CN101489566B

CN101489566B - Aha基因的RNAi调控及其治疗性应用

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Publication number: CN101489566B
Application number: CN2007800259419A
Authority: CN
Inventors: 赖纳·康斯蒂恩; 比吉特·布拉姆利奇; 帕梅拉·谭; 汉斯-彼得·沃尔洛赫尔; 威廉·鲍尔奇
Original assignee: Scripps Research Institute; Alnylam Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Scripps Research Institute; Alnylam Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2006-05-19
Filing date: 2007-05-18
Publication date: 2012-04-18
Anticipated expiration: 2027-05-18
Also published as: US20120142757A1; AU2007253803B2; AU2007253803A1; EP2023937B1; US8114984B2; WO2007137156A8; CN101489566A; WO2007137156A3; EP2023937A4; US7812150B2; CA2652770A1; CN101454335A; EP2392583A1; JP2009537153A; BRPI0712034A2; WO2007137156A2; EP2023937A2; ATE528008T1; US20110003882A1; US20080113931A1

Abstract

本发明涉及抑制Aha基因(Aha1基因)表达的双链核糖核酸(dsRNA)，其包含具有小于30个核苷酸长度且通常为19-25个核苷酸长度的核苷酸序列的反义链，并与Aha基因的至少一部分基本互补。本发明还涉及包含所述dsRNA和药学上可接受的载体的药物组合物；利用所述药物组合物治疗由Aha1表达和Aha基因的表达引起的疾病的方法；以及抑制细胞中Aha基因表达的方法。

Description

Aha基因的RNAi调控及其治疗性应用

发明领域

本发明涉及利用热休克蛋白90 ATP酶激活因子(Aha)基因的调节剂的治疗方法。更具体地，本发明涉及通过施用下调Aha表达的小干扰RNA治疗与不良Aha活性相关的病症的方法，以及用于所述方法的试剂。

发明背景

热休克蛋白90 ATP酶1激活因子(本文表示为Aha1)是Hsp90 ATP酶活性的激活因子，并且能够使酵母Hsp90的固有活性提高12倍并使人Hsp90的固有活性提高50倍(Panaretou，B.，et al.，Mol.Cell 2002，10：1307-1318)。生物化学研究已经证明Aha1与Hsp90的中间区域结合(Panaretou et al.，2002，supra，Lotz，G.P.，et al.，J.Biol.Chem.2003，278：17228-17235)，并且最近关于Aha1-Hsp90核心复合体的结构学研究表明共伴侣分子(co-chaperone)促进Hsp90中段催化环(370-390)的构象转变，从而释放催化性Arg380并促进其与ATP在N末端核苷酸结合域内的相互作用(Meyer，P.，et al.，EMBO J.2004，23：511-519)。

分子伴侣热休克蛋白90(Hsp90)负责特定客户蛋白(client protein)的体内激活或成熟(Picard，D.，Cell Mol.Life Sci.2002，59：1640-1648；Pearl，L.H.，and Prodromou，C.，Adv.Protein Chem.2002，59：157-185；Pratt，W.B.，andToft，D.O.，Exp.Biol.Med.2003，228：111-133；Prodromou，C.，和Pearl，L.H.，Curr.Cancer Drug Targets 2003，3：301-323)。对此类激活作用至关重要的是Hsp90的基本ATP酶活性(Panaretou，B.，et al.，EMBO J.1998，17：4829-4836)，该活性驱动一个包括Hsp90二聚体内的N-末端核苷酸结合域的瞬时结合的构象循环(Prodromou，C.，et al.，EMBO J.2000，19：4383-4392)。

作为分子伴侣，HSP90促进大量构象易变的客户蛋白的成熟并保持其稳定性，其中大多数所述客户蛋白参与例如信号转导、细胞周期进程和凋亡的生物过程，而在肿瘤细胞中这些生物过程通常受到扰乱。因此，与其它分子靶向性治疗不同，HSP90抑制剂通过在癌细胞中同时破坏多种致癌底物而有希望具有抗癌活性(Whitesell L，和Dai C.，Future Oncol.2005；1：529-540；WO 03/067262)。另外，HSP90还参与囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)的降解。作为HSP90 ATP酶活性的结果，CFTR基因突变导致其蛋白质的折叠缺陷和泛素化。泛素化之后，CFTR在达到其活性位点前被降解。然后，活性CFTR的缺乏导致带有此类突变的人类受试者发生囊性纤维化。因此，HSP90活性的抑制可有益于患有癌症或囊性纤维化的受试者。

Hsp90构成约1-2％的细胞总蛋白质(Pratt，W.B.，Annu.Rev.Pharmacol.Toxicol.1997，37：297-326)，并且通过拮抗剂或抑制剂的方式抑制如此大量的蛋白质可能需要向细胞总引入过量的抑制剂或拮抗剂。另一种方法是抑制存在量较少的HSP90 ATP酶活性激活因子，如Aha1。通过下调细胞中Aha1的存在量，可明显降低HSP90的活性。

在人类(Homo sapiens，NM_012111.1)、小鼠(Mus musculus，NM_146036.1)和黑猩猩(Pan troglodytes，XM_510094.1)的Aha1之间存在显著的序列同源性。尚未鉴定出明确的Aha1的褐家鼠(Rattus norvegicus)同系物，但是有一个褐家鼠基因(XM_223680.3)，由于其与酵母Ahsa2的序列同源性而被命名为热休克蛋白ATP酶同系物2的激活因子(Ahsa2)。所述基因的序列与小鼠RIKEN cDNA 1110064P04基因(NM_172391.3)同源，而后者的序列则与除N末端截尾之外的Aus musculus Aha1相似。目前人类Ahsa2(NM_152392.1)也得到预测，但是其序列同系物有限。所述后三个基因的功能还没有被充分阐明。然而，在以上所述的所有序列中都存在一个相同区域，并且该区域可以用作RNAi试剂的靶标。这可能有利于抑制不只一个Aha基因的活性。

最近，已发现双链RNA分子(dsRNA)通过被称为RNA干扰(RNAi)的高度保守的调控机制来阻断基因表达。WO 99/32619(Fire et al.)公开了长度为至少25个核苷酸的dsRNA在抑制线虫(C.elegans)基因表达中的用途。还发现dsRNA在其它生物体中降解靶RNA，其中所述生物体包括植物(参见，例如WO 99/53050，Waterhouse et al.和WO 99/61631，Heifetz et al.)、果蝇(参见，例如Yang，D.，et al.，Curr.Biol.(2000)10：1191-1200)和哺乳动物(参见WO 00/44895，Limmer和DE 101 00 586.5，Kreutzer et al.)。这种天然机制现已成为治疗因基因异常或有害调控而引发的病症的新型药物的研发热点。

除了RNAi领域的显著进展以及对由HSP90介导的病理过程治疗的进展之外，人们还需要能够利用细胞自身的RNAi机制来选择性且高效地降低HSP90 ATP酶活性的试剂。此类试剂将同时具有高生物活性和体内稳定性，并将有效抑制靶标Aha基因(例如Aha1)的表达，用于治疗由Aha表达(例如Aha1表达)直接或间接介导的病理过程。

发明概述

本发明提供了双链核糖核酸(dsRNA)以及使用此类dsRNA抑制细胞或哺乳动物中Aha基因表达的组合物和方法。本发明还提供了用于治疗由Aha基因表达介导的病理状态或疾病(例如癌症或囊性纤维化)的组合物和方法。本发明的dsRNA包含长度小于30个核苷酸且通常长度为19-24个核苷酸的区域的RNA链(反义链)，并且所述区域与Aha基因mRNA转录本的至少一部分基本互补。

一方面，本发明提供了抑制Aha基因表达的双链核糖核酸(dsRNA)分子。所述dsRNA包含至少两个彼此互补的序列。所述dsRNA包含具有第一序列的正义链和具有第二序列的反义链。所述反义链包含与编码Aha基因的mRNA的至少一部分基本互补的核苷酸序列，并且所述互补区的长度小于30个核苷酸且通常为19-24个核苷酸。所述dsRNA影响第二dsRNA靶序列内编码Aha基因的mRNA的剪切，所述第二dsRNA具有选自下组的正义链：SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQID NO：23、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQID NO：55、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：117、SEQID NO：119、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：143、SEQID NO：145、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：149、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：167、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：171、SEQID NO：173、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：179、SEQ ID NO：181和SEQ ID NO：183，以及与该正义链互补且选自于下组的反义链：SEQ IDNO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：118、SEQID NO：120、SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：126、SEQ ID NO：128、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：144、SEQID NO：146、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：156、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：168、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：172、SEQID NO：174、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：178、SEQ ID NO：180、SEQ ID NO：182和SEQ ID NO：184(参见表1和表2)。所述Aha基因优选为Aha1基因，更优选为人类Aha1基因。所述dsRNA与表达所述Aha基因的细胞(例如HeLa细胞和/或MLE 12细胞)接触，则可以将所述细胞中所述Aha基因的表达抑制至少20％，或至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、85％、90％或95％。所述dsRNA可区别于所述第二dsRNA，但是在每条链上可以具有与上述给出核苷酸序列之一相同的至少5个、至少10个、至少15个、至少18个或至少20个连续核苷酸。

优选地，所述第二dsRNA选自下组：AL-DP-7301、AL-DP-7308、AL-DP-7318、AL-DP-7320、AL-DP-7322、AL-DP-7324、AL-DP-7325、AL-DP-7326、AL-DP-7327、AL-DP-7329、AL-DP-7331、AL-DP-7333、AL-DP-7340、AL-DP-7342、AL-DP-7303、AL-DP-7305、AL-DP-7307、AL-DP-7309、AL-DP-7316和AL-DP-7337、AL-DP-7304、AL-DP-7312、AL-DP-7339、AL-DP-7344、AL-DP-7306、AL-DP-7317、AL-DP-7346、AL-DP-7310、AL-DP-7323、AL-DP-7335、AL-DP-7338、AL-DP-7341、AL-DP-7302、AL-DP-7315、AL-DP-7328、AL-DP-7330、AL-DP-7336、AL-DP-7345、AL-DP-9250、AL-DP-9251、AL-DP-9252、AL-DP-9253、AL-DP-9254、AL-DP-9255、AL-DP-9256、AL-DP-9257、AL-DP-9258、AL-DP-9259、AL-DP-9260、AL-DP-9261、AL-DP-9262、AL-DP-9263、AL-DP-9264、AL-DP-9265、AL-DP-9266、AL-DP-9267、AL-DP-9268、AL-DP-9269、AL-DP-9270、AL-DP-9271、AL-DP-9272、AL-DP-9273、AL-DP-9274、AL-DP-9275、AL-DP-9276、AL-DP-9277、AL-DP-9279、AL-DP-9280、AL-DP-9281、AL-DP-9282、AL-DP-9283、AL-DP-9284、AL-DP-9285、AL-DP-9286、AL-DP-9287、AL-DP-9288和AL-DP-9289(参见表1和表2)。

或者，所述dsRNA本身可选自下组：AL-DP-7301、AL-DP-7308、AL-DP-7318、AL-DP-7320、AL-DP-7322、AL-DP-7324、AL-DP-7325、AL-DP-7326、AL-DP-7327、AL-DP-7329、AL-DP-7331、AL-DP-7333、AL-DP-7340、AL-DP-7342、AL-DP-7303、AL-DP-7305、AL-DP-7307、AL-DP-7309、AL-DP-7316和AL-DP-7337、AL-DP-7304、AL-DP-7312、AL-DP-7339、AL-DP-7344、AL-DP-7306、AL-DP-7317、AL-DP-7346、AL-DP-7310、AL-DP-7323、AL-DP-7335、AL-DP-7338、AL-DP-7341、AL-DP-7302、AL-DP-7315、AL-DP-7328、AL-DP-7330、AL-DP-7336、AL-DP-7345、AL-DP-9250、AL-DP-9251、AL-DP-9252、AL-DP-9253、AL-DP-9254、AL-DP-9255、AL-DP-9256、AL-DP-9257、AL-DP-9258、AL-DP-9259、AL-DP-9260、AL-DP-9261、AL-DP-9262、AL-DP-9263、AL-DP-9264、AL-DP-9265、AL-DP-9266、AL-DP-9267、AL-DP-9268、AL-DP-9269、AL-DP-9270、AL-DP-9271、AL-DP-9272、AL-DP-9273、AL-DP-9274、AL-DP-9275、AL-DP-9276、AL-DP-9277、AL-DP-9279、AL-DP-9280、AL-DP-9281、AL-DP-9282、AL-DP-9283、AL-DP-9284、AL-DP-9285、AL-DP-9286、AL-DP-9287、AL-DP-9288和AL-DP-9289(参见表1和表2)。

所述dsRNA可包含至少一个修饰核苷酸。所述修饰核苷酸选自下组：2’-O-甲基修饰核苷酸、包含5’-硫代磷酸酯基团的核苷酸以及与胆固醇衍生物或十二酸双癸酰胺基团连接的末端核苷酸。所述修饰核苷酸也可选自下组：2’-脱氧-2’-氟代修饰核苷酸、2’-脱氧-修饰核苷酸、锁核苷酸(lockednucleotide)、无碱基核苷酸(abasic nucleotide)、2’-氨基-修饰核苷酸、2’-烷基-修饰核苷酸、吗啉代核苷酸、氨基磷酸酯和包含非天然碱基的核苷酸。

另一方面，本发明提供了包含本发明dsRNAs之一的分离细胞。所述细胞通常为哺乳动物细胞，例如人类细胞。上述本发明的其它方面提供了包含本发明dsRNA的细胞的其它实施方案。

另一方面，本发明提供了抑制生物体内Aha基因表达的药物组合物，其包含dsRNA和药学上可接受的载体，其中所述dsRNA包含至少两个彼此互补的序列，并且其中正义链包含第一序列，且反义链包含第二序列，所述第二序列包含与编码Aha基因的mRNA的至少一部分基本互补的互补区，并且其中所述互补区的长度小于30个核苷酸，且其中所述dsRNA影响第二dsRNA靶序列内编码Aha基因的mRNA的剪切，所述第二dsRNA具有选自下组的正义链：SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：107、SEQID NO：109、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：149、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：159、SEQID NO：163、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：167、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：179、SEQ ID NO：181和SEQ ID NO：183，以及与该正义链互补且选自下组的反义链：SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ IDNO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：44、SEQID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQID NO：74、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQID NO：102、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：126、SEQID NO：128、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：152、SEQID NO：154、SEQ ID NO：156、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：168、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：178、SEQ ID NO：180、SEQID NO：182和SEQ ID NO：184(参见表1和表2)。其中，Aha基因可以为Aha1基因，且优选为人类Aha1基因。包含在所述药物组合物中的所述dsRNA与表达所述Aha基因的细胞(例如HeLa细胞和/或MLE12细胞)接触，则可以将所述细胞中所述Aha基因的表达抑制至少20％，或至少25％、30％、35％、40％、45％、50％、55％、60％、65％、70％、85％、90％或95％。所述dsRNA可区别于所述第二dsRNA，但是在每条链上可以具有与以上给出的核苷酸序列之一相同的至少5个、至少10个、至少15个、至少18个或至少20个连续核苷酸。

所述第二dsRNA优选地选自于下组：AL-DP-7301、AL-DP-7308、AL-DP-7318、AL-DP-7320、AL-DP-7322、AL-DP-7324、AL-DP-7325、AL-DP-7326、AL-DP-7327、AL-DP-7329、AL-DP-7331、AL-DP-7333、AL-DP-7340、AL-DP-7342、AL-DP-7303、AL-DP-7305、AL-DP-7307、AL-DP-7309、AL-DP-7316和AL-DP-7337、AL-DP-7304、AL-DP-7312、AL-DP-7339、AL-DP-7344、AL-DP-7306、AL-DP-7317、AL-DP-7346、AL-DP-7310、AL-DP-7323、AL-DP-7335、AL-DP-7338、AL-DP-7341、AL-DP-7302、AL-DP-7315、AL-DP-7328、AL-DP-7330、AL-DP-7336、AL-DP-7345、AL-DP-9250、AL-DP-9251、AL-DP-9252、AL-DP-9253、AL-DP-9254、AL-DP-9255、AL-DP-9256、AL-DP-9257、AL-DP-9258、AL-DP-9259、AL-DP-9260、AL-DP-9261、AL-DP-9262、AL-DP-9263、AL-DP-9264、AL-DP-9265、AL-DP-9266、AL-DP-9267、AL-DP-9268、AL-DP-9269、AL-DP-9270、AL-DP-927 1、AL-DP-9272、AL-DP-9273、AL-DP-9274、AL-DP-9275、AL-DP-9276、AL-DP-9277、AL-DP-9279、AL-DP-9280、AL-DP-9281、AL-DP-9282、AL-DP-9283、AL-DP-9284、AL-DP-9285、AL-DP-9286、AL-DP-9287、AL-DP-9288和AL-DP-9289(参见表1和表2)。

或者，包含在所述药物组合物中的所述dsRNA本身可选自于下组：AL-DP-7301、AL-DP-7308、AL-DP-7318、AL-DP-7320、AL-DP-7322、AL-DP-7324、AL-DP-7325、AL-DP-7326、AL-DP-7327、AL-DP-7329、AL-DP-7331、AL-DP-7333、AL-DP-7340、AL-DP-7342、AL-DP-7303、AL-DP-7305、AL-DP-7307、AL-DP-7309、AL-DP-7316和AL-DP-7337、AL-DP-7304、AL-DP-7312、AL-DP-7339、AL-DP-7344、AL-DP-7306、AL-DP-7317、AL-DP-7346、AL-DP-7310、AL-DP-7323、AL-DP-7335、AL-DP-7338、AL-DP-7341、AL-DP-7302、AL-DP-7315、AL-DP-7328、AL-DP-7330、AL-DP-7336、AL-DP-7345、AL-DP-9250、AL-DP-9251、AL-DP-9252、AL-DP-9253、AL-DP-9254、AL-DP-9255、AL-DP-9256、AL-DP-9257、AL-DP-9258、AL-DP-9259、AL-DP-9260、AL-DP-9261、AL-DP-9262、AL-DP-9263、AL-DP-9264、AL-DP-9265、AL-DP-9266、AL-DP-9267、AL-DP-9268、AL-DP-9269、AL-DP-9270、AL-DP-9271、AL-DP-9272、AL-DP-9273、AL-DP-9274、AL-DP-9275、AL-DP-9276、AL-DP-9277、AL-DP-9279、AL-DP-9280、AL-DP-928 1、AL-DP-9282、AL-DP-9283、AL-DP-9284、AL-DP-9285、AL-DP-9286、AL-DP-9287、AL-DP-9288和AL-DP-9289(参见表1和表2)。

