合物的至少约80wt％包括含有两性霉素B和药学可接受的赋形剂的粒子。

288.如权利要求271所述的方法，其中所述的组合物包含具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径的粒子，并且其中所述的两性霉素B具有至少约50％的结晶度。

289.如权利要求271所述的方法，其中所述的组合物包括实质上由两性霉素B组成的粒子。

290.如权利要求289所述的方法，其中所述的组合物进一步包括含有药学可接受的赋形剂的粒子。

291.如权利要求271所述的方法，其中所述的组合物包括含有两性霉素B和药学可接受的赋形剂的粒子。

292.如权利要求291所述的方法，其中所述的药学可接受的赋形剂包括选自碳水化合物，脂类，氨基酸，缓冲剂和盐中的至少一种。

293.如权利要求291所述的方法，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂。

294.如权利要求291所述的方法，其中所述的药学可接受的赋形剂包括金属离子。

295.如权利要求291所述的方法，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂和金属离子。

296.如权利要求271所述的方法，其中所述的组合物包括中空的和/或多孔的粒子。

297.如权利要求271所述的方法，其中所述的组合物包括在基质物质中的结晶两性霉素B的粒子。

298.如权利要求297所述的方法，其中所述的基质物质包括至少一种磷脂。

299.如权利要求271所述的方法，其中所述的给药包括利用干粉末吸入器递送干粉末状的组合物。

300.如权利要求271所述的方法，其中所述的组合物包括推进剂，并且其中所述的给药包括通过打开阀门使所述的组合物气雾化以释放所述的组合物。

301.如权利要求300所述的方法，其中所述的推进剂包括至少一种氢氟烷烃。

302.如权利要求271所述的方法，其中所述的方法包括治疗真菌感染。

303.如权利要求271所述的方法，其中所述的方法包括提供预防真菌感染。

304.如权利要求271所述的方法，其中所述的真菌感染包括肺部真菌感染。

305.如权利要求271所述的方法，其中所述的真菌感染包括鼻部真菌感染。

306.如权利要求271所述的方法，其中所述的给药包括经肺给药。

307.如权利要求271所述的方法，其中所述的给药包括经鼻给药。

308.如权利要求271所述的方法，其中所述的方法包括提供对肺真菌感染的预防，

其中所述的给药包括经肺给药，

其中给药足够量的所述的组合物以维持至少约8周的肺靶两性霉素B浓度，该浓度是测定的最小抑制浓度的至少约5倍，

其中所述的组合物由包含两性霉素B的粒子制成，该粒子具有约0.5μm至约1.8μm的质量中位直径，

其中所述的两性霉素B具有至少约50％的结晶度，

其中所述的组合物包含具有约1μm至约6μm之间的空气动力学质量中位直径的粒子，及

其中所述的组合物的至少约80wt％包括含有两性霉素B和磷脂的粒子。

309.治疗和/或提供预防真菌感染的方法，其包括：

通过吸入有效量的包含两性霉素B的组合物对有需要的病人给药，其中所述的组合物由包含两性霉素B的粒子制成，并且其中所述的包含两性霉素B的粒子的至少约80wt％具有约1.1μm至约1.9μm之间的几何直径。

310.治疗和/或提供预防真菌感染的方法，其包括：

通过吸入有效量的包含两性霉素B的组合物对有需要的病人给药，其中所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度。

311.如权利要求310所述的方法，其中给药足够量的所述的组合物以维持至少约4周的肺靶两性霉素B浓度，该浓度是测定的最小抑制浓度的至少约5倍。

312.如权利要求311所述的方法，其中所述的最小抑制浓度是肺上皮内衬的最小抑制浓度。

313.如权利要求311所述的方法，其中所述的最小抑制浓度是肺实体组织的最小抑制浓度。

314.如权利要求311所述的方法，其中所述的肺靶两性霉素B浓度维持至少约8周。

315.如权利要求311所述的方法，其中所述的肺靶两性霉素B浓度为至少约4μg/g。

316.如权利要求311所述的方法，其中所述的肺靶两性霉素B的浓度为约4.5μg/g至约20μg/g，并且其中所述的给药包括周期性地释放所述的药物组合物以维持所述的肺两性霉素B浓度在所述的靶两性霉素B肺浓度范围之内。

317.如权利要求311所述的方法，其中所述的给药包括在给药第1周期间释放所述的组合物的1个剂量。

318.如权利要求310所述的方法，其中所述的给药包括在给药第1周期间释放所述的药物组合物的至少2个剂量。

319.如权利要求310所述的方法，其中所述的给药包括第一给药周期和第二给药周期，并且其中与所述的第二给药周期相比，在所述的第一周期期间以更加频繁或更高剂量给药所述的组合物。

320.如权利要求310所述的方法，其中所述的组合物由包含两性霉素B的粒子制成，该粒子具有小于约3μm的质量中位直径。

321.如权利要求310所述的方法，其中所述的组合物由包含两性霉素B的粒子制成，并且其中所述的包含两性霉素B的粒子的至少约80wt％具有小于约3μm的几何直径。

322.如权利要求310所述的方法，其中所述的两性霉素B具有至少约70％的结晶度。

323.如权利要求310所述的方法，其中所述的组合物包括粒子。

324.如权利要求323所述的方法，其中所述的粒子具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径。