包含在所述药物组合物中的所述dsRNA可包含至少一个修饰核苷酸。优选地，所述修饰核苷酸选自下组：2’-O-甲基修饰核苷酸、包含5’-硫代磷酸酯基团的核苷酸以及与胆固醇衍生物或十二酸双癸酰胺基团连接的末端核苷酸。所述修饰核苷酸也可选自下组：2’-脱氧-2’-氟代修饰核苷酸、2’-脱氧-修饰核苷酸、锁核苷酸、无碱基核苷酸、2’-氨基-修饰核苷酸、2’-烷基-修饰核苷酸、吗啉代核苷酸、氨基磷酸酯和含非天然碱基的核苷酸。

另一方面，本发明提供了抑制细胞内Aha基因表达的方法，所述方法包括：

(a)向所述细胞引入双链核苷酸(dsRNA)，其中所述dsRNA包含至少两条彼此互补的序列，并且其中正义链包含第一序列，并且反义链包含第二序列，所述第二序列包含与编码Aha1的mRNA的至少一部分基本互补的互补区，并且其中所述互补区的长度小于30个核苷酸，且其中所述dsRNA影响第二dsRNA靶序列内编码Aha基因的mRNA的剪切，所述第二dsRNA具有选自下组的正义链：SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：123、SEQID NO：125、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：149、SEQID NO：151、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：163、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：167、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：177、SEQID NO：179、SEQ ID NO：181和SEQ ID NO：183，以及与该正义链互补且选自于下组的反义链：SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ IDNO：12、SEQ ID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQID NO：72、SEQ ID NO：74、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98、SEQID NO：100、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：124、SEQID NO：126、SEQ ID NO：128、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：150、SEQID NO：152、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：156、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：168、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：178、SEQID NO：180、SEQ ID NO：182和SEQ ID NO：184；和

(b)将步骤(a)得到的细胞维持足够长的时间以降解Aha基因的mRNA转录本，从而抑制所述细胞中Aha基因的表达。Aha基因优选为Aha1基因，更优选为人类Aha1基因。所述dsRNA可区别于所述第二dsRNA，但是在每条链上可以具有与以上给出的核苷酸序列之一相同的至少5个、至少10个、至少15个、至少18个或至少20个连续核苷酸。

所述第二dsRNA优选选自于下组：AL-DP-7301、AL-DP-7308、AL-DP-7318、AL-DP-7320、AL-DP-7322、AL-DP-7324、AL-DP-7325、AL-DP-7326、AL-DP-7327、AL-DP-7329、AL-DP-7331、AL-DP-7333、AL-DP-7340、AL-DP-7342、AL-DP-7303、AL-DP-7305、AL-DP-7307、AL-DP-7309、AL-DP-7316和AL-DP-7337、AL-DP-7304、AL-DP-7312、AL-DP-7339、AL-DP-7344、AL-DP-7306、AL-DP-7317、AL-DP-7346、AL-DP-7310、AL-DP-7323、AL-DP-7335、AL-DP-7338、AL-DP-7341、AL-DP-7302、AL-DP-7315、AL-DP-7328、AL-DP-7330、AL-DP-7336、AL-DP-7345、AL-DP-9250、AL-DP-9251、AL-DP-9252、AL-DP-9253、AL-DP-9254、AL-DP-9255、AL-DP-9256、AL-DP-9257、AL-DP-9258、AL-DP-9259、AL-DP-9260、AL-DP-9261、AL-DP-9262、AL-DP-9263、AL-DP-9264、AL-DP-9265、AL-DP-9266、AL-DP-9267、AL-DP-9268、AL-DP-9269、AL-DP-9270、AL-DP-9271、AL-DP-9272、AL-DP-9273、AL-DP-9274、AL-DP-9275、AL-DP-9276、AL-DP-9277、AL-DP-9279、AL-DP-9280、AL-DP-9281、AL-DP-9282、AL-DP-9283、AL-DP-9284、AL-DP-9285、AL-DP-9286、AL-DP-9287、AL-DP-9288和AL-DP-9289(参见表1和表2)。

所述dsRNA本身也可选自于下组：AL-DP-7301、AL-DP-7308、AL-DP-7318、AL-DP-7320、AL-DP-7322、AL-DP-7324、AL-DP-7325、AL-DP-7326、AL-DP-7327、AL-DP-7329、AL-DP-7331、AL-DP-7333、AL-DP-7340、AL-DP-7342、AL-DP-7303、AL-DP-7305、AL-DP-7307、AL-DP-7309、AL-DP-7316和AL-DP-7337、AL-DP-7304、AL-DP-7312、AL-DP-7339、AL-DP-7344、AL-DP-7306、AL-DP-7317、AL-DP-7346、AL-DP-7310、AL-DP-7323、AL-DP-7335、AL-DP-7338、AL-DP-7341、AL-DP-7302、AL-DP-7315、AL-DP-7328、AL-DP-7330、AL-DP-7336、AL-DP-7345、AL-DP-9250、AL-DP-9251、AL-DP-9252、AL-DP-9253、AL-DP-9254、AL-DP-9255、AL-DP-9256、AL-DP-9257、AL-DP-9258、AL-DP-9259、AL-DP-9260、AL-DP-9261、AL-DP-9262、AL-DP-9263、AL-DP-9264、AL-DP-9265、AL-DP-9266、AL-DP-9267、AL-DP-9268、AL-DP-9269、AL-DP-9270、AL-DP-9271、AL-DP-9272、AL-DP-9273、AL-DP-9274、AL-DP-9275、AL-DP-9276、AL-DP-9277、AL-DP-9279、AL-DP-9280、AL-DP-9281、AL-DP-9282、AL-DP-9283、AL-DP-9284、AL-DP-9285、AL-DP-9286、AL-DP-9287、AL-DP-9288和AL-DP-9289。所述方法优选在体外进行。上述本发明的其它方面提供了抑制细胞内Aha基因表达的方法的其它实施方案。

另一方面，本发明提供了治疗、预防或控制由Aha表达介导的病理过程的方法，所述方法包括向需要此类治疗、预防或控制的患者施用治疗有效量或预防有效量的dsRNA，其中所述dsRNA包含至少两个彼此互补的序列，并且其中正义链包含第一序列，反义链包含第二序列，所述第二序列包含与编码Aha1的mRNA的至少一部分基本互补的互补区，并且其中所述互补区的长度小于30个核苷酸，且其中所述dsRNA影响第二dsRNA靶序列内编码Aha基因的mRNA的剪切，所述第二dsRNA具有选自下组的正义链：SEQID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQ ID NO：33、SEQID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQ ID NO：63、SEQID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQ ID NO：91、SEQID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：107、SEQ ID NO：109、SEQID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQ ID NO：135、SEQID NO：137、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：149、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：159、SEQ ID NO：163、SEQID NO：165、SEQ ID NO：167、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：179、SEQ ID NO：181、和SEQ ID NO：183，以及与该正义链互补且选自于下组的反义链：SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQ ID NO：14、SEQ IDNO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：44、SEQ ID NO：46、SEQID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQ ID NO：74、SEQID NO：76、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQ ID NO：102、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：110、SEQID NO：112、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：126、SEQ ID NO：128、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：136、SEQID NO：138、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：152、SEQ ID NO：154、SEQ ID NO：156、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：164、SEQID NO：166、SEQ ID NO：168、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：178、SEQ ID NO：180、SEQ ID NO：182、和SEQ ID NO：184。所述dsRNA可区别于所述第二dsRNA，但是在每条链上可以具有与以上给出的核苷酸序列之一相同的至少5个、至少10个、至少15个、至少18个或至少20个连续核苷酸。

所述第二dsRNA优选选自下组：AL-DP-7301、AL-DP-7308、AL-DP-7318、AL-DP-7320、AL-DP-7322、AL-DP-7324、AL-DP-7325、AL-DP-7326、AL-DP-7327、AL-DP-7329、AL-DP-7331、AL-DP-7333、AL-DP-7340、AL-DP-7342、AL-DP-7303、AL-DP-7305、AL-DP-7307、AL-DP-7309、AL-DP-7316和AL-DP-7337、AL-DP-73 04、AL-DP-7312、AL-DP-7339、AL-DP-7344、AL-DP-7306、AL-DP-7317、AL-DP-7346、AL-DP-7310、AL-DP-7323、AL-DP-7335、AL-DP-7338、AL-DP-7341、AL-DP-7302、AL-DP-7315、AL-DP-7328、AL-DP-7330、AL-DP-7336、AL-DP-7345、AL-DP-9250、AL-DP-9251、AL-DP-9252、AL-DP-9253、AL-DP-9254、AL-DP-9255、AL-DP-9256、AL-DP-9257、AL-DP-9258、AL-DP-9259、AL-DP-9260、AL-DP-9261、AL-DP-9262、AL-DP-9263、AL-DP-9264、AL-DP-9265、AL-DP-9266、AL-DP-9267、AL-DP-9268、AL-DP-9269、AL-DP-9270、AL-DP-9271、AL-DP-9272、AL-DP-9273、AL-DP-9274、AL-DP-9275、AL-DP-9276、AL-DP-9277、AL-DP-9279、AL-DP-9280、AL-DP-9281、AL-DP-9282、AL-DP-9283、AL-DP-9284、AL-DP-9285、AL-DP-9286、AL-DP-9287、AL-DP-9288和AL-DP-9289(参见表1和表2)。

所述dsRNA本身也可选自下组：AL-DP-7301、AL-DP-7308、AL-DP-7318、AL-DP-7320、AL-DP-7322、AL-DP-7324、AL-DP-7325、AL-DP-7326、AL-DP-7327、AL-DP-7329、AL-DP-7331、AL-DP-7333、AL-DP-7340、AL-DP-7342、AL-DP-7303、AL-DP-7305、AL-DP-7307、AL-DP-7309、AL-DP-7316和AL-DP-7337、AL-DP-7304、AL-DP-7312、AL-DP-7339、AL-DP-7344、AL-DP-7306、AL-DP-7317、AL-DP-7346、AL-DP-7310、AL-DP-7323、AL-DP-7335、AL-DP-7338、AL-DP-7341、AL-DP-7302、AL-DP-7315、AL-DP-7328、AL-DP-7330、AL-DP-7336、AL-DP-7345、AL-DP-9250、AL-DP-9251、AL-DP-9252、AL-DP-9253、AL-DP-9254、AL-DP-9255、AL-DP-9256、AL-DP-9257、AL-DP-9258、AL-DP-9259、AL-DP-9260、AL-DP-9261、AL-DP-9262、AL-DP-9263、AL-DP-9264、AL-DP-9265、AL-DP-9266、AL-DP-9267、AL-DP-9268、AL-DP-9269、AL-DP-9270、AL-DP-9271、AL-DP-9272、AL-DP-9273、AL-DP-9274、AL-DP-9275、AL-DP-9276、AL-DP-9277、AL-DP-9279、AL-DP-9280、AL-DP-9281、AL-DP-9282、AL-DP-9283、AL-DP-9284、AL-DP-9285、AL-DP-9286、AL-DP-9287、AL-DP-9288和AL-DP-9289。上述本发明的其它方面提供了包括施用本发明dsRNA的所述方法的其它实施方案。

另一方面，本发明提供了抑制细胞内Aha基因表达的载体，其中所述载体包含可操作性连接于编码dsRNA中至少一条链的核苷酸序列的调控序列，其中所述dsRNA的一条链与编码Aha1的mRNA的至少一部分基本互补，并且其中所述dsRNA的长度小于30个碱基对，且其中所述dsRNA影响第二dsRNA靶序列内编码Aha基因的mRNA的剪切，所述第二dsRNA具有选自下组的正义链：SEQ ID NO：5、SEQ ID NO：7、SEQ ID NO：9、SEQ ID NO：11、SEQ ID NO：13、SEQ ID NO：15、SEQ ID NO：17、SEQ ID NO：19、SEQ ID NO：21、SEQ ID NO：23、SEQ ID NO：27、SEQ ID NO：29、SEQ ID NO：31、SEQID NO：33、SEQ ID NO：35、SEQ ID NO：37、SEQ ID NO：39、SEQ ID NO：43、SEQ ID NO：45、SEQ ID NO：47、SEQ ID NO：49、SEQ ID NO：51、SEQ ID NO：53、SEQ ID NO：55、SEQ ID NO：57、SEQ ID NO：59、SEQ ID NO：61、SEQID NO：63、SEQ ID NO：65、SEQ ID NO：67、SEQ ID NO：69、SEQ ID NO：71、SEQ ID NO：73、SEQ ID NO：75、SEQ ID NO：77、SEQ ID NO：79、SEQ ID NO：81、SEQ ID NO：83、SEQ ID NO：85、SEQ ID NO：87、SEQ ID NO：89、SEQID NO：91、SEQ ID NO：93、SEQ ID NO：95、SEQ ID NO：97、SEQ ID NO：99、SEQ ID NO：101、SEQ ID NO：103、SEQ ID NO：105、SEQ ID NO：107、SEQID NO：109、SEQ ID NO：111、SEQ ID NO：113、SEQ ID NO：115、SEQ ID NO：117、SEQ ID NO：119、SEQ ID NO：121、SEQ ID NO：123、SEQ ID NO：125、SEQ ID NO：127、SEQ ID NO：129、SEQ ID NO：131、SEQ ID NO：133、SEQID NO：135、SEQ ID NO：137、SEQ ID NO：139、SEQ ID NO：141、SEQ ID NO：143、SEQ ID NO：145、SEQ ID NO：147、SEQ ID NO：149、SEQ ID NO：151、SEQ ID NO：153、SEQ ID NO：155、SEQ ID NO：157、SEQ ID NO：159、SEQID NO：163、SEQ ID NO：165、SEQ ID NO：167、SEQ ID NO：169、SEQ ID NO：171、SEQ ID NO：173、SEQ ID NO：175、SEQ ID NO：177、SEQ ID NO：179、SEQ ID NO：181和SEQ ID NO：183，以及与该正义链互补且选自于下组的反义链：SEQ ID NO：6、SEQ ID NO：8、SEQ ID NO：10、SEQ ID NO：12、SEQID NO：14、SEQ ID NO：16、SEQ ID NO：18、SEQ ID NO：20、SEQ ID NO：22、SEQ ID NO：24、SEQ ID NO：28、SEQ ID NO：30、SEQ ID NO：32、SEQ ID NO：34、SEQ ID NO：36、SEQ ID NO：38、SEQ ID NO：40、SEQ ID NO：44、SEQID NO：46、SEQ ID NO：48、SEQ ID NO：50、SEQ ID NO：52、SEQ ID NO：54、SEQ ID NO：56、SEQ ID NO：58、SEQ ID NO：60、SEQ ID NO：62、SEQ ID NO：64、SEQ ID NO：66、SEQ ID NO：68、SEQ ID NO：70、SEQ ID NO：72、SEQID NO：74、SEQ ID NO：76、SEQ ID NO：78、SEQ ID NO：80、SEQ ID NO：82、SEQ ID NO：84、SEQ ID NO：86、SEQ ID NO：88、SEQ ID NO：90、SEQ ID NO：92、SEQ ID NO：94、SEQ ID NO：96、SEQ ID NO：98、SEQ ID NO：100、SEQID NO：102、SEQ ID NO：104、SEQ ID NO：106、SEQ ID NO：108、SEQ ID NO：110、SEQ ID NO：112、SEQ ID NO：114、SEQ ID NO：116、SEQ ID NO：118、SEQ ID NO：120、SEQ ID NO：122、SEQ ID NO：124、SEQ ID NO：126、SEQID NO：128、SEQ ID NO：130、SEQ ID NO：132、SEQ ID NO：134、SEQ ID NO：136、SEQ ID NO：138、SEQ ID NO：140、SEQ ID NO：142、SEQ ID NO：144、SEQ ID NO：146、SEQ ID NO：148、SEQ ID NO：150、SEQ ID NO：152、SEQID NO：154、SEQ ID NO：156、SEQ ID NO：158、SEQ ID NO：160、SEQ ID NO：164、SEQ ID NO：166、SEQ ID NO：168、SEQ ID NO：170、SEQ ID NO：172、SEQ ID NO：174、SEQ ID NO：176、SEQ ID NO：178、SEQ ID NO：180、SEQID NO：182和SEQ ID NO：184。所述dsRNA可不同于所述第二dsRNA，但是在每条链上可以具有与以上给出的核苷酸序列之一相同的至少5个、至少10个、至少15个、至少18个或至少20个连续核苷酸。

所述第二dsRNA优选选自下组：AL-DP-7301、AL-DP-7308、AL-DP-7318、AL-DP-7320、AL-DP-7322、AL-DP-7324、AL-DP-7325、AL-DP-7326、AL-DP-7327、AL-DP-7329、AL-DP-7331、AL-DP-7333、AL-DP-7340、AL-DP-7342、AL-DP-7303、AL-DP-7305、AL-DP-7307、AL-DP-7309、AL-DP-7316和AL-DP-7337、AL-DP-7304、AL-DP-7312、AL-DP-7339、AL-DP-7344、AL-DP-7306、AL-DP-7317、AL-DP-7346、AL-DP-7310、AL-DP-7323、AL-DP-7335、AL-DP-7338、AL-DP-7341、AL-DP-7302、AL-DP-7315、AL-DP-7328、AL-DP-7330、AL-DP-7336、AL-DP-7345、AL-DP-9250、AL-DP-9251、AL-DP-9252、AL-DP-9253、AL-DP-9254、AL-DP-9255、AL-DP-9256、AL-DP-9257、AL-DP-9258、AL-DP-9259、AL-DP-9260、AL-DP-9261、AL-DP-9262、AL-DP-9263、AL-DP-9264、AL-DP-9265、AL-DP-9266、AL-DP-9267、AL-DP-9268、AL-DP-9269、AL-DP-9270、AL-DP-9271、AL-DP-9272、AL-DP-9273、AL-DP-9274、AL-DP-9275、AL-DP-9276、AL-DP-9277、AL-DP-9279、AL-DP-9280、AL-DP-9281、AL-DP-9282、AL-DP-9283、AL-DP-9284、AL-DP-9285、AL-DP-9286、AL-DP-9287、AL-DP-9288和AL-DP-9289(参见表1和表2)。上述本发明的其它方面提供了本发明所述载体的其它实施方案。

另一方面，本发明提供了包含上述载体的分离细胞。上述本发明的其它方面提供了包含本发明载体的所述细胞的其它实施方案。

表1：下调人类(NM_012111.1)、小鼠(NM_146036.1)和黑猩猩(XM_510094.1)Aha1，并且在大鼠细胞中具有最小脱靶相互作用的RNAi试剂；AL-DP-7561、AL-DP-7562、AL-DP-7563和AL-DP-7564还与小鼠(NM_172391.3)和褐家鼠(XM_223680.3)Aha2发生交叉反应。

双链名称	正义链序列¹	序列号	反义链序列¹	序列号
					AL-DP-7299	auugguccacggauaagcuTT	1	agcuuauccguggaccaauTT	2
AL-DP-7300	gugaguaagcuugauggagTT	3	cuccaucaagcuuacucacTT	4
					AL-DP-7301	agucaaaauccccacuuguTT	5	acaaguggggauuuugacuTT	6
AL-DP-7302	aaaucucguggccuuaaugTT	7	cauuaaggccacgagauuuTT	8
					AL-DP-7303	gagauuagugugagccuugTT	9	caaggcucacacuaaucucTT	10
AL-DP-7304	aaucucguggccuuaaugaTT	11	ucauuaaggccacgagauuTT	12
					AL-DP-7305	agauuagugugagccuugcTT	13	gcaaggcucacacuaaucuTT	14
AL-DP-7306	cgggcggacgccaccaacgTT	15	cguugguggcguccgcccgTT	16
					AL-DP-7307	ggcggacgccaccaacgucTT	17	gacguugguggcguccgccTT	18
AL-DP-7308	gggcggacgccaccaacguTT	19	acguugguggcguccgcccTT	20
					AL-DP-7309	caacgucaacaacuggcacTT	21	gugccaguuguugacguugTT	22
AL-DP-7310	gcgggcggacgccaccaacTT	23	guugguggcguccgcccgcTT	24
					AL-DP-7311	aucucguggccuuaaugaaTT	25	uucauuaaggccacgagauTT	26
AL-DP-7312	acgucaacaacuggcacugTT	27	cagugccaguuguugacguTT	28
					AL-DP-7313	accaacgucaacaacuggcTT	29	gccaguuguugacguugguTT	30
AL-DP-7314	acgcuggaucguggaggagTT	31	cuccuccacgauccagcguTT	32
					AL-DP-7315	agacccacgcuggaucgugTT	33	cacgauccagcgugggucuTT	34
AL-DP-7316	gacccacgcuggaucguggTT	35	ccacgauccagcgugggucTT	36
					AL-DP-7317	gaauuuacaucagcacccuTT	37	agggugcugauguaaauucTT	38
AL-DP-7318	gggaauuuacaucagcaccTT	39	ggugcugauguaaauucccTT	40
					AL-DP-7319	ugggaauuuacaucagcacTT	41	gugcugauguaaauucccaTT	42
AL-DP-7320	ccaacgucaacaacuggcaTT	43	ugccaguuguugacguuggTT	44
					AL-DP-7321	aaguggggugagggagaccTT	45	ggucucccucaccccacuuTT	46
AL-DP-7322	acacaaaucucguggccuuTT	47	aaggccacgagauuuguguTT	48
					AL-DP-7323	acccacgcuggaucguggaTT	49	uccacgauccagcguggguTT	50
AL-DP-7324	gagucaaaauccccacuugTT	51	caaguggggauuuugacucTT	52
					AL-DP-7325	gagcucuauagaguguuuaTT	53	uaaacacucuauagagcucTT	54
AL-DP-7326	ggcagcgguacuacuuugaTT	55	ucaaaguaguaccgcugccTT	56
					AL-DP-7327	gacacaaaucucguggccuTT	57	aggccacgagauuugugucTT	58
AL-DP-7328	agcgggcggacgccaccaaTT	59	uugguggcguccgcccgcuTT	60
					AL-DP-7329	caaaauccccacuuguaagTT	61	cuuacaaguggggauuuugTT	62
AL-DP-7330	gagacccacgcuggaucguTT	63	acgauccagcgugggucucTT	64
					AL-DP-7331	gagccuugccaaagaugagTT	65	cucaucuuuggcaaggcucTT	66
AL-DP-7332	ugacacaaaucucguggccTT	67	ggccacgagauuugugucaTT	68
					AL-DP-7333	ggagcucuauagaguguuuTT	69	aaacacucuauagagcuccTT	70
AL-DP-7334	cccacgcuggaucguggagTT	71	cuccacgauccagcgugggTT	72
					AL-DP-7335	gauccccaauuugucugauTT	73	aucagacaaauuggggaucTT	74
AL-DP-7336	gagauccccaauuugucugTT	75	cagacaaauuggggaucucTT	76
					AL-DP-7337	agccugacacaaaucucguTT	77	acgagauuugugucaggcuTT	78
AL-DP-7338	agauccccaauuugucugaTT	79	ucagacaaauuggggaucuTT	80
					AL-DP-7339	agggagacccacgcuggauTT	81	auccagcgugggucucccuTT	82
AL-DP-7340	gagggagacccacgcuggaTT	83	uccagcgugggucucccucTT	84
					AL-DP-7341	gccaaguggggugagggagTT	85	cucccucaccccacuuggcTT	86
AL-DP-7342	uggcagcgguacuacuuugTT	87	caaaguaguaccgcugccaTT	88
					AL-DP-7343	ugagggagacccacgcuggTT	89	ccagcgugggucucccucaTT	90
AL-DP-7344	aguggagauuagugugagcTT	91	gcucacacuaaucuccacuTT	92
					AL-DP-7345	aggagcucuauagaguguuTT	93	aacacucuauagagcuccuTT	94
AL-DP-7346	agcgguacuacuuugagggTT	95	cccucaaaguaguaccgcuTT	96
					AL-DP-7561	cgcuggaucguggaggagcTT	97	gcuccuccacgauccagcgTT	98
AL-DP-7562	gcuggaucguggaggagcgTT	99	cgcuccuccacgauccagcTT	100
					AL-DP-7563	cuggaucguggaggagcggTT	101	ccgcuccuccacgauccagTT	102
AL-DP-7564	uggaucguggaggagcgggTT	103	cccgcuccuccacgauccaTT	104

¹大写字母＝脱氧核糖核苷酸；小写字母＝核糖核苷酸

表2：下调人类(NM_012111.1)、小鼠(NM_146036.1)和黑猩猩(XM_510094.1)Aha1，并且在人类细胞中具有最小脱靶相互作用的RNAi试剂

双链名称	正义链序列¹	序列号	反义链序列¹	序列号
					AL-DP-9250	gccugacacaaaucucgugTT	105	cacgagauuugugucaggcTT	106
AL-DP-9251	ccugacacaaaucucguggTT	107	ccacgagauuugugucaggTT	108
					AL-DP-9252	acgccaccaacgucaacaaTT	109	uuguugacguugguggcguTT	110
AL-DP-9253	agcucuauagaguguuuacTT	111	guaaacacucuauagagcuTT	112
					AL-DP-9254	gggcuggcagcgguacuacTT	113	guaguaccgcugccagcccTT	114
AL-DP-9255	cuggcagcgguacuacuuuTT	115	aaaguaguaccgcugccagTT	116
					AL-DP-9256	ggaugaaguggagauuaguTT	117	acuaaucuccacuucauccTT	118
AL-DP-9257	accagaggagcucuauagaTT	119	ucuauagagcuccucugguTT	120
					AL-DP-9258	aaguggagauuagugugagTT	121	cucacacuaaucuccacuuTT	122
AL-DP-9259	gaggagcucuauagaguguTT	123	acacucuauagagcuccucTT	124
					AL-DP-9260	gggagacccacgcuggaucTT	125	gauccagcgugggucucccTT	126
AL-DP-9261	ugagccugacacaaaucucTT	127	gagauuugugucaggcucaTT	128
					AL-DP-9262	gcggacgccaccaacgucaTT	129	ugacguugguggcguccgcTT	130
AL-DP-9263	cggacgccaccaacgucaaTT	131	uugacguugguggcguccgTT	132
					AL-DP-9264	gaaguggagauuagugugaTT	133	ucacacuaaucuccacuucTT	134
AL-DP-9265	cucguggccuuaaugaaggTT	135	ccuucauuaaggccacgagTT	136
					AL-DP-9266	ucguggccuuaaugaaggaTT	137	uccuucauuaaggccacgaTT	138
AL-DP-9267	aaugggaauuuacaucagcTT	139	gcugauguaaauucccauuTT	140
					AL-DP-9268	ggaauuuacaucagcacccTT	141	gggugcugauguaaauuccTT	142
AL-DP-9269	ggagauuagugugagccuuTT	143	aaggcucacacuaaucuccTT	144
					AL-DP-9270	cacaaaucucguggccuuaTT	145	uaaggccacgagauuugugTT	146
AL-DP-9271	acaaaucucguggccuuaaTT	147	uuaaggccacgagauuuguTT	148
					AL-DP-9272	ggagacccacgcuggaucgTT	149	cgauccagcgugggucuccTT	150
AL-DP-9273	ggacgccaccaacgucaacTT	151	guugacguugguggcguccTT	152
					AL-DP-9274	gaugaaguggagauuagugTT	153	cacuaaucuccacuucaucTT	154
AL-DP-9275	gugagccuugccaaagaugTT	155	caucuuuggcaaggcucacTT	156
					AL-DP-9276	caaugaauggagagucaguTT	157	acugacucuccauucauugTT	158
AL-DP-9277	auuagugugagccuugccaTT	159	uggcaaggcucacacuaauTT	160
					AL-DP-9278	agaugagccugacacaaauTT	161	auuugugucaggcucaucuTT	162
AL-DP-9279	uagugugagccuugccaaaTT	163	uuuggcaaggcucacacuaTT	164
					AL-DP-9280	uuugccaccaucaccuugaTT	165	ucaaggugaugguggcaaaTT	166
AL-DP-9281	acggagagagaugcuucaaTT	167	uugaagcaucucucuccguTT	168
					AL-DP-9282	cggagagagaugcuucaaaTT	169	uuugaagcaucucucuccgTT	170
AL-DP-9283	aaaauccccacuuguaagaTT	171	ucuuacaaguggggauuuuTT	172
					AL-DP-9284	auccccaauuugucugaugTT	173	caucagacaaauuggggauTT	174
AL-DP-9285	ucaaaauccccacuuguaaTT	175	uuacaaguggggauuuugaTT	176
					AL-DP-9286	aaauccccacuuguaagauTT	177	aucuuacaaguggggauuuTT	178
AL-DP-9287	uccccaauuugucugaugaTT	179	ucaucagacaaauuggggaTT	180
					AL-DP-9288	auggccaaguggggugaggTT	181	ccucaccccacuuggccauTT	182
AL-DP-9289	ggagucaaaauccccacuuTT	183	aaguggggauuuugacuccTT	184

¹大写字母＝脱氧核糖核苷酸；小写字母＝核糖核苷酸

附图说明

无附图。

发明详述

本发明提供了双链核糖核酸(dsRNA)以及以及使用所述dsRNA抑制细胞或哺乳动物中Aha基因表达的组合物和方法。本发明还提供了利用dsRNA治疗哺乳动物中由Aha基因表达引起的病理状态和疾病的组合物和方法。dsRNA通过被称为RNA干扰(RNAi)的过程指导mRNA的序列特异性降解。

本发明的dsRNA包含具有长度小于30个核苷酸且通常长度为19-24个核苷酸的区域的RNA链(反义链)，其中所述区域与Aha基因mRNA转录本的至少一部分基本互补。使用这些dsRNA能够靶向降解参与哺乳动物癌细胞增殖和/或保持和/或囊性纤维化跨膜传导调节因子(CFTR)降解的基因的mRNA。使用基于细胞的试验和以及动物试验，本发明人已证明极低剂量的这些dsRNA可特异性地且高效地介导RNAi，造成对Aha基因表达的显著抑制。因此，本发明中包含这些dsRNA的方法和组合物可通过靶向参于蛋白质降解的基因而用于治疗由Aha表达介导的病理过程，例如，癌症和/或囊性纤维化。

下文的详细说明公开了如何制备并使用所述dsRNA和包含dsRNA的组合物以抑制Aha基因的表达，以及治疗由Aha基因表达引起的疾病和病症(例如癌症和/或囊性纤维化)的组合物和方法。本发明的药物组合物包含dsRNA和药学上可接受的载体，其中所述dsRNA具有长度小于30个核苷酸且通常长度为19-24个核苷酸的互补区域的反义链，其中所述互补区域与Aha基因mRNA转录本的至少一部分互补。

因此，本发明的某些方面提供了包含本发明的dsRNA和药学上可接受的载体的药物组合物，使用所述组合物抑制Aha基因表达的方法以及使用所述药物组合物治疗由Aha表达引起的疾病的方法。

定义

为了方便起见，下文提供了本说明书、实施例和权利要求书中使用的特定术语和短语的含义。如果某术语在本说明书其它部分中的用法与本节中提供的其定义之间有明显差异，应以本节中的定义为准。

“G”、“C”、“A”“T”和“U”(不论写为大写字母还是小写字母)通常分别代表包含鸟嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶和尿嘧啶作为碱基的核苷酸。然而，应理解的是术语“核糖核苷酸”或“核苷酸”也可指如下文详述的修饰核苷酸，或代用替换部分(surrogate replacement moiety)。技术人员熟知可将鸟嘌呤、胞嘧啶、腺嘌呤、胸腺嘧啶和尿嘧啶替换成其它部分而基本不改变包含带有此类替换部分的核苷酸的寡核苷酸碱基配对性质。例如但不限于：包含次黄嘌呤作为其碱基的核苷酸可与包含腺嘌呤、胞嘧啶或尿嘧啶的核苷酸进行碱基配对。因此，本发明的核苷酸序列中包含尿嘧啶、鸟嘌呤或腺嘌呤的核苷酸可被替换成包含如次黄嘌呤的核苷酸。包含此类替换部分的序列是本发明的实施方案。

本文所使用的“Aha基因”是指热休克蛋白90 ATP酶激活因子基因。“Aha1”指热休克蛋白90 ATP酶激活因子1基因，可在Genbank登录号NM-012111.1(人类)、NM_146036.1(小鼠)和XM_510094.1(黑猩猩)中找到其非穷举性实例。“Aha2”是指推定的热休克蛋白90 ATP酶激活因子2基因(也称为Ahsa2)，可在Genbank登录号NM_172391.3(小鼠)和XM_223680.3(褐家鼠)中找到其非穷举性实例。

本文所使用的“靶序列”是指Aha基因转录过程中形成的mRNA分子的连续核苷酸序列片段，包括作为初级转录产物的RNA加工产物的mRNA。任意给定的本发明RNAi试剂的靶序列是指X个核苷酸的mRNA序列，其中所述RNAi试剂凭借其反义链和所述mRNA序列的互补性而靶向此mRNA序列，并且在所述RNAi试剂与所述mRNA接触时，其反义链可以与所述mRNA杂交，其中X是反义链的核苷酸数量加上正义链的单链悬端(如果存在)的核苷酸数量所得的核苷酸数量。

本文所用术语“包含序列的链”是指包含核苷酸链的寡核苷酸，该寡核苷酸链通过利用标准核苷酸命名法表示的序列进行阐述。

除非另有说明，否则在用于描述第一核苷酸序列和第二核苷酸序列的关系时，本文所用术语“互补”是指包含所述第一核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸在某些条件下与包含所述第二核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸杂交并形成双螺旋结构的能力，本领域技术人员可理解这一点。例如，此类条件可以是严格条件，其中所述严格条件可包括400mM NaCl、40mM PIPES pH6.4、1mM EDTA，在50℃或70℃下持续12-16小时，随后进行清洗。也可应用其它条件，例如可能在生物体内遇到的生理相关条件。本领域技术人员能够根据杂交核苷酸的最终应用决定最适合于两序列互补试验的系列条件。

这包括包含所述第一核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸与包含所述第二核苷酸序列的寡核苷酸或多核苷酸在第一和第二核苷酸序列的全长范围内的碱基配对。本文中这些序列被称为彼此“完全互补”。然而，在本文中当提到所述第一序列与所述第二序列“基本互补”时，所述两个序列可完全互补或在杂交时形成一个或多个，但通常不超过4个、3个或2个错配碱基对，同时保留与其最终应用最相关的条件下的杂交能力。但是，当两个寡核苷酸经设计以杂交形成一个或多个单链悬端时，考虑到互补的定义这种悬端不应该被认做是错配。例如，在包含一条长度为21个核苷酸的寡核苷酸和另一条长度为23个核苷酸的寡核苷酸的dsRNA中，较长寡核苷酸包含与较短寡核苷酸完全互补的21个核苷酸的序列，在本发明的目的下，这种情况也属于“完全互补”。

只要其杂交能力能够满足上述需求，本文所用“互补”序列也可以包含或完全由非Watson-Crick碱基对形成和/或由非天然和修饰核苷酸形成的碱基对形成。

本文中对于dsRNA的正义链与反义链间碱基配对，或dsRNA的反义链与靶序列间碱基配对可使用术语“互补”、“完全互补”和“基本互补”，所述术语可根据其所处上下文进行理解。

本文所用的与信使RNA(mRNA)的“至少一部分基本互补”的多核苷酸是指于与目标mRNA(例如，编码Aha1的mRNA)的连续片段基本互补的多核苷酸。例如，如果多核苷酸的序列与编码Aha1的mRNA中的非中断片段基本互补，那么所述多核苷酸与Aha1 mRNA的至少一部分互补。

本文所用术语“双链RNA”或“dsRNA”是指核糖核酸分子的复合体，所述复合体具有双链结构并包含两条反平行且如上所述的基本互补的核酸链。形成所述双链结构的两条链可以是同一条较大RNA分子的不同部分，或者是单独的RNA分子。如果所述两条链为一个较大分子的部分并且，通过形成双链结构的一条链3’-末端与另一条链5’-末端之间的非中断核苷酸链相连接，那么所述相连的RNA链被称为“发夹环”。如果所述两条链通过形成双链结构的一条链3’-末端及另一条链5’-末端之间的非中断链之外的方式共价连接，那么所述连接结构被称为“接头(linker)”。所述RNA链可具有相同或不同数量的核苷酸。碱基对的最大值是dsRNA中的最短链减去双链中存在的任何悬端后的核苷酸数目。除双链结构之外，dsRNA可包含一个或多个核苷酸悬端。

本文所用“核苷酸悬端”是指当dsRNA的一条链的3’末端超过另一条链的5’末端或反之时，从dsRNA的双链结构突出的一个或多个未配对核苷酸。“平端”或“平末端”是指在dsRNA的末端没有未配对的核苷酸，即没有核苷酸悬端。“平末端化的”dsRNA是指其任一个末端均没有核苷酸悬端。

术语“反义链”是指dsRNA中的一条链，其包含与靶序列基本互补的区域。本文所用术语“互补区”是指反义链上与本文所定义的序列(例如靶序列)基本互补的区域。如果互补区与靶序列不完全互补，则最能容许错配发生在末端区域，并且如果存在错配，则通常位于末端区域，或者例如5’和/或3’末端的6、5、4、3或2个核苷酸之内。所述错配最优选位于反义链5’末端和/或正义链3’末端的6、5、4、3或2个核苷酸之内。