325.如权利要求323所述的方法，其中所述的粒子具有约1μm至约6μm之间的空气动力学质量中位直径。

326.如权利要求323所述的方法，其中所述的组合物的至少约80wt％包括含有两性霉素B和药学可接受的赋形剂的粒子。

327.如权利要求310所述的方法，其中所述的组合物包含具有小于约10μm的空气动力学质量中位直径的粒子，并且其中所述的两性霉素B具有至少约70％的结晶度。

328.如权利要求310所述的方法，其中所述的组合物包括实质上由两性霉素B组成的粒子。

329.如权利要求328所述的方法，其中所述的组合物进一步包括含有药学可接受的赋形剂的粒子。

330.如权利要求310所述的方法，其中所述的组合物包括含有两性霉素B和药学可接受的赋形剂的粒子。

331.如权利要求330所述的方法，其中所述的药学可接受的赋形剂包括选自碳水化合物，脂类，氨基酸，缓冲剂和盐中的至少一种。

332.如权利要求330所述的方法，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂。

333.如权利要求330所述的方法，其中所述的药学可接受的赋形剂包括金属离子。

334.如权利要求330所述的方法，其中所述的药学可接受的赋形剂包括磷脂和金属离子。

335.如权利要求310所述的方法，其中所述的组合物包括中空的和/或多孔的粒子。

336.如权利要求310所述的方法，其中所述的组合物包括含有在基质物质中的结晶两性霉素B的粒子。

337.如权利要求336所述的方法，其中所述的基质物质包括至少一种磷脂。

338.如权利要求310所述的方法，其中所述的给药包括利用干粉末吸入器递送干粉末状的组合物。

339.如权利要求310所述的方法，其中所述的组合物包括推进剂，并且其中所述的给药包括通过打开阀门使所述的组合物气雾化以释放所述的组合物。

340.如权利要求339所述的方法，其中所述的推进剂包括至少一种氢氟烷烃。

341.如权利要求310所述的方法，其中所述的方法包括治疗真菌感染。

342.如权利要求310所述的方法，其中所述的方法包括提供预防真菌感染。

343.如权利要求310所述的方法，其中所述的真菌感染包括肺部真菌感染。

344.如权利要求310所述的方法，其中所述的真菌感染包括鼻部真菌感染。

345.如权利要求310所述的方法，其中所述的给药包括经肺给药。

346.如权利要求310所述的方法，其中所述的给药包括经鼻给药。

347.如权利要求310所述的方法，其中所述的方法包括提供预防真菌感染，

其中所述的给药包括经肺给药，

其中所述的组合物由包含两性霉素B的粒子制成，该粒子具有小于约3μm的质量中位直径，

其中所述的两性霉素B具有至少约70％的结晶度，

其中所述的组合物包含具有约1μm至6μm之间的空气动力学质量中位直径的粒子，及

348.治疗和/或提供预防真菌感染的方法，其包括：

通过吸入有效量的包含两性霉素B的组合物对有需要的病人给药，

其中所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度，及

其中所述的两性霉素B具有至少约1周的肺实体组织保留半衰期，通过肺组织活组织检查测定。

349.治疗和/或提供预防真菌感染的方法，其包括：

其中所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度，及

其中所述的两性霉素B具有至少约10小时的肺上皮内衬液保留半衰期，通过支气管气泡灌洗测定。

350.治疗和/或提供预防真菌感染的方法，其包括：

通过吸入包含约0.01mg/kg至7.0mg/kg的量的两性霉素B的组合物，对有需要的病人给药，

其中所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度，及

其中两性霉素B的血浆浓度保持低于约1000ng/mL。

351.治疗和/或提供预防真菌感染的方法，其包括：

其中所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度；及

其中两性霉素B的血浆浓度保持足够低以避免肾和/或肝毒性。

352.治疗和/或提供预防真菌感染的方法，其包括：

通过吸入包含两性霉素B的组合物对有需要的病人给药，

其中所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度，及

其中两性霉素B的肺浓度在至少部分治疗时间段内达到最小抑制浓度的至少5倍量，通过支气管气泡灌洗测定，及

其中两性霉素B的血浆浓度保持低于约1000ng/ml。

353.治疗和/或提供预防真菌感染的方法，其包括：

通过吸入包含两性霉素B的组合物，对有需要的病人给药，

其中所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度，及

其中治疗时间为约15周至约20周，及

其中肺两性霉素B浓度在至少部分治疗时间段内达到最小抑制浓度的至少5倍量，通过支气管气泡灌洗测定。

354.治疗和/或提供预防真菌感染的方法，其包括：

通过吸入包含约2mg/kg至约50mg/kg的量的两性霉素B的组合物，对有需要的病人给药，

其中所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度，及

其中所述的给药在小于约5分钟的时间内实施。

355.治疗和/或提供预防真菌感染的方法，其包括：

通过吸入有效量的包含两性霉素B的干粉末，对有需要的病人给药，

其中所述的两性霉素B具有至少约20％的结晶度，和