本文所用术语“正义链”是指dsRNA中的一条链，其包含与所述反义链区域基本互补的区域。

如本领域技术人员的理解，所述“引入到细胞中(或向细胞引入)”在用于dsRNA时，是指便于摄取或吸收进入细胞。dsRNA的吸收或摄取可通过非辅助性扩散或主动的细胞过程发生，或者通过辅助试剂或设备发生。此术语的内涵不限定于体外细胞；也可以将dsRNA“引入到细胞中(或向细胞引入)”，而其中所述细胞是活生物体一部分。在此情况下，引入到细胞中将包括向生物体的递送。例如，在体内递送中，可将dsRNA注射到组织位点或进行全身施用。向体外细胞的引入包括本领域已知的方法，例如电穿孔法和脂质体转染法(lipofection)。

当术语“沉默”和“抑制表达”是针对Aha基因(例如Aha1基因)时，它们在本文指至少部分抑制Aha基因(例如Aha1基因)的表达，通过与第二细胞或细胞群相比可以从第一细胞或细胞群中分离的转录自Aha基因的mRNA数量的减少来表示，其中所述第一细胞或细胞群中Aha基因被转录且其已经被处理以使Aha基因的表达被抑制，所述第二细胞或细胞群与所述第一细胞或细胞群基本相当但其没有作此处理(对照细胞)。所述细胞优选HeLa细胞或MLE12细胞。抑制度通常用以下方式表示：

或者，将抑制度表示为与Aha基因转录在功能上相关的参数的减小，例如由细胞分泌的或者此类细胞裂解后发现于溶液中的Aha基因编码蛋白质的量，或显示特定表型(例如凋亡或细胞表面CFTR)的细胞数量。理论上讲，可以组成型地或通过基因工程方法或任意合适的试验在任意表达所述靶标的细胞中测定Aha基因的沉默。然而，当需要参考以测定给定dsRNA是否在特定程度上抑制Aha基因的表达并因此属于本发明的范围之内时，以下实施例中提供的试验可作为此类参考。

例如，在某些情况下，通过施用本发明的双链寡核苷酸将Aha基因(例如Aha1基因)的表达抑制至少约20％、25％、35％或50％。在一些实施方案中，通过施用本发明的双链寡核苷酸将Aha基因(例如Aha1基因)抑制至少约60％、70％或80％。在一些实施方案中，通过施用本发明的双链寡核苷酸将Aha基因(例如Aha1基因)抑制至少约85％、90％或95％。表6提供了在体外试验中使用本发明的多种dsRNA分子所获得Aha基因表达抑制值。

本文在Aha表达(例如Aha1表达)的上下文中所使用的术语“治疗”(“treat”，“treatment”)等是指Aha基因表达介导的病理过程的缓解或减轻。在本发明的上下文中只要涉及下文陈述的其它任意病症(除可通过Aha表达介导的病理过程之外)，术语“治疗”等表示缓解或减轻至少一种与所述病症相关的症状，或者减缓或逆转所述病症的进程。

本文所用短语“治疗有效量”和“预防有效量”是指在Aha表达介导的病理过程或在Aha表达介导的病理过程的一个明显症状的治疗、预防或控制中产生治疗效益的量。治疗有效的特定量可简单地由普通医务工作者来确定，并可根据本领域已知的因素进行改变，例如可通过Aha表达介导的病理过程的类型，患者的病史和年龄，由Aha表达介导的病理过程的阶段，以及对由Aha表达介导的其它病理过程的抗性试剂的施用。

本文所用“药物组合物”包含药理学有效量的dsRNA和药学上可接受的载体。本文所用“药理学有效量”、“治疗有效量”或“有效量”是指有效产生所需药理学、治疗性或预防性结果的RNA量。例如，如果认为使疾病或病症相关的可测量参数下降至少25％的给定临床治疗为有效治疗，那么用于治疗所述疾病或病症的药物的治疗有效量是将所述参数减少至少25％时所必需的量。

术语“药学上可接受的载体”是指施用治疗剂所用的载体。此类载体包括但不限于盐溶液、缓冲盐溶液、葡萄糖、水、甘油、乙醇及其组合物。所述术语明确地排除了细胞培养基。对于口服药物而言，药学上可接受的载体包括但不限于药学上可接受的赋形剂，例如惰性稀释剂、崩解剂、粘合剂、润滑剂、甜味剂、芳香剂、着色剂和防腐剂。合适的惰性稀释剂包括碳酸钠和碳酸钙、磷酸钠和磷酸钙以及乳糖，而玉米淀粉和褐藻酸是合适的崩解剂。粘合剂可以包括淀粉和明胶，而如果存在润滑剂则通常为硬脂酸镁、硬脂酸或滑石。如果需要，片剂可以用如单硬脂酸甘油酯或二硬脂酸甘油酯的物质进行包被以延迟在胃肠道中的吸收。

本文所用“转化细胞”是指向其引入载体的细胞，其中所述载体可表达dsRNA分子。

双链核糖核酸(dsRNA)

在一个实施方案中，本发明提供了用于抑制细胞或哺乳动物中Aha基因(例如Aha1基因)表达的双链核糖核酸(dsRNA)分子，其中所述dsRNA包含具有互补区的反义链，所述互补区与Aha基因(例如Aha1基因)表达中形成的mRNA的至少一部分互补，并且所述互补区的长度小于30个核苷酸且通常为19-24个核苷酸。所述dsRNA可与表1和表2中dsRNA之一相同，或者影响在表1和表2中dsRNA之一的靶序列内编码Aha基因的mRNA的剪切。所述dsRNA优选每条链具有与表1和表2中dsRNA之一的至少一条链(但优选为两条链)相同的至少5个、至少10个、至少15个、至少18个或至少20个连续核苷酸。利用靶序列和Aha1侧翼序列可以容易地确定其他dsRNA，这些其他dsRNA靶向于表1和表2所示dsRNA之一的靶序列中的其它位置。

所述dsRNA包含两条充分互补以杂交从而形成双链结构的RNA链。所述dsRNA中的一条链(反义链)包含与衍生自Aha基因表达过程中形成的mRNA序列的靶基因基本互补或通常为完全互补的互补区，而另一条链(正义链)包含与所述反义链互补的区域，这样在合适的条件下混合时，所述两条链就会杂交并形成双链结构。通常，所述双链结构的长度为15-30个碱基对，更常见18-25个、还更常见19-24个、最常见为19-21个碱基对长度。类似地，与靶序列互补的区域的长度为15-30个碱基对，更常见18-25个、还更常见19-24个、最常见为19-21个碱基对长度。本发明的dsRNA还可以包含一个或多个单链核苷酸悬端。可通过下文进一步讨论的本领域已知的标准方法合成所述dsRNA，例如使用自动DNA合成仪(例如，可商购自Biosearch，Applied Biosystems，Inc.)。在一个优选实施方案中，Aha基因是人类Aha1基因。在具体实施方案中，所述dsRNA的第一链包括所述RNAi试剂AL-DP-7301至AL-DP-7346和AL-DP-7561至AL-DP-7564(表1)以及AL-DP-9250至AL-DP-9289(表2)的正义序列，第二序列选自于下组的反义序列：AL-DP-7301至AL-DP-7346和AL-DP-7561至AL-DP-7564(表1)以及AL-DP-9250至AL-DP-9289(表2)。

在另一个实施方案中，所述dsRNA包含至少一条选自于由以上RNAi试剂AL-DP-7301至AL-DP-7346和AL-DP-7561至AL-DP-7564(表1)以及AL-DP-9250至AL-DP-9289(表2)所示序列组成的组的核苷酸序列。在其它实施方案中，所述dsRNA包含至少两条选自所述组的序列，其中所述至少两条序列中的一条与所述至少两条序列中的另一条互补，并且所述至少两条序列中的一条与在Aha基因(例如Aha1基因)表达过程中产生的mRNA序列基本互补。通常，所述dsRNA包含两条寡核苷酸，其中可将一条寡核苷酸描述为如RNAi试剂AL-DP-7301至AL-DP-7346和AL-DP-7561至AL-DP-7564(表1)以及AL-DP-9250至AL-DP-9289(表2)之一的正义链，而可将第二寡核苷酸描述为RNAi试剂AL-DP-7301至AL-DP-7346和AL-DP-7561至AL-DP-7564(表1)以及AL-DP-9250至AL-DP-9289(表2)之一的反义链。

本领域技术人员清楚地知道，目前广泛认为包含20-23个，特别是21个碱基对的双链结构的dsRNA可特别有效地诱导RNA干扰(Elbashir et al.，EMBO 2001，20：6877-6888)。然而，也发现较短或较长的dsRNAs也可同样有效。在一个上述实施方案中，借助于为RNAi试剂AL-DP-7301至AL-DP-7346和AL-DP-7561至AL-DP-7564(表1)以及AL-DP-9250至AL-DP-9289(表2)提供的寡核苷酸的特质，本发明的dsRNA可包含至少一条最短长度为21nt的链。可以合理地期望，相对于本文为RNAi试剂AL-DP-7301至AL-DP-7346和AL-DP-7561至AL-DP-7564(表1)以及AL-DP-9250至AL-DP-9289(表2)提供的序列之一，仅在其一个端或两个末端缺失若干个核苷酸的较短dsRNA可具有与上述dsRNA相类似的功效。因此，本发明也关注以下所描述的dsRNA：其包含来自RNAi试剂AL-DP-7301至AL-DP-7346和AL-DP-7561至AL-DP-7564(表1)以及AL-DP-9250至AL-DP-9289(表2)序列之一的部分序列(至少15、16、17、18、19、20或更多个连续核苷酸)，且在下文中所述的FACS试验中，其抑制Aha基因(Aha1基因)表达能力的区别在于其抑制能力不超过包含全长序列dsRNA的抑制能力的5、10、15、20、25或30％。

利用Aha1基因序列和相应的靶序列可以容易地制备在RNAi试剂AL-DP-7301至AL-DP-7346和AL-DP-7561至AL-DP-7564(表1)以及AL-DP-9250至AL-DP-9289(表2)的靶序列内进行剪切的其它dsRNA。表1和表2提供的RNAi试剂可鉴定Aha1 mRNA内对基于RNAi的切割敏感的位点。因此，本发明还包括靶向被本发明一种试剂靶向的序列之内的RNAi试剂。如本文所使用的，如果dsRNA在与第dsRNA反义链互补的mRNA中任意位点进行切割，则所述dsRNA可被称为靶向所述第二dsRNA的序列之内的RNAi试剂。此类dsRNA可通常具有来自表1和表2提供的一条序列的至少5个、至少10个、至少15个、至少18个或至少20个连续核苷酸，并连接有来自编码Aha基因的mRNA中选定序列的相邻区域的其它核苷酸序列。例如，使靶序列AL-DP-7301的3’最末端15个核苷酸之后连接来自靶基因Aha1的6个核苷酸，可产生基于表1和表2所提供序列之一的21个核苷酸的单链试剂。

优选地，所述第二dsRNA选自于在适当检测中(如本文所阐述的检测)具有抑制Aha基因表达的活性的dsRNA组。因此，在一些优选实施方案中，所述第二dsRNA选自于下组：AL-DP-7301、AL-DP-7308、AL-DP-7318、AL-DP-7320、AL-DP-7322、AL-DP-7324、AL-DP-7325、AL-DP-7326、AL-DP-7327、AL-DP-7329、AL-DP-7331、AL-DP-7333、AL-DP-7340、AL-DP-7342、AL-DP-7303、AL-DP-7305、AL-DP-7307、AL-DP-7309、AL-DP-7316和AL-DP-7337、AL-DP-7304、AL-DP-7312、AL-DP-7339、AL-DP-7344、AL-DP-7306、AL-DP-7317、AL-DP-7346、AL-DP-7310、AL-DP-7323、AL-DP-7335、AL-DP-7338、AL-DP-7341、AL-DP-7302、AL-DP-7315、AL-DP-7328、AL-DP-7330、AL-DP-7336、AL-DP-7345、AL-DP-9250、AL-DP-9251、AL-DP-9252、AL-DP-9253、AL-DP-9254、AL-DP-9255、AL-DP-9256、AL-DP-9257、AL-DP-9258、AL-DP-9259、AL-DP-9260、AL-DP-9261、AL-DP-9262、AL-DP-9263、AL-DP-9264、AL-DP-9265、AL-DP-9266、AL-DP-9267、AL-DP-9268、AL-DP-9269、AL-DP-9270、AL-DP-9271、AL-DP-9272、AL-DP-9273、AL-DP-9274、AL-DP-9275、AL-DP-9276、AL-DP-9277、AL-DP-9279、AL-DP-9280、AL-DP-9281、AL-DP-9282、AL-DP-9283、AL-DP-9284、AL-DP-9285、AL-DP-9286、AL-DP-9287、AL-DP-9288和AL-DP-9289。

本发明的dsRNA可以包含与靶序列的一个或多个错配。在一个优选实施方案中，本发明的dsRNA包含不超过3个错配。如果所述dsRNA的反义链包含与靶序列的错配，则优选所述错配区域不位于互补区的中心。如果所述dsRNA的反义链包含与靶序列的错配，则优选所述错配区域被限制为任一末端的5个核苷酸之内，例如互补区5’-或3’-末端(优选5’-末端)的5、4、3、2或1个核苷酸。例如，对于与Aha基因中一个区域互补的23个核苷酸的dsRNA链而言，所述dsRNA通常在其中心的13个核苷酸内不包含任何错配。在另一个实施方案中，所述dsRNA的反义链在该反义链(从5’-3’计算)从第1或第2位至第9或第10位的区域内不包含任何错配。本文所述的方法可用于检测包含与靶序列错配的dsRNA是否能有效抑制Aha基因的表达。考虑带有错配的dsRNA在抑制Aha基因表达中的效力非常重要，特别是已知Aha基因中的特定互补区在群体中具有多态性序列变异的情况下。

在一个实施方案中，dsRNA的至少一个末端具有1-4个，通常1或2个核苷酸的单链核苷酸悬端。与其平端对应物相比，具有至少一个核苷酸悬端的dsRNA具有意想不到的较高的抑制特性。此外，本发明人还发现仅一个核苷酸悬端的存在可增强dsRNA的干扰活性，而不影响其整体稳定性。已证明仅具有一个悬端的dsRNA在体内以及多种细胞、细胞培养基、血液和血清中尤其稳定和有效。通常，单链悬端位于反义链的3’-末端，或者正义链的3’-末端。所述dsRNA也可以具有平端，通常位于反义链的5′-末端。此类dsRNA具有改进的稳定性和抑制活性，因此能够以低剂量施用，即每天施用小于5mg/kg受试者体重。通常，所述dsRNA的反义链在3’-末端具有核苷酸悬端，而5’-末端为平端。在另一个实施方案中，悬端中的一个或多个核苷酸被替代为核苷硫代磷酸酯。

在另一个实施方案中，对所述dsRNA进行化学修饰以增强稳定性。可通过本领域的常规方法合成和/或修饰本发明的核酸，例如那些描述于“Currentprotocols in nucleic acid chemistry”，Beaucage，S.L.et al.(Edrs.)，John Wiley&Sons，Inc.，New York，NY，USA中的方法，以上文献通过引用并入本文。可用于本发明的优选dsRNA化合物的特定实例包括含修饰骨架的或非天然核苷间连接的dsRNA。如在本说明书中的定义，具有修饰骨架的dsRNA包括那些保留骨架中磷原子的dsRNA和未保留骨架中磷原子的dsRNA。出于本说明书的目的，并且如有时在本领域中所指，在其核苷间骨架中不含磷原子的修饰dsRNA也能被认为是寡核苷。

优选的修饰dsRNA骨架包括，例如具有正常3’-5’连接的硫代磷酸酯、手性硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯、磷酸三酯、氨基烷基磷酸三酯、甲基和其他烷基膦酸酯(包括3’-亚烷基膦酸酯和手性膦酸酯)、亚膦酸酯、氨基磷酸酯(包括3’-氨基氨基磷酸酯和氨基烷基氨基磷酸酯)、硫酰基氨基磷酸酯(thionophosphoramidate)、硫酰基烷基膦酸酯、硫酰基烷基磷酸三酯和硼烷磷酸酯(boranophosphate)以及它们2’-5’连接的类似物，以及具有反极性的那些类似物(其中相邻核苷单位对的连接由3’-5’变成5’-3’或由2’-5’变成5’-2’)。还包括各种盐、混合的盐和游离酸的形式。

教导以上含磷连接的制备的代表性美国专利包括但不限于美国专利第3,687,808号、第4,469,863号、第4,476,301号、第5,023,243号、第5,177,195号、第5,188,897号、第5,264,423号、第5,276,019号、第5,278,302号、第5,286,717号、第5,321,131号、第5,399,676号、第5,405,939号、第5,453,496号、第5,455,233号、第5,466,677号、第5,476,925号、第5,519,126号、第5,536,821号、第5,541,316号、第5,550,111号、第5,563,253号、第5,571,799号、第5,587,361号和第5,625,050号，所述各专利均通过引用方式并入本文。

其中不包含磷原子的优选的修饰dsRNA骨架具有通过短链烷基或环烷基核苷酸间连接、混合的杂原子和烷基或环烷基核苷酸间连接，或者一个或多个短链杂原子或杂环核苷间连接形成的骨架。这些包括那些具有吗啉基连接键(部分由核苷的糖部分形成)的那些骨架；硅氧烷骨架；硫化物、亚砜和砜骨架；formacetyl和thioformacetyl骨架；methylene formacetyl和thioformacetyl骨架；含有烯烃的骨架；氨基磺酸酯骨架；亚甲基亚胺和亚甲基肼基骨架；磺酸酯和磺酰胺骨架；酰胺骨架；和其它具有混合的N、O、S和CH₂组分部分的骨架。

教导制备上述寡聚核苷的代表性美国专利包括但不限于美国专利第5,034,506号、第5,166,315号、第5,185,444号、第5,214,134号、第5,216,141号、第5,235,033号、第5,264,562号、第5,264,564号、第5,405,938号、第5,434,257号、第5,466,677号、第5,470,967号、第5,489,677号、第5,541,307号、第5,561,225号、第5,596,086号、第5,602,240号、第5,610,289号、第5,602,240号、第5,608,046号、第5,610,289号、第5,618,704号、第5,623,070号、第5,663,312号、第5,633,360号、第5,677,437号和第5,677,439号，所述各专利均通过引用方式并入本文。

在另一个优选的dsRNA模拟物中，糖和核苷间连接，即核苷酸单元的骨架被新基团取代。保持碱基单元以与适当的核酸靶标化合物进行杂交。一种此类寡聚化合物，即已经显示具有优异的杂交特性的dsRNA模拟物，被称为肽核酸(PNA)。在PNA化合物中，dsRNA的糖骨架被含酰胺的骨架，特别是氨乙基甘氨酸骨架取代。核酸碱基得到保留并直接或间接地结合所述骨架酰胺部分的氮杂氮原子。教导制备所述PNA化合物的代表性美国专利包括但不限于美国专利第5,539,082号、第5,714,331号和第5,719,262号，所述各专利均通过引用方式并入本文。关于PNA化合物的其他学说可参见Nielsen etal.，Science，1991，254，1497-1500。

本发明的最优选实施方案为具有硫代磷酸酯骨架的dsRNA和具有杂原子骨架的寡核苷，特别是上述参考美国专利第5,489,677号的-CH₂-NH-CH₂-、-CH₂-N(CH₃)-O-CH₂-[称为亚甲基(甲基亚胺基)或MMI骨架]、-CH₂-O-N(CH₃)-CH₂-、-CH₂-N(CH₃)-N(CH₃)-CH₂-和-N(CH₃)-CH₂-CH₂-[其中天然的磷酸二酯骨架表示为-O-P-O-CH₂-]，以及上述参考美国专利第5,602,240号的酰胺骨架。还优选上述参考美国专利第5,034,506号的具有吗啉基骨架结构的dsRNA。

修饰的dsRNA还可以含一个或多个取代的糖部分。优选的dsRNA在2’位置包含下述之一：OH；F；O-、S-或N-烷基；O-、S-或N-链烯基；O-、S-或N-炔基或O-烷基-O-烷基，其中烷基、烯基和炔基可以是取代或非取代的C₁至C₁₀烷基或C₂至C₁₀烯基和炔基。特别优选的是O[(CH₂)_nO]_mCH₃、O(CH₂)_nOCH₃、O(CH₂)_nNH₂、O(CH₂)_nCH₃、O(CH₂)_nONH₂和O(CH₂)_nON[(CH₂)_nCH₃)]₂，其中n和m为1至约10。其它优选的dsRNA在2’位置包含下述之一：C₁至C₁₀低级烷基、取代的低级烷基、烷芳基、芳烷基、O-烷芳基或O-芳烷基、SH、SCH₃、OCN、Cl、Br、CN、CF₃、OCF₃、SOCH₃、SO₂CH₃、ONO₂、NO₂、N₃、NH₂、杂环烷基、杂环烷芳基、氨基烷基氨基、多聚烷基氨基、取代的甲硅烷基、RNA剪切基团、报告基团、嵌入剂、提高dsRNA药代动力学特性的基团或提高dsRNA药效学特性的基团、以及其它具有类似特性的取代基。优选的修饰包括2’-甲氧基乙氧基(2’-O-CH₂CH₂OCH₃，也称为2’-O-(2-甲氧基乙基)或2’-MOE)(Martin et al，Helv.Chim.Acta，1995，78，486-504)，即烷氧基-烷氧基基团。另一个优选的修饰包括如下文实施例中阐述的2’-二甲基氨基氧基乙氧基，即O(CH₂)₂ON(CH₃)₂基团，也称为2’-DMAOE，以及如下文实施例中阐述的2’-二甲基氨基乙氧基乙氧基(在本领域中也称为2’-O-二甲基氨基乙氧基乙基或2’-DMAEOE)，即2’-O-CH₂-O-CH₂-N(CH₂)₂。

其它优选的修饰包括2’-甲氧基(2’-OCH₃)、2’-氨基丙氧基(2’-OCH₂CH₂CH₂NH₂)和2’-氟(2’-F)。类似的修饰也可以在dsRNA的其它位置完成，特别是3’末端核苷酸中或2’-5’连接的dsRNA中糖的3’位以及5’末端核苷酸的5’位。dsRNA还可以具有糖模拟物，例如替代呋喃戊糖的环丁基部分。教导这种修饰糖结构的制备的代表性美国专利包括但不限于美国专利第4,981,957号、第5,118,800号、第5,319,080号、第5,359,044号、第5,393,878号、第5,446,137号、第5,466,786号、第5,514,785号、第5,519,134号、第5,567,811号、第5,576,427号、第5,591,722号、第5,597,909号、第5,610,300号、第5,627,053号、第5,639,873号、第5,646,265号、第5,658,873号、第5,670,633号和第5,700,920号，其中某些专利与本申请具有共同申请人，并且各专利的全文均通过引用方式并入本文。

dsRNA还可以包括核酸碱基(在本领域中通常简称为“碱基”)修饰或取代。本文所使用的“非修饰”或“天然”的核酸碱基包括嘌呤碱基(腺嘌呤(A)和鸟嘌呤(G))，以及嘧啶碱基(胸腺嘧啶(T)、胞嘧啶(C)和尿嘧啶(U))。修饰核酸碱基包括其它合成的和天然的核酸碱基，例如5-甲基胞嘧啶(5-me-C)，5-羟甲基胞嘧啶，黄嘌呤，次黄嘌呤，2-氨基腺嘌呤，腺嘌呤和鸟嘌呤的6-甲基和其它烷基衍生物，腺嘌呤和鸟嘌呤的2-丙基和其它烷基衍生物，2-硫代尿嘧啶，2-硫代胸腺嘧啶和2-硫代胞嘧啶，5-卤代尿嘧啶和胞嘧啶，5-丙炔基尿嘧啶和胞嘧啶，6-偶氮尿嘧啶、胞嘧啶和胸腺嘧啶，5-尿嘧啶(假尿嘧啶)，4-硫代尿嘧啶，8-卤代、8-氨基、8-硫羟、8-硫烷基、8-羟基和其它8-取代的腺嘌呤和鸟嘌呤，5-卤代，特别是5-溴代、5-三氟甲基和其它5-取代的尿嘧啶和胞嘧啶，7-甲基鸟嘌呤和7-甲基腺嘌呤，8-氮杂鸟嘌呤和8-氮杂腺嘌呤，7-脱氮杂鸟嘌呤和7-脱氮杂腺嘌呤以及3-脱氮杂鸟嘌呤和3-脱氮杂腺嘌呤。其它核酸碱基包括公开于以下文献中的核酸碱基：美国专利第3,687,808号；The Concise Encyclopedia Of Polymer Science AndEngineering，858-859页，Kroschwitz，J.L，ed.John Wiley & Sons，1990；Englisch et al.，Angewandte Chemie，International Edition，1991，30，613；和Sanghvi，Y S.，15章，DsRNA Research and Applications，289-302页，Crooke，S.T.和Lebleu，B.，Ed.，CRC Press，1993。这些核酸碱基中的一些对提高本发明寡聚化合物的结合亲和力特别有用。这些核酸碱基包括5-取代的嘧啶，6-氮杂嘧啶和N-2、N-6以及O-6取代的嘌呤，例如2-氨基丙基腺嘌呤、5-丙炔基尿嘧啶和5-丙炔基胞嘧啶。已经表明5-甲基胞嘧啶取代将核酸双链的稳定性提高0.6-1.2℃(Sanghvi，Y.S.，Crooke，S.T.和Lebleu，B.，Eds.，DsRNAResearch and Applications，CRC Press，Boca Raton，1993，276-278页)，并且是目前的优选碱基取代，特别当与2’-O-甲氧基乙基糖修饰物组合时则更加优选。

教导以上所提到的某些修饰核酸碱基和其它修饰核酸碱基的制备的代表性美国专利包括但不限于以上提到的美国专利第3,687,808号，还有美国专利第4,845,205号、第5,130,30号、第5,134,066号、第5,175,273号、第5,367,066号、第5,432,272号、第5,457,187号、第5,459,255号、第5,484,908号、第5,502,177号、第5,525,711号、第5,552,540号、第5,587,469号、第5,594,121号、第5,596,091号、第5,614,617号和第5,681,941号，所述各专利均通过引用方式并入本文，以及美国专利第5,750,692号，也通过引用方式并入本文。

本发明的dsRNA的另一种修饰包括化学连接至dsRNA的一个或多个部分或偶联物以增强dsRNA的活性、细胞分布和细胞摄取。这种部分包括但不限于脂质部分，例如胆固醇部分(Letsinger et al，Proc.Natl.Acid.Sci.USA，199，86，6553-6556)，胆酸(Manoharan et al，Biorg.Med.Chem.Let.，1994 41053-1060)，硫醚，例如beryl-S-三苯甲基硫醇(Manoharan et al，Ann.N.Y.Acad.Sci.，1992，660，306-309；Manoharan et al，Biorg.Med.Chem.Let.，1993，3，2765-2770)，硫代胆固醇(Oberhauser et al，Nucl.Acids Res.，1992，20，533-538)，和脂肪链，例如十二烷基二醇或十一烷基残基(Saison-Behmoaras et al，EMBO J，1991，10，1111-1118；Kabanov et al，FEBSLett.，1990，259，327-330；Svinarchuk et al，Biochimie，1993，75，49-54)，磷脂，例如二-十六烷基-外消旋-甘油或三乙基-铵1，2-二-O-十六烷基-外消旋-甘油-3-H-磷酸酯(Manoharan et al，Tetrahedron Lett.，1995，36，3651-3654；Shea et al，Nucl.Acids Res.，1990，18，3777-3783)，聚胺或聚乙二醇链(Manoharan et al，Nucleosides & Nucleotides，1995，14，969-973)或金刚烷乙酸(Manoharan et al，Tetrahedron Lett.，1995，36，3651-3654)，棕榈酰部分(Mishra et al，Biochim.Biophys.Acta，1995，1264，229-237)，或十八胺或己胺-羰基氧基胆固醇部分(Crooke et al，J.Pharmacol.Exp.Ther.，1996，277，923-937)。

教导这种dsRNA偶联物的制备的代表性美国专利包括但不限于美国专利第4,828,979号、第4,948,882号、第5,218,105号、第5,525,465号、第5,541,313号、第5,545,730号、第5,552,538号、5,578,717号、第5,580,731号、第5,591,584号、第5,109,124号、第5,118,802号、第5,138,045号、第5,414,077号、第5,486,603号、第5,512,439号、第5,578,718号、第5,608,046号、第4,587,044号、第4,605,735号、第4,667,025号、第4,762,779号、第4,789,737号、第4,824,941号、第4,835,263号、第4,876,335号、第4,904,582号、第4,958,013号、第5,082,830号、第5,112,963号、第5,214,136号、第5,082,830号、第5,112,963号、第5,214,136号、第5,245,022号、第5,254,469号、第5,258,506号、第5,262,536号、第5,272,250号、第5,292,873号、第5,317,098号、第5,371,241号、第5,391,723号、第5,416,203号、第5,451,463号、第5,510,475号、第5,512,667号、第5,514,785号、第5,565,552号、第5,567,810号、第5,574,142号、第5,585,481号、第5,587,371号、第5,595,726号、第5,597,696号、第5,599,923号、第5,599,928号和第5,688,941，所述各专利均通过引用方式并入本文。

没有必要对给定化合物中的所有位置统一进行修饰，并且事实上可以向单个化合物中乃至向dsRNA内的单个核苷上引入不止一个前述修饰。本发明还包括是嵌合化合物的dsRNA化合物。在本发明文中，“嵌合的”dsRNA化合物或“嵌合体”为dsRNA化合物，特别是包含两个或多个化学分离区的dsRNA，每一个所述化学分离区由至少一个单体单元(在dsRNA化合物的情况下，所述单体单元为核苷酸)构成。通常这些dsRNA包含至少一个对所述dsRNA进行修饰进行修饰的区域，以便赋予所述dsRNA提高的抗核酸酶降解性、提高的细胞摄取、和/或提高的与靶核酸的结合亲和力。dsRNA的一个附加区域可以作为能够剪切RNA:DNA或RNA:RNA杂合体的酶的底物。例如，RNase H是细胞中一种能剪切RNA:DNA双链中的RNA链的核酸内切酶。因此，RNase H的激活引起对RNA靶标的剪切，由此极大地增强dsRNA对基因表达的抑制效率。因此，与杂交至同一靶标区域的硫代磷酸酯脱氧dsRNA相比，在使用嵌合dsRNA时，通常由较短的dsRNA就能够获得相当的结果。可以通过常规的凝胶电泳检测靶RNA的剪切，而且如果需要也可结合本领域已知的相关核酸杂交技术进行检测。

在某些情况下，可通过非配体基团修饰dsRNA。现已将多种非配体分子与dsRNA结合以改善所述dsRNA的活性、细胞分布或细胞摄取，而且可从科技文献中获得进行此类结合的方法。这些非配体部分包括脂质部分，例如胆固醇(Letsinger et al，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，1989，86：6553)，胆酸(Manoharan et al.，Bioorg.Med.Chem.Lett.，1994，4：1053)，硫醚，例如己基-S-三苯甲基硫醇(Manoharan et al，Ann.N.Y.Acad.Sci.，1992，660：306；Manoharan et al，Bioorg.Med.Chem.Let.，1993，3：2765)，硫代胆固醇(Oberhauser et al，Nucl.Acids Res.，1992，20：533)，脂肪链，例如十二烷基二醇或十一烷基残基(Saison-Behmoaras et al，EMBO J.，1991，10：111；Kabanovet al，FEBS Lett.，1990，259：327；Svinarchuk et al，Biochimie，1993，75：49)，磷脂，例如二-十六烷基-外消旋-甘油或三乙基-铵1，2-二-O-十六烷基-外消旋-甘油-3-H-磷酸酯(Manoharan et al，Tetrahedron Lett.，1995，36：3651；Shea et al，Nucl.Acids Res.，1990，18：3777)，聚胺或聚乙二醇链(Manoharan et al，Nucleosides & Nucleotides，1995，14：969)，或金刚烷乙酸(Manoharan et al，Tetrahedron Lett.，1995，36：3651)，棕榈酰部分(Mishra et al，Biochim.Biophys.Acta，1995，1264：229)，或十八胺或己胺-羰基氧基胆固醇部分(Crooke et al，J.Pharmacol.Exp.Ther.，1996，277：923)。上文已经列出了教导制备此类dsRNA结合物的代表性美国专利。典型的结合方法包含合成在序列中一个或多个位点具有氨基接头的dsRNA。随后，使用合适的偶联或活化试剂使氨基基团与将要被结合的分子反应。所述结合反应可在dsRNA仍结合在固体支持物时进行，或者在dsRNA被切割至溶液相后进行。通常通过HPLC纯化dsRNA偶联物以获得纯的偶联物。

编码RNAi试剂的载体

本发明的dsRNA也可以由重组病毒载体在体内细胞中表达。本发明的重组病毒载体包含编码本发明dsRNA的序列以及任意适合于表达所述dsRNA序列的启动子。合适的启动子包括，例如，U6或H1 RNA pol III启动子序列和巨细胞病毒启动子。对其它合适启动子的选择属于本领域的技术范围。本发明的重组病毒载体也可包含可诱导的或可调控的启动子，以在特定组织或特定细胞内环境中表达dsRNA。下文中更详细地讨论了重组病毒载体在将本发明dsRNA递送至体内细胞中的用途。

本发明的dsRNA可以由重组病毒载体表达为两个分离的互补RNA分子或由具有两个互补区域的单个RNA分子。

可以使用能够接受将要表达的dsRNA分子的编码序列的任何病毒载体，例如衍生自腺病毒(AV)、腺相关病毒(AAV)、逆转录病毒(如慢病毒(LV)、棒状病毒、鼠白血病病毒)、疱疹病毒等的载体。可适当地通过使用来自其它病毒的包膜蛋白或其它表面抗原对病毒载体进行假型化，或通过取代不同的病毒衣壳蛋白来改变所述病毒载体的亲嗜性。

例如，可使用来自于疱疹性口腔炎病毒(VSV)、狂犬病毒、埃博拉病毒、莫科拉病毒(Mokola)等的表面蛋白对本发明的慢病毒载体进行假型化。可通过对载体进行基因改造以表达不同的衣壳蛋白血清型而使本发明的AAV载体靶向不同的细胞。例如，表达2型血清型基因组上的2型血清型衣壳蛋白的AAV载体被称为AAV 2/2。可以由5型血清型的衣壳蛋白基因取代AAV2/2载体中的此类2型血清型衣壳蛋白基因以产生AAV 2/5载体。构建表达不同衣壳蛋白血清型的技术属于本领域的技术范围；参见，例如Rabinowitz JE et al.(2002)，J Virol 76：791-801，其公开的全文通过引用方式并入本文。

适合本发明使用的重组病毒载体的选择、将表达dsRNA的核酸序列插入载体内的方法和将病毒载体递送至目标细胞的方法都属于本领域的技术范围。参见，例如Dornburg R(1995)，Gene Therap.2：301-310；Eglitis M A(1988)，Biotechniques 6：608-614；Miller A D(1990)，Hum Gene Therap.1：5-14；Anderson W F(1998)，Nature 392：25-30；和Rubinson D A et al.，Nat.Genet.33：401-406，其公开的全文通过引用方式并入本文。

优选的病毒载体是那些衍生自AV和AAV的载体。在特定的优选实施方案中，本发明的dsRNA可以由重组AAV载体表达为两个分离且互补的单链RNA分子，其中所述重组AAV载体包含例如U6或H1 RNA启动子，或巨细胞病毒(CMV)启动子。

适合于表达本发明dsRNA的AV载体、构建重组AV载体的方法和将所述载体递送至靶标细胞的方法描述于Xia H et al.(2002)，Nat.Biotech.20：1006-1010。

适合于表达本发明dsRNA的AAV载体、构建重组AV载体的方法和将所述载体递送至靶标细胞的方法描述于Samulski R et al.(1987)，J.Virol.61：3096-3101；Fisher K J et al.(1996)，J.Virol，70：520-532；Samulski R et al.(1989)，J.Virol.63：3822-3826；美国专利第5,252,479号；美国专利第5,139,941号；国际专利申请WO 94/13788和国际专利申请WO 93/24641中，其公开的全文通过引用方式并入本文。

包含dsRNA的药物组合物

在一个实施方案中，本发明提供了包含如本文所述的dsRNA和药学上可接受载体的药物组合物。所述包含dsRNA的药物组合物可用于治疗与Aha基因表达或活性相关的疾病或病症，例如，治疗由Aha1表达介导的病理过程。此类药物组合物根据其给药方式进行配制。一个实例是配制经非肠道给药向全身施用的组合物。

以足够抑制Aha基因表达的剂量施用本发明的药物组合物。本发明人发现，因为其效力得到提高，包含本发明dsRNA的组合物能够以意想不到的低剂量施用。每天5mg dsRNA/kg受试者体重的最大剂量足以抑制或完全抑制Aha基因的表达。

通常，dsRNA的合适剂量是每天0.01至5.0mg/kg受试者体重，通常为每天1μg至1mg/kg体重。药物组合物可以每天施用一次，或者可以在一天内以适当的间隔分两个、三个或多个亚剂量施用dsRNA，乃至使用连续输注或通过控释制剂给药。在这种情况下，每个亚剂量中所包含的dsRNA必须相对较少以达到每天的总剂量。也可将剂量单位组合以用于数天的给药，例如使用常规缓释制剂以在数天内提供缓释的dsRNA。缓释制剂是本领域所熟知的技术，并通常用于试剂的阴道内递送，以此可以与本发明的试剂一起使用。在本实施方案中，剂量单位包含相应的多个日剂量。

技术人员可以理解，特定因素可能影响有效治疗受试者所需要的剂量和时间，所述因素包括但不限于疾病或病症的严重程度、先期治疗、受试者的综合健康度和/或年龄以及存在的其它疾病。此外，使用治疗有效量的组合物对受试者进行的治疗可以包括单次治疗或一系列治疗。如本文其它部分所述，可以使用常规方法学或者使用合适的动物模型在体内检测的基础上评估本发明所涵盖的单个dsRNA的有效量和体内半衰期。

随着小鼠遗传学的进展，已经产生了用于研究多种人类疾病(例如，由Aha基因表达介导的病理过程)的多种小鼠模型。此类模型可用于dsRNA的体内检测以及确定治疗有效剂量。

本发明还包括包含本发明dsRNA化合物的药物组合物和制剂。取决于是否需要局部或全身治疗和需要治疗的区域，可以以多种方式施用本发明的药物组合物。可以局部施用、经肺部施用，例如通过吸入或吹入粉末或气溶胶(包括通过喷雾器)；气管内、鼻内、表皮和透皮，口服或非肠道施用。非肠道施用包括静脉内、动脉内、皮下、腹膜内或肌内注射或输注，或者颅内，例如鞘内或心室内施用。

用于局部施用的药物组合物和制剂可以包括透皮贴剂、软膏、洗液、乳膏、凝胶、滴剂、栓剂、喷雾、液体和粉末。也有必要或需要使用常规药物载体、水、粉末或油基料、增稠剂等。还可以使用有涂层的避孕套、手套等。优选的局部用制剂包括将本发明的dsRNA与局部递送试剂(例如脂质、脂质体、脂肪酸、脂肪酸酯、类固醇、螯合剂和表面活性剂)混合的那些制剂。优选的脂质和脂质体包括中性(例如二油酰磷脂酰乙醇胺＝DOPE、二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱＝DMPC、二硬脂酰磷脂酰胆碱)、阴离子性(例如二肉豆蔻酰磷脂酰甘油＝DMPG)和阳离子性(例如，二油酰四甲基氨基丙烷＝DOTAP和二油酰基磷脂酰基乙醇胺＝DOTMA)。可以将本发明的dsRNA封装在脂质体内或者与其(特别是与阳离子脂质体)形成复合物。或者，dsRNA可以与脂质复合，特别是与阳离子脂质。优选的脂肪酸和酯包括但不限于花生四烯酸、油酸、花生酸、月桂酸、辛酸、癸酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻酸、二癸酸酯、三癸酸酯、单油酸酯、月桂酸二甘油酯、甘油1-单癸酸酯、1-十二烷基氮杂环庚烷-2-酮、酰基肉毒碱、酰基胆碱、或C_1-10烷基酯(例如肉豆蔻酸异丙酯IPM)、甘油单酯、甘油二酯或其药学上可接受的盐。局部制剂在1999年5月20日递交的美国专利申请第09/315,298号中得到了详细阐述，此文献全文通过引用方式并入本文。

用于口服给药的组合物和制剂包括粉末或颗粒、微颗粒、纳米颗粒、在水或非水溶剂的悬浮液或溶液、胶囊、凝胶胶囊、药袋(sachets)、片剂或微片剂。可能需要增稠剂、芳香剂、稀释液、乳化剂、分散剂或粘合剂。优选的口服制剂是将本发明的dsRNA与一个或多个渗透增强剂、表面活性剂和螯合剂一起施用的制剂。优选的表面活性剂包括脂肪酸和/或其酯或盐、胆酸和/或其盐。优选的胆酸/盐包括鹅脱氧胆酸(CDCA)和熊脱氧胆酸(ursodeoxychenodeoxycholic acid，UDCA)、胆酸、脱氢胆酸、脱氧胆酸、葡糖胆酸、甘油胆酸、甘油脱氧胆酸、牛磺胆酸、牛磺脱氧胆酸、牛磺-24，25-二氢-夫西地酸钠和甘油二氢夫西地酸钠。优选的脂肪酸包括花生四烯酸、十一烷酸、油酸、月桂酸、辛酸、癸酸、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻酸、二癸酯、三癸酯、单油酸酯、月桂酸二甘油酯、甘油1-单癸酸酯、1-十二烷基氮杂环庚烷-2-酮、酰基肉毒碱、酰基胆碱、或甘油单酯、甘油二酯或其药学上可接受的盐(例如，钠盐)。优选的还有渗透增强剂的组合，例如脂肪酸/盐与胆酸/盐的组合。特别优选的组合是月桂酸、辛酸和UDCA的钠盐。其它渗透增强剂包括聚氧乙烯-9-月桂醚、聚氧乙烯-20-十六烷基醚。本发明的dsRNA可以以粒状形式(包括喷雾干燥颗粒或聚合形成的微颗粒或纳米颗粒)口服递送。dsRNA复合剂(complexing agent)包括聚氨基酸，聚亚胺，聚丙烯酸酯，聚烷基丙烯酸酯、聚氧乙烷、聚烷基氰基丙烯酸酯，阳离子化的明胶、白蛋白、淀粉、丙烯酸酯、聚乙二醇(PEG)和淀粉，聚烷基氰基丙烯酸酯，DEAE衍生化的聚亚胺、短梗霉多糖(pollulans)、纤维素和淀粉。特别优选的复合剂包括壳聚糖、N-三甲基壳聚糖、聚L-赖氨酸、聚组氨酸、聚鸟氨酸、聚精胺、鱼精蛋白、聚乙烯吡啶、聚硫代二乙基氨基甲基乙烯P(TDAE)、聚氨基苯乙烯(例如，对氨基)、聚(甲基氰基丙烯酸酯)、聚(乙基氰基丙烯酸酯)、聚(丁基氰基丙烯酸酯)、聚(异丁基氰基丙烯酸酯)、聚(异己基氰基丙烯酸酯)、DEAE-甲基丙烯酸酯、DEAE-己基丙烯酸酯、DEAE-丙烯酰胺、DEAE-白蛋白和DEAE-葡聚糖、聚甲基丙烯酸酯、聚己基丙烯酸酯、聚(D，L-乳酸)、聚D，L-乳酸聚乙醇酸共聚物(PLGA)、藻酸盐和聚乙二醇(PEG)。dsRNA的口服制剂及其制备详细描述于美国申请第08/886,829号(递交于1997年7月1日)、09/108,673(递交于1998年7月1日)、第09/256,515号(递交于1999年2月23日)、09/082,624(递交于1998年5月21日)和第09/315,298号(递交于1999年5月20日)，以上文献均通过引用方式并入本文。

用于非肠道、鞘内或心室内施用的组合物和制剂可以包括无菌水溶液，所述水溶液还可以包含缓冲剂、稀释剂和其它合适的添加剂，例如但不限于渗透增强剂、载体化合物和其它药学上可接受的载体或赋形剂。

本发明的药物组合物包括但不限于溶液、乳剂和包含脂质体的制剂。这些组合物可以从多种组分生成，所述组分包括但不限于预制的液体、自乳化的固体和自乳化的半固体。

本发明的药物制剂可以便捷地以单位剂量的形式存在，其可以根据制药业中熟知的常规技术进行制备。这种技术包括使活性成分与药物载体或赋形剂相结合的步骤。通常，通过均匀地且紧密地将活性成分与液体载体或精细研磨的固体载体或与以上两者组合来制备所述制剂，然后(如果需要)将产品制成型。

本发明的组合物可以配制成任意多个可能的剂型，例如但不限于片剂、胶囊、凝胶囊、液体糖浆、软凝胶、栓剂和灌肠剂。本发明的组合物还可以制成水悬浮液、非水或混合溶剂的悬浮液。水悬浮液还可以包含提高悬浮液粘性的物质，例如羧甲基纤维素碳酸钠、山梨醇和/或葡聚糖。所述悬浮液还可以包含稳定剂。

在一个实施方案中，可以将本发明的药物组合物配制成泡沫剂并作为泡沫剂使用。药物泡沫剂包括制剂，例如但不限于：乳剂、微乳剂、膏剂、凝胶剂和脂质体。虽然这些制剂本质基本相同，但是其成分和终产品的粘性并不相同。此类组合物和试剂的制备法通常为药学和制剂学领域技术人员通常所熟知，并且可应用于本发明组合物的配制。

乳剂

本发明的制剂和组合物可以制备并配制成乳剂。乳剂通常是以直径通常超过0.1μm的微滴形式将一种液体分散在另一种液体中的异源体系(Idson，in Pharmaceutical Dosage Forms，Lieberman，Rieger and Banker(Eds.)，1988，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，volume 1，p.199；Rosoff，inPharmaceutical Dosage Forms，Lieberman，Rieger and Banker(Eds.)，1988，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，Volume 1，p.245；Block in PharmaceuticalDosage Forms，Lieberman，Rieger and Banker(Eds.)，1988，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，volume 2，p.335；Higuchi et al.，in Remington’s PharmaceuticalSciences，Mack Publishing Co.，Easton，Pa.，1985，p.301)。乳剂常是包含彼此充分混合并分散的两个不混溶液相的双相系统。通常，乳剂可以为油包水(w/o)或水包油(o/w)的形式。当水相分离为微小液滴并分散到大量的油相中时，所产生的组合物被称为油包水(w/o)乳剂。或者，当油相分离为微小液滴细碎并分散到大量的水相中时，所产生的组合物被称为水包油(o/w)乳剂。除了分散相和活性药物外，乳剂还可以含其它组分，所述活性药物可以作为水相、油相溶液，或者其自身作为独立相存在。根据需要，乳剂中也可以存在药物赋形剂，例如乳化剂、稳定剂、染料和抗氧化剂。药物乳剂也可以是由两个以上的相组成的多重乳剂，例如油包水包油(o/w/o)和水包油包水(w/o/w)乳剂的情况。这种复合制剂通常具有简单的二相乳剂所不具有的特定优点。当多重乳剂中的o/w乳剂的各油滴还包有小水滴时，该多重乳剂形成w/o/w乳剂。同样地，在油连续相中稳定化的水滴中包封油滴的系统构成o/w/o乳剂。

乳剂具有较小或没有热力学稳定性的特点。通常，乳剂的分散相或不连续相很好地分散在外相或连续相中，并通过乳化剂或制剂的粘性保持这种形式。如在乳剂状软膏基料或膏剂的情况下，乳剂的每个相都可以为半固体或固体。其它稳定乳剂的方式需要使用乳化剂，所述乳化剂可被并入到乳剂的任一相中。乳化剂可以宽泛地分成四种类型：合成的表面活性剂、天然存在的乳化剂、吸收基料和细分散的固体(Idson，in Pharmaceutical Dosage Forms，Lieberman，Rieger and Banker(Eds)，1988，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，volume 1，p.199)。

合成的表面活性剂(surfactants或写为surface active agents)已广泛应用于乳剂的配制，并且已经在文献中进行了综述(Rieger，in PharmaceuticalDosage Forms，Lieberman，Rieger and Banker(Eds.)，1988，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，volume 1，p.285；Idson，in Pharmaceutical Dosage Forms，Lieberman，Rieger and Banker(Eds.)，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，1988，volume 1，p.199)。表面活性剂通常是两性分子，包含亲水部分和疏水部分。表面活性剂的亲水性和疏水性的比值被定义为亲水性/疏水性平衡值(HLB)，这是制剂制备过程中分类和选择表面活性剂的有力工具。可以根据亲水基团的性质将表面活性剂分成不同的类型：非离子型、阴离子型、阳离子型和两性型(Rieger，in Pharmaceutical Dosage Forms，Lieberman，Rieger and Banker(Eds.)，1988，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，volume 1，p.285)。

乳剂配制中使用的天然存在的乳化剂包括羊毛脂、蜂蜡、磷脂、卵磷脂和阿拉伯树胶。吸收基料具有亲水特性，所以能够吸收水，形成w/o乳剂并仍然保持其半固体稠度，例如无水羊毛脂和亲水凡士林。微细固体也已经被用做优良的乳化剂，特别是与表面活性剂组合使用和在粘性制品中使用。这些微细固体包括极性无机固体，例如重金属氢氧化物；非溶胀性粘土，例如膨润土、绿坡缕石、锂蒙脱石、高岭土、蒙脱石、胶状硅酸铝和胶状硅酸镁铝；色素和非极性固体，例如碳或三硬脂酸甘油酯。

在乳剂制剂中还包含有利于乳剂性质的多种非乳化物。这些非乳化物包括脂肪、油、蜡、脂肪酸、脂肪醇、脂肪酯、湿润剂、亲水胶体、防腐剂和抗氧化剂(Block，in Pharmaceutical Dosage Forms，Lieberman，Rieger andBanker(Eds.)，1988，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，volume 1，p.335；Idson，in Pharmaceutical Dosage Forms，Lieberman，Rieger and Banker(Eds.)，1988，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，volume 1，p.199)。

亲水胶体或水状胶体包括天然存在的树胶和合成的聚合物，例如多糖(如阿拉伯树胶、琼脂、藻酸、角叉菜胶、瓜耳胶、刺梧桐树胶和黄芪胶)，纤维素衍生物(例如，羧甲基纤维素和羧丙基纤维素)和合成的聚合物(例如，碳聚物、纤维素醚和羰基乙烯基聚合物)。这些物质在水中分散或膨胀形成的胶状溶液可通过在分散相小滴的周围形成强界面膜并通过增强外相的粘性来稳定乳剂。

由于乳剂通常包含大量可以有利于微生物生长的成份，例如碳水化合物、蛋白质、固醇类和磷脂，所以这些制剂通常含有防腐剂。乳剂制剂中通常使用的防腐剂包括对羟基苯甲酸甲酯、对羟基苯甲酸丙酯、季铵盐、苯扎氯铵、对羟基苯甲酸酯和硼酸。通常也将抗氧剂加入到乳剂制剂中以预防制剂变质。所使用的抗氧化剂可以为自由基清除剂，例如生育酚、没食子酸烷基酯、丁基化羟基茴香醚，丁基化羟基甲苯，或还原剂，例如抗坏血酸和偏亚硫酸氢钠，以及抗氧化剂增效剂，例如柠檬酸、酒石酸和卵磷脂。

现有文献已对乳剂制剂经皮肤、口服和非肠道途径的应用及其生产方法作出了综述(Idson，in Pharmaceutical Dosage Forms，Lieberman，Rieger和Banker(Eds.)，1988，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，volume 1，p.199)。因为配制简单并且在吸收和生物利用率方面的高效性，口服递送的乳剂制剂已经得到广泛使用(Rosoff，in Pharmaceutical Dosage Forms，Lieberman，Riegerand Banker(Eds.)，1988，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，volume 1，p.245；Idson，in Pharmaceutical Dosage Forms，Lieberman，Rieger and Banker(Eds.)，1988，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，volume 1，p.199)。基于矿物油的轻泻剂、油溶性维生素和高脂肪营养制品属于经常作为o/w乳剂口服的物质。

在本发明的一个实施方案中，将dsRNA与核酸的组合物配制成微乳剂。微乳剂可以定义为水、油和两亲性物质的体系，是具有单一的光学同向性和热力学稳定的液体溶液(Rosoff，in Pharmaceutical Dosage Forms，Lieberman，Rieger and Banker(Eds.)，1988，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，volume 1，p.245)。通常，微乳剂是通过如下方法制备的系统：首先将油分散到表面活性剂水溶液中，然后加入足量的第四组分(通常为中等链长度的醇)以形成透明体系。因此，微乳剂也被描述成被表面活性分子的界面膜稳定的两种不可混溶液体的热力学稳定且各向同性的澄清分散系(Leung and Shah，in：Controlled Release of Drugs：Polymers and Aggregate Systems，Rosoff，M.，Ed.，1989，VCH Publishers，New York，pages 185-215)。通常通过组合包括油、水、表面活性剂、辅助表面活性剂和电解液的3至5种成分来制备微乳剂。微乳剂是油包水(w/o)还是水包油(o/w)类型依赖于所使用的油和表面活性剂的性质以及表面活性剂分子的极性头部和烃基尾部的结构和几何包装(geometric packing)(Schott，Remington’s Pharmaceutical Sciences，MackPublishing Co.，Easton，Pa.，1985，p.271)。

现已对利用相图的现象学方法进行了深入研究，并且已经向本领域技术人员提供了如何制备微乳剂的全面理论(Rosoff，in Pharmaceutical DosageForms，Lieberman，Rieger和Banker(Eds.)，1988，Marcel Dekker，Inc.，NewYork，N.Y.，volume 1，p.245；Block，in Pharmaceutical Dosage Forms，Lieberman，Rieger和Banker(Eds.)，1988，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，volume1，p.335)。与常规乳剂相比，微乳剂的优点是能够使水溶性药物溶解于自发形成的热力学稳定的液滴制剂中。

微乳剂制备中所使用的表面活性剂包括但不限于单独使用或与辅助表面活性剂组合使用的离子表面活性剂、非离子表面活性剂、Brij 96、聚氧乙烯油基醚、聚脂肪酸甘油酯、单月桂酸四甘油酯(ML310)、单油酸四甘油酯(MO310)、单油酸六甘油酯(PO310)、五油酸六甘油酯(PO500)、单癸酸十甘油酯(MCA750)、单油酸十甘油酯(MO750)、倍半油酸十甘油酯(SO750)、十油酸十甘油酯(DAO750)。所述辅助表面活性剂通常是短链醇，例如乙醇、1-丙醇和1-丁醇，其作用是通过渗透到表面活性剂膜中并随后由表面活性剂分子间产生的空余空间而产生无序膜，从而提高界面流动性。然而，也可以不使用辅助表面活性剂制备微乳剂，并且无醇的自乳化微乳剂体系是本领域已知的。通常，水相可以是但不限于水、药物的水溶液、甘油、PEG300、PEG400、聚甘油、丙二醇，以及乙二醇的衍生物。油相可以包括但不限于如Captex 300，Captex 500，Capmul MCM，脂肪酸酯，中等链(C₈-C₁₂)的单、二和三甘油酯，聚氧乙基化甘油脂肪酸酯、脂肪醇，聚乙二醇化甘油酯，饱和聚乙二醇化的C₈-C₁₀甘油酯、植物油和硅油。

从药物溶解和增强药物吸收的方面来看，微乳剂特别令人感兴趣。已经提议使用基于脂质的微乳剂(o/w和w/o两者)以增强药物(包括肽)的口服生物利用度(Constantinideset al，Pharmaceutical Research，1994，11，1385-1390；Ritschel，Meth.Find.Exp.Clin.Pharmacol.，1993，13，205)。微乳剂具有以下优势：提高药物溶解度、保护药物免受酶的水解、由于表面活性剂导致膜流动性和渗透性的改变可能增强药物的吸收、制备简单、易于以固体剂型口服、提高临床效能和降低毒性(Constantinideset al.，PharmaceuticalResearch，1994，11，1385；Hoet al，J.Pharm.Sci.，1996，85，138-143)。通常，将微乳剂的成份在环境温度下混合时可以自发形成微乳剂。这可能特别有益于制备热不稳定的药物、肽或dsRNA。在化妆品和药物应用领域，微乳剂还可有效地透皮递送活性组分。我们期望本发明的微乳剂组合物和制剂将会有利于提高由胃肠道系统性地吸收dsRNA和核酸，并提高dsRNA和核酸在胃肠道、鞘、口腔和施用的其它区域内的局部细胞摄取。

本发明的微乳剂还可以包含其它成份和添加剂，例如山梨醇单硬脂酸酯(Grill 3)、Labrasol和渗透增强剂以增强所述制剂的性质并提高本发明dsRNA和核酸的吸收。本发明的微乳剂中使用的渗透增强剂可以属于五个类型中的一种：表面活性剂、脂肪酸、胆汁盐、螯合剂和没有螯合的非表面活性剂(Leeet al.，Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems，1991，p.92)。每个类型都已经在以上文中进行了讨论。

脂质体

除了微乳剂以外，还有许多经过研究并用于药物制剂的有序表面活性剂结构。这些结构包括单分子层、胶束、双分子层和囊泡。由于其特异性和在药物递送方面所提供作用的持久性，囊泡(如脂质体)已经引起广泛关注。本发明中所使用的术语“脂质体”是指由排列成一个或多个球形双分子层的两性脂质组成的囊泡。

脂质体是单层或多层囊泡，其具有由亲脂性物质形成的膜和水性内部。水性部分包含待递送的组合物。阳离子脂质体具有能够与细胞壁融合的优点。非阳离子脂质体虽然不能与细胞壁进行如此有效地融合，但在体内可通过巨噬细胞被摄取。

为了穿越完整的哺乳动物皮肤，脂质囊泡必须在合适的透皮梯度的影响下穿过一系列的每个直径小于50nm的小孔。因此，期望使用高度可变性的并能够穿过此类小孔的脂质体。

脂质体的其它优势包括：由天然磷脂形成的脂质体具有生物相容性和生物可降解性；脂质体可以与很大范围的水溶性和脂溶性药物结合；脂质体能够防止包裹在其内腔中的药物被代谢和降解(Rosoff，in PharmaceuticalDosage Forms，Lieberman，Rieger and Banker(Eds.)，1988，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，volume 1，p.245)。在脂质体制剂制备中需要考虑的重点是脂表面电荷、囊泡大小和脂质体中的水体积。

脂质体可用于将活性成份转移和递送至作用位点。因为脂质体膜与生物膜在结构上相似，当将脂质体应用于组织时，脂质体就会开始和细胞膜融合并且随着脂质体与细胞融合的进行，脂质体的内容物被完全转移进入细胞中，在此活性物质可以发挥作用。

脂质体制剂作为多种药物递送的模式是很多研究的焦点。越来越多的证据表明对于局部施药，脂质体具有优于其它制剂的很多优势。此类优势包括降低与所施用药物的高度全身吸收相关的副作用，提高所施用的药物在预期靶标处的积累，以及具有向皮肤施用多种亲水性和疏水性药物的能力。

已有多个报告详细叙述了脂质体向皮肤递送包括大分子量DNA在内的试剂的能力。已经将包括止痛剂、抗体、激素和大分子量DNA在内的化合物施用于皮肤。大多数应用会导致对上层表皮的靶向。

脂质体分成两大类。阳离子脂质体是带正电荷的脂质体，其与带负电的DNA分子相互作用形成稳定的复合物。带正电荷的DNA/脂质体复合物能结合至带负电荷的细胞表面，并被内化到内体中。由于内体中的酸性pH，脂质体破裂，将其内容物释放至细胞质中(Wang et al，Biochem.Biophys.Res.Commun.，1987，147，980-985)。

pH敏感的或带负电荷的脂质体捕获DNA，而不是与其复合。由于DNA和脂质都带有类似的电荷，它们发生排斥而不是形成复合物。因而，一些DNA被这些脂质体的水性内部捕获。已经将pH敏感性脂质体用于向培养物中的细胞单层中递送编码胸苷激酶基因的DNA。在靶细胞中检测到外源基因的表达(Zhou et al，Journal of Controlled Release，1992，19，269-274)。

脂质体组合物的一个重要类型包括磷脂，而非天然来源的磷脂酰胆碱。例如，中性脂质体组合物可以由二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱(DMPC)或二棕榈酰磷脂酰胆碱(DPPC)形成。阴离子脂质体组合物通常由二肉豆蔻酰磷脂酰甘油形成，而阴离子融合脂质体则由二油酰磷脂酰乙醇胺(DOPE)形成。另一种类型的脂质体组合物是由磷脂酰胆碱(PC)形成，例如大豆PC、和卵PC。另一类是由磷脂和/或磷脂酰胆碱和/或胆固醇的混合物形成。

有一些研究评价了脂质体药物制剂向皮肤的局部递送。在豚鼠皮肤上应用包含干扰素的脂质体可减轻皮肤疱疹溃疡，然而通过其它方式(例如作为溶液或乳剂)递送干扰素则是无效的(Weiner et al，Journal of Drug Targeting，1992，2，405-410)。另外，另一项研究检验了作为脂质体制剂的一部分施用干扰素相对于利用水性系统施用干扰素的效率，并得出结论：脂质体制剂优于水性施用(du Plessis et al，Antiviral Research，1992，18，259-265)。

还检验了非离子脂质体系统，特别是包含非离子表面活性剂和胆固醇的系统，以确定其在向皮肤递送药物中的功用。使用包含Novasome.TM.I(二月桂酸甘油酯/胆固醇/聚氧乙烯-10-硬脂酰醚)和Novasome.TM.II(二硬脂酸甘油酯/胆固醇/聚氧乙烯-10-硬脂酰醚)的非离子脂质体制剂向小鼠真皮内递送环孢素A。结果表明，此类非离子脂质体系统可有效促进环孢素A向不同皮肤层中的沉积(Hu et al，S.T.P.Pharma.Sci.，1994，4，6，466)。

脂质体还包括“空间稳定的”脂质体，本文使用此术语是指包含一个或多个特殊化脂质的脂质体，相对于不含此类特殊化脂质的脂质体相比，所述特殊化脂质混入脂质体中时会导致循环寿命的提高。在空间稳定的脂质体的实例中，脂质体中形成囊泡的脂质部分的一部分(A)包含一种或多种糖脂例如单唾液酸神经节苷脂G_m1，或(B)由一种或多种亲水聚合物，例如聚乙二醇(PEG)部分进行衍生化。尽管不希望受到任何具体理论的限制，在本领域中认为至少对于包含神经节苷脂、鞘磷脂或由PEG衍生化脂质的空间稳定的脂质体来说，这些空间稳定的脂质体的循环半衰期的增加是由于网状内皮系统(RES)细胞对其摄取的下降(Allen et al，FEBS Letters，1987，223，42；Wu et al.，Cancer Research，1993，53，3765)。

包含一种或多种糖脂的各种脂质体是本领域已知的。Papahadjopoulos等人报告了单唾液酸神经节苷脂G_m1、半乳糖脑苷脂硫酸酯和磷脂酰肌醇提高脂质体血液半衰期的能力(Ann.N.Y.Acad.Sci.，1987，507，64)。Gabizon等人对这些发现进行了详细说明(Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.，1988，85，6949)。Allen等人的美国专利第4,837,028号和WO 88/04924中公开了包含(1)鞘磷脂和(2)神经节苷脂G_m1或半乳糖脑苷脂硫酸酯的脂质体。美国专利第5,543,152号(Webb et al)公开了包含鞘磷脂的脂质体。WO 97/13499(Lim etal)中公开了包含1，2-sn-二肉豆蔻酰磷脂酰胆碱的脂质体。

本领域内已知包含由一种或多种亲水聚合物衍生化的脂质的多种脂质体及其制备方法。Sunamoto等人阐述了包含非离子去垢剂2C_1215G(包含PEG部分)的脂质体(Bull.Chem.Soc.Jpn.，1980，53，2778)。Illum等人指出包含聚乙二醇的聚苯乙烯颗粒的亲水涂层可使其血液半衰期的显著增长(FEBSLett.，1984，167，79)。Sears(美国专利第4,426,330号和第4,534,899号)阐述了通过结合聚亚烷基二醇(例如，PEG)的羧基基团进行修饰的合成磷脂。Klibanov等人描述的试验表明包含由PEG或PEG硬脂酸酯衍生化的磷脂酰乙醇胺(PE)的脂质体在血液循环中具有显著提高的半衰期(FEBS Lett.，1990，268，235)。Blume等人将此类发现延伸至其它PEG衍生化的磷脂，例如由二硬脂酰磷脂酰乙醇胺(DSPE)和PEG组合形成的DSPE-PEG(Biochimica etBiophysica Acta，1990，1029，91)。在Fisher的欧洲专利EP 0 445 131 B1和WO 90/04384中阐述了在其外表面具有共价结合的PEG部分的脂质体。Woodle(美国专利第5,013,556号和第5,356,633号)和Martin等人(美国专利号第5,213,804号和欧洲专利EP 0 496 813 B1)阐述了包含1-20摩尔百分比PEG衍生化PE的脂质体组合物以及其用途。在Martin等人的WO 91/05545和美国专利第5,225,212号以及Zalipsky等人的WO 94/20073中阐述了包含其它一些脂质聚合物偶联物的脂质体。在WO 96/10391(Choi et al)中阐述了包含经PEG修饰的神经酰胺脂的脂质体。美国专利第5,540,935号(Miyazaki et al)和美国专利第5,556,948号(Tagawa et al)阐述了可进一步使用官能团部分对其表面进行衍生化的包含PEG的脂质体。

本领域已知的包含核酸的脂质体的数量有限。Thierry等人的WO96/40062公开了将高分子量核酸封装到脂质体中的方法。Tagawa等人的美国专利第5,264,221号公开了结合蛋白质的脂质体，并声称此类脂质体的内容物可以包括dsRNA。Rahman等人的美国专利第5,665,710阐述了将寡聚脱氧核苷酸封装到脂质体中的特定方法。Love等人的WO 97/04787公开了包含靶向raf基因的dsRNA的脂质体。

传递体(transfersome)是另一种类型的脂质体，是具有高度可变性的脂质聚合体，并且是药物递送载体(vehicle)的有力候选物。传递体可以被描述成脂质液滴，所述脂质液滴具有高度的变形性以使其容易地通过比自身还要小的小孔。传递体可以适应其应用环境，例如传递体自优化(适应皮肤中小孔的形状)，自修复，通常不需要片段化即可到达其靶标，并且通常可以进行自动负载。为了制备传递体，可以在标准的脂质体组合物中加入表面边界活化剂，通常为表面活性剂。已经将传递体用于向皮肤递送血清白蛋白。已经显示传递体介导的血清白蛋白递送与皮下注射包含血清白蛋白的溶液同样有效。

表面活性剂在制剂中，例如乳剂(包括微乳剂)和脂质体中有广泛应用。对这些不同类型的表面活性剂(包括合成的和天然的)的特性进行分类和分级的最常见方式是使用亲水性/亲脂性平衡值(HLB)。亲水基团(也称为“头部”)的性质提供了对用于制剂的不同表面活性剂进行分类的最有用的方式(Rieger，in Pharmaceutical Dosage Forms，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，1988，p.285)。

如果表面活性剂分子不是离子化的，则将其归类为非离子表面活性剂。非离子表面活性剂在药物和化妆产品中有广泛的应用，并可以在宽范围的pH值内使用。通常，取决于其结构，其HLB值在2至约18间变化。非离子表面活性剂包括非离子酯，例如乙二醇酯、丙二醇酯、甘油酯、聚甘油酯、山梨聚糖酯、蔗糖酯和乙氧基酯。非离子的烷醇酰胺和醚，例如脂肪醇乙氧基化物、丙氧基化醇和乙氧基化/丙氧基化嵌段聚合物也包括在这一类中。聚氧乙烯表面活性剂是非离子表面活性剂类中最常用的成员。

如果表面活性剂分子在溶于水或分散于水中时带有负电荷，所述表面活性剂被归类为阴离子表面活性剂。阴离子表面活性剂包括羧酸酯，例如脂肪酸酯、酰基乳酰酯、氨基酸的酰基氨基化合物，硫酸酯，例如烷基硫酸酯和乙氧基化烷基硫酸酯，磺酸酯，例如烷基苯磺酸酯、酰基羟乙基磺酸酯、酰基牛磺酸酯和磺基琥珀酸酯以及磷酸酯。阴离子表面活性剂的最重要的成员为烷基硫酸酯和脂肪酸酯。

如果表面活性剂分子在溶于水或分散于水中时带有正电荷，所述表面活性剂被归类为阳离子表面活性剂。阳离子表面活性剂包括季铵盐和乙氧化胺。季铵盐是这个类别中最常使用的成员。

如果表面活性剂分子能够带有正电荷或者负电荷，所述表面活性剂被归类为两性表面活性剂。两性表面活性剂包括丙烯酸衍生物、取代的烷基氨基化合物、N-烷基甜菜碱和磷脂。

已有关于表面活性剂在药物产品、制剂中和乳剂中应用的综述(Rieger，inPharmaceutical Dosage Forms，Marcel Dekker，Inc.，New York，N.Y.，1988，p.285)。

渗透增强剂

在一个实施方案中，本发明使用了各种渗透增强剂以实现核酸(特别是dsRNA)向动物皮肤的有效递送。多数药物以离子化和非离子化的形式存在于溶液中。然而，通常只有脂溶的或亲脂的药物可容易地穿过细胞膜。已经发现用渗透增强剂处理要穿过的膜后，甚至连非亲脂药物也可以穿过所述细胞膜。除了帮助非亲脂药物扩散穿过细胞膜外，渗透增强剂还能增强亲脂药物的渗透性。

渗透增强剂可以归类为5大类之一，即表面活性剂、脂肪酸、胆汁盐、螯合剂和非螯合的非表面活性剂(Lee et al，Critical Reviews in TherapeuticDrug Carrier Systems，1991，p.92)。在下面详细阐述了各类上述渗透增强剂。

表面活性剂：在本发明的文中，表面活性剂(或“表面活性试剂”)为溶解到水溶液中后能降低溶液的表面张力或者降低水溶液和另一个脂质之间界面间张力的化学物质，其结果可使dsRNA通过粘膜的吸收得到增强。除了胆汁盐和脂肪酸之外，这些渗透增强剂还包括，例如月桂基硫酸钠、聚氧乙烯-9-月桂基醚和聚氧乙烯-20-鲸蜡基醚(Lee et al，Critical Reviews inTherapeutic Drug Carrier Systems，1991，p.92)，以及全氟化合物乳剂，例如FC-43(Takahashi et al，J.Pharm.Pharmacol.，1988，40，252)。

脂肪酸：作为渗透增强剂的各种脂肪酸及其衍生物包括，例如油酸、月桂酸、癸酸(正癸酸)、肉豆蔻酸、棕榈酸、硬脂酸、亚油酸、亚麻酸、二癸酸酯、三癸酸酯、单油酸酯(1-单油酰-rac-甘油，)、月桂酸二甘油酯、辛酸、花生四烯酸、甘油1-单癸酸酯、1-十二烷基氮杂环庚烷-2-酮、酰基肉毒碱、酰基胆碱，其C_1-10烷基酯(如甲基、异丙基和叔丁基)及其甘油单酯和甘油二酯(即油酸酯、月桂酸酯、癸酸酯、肉豆蔻酸酯、棕榈酸酯、硬脂酸酯、亚油酸酯等)(Lee et al.，Critical Reviews in Therapeutic Drug Carryier Systems，1991，p.92；Muranishi，Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems，1990，7，1-33；El Hariri et al，J.Pharm.Pharmacol.，1992，44，651-654)。

胆汁盐：胆汁的生理作用包括促进脂质和脂溶性维生素的分散和吸收(Brunton，Chapter 38 in：Goodman & Gilman’s The Pharmacological Basis ofTherapeutics，9^thEd，Hardman et al Eds.，McGraw-Hill，New York，1996，pp.934-935)。各种天然胆汁盐及其合成衍生物作为渗透增强剂起作用。因此术语“胆汁盐”包括胆汁中天然存在的任何成分及任何其合成的衍生物。本发明的胆汁盐包括，例如胆酸(或其药学上可接受的钠盐，胆酸钠)、脱氢胆酸(脱氢胆酸钠)、脱氧胆酸(脱氧胆酸钠)、葡糖胆酸(葡糖胆酸钠)、甘油胆酸(甘油胆酸钠)、甘油脱氧胆酸(甘油脱氧胆酸钠)、牛磺胆酸(牛磺胆酸钠)、牛磺脱氧胆酸(牛磺脱氧胆酸钠)、鹅脱氧胆酸(鹅脱氧胆酸钠)、熊脱氧胆酸(UDCA)、牛磺-24，25-二氢-夫西地酸钠(STDHF)、甘油二氢夫西地酸钠和聚氧乙烯-9-月桂基醚(POE)(Lee et al，Critical Reviews in TherapeuticDrug Carrier Systems，1991，p.92；Swinyard，Chapter 39 in：Remington’sPharmaceutical Sciences，18^thEd，Gennaro，ed.，Mack Co.，Easton，Pa.Press，1990，pages 782-783；Muranishi，Critical Reviews in Therapeutic Drug Carrier Systems，1990，7，1-33；Yamamoto et al，J.Pharm.Exp.Ther.，1992，263，25；Yamashita etal，J.Pharm.Sci.，1990，79，579-583)。

螯合剂：所使用的与本发明有关的螯合剂可以定义为通过与金属离子形成复合物将其从溶液中除去的化合物，其结果可加强通过粘膜的dsRNA的吸收。关于其在本发明中作为渗透增强剂的应用，因为多数经表征的DNA核酸酶需要用于催化二价金属离子，从而可以被螯合试剂抑制，所以螯合试剂还具有作为DNase抑制剂的附加优势(Jarrett，J.Chromatogr.，1993，618，315-339)。本发明的螯合试剂包括但不限于乙二胺四乙酸二钠(EDTA)、柠檬酸、水杨酸盐(例如水杨酸钠、5-甲氧基水杨酸酯和高香兰酸酯(homovanilate))、胶原质的N-酰基衍生物、聚氧乙烯-9-月桂基醚和β-二酮的N-氨基酰基衍生物(烯胺)(Lee et al，Critical Reviews in Therapeutic DrugCarrier Systems，1991，p.92；Muranishi，Critical Reviews in Therapeutic DrugCarrier Systems，1990，7，1-33；Buur et al，J.Control Rel.，1990，14，43-51)。

非螯合的非表面活性剂：本文所使用的非螯合的非表面活性的渗透增强化合物可以定义为不具有显著螯合剂或表面活性剂活性，但仍可增强dsRNA穿过消化道粘膜的吸收(Muranishi，Critical Reviews in Therapeutic DrugCarrier Systems，1990，7，1-33)。这类的渗透增强剂包括，例如不饱和环脲、1-烷基-氮杂环-烷酮衍生物和1-链烯基氮杂环-烷酮衍生物(Lee et al，CriticalReviews in Therapeutic Drug Carrier Systems，1991，p.92)，以及非甾体类抗炎剂，例如双氯芬酸钠、吲哚美辛和苯基丁氮酮(Yamashit et al，J.Pharm.Pharmacol.，1987，39，621-626)。

在细胞水平上增强dsRNA摄取的试剂也可以加入到本发明的药物组合物和其它组合物中。例如，已知阳离子脂质，例如Lipofectin(Junichi et al，美国专利第5,705,188号)、阳离子甘油衍生物和聚阳离子分子，例如聚赖氨酸(Lollo等人PCT申请WO 97/30731)能增强dsRNA的细胞摄取。

也可使用其它试剂增强所施用核酸的渗透，所述试剂包括二元醇，例如乙二醇和丙二醇；吡咯，例如2-吡咯；氮酮(azones)和萜类，例如柠檬烯和薄荷酮。

载体

本发明的某些组合物还在制剂中引入了载体化合物。本文所使用“载体化合物”或“载体”可以指惰性的(即本身不具有生物活性)但可被体内过程认为是核酸的核酸或其类似物，例如，所述体内过程能够通过降解具有生物活性的核酸或促进其从循环系统中的消除来降低具有生物活性的核酸的生物利用度。核酸和载体化合物的共同施用(通常是后一种物质过量)，能够是由肝、肾或其它循环外脏器中回收的核酸的量大幅度减少，这可能是由于载体化合物和核酸对共有受体的竞争造成的。例如，当与聚次黄嘌呤核苷酸、葡聚糖硫酸酯、聚胞嘧啶核苷酸或4-乙酰胺基-4’异氰硫基-芪-2，2’-二磺酸共同施用时，可以减少部分硫代磷酸酯dsRNA在肝组织中的回收(Miyao et al，Antisense Res.Dev.，1995，5，115-121；Takakura et al，Antisense & Nucl.AcidDrug Dev.，1996，6，177-183)。

赋形剂

与载体化合物相比，“药用载体”或“赋形剂”是向动物递送一种或多种核酸的药学上可接受的溶剂、悬浮剂或其它任何药学上惰性的溶剂(vehicle)。所述赋形剂可以是液体或固体，当与核酸和特定药物组合物的其它成分组合时，可参考预期的给药途径选择赋形剂以提供所需的体积、稠度等。典型的药用载体包括但不限于粘合剂(例如，预胶凝的玉米淀粉、聚乙烯吡咯烷酮或羟基丙烷基甲基纤维素等)，填料(例如，乳糖和其它糖、微晶纤维素、果胶、明胶、硫酸钙、乙基纤维素、聚丙烯酸酯或磷酸氢钙等)，润滑剂(例如，硬脂酸镁、滑石、二氧化硅、胶状二氧化硅、硬脂酸、金属的硬脂酸盐、氢化植物油、玉米淀粉、聚乙二醇、苯甲酸钠、乙酸钠等)，崩解剂(例如，淀粉、淀粉乙醇酸钠等)，和湿润剂(例如，月桂基硫酸钠等)。

适合于非肠道施用的、不与核酸发生有害反应的、药学上可接受的有机或无机赋形剂也可以用来制备本发明的组合物。合适的药学上可接受的载体包括但不限于水、盐溶液、醇、聚乙二醇、明胶、乳糖、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石、硅酸、粘性石蜡、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等。

用于局部施用核酸制剂可以包括无菌或非无菌的水溶液、常见溶剂(例如醇)的非水溶液，或在液体或固体油基质中的核酸溶液。所述溶液还可包含缓冲液、稀释液和其它合适的添加剂。可以使用适合于非肠道外施用的、且不与核酸发生有害反应的、药学上可接受的有机或无机赋形剂。

合适的药学上可接受的赋形剂包括但不限于：水、盐溶液、醇、聚乙二醇、明胶、乳糖、直链淀粉、硬脂酸镁、滑石、硅酸、粘性石蜡、羟甲基纤维素、聚乙烯吡咯烷酮等。

向呼吸道递送的药物组合物

本发明的另一方面提供了向呼吸道递送的iRNA试剂，特别用于治疗囊性纤维化的iRNA试剂的递送。呼吸道依次包括上呼吸道、下呼吸道，其中上呼吸道包括口咽部和喉部，下呼吸道依次包括气管及支气管和细支气管分支。上呼吸道和下呼吸道被称为导气管。末端细支气管进一步分支为通向最终呼吸区(肺泡或深层肺)的呼吸细支气管。深层肺或肺泡是用于iRNA试剂全身递送的治疗性吸入气溶胶的主要靶标。

可以通过使患者吸入悬浮物递送经肺递送的组合物，由此将使喷散物中的所述组合物(优选iRNA试剂)到达肺部，例如，容易地通过肺泡区域被直接吸收而进入血液循环。肺部递送对于治疗肺部疾病的全身递送和局部递送都是有效的。

可以通过不同的方法实现肺部递送，包括使用基于喷雾、气溶胶、微囊和干粉的制剂，通过吸入的施用可以是经口腔和/或经鼻腔吸入。可以利用液体喷雾器、基于气溶胶的吸入器和干粉喷散设备实现递送。优选使用定量设备。利用喷雾器或吸入器的一个优点是，由于该设备是自携式(self contained)所以可将污染的可能性减至最小。例如，干粉喷散设备可递送简单配制成干粉的药物。可以以其自身冻干粉或自身喷雾干燥粉末的形式或与合适的粉末载体组合的形式稳定地贮存iRNA组合物。可以通过定量定时元件(包括计时器、计量器、时间测量设备或时间指示器)进行吸入组合物的递送，所述元件可装入所述设备中，从而在气溶胶药物的施用过程中实现剂量跟踪、依从性监测和/或患者剂量的控制。

用于气溶胶递送的药物设备的实例包括定量吸入器(MDI)、干粉吸入器(DPI)和空气喷射(air-jet)喷雾器。例如，美国专利第5,756,353号、第5,858,784号和PCT申请WO98/31346、WO98/10796、WO00/27359、WO01/54664、WO02/060412中阐述了经简单改造后适合通过吸入向递送受试者iRNA试剂的示例性递送系统。美国专利第6,294,153号、第6,344,194号、第6,071,497号和PCT申请WO02/066078、WO02/053190、WO01/60420、WO00/66206中阐述了可用于iRNA试剂递送的其它气溶胶制剂。另外，可以将通过吸入递送其它寡核苷酸(例如反义寡核苷酸)的方法，例如Templinet a1.，Antisense Nucleic Acid Drug Dev，2000，10：359-68；Sandrasagra et al.，Expert Opin Biol Ther，2001，1：979-83；Sandrasagra et al.，Antisense NucleicAcid Drug Dev，2002，12：177-81阐述的方法，改造成用于iRNA递送的方法。

本发明试剂的递送还可以包括施用所谓“前药”，前药是治疗性物质的制剂或化学修饰物，其需要通过受试生物体先天性系统的某种形式处理或运送以释放治疗性物质(优选在所需作用位点)；后一种实施方案可以与呼吸道递送结合使用，但也可以与本发明的其它实施方案结合使用。例如，人肺部可在数分钟至数小时的时间范围内转移或快速水解可剪切的沉积气溶胶。在上呼吸道中，纤毛上皮的“粘膜纤毛刷(mucociliary excalator)”将气管中的颗粒物清扫至口部(Pavia，D.，″Lung Mucociliary Clearance，″in Aerosols andthe Lung：Clinical and Experimental Aspects，Clarke，S.W.and Pavia，D.，Eds.，Butterworths，London，1984)。在深层肺中，颗粒物一经沉积即可被肺泡巨噬细胞吞噬(Warheit et al.Microscopy Res.Tech.，26：412-422(1993)；和Brain，J.D.，″Physiology and Pathophysiology of Pulmonary Macrophages，″in TheReticuloendothelial System，S.M.Reichard and J.Filkins，Eds.，Plenum，New.York.，pp.315-327，1985)。

在优选的实施方案中，特别是需要对iRNA进行全身给药时，可将气溶胶化的iRNA试剂配制成微颗粒。直径为0.5微米至10微米的微颗粒可以穿过大多数天然屏障从而渗入肺中。直径需要小于10微米是为了通过喉咙，直径需要0.5微米或更大是防止被呼出。

其它成份

本发明的组合物还可以包含在本领域常规用量的、常用于药物组合物中的其它附加组分。因此，例如组合物可以包含具有相容性和药学活性的其它物质，例如止痒剂、止血剂、局部麻醉剂或抗炎剂，或者可以包含有利于本发明组合物的各种剂型的物理配制的其它物质，例如染料、调味剂、防腐剂、抗氧化剂、遮光剂、增稠剂和稳定剂。然而，当加入时，此类物质不应当过度干扰本发明组合物中成份的生物活性。可以对所述制剂进行灭菌，并且如果需要的话，可将所述制剂和不与制剂中的核酸发生有害相互作用的助剂进行混合，例如与润滑剂、防腐剂、稳定剂、湿润剂、乳化剂、用于调节渗透压的盐、缓冲液、着色剂、调味剂和/或芳香剂等混合。

水悬浮液可以包含提高悬浮液粘性的物质，包括如羧甲基纤维素钠、山梨醇和/或葡聚糖。所述悬浮液还可以包含稳定剂。

本发明的特定实施方案提供了包含(a)一种或多种dsRNA试剂和(b)通过非RNA干扰机制发挥作用的一种或多种其它化疗剂的药物组合物。此类化疗剂的实例包括但不限于道诺红菌素(daunorubicin)、道诺霉素(daunomycin)、更生霉素(dactinomycin)、阿霉素、表阿霉素(epirubicin)、伊达比星(idarubicin)、依索比星(esorubicin)、博来霉素、马磷酰胺(mafosfamide)、异环磷酰胺、阿糖胞苷、双氯乙基亚硝基脲(bis-chloroethylnitrosurea)、白消安、丝裂霉素C、放射菌素D、光神霉素、泼尼松(prednisone)、羟基孕酮、睾酮、它莫西芬、达卡巴嗪、甲基苄肼(procarbazine)、六甲基三聚氰胺、五甲基三聚氰胺、米托蒽醌、安吖啶、苯丁酸氮芥、甲基环己基亚硝基脲(methylcyclohexylnitrosurea)、氮芥、美法仑、环磷酰胺、6-巯基嘌呤、6-巯基鸟嘌呤、阿糖胞苷、5-氮杂胞苷、羟基脲、脱氧助间型霉素(deoxycoformycin)、4-羟基过氧环磷酰胺、5-氟尿嘧啶(5-FU)、5-氟脱氧尿苷(5-FUdR)、甲氨蝶呤(MTX)、秋水仙碱、紫杉醇、长春新碱、长春碱、依托泊甙(VP-16)、三甲曲沙(trimetrexate，)、依立替康(irinotecan)、拓扑替康(topotecan)、吉西他滨、替尼泊苷(teniposide)、顺铂和二乙基乙烯雌酚(DES)。通常参见The Merck Manual of Diagnosis andTherapy，15th Ed.1987，pp.1206-1228，Berkow et al，eds.，Rahway，N.J.。当与本发明的化合物一起使用时，这种化疗剂可以单独使用(例如，5-FU和寡核苷酸)、依次使用(例如，使用5-FU和寡核苷酸一段时间后，再使用MTX和寡核苷酸)，或者与一种或多种其它此类化疗试剂(例如，5-FU、MTX和寡核苷酸或者5-FU、放疗剂和寡核苷酸)联合使用。也可以本发明的组合物中组合使用抗炎药物(包括但不限于非甾类抗炎药物和皮质甾类药物)和抗病毒药物(包括但不限于利巴韦林(ribivirin)、阿糖腺苷、阿昔洛韦和更昔洛韦)。通常分别参见The Merck Manual of Diagnosis and Therapy，15th Ed和Berkow et al，eds.，1987，Rahway，N.J.，pages 2499-2506 and 46-49。其它非dsRNA化疗试剂也在本发明的范围之内。可以一起使用或依次使用两种或多种组合的化合物。

可以在细胞培养或试验动物中由标准的药学过程测定此类化合物的毒性和治疗功效，例如测定LD50(半数致死剂量)和ED50(半数治疗有效剂量)。毒性效果和治疗效果之间的剂量比是治疗指数，并可以表示为LD50/ED50比。优选具有高治疗指数的化合物。

由细胞培养试验和动物研究获取的数据可以用于配制用于人的一定范围的剂量。本发明组合物的剂量通常在包括低毒或无毒ED50的循环浓度范围之内。根据所采用的剂型和所使用的给药途径，剂量可以在此范围之内变化。对于本发明的方法中所使用的任意化合物，都可以首先根据细胞培养试验估算治疗有效量。可以向动物模型施用可达到化合物的循环血浆浓度范围的剂量，或在适当时施用可达到靶标序列多肽产物的循环血浆浓度范围(例如，达到降低的多肽浓度)的剂量，其中所述浓度范围包括在细胞培养物中所确定的IC50(即达到症状的半最大抑制时试验化合物的浓度)。此类信息可以用于更准确地确定在人体中的有用剂量。可以通过例如高效液相层析法测定血浆中的浓度。

如上所讨论的，除了单独施用或多个一起施用，本发明的dsRNA还可以与其它已知的对治疗由Aha表达介导的病理过程有效的试剂联合施用。无论如何，施药医师可以使用本领域已知的或本文所阐述的常规效力测量方法，根据所观察的结果调整dsRNA的施用量和施用时间。

治疗由Aha基因表达引起的疾病的方法

本发明尤其涉及dsRNA或由其制备的药物组合物在治疗囊性纤维化中的应用。由于具有抑制Aha1表达的作用，本发明的dsRNA或由其制备的药物组合物可以提高囊性纤维化患者的生存质量。

另外，本发明还涉及本发明的dsRNA或药物组合物在治疗癌症(例如，抑制肿瘤生长和肿瘤转移)中的应用。例如，所述dsRNA或由其制备的药物组合物用于治疗实体瘤，如乳癌、肺癌、头颈癌、脑癌、腹癌、结肠癌、结直肠癌、食道癌、胃肠癌、神经胶质瘤、肝癌、舌癌、神经母细胞瘤、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、威尔姆氏肿瘤(Wilm′stumor)、多发性骨髓瘤，以及用于治疗皮肤癌，如黑色素瘤，用于治疗淋巴瘤和血癌。本发明还涉及本发明的dsRNA或由其制备的药物组合物在抑制Aha1表达和/或用于抑制不同类型癌症中腹水液和胸腔积液聚积中的应用，所述癌症如乳癌、肺癌、头部癌、颈部癌、脑癌、腹癌、结肠癌、结直肠癌、食道癌、胃肠癌、神经胶质瘤、肝癌、舌癌、神经母细胞瘤、骨肉瘤、卵巢癌、胰腺癌、前列腺癌、视网膜母细胞瘤、威尔姆氏肿瘤、多发性骨髓瘤、皮肤癌、黑色素瘤、淋巴瘤和血癌。由于具有对Aha1表达的抑制作用，本发明的dsRNA或由其制备的药物组合物可以提高癌症患者的生存质量。

本发明还涉及dsRNA或其药物组合物与其它药物和/或其它治疗方法(例如，与已知的药物和/或已知的治疗方法，如那些目前用于治疗囊性纤维化或癌症和/或用于抑制肿瘤的转移的药物和/或方法)的联合应用，用于例如治疗囊性纤维化或癌症和/或抑制肿瘤的转移。当所述药物组合物旨在治疗囊性纤维化时，优选与以下组合：日常胸部物理治疗、口服胰腺酶、抵抗肺感染的日常口服或吸入式抗生素、吸入式抗哮喘治疗、皮质甾类片剂、膳食性维生素补充剂(特别是维生素A和D)、Pulmozyme^TM吸入剂、减轻便秘或提高酶补充剂活性的药物、用于CF相关糖尿病的胰岛素、用于CF相关肝病的药物以及帮助呼吸的氧。

当所述药物组合物旨在治疗癌症和/或预防肿瘤转移时，优选其与放疗和化疗试剂(例如，顺铂、环磷酰胺、5-氟尿嘧啶、阿霉素、道诺红菌素或它莫西芬)联合使用。

本发明还可以通过包括特异性RNAi试剂与另一个抗肿瘤化疗试剂(如任意常规化疗试剂)组合来实现。特异结合试剂与此类其它试剂的组合可以增强化学治疗方案。在考虑引入到本发明的方法时，熟练的操作者可以想到多个化学治疗方案。可以使用任意化疗剂，包括烷基化试剂、抗代谢物、激素和拮抗剂、放射性同位素和天然产物。例如，本发明的化合物可以与抗生素(例如阿霉素和其它蒽环类似物)、氮芥类(例如环磷酰胺)，嘧啶类似物(例如5-氟尿嘧啶)、顺铂、羟基脲、紫杉醇以及其天然和合成衍生物等一起施用。在另一个实例中，在包括促性腺素依赖性细胞和促性腺素非依赖性细胞的混合肿瘤(例如，乳房腺癌)情况下，所述化合物可以与亮丙瑞林(leuprolide)或戈舍瑞林(goserelin，LH-RH的合成肽类似物)组合施用。其它抗肿瘤方案包括使用四环素化合物与另一种治疗手段(例如手术、放射等)一起使用，在本文也被称为“联合抗肿瘤方式”。因此，本发明的方法可以与此类常规疗法一起应用，从而具有降低副作用并增强功效的效果。

抑制Aha基因表达的方法

在另一方面，本发明提供了抑制哺乳动物中Aha基因表达的方法。该方法包括向哺乳动物施用本发明的组合物，从而沉默靶标Aha基因(例如Aha1)的表达。由于其高度的特异性，本发明的dsRNA特异地靶向Aha靶基因的RNA(原始的或加工后的RNA)。可以根据本文其它部分的阐述，实施利用dsRNA抑制这些Aha基因表达的组合物和方法。

在一个实施方案中，所述方法包括施用包含dsRNA的组合物，其中所述dsRNA包含与待治疗哺乳动物的Aha基因(例如Aha1)的RNA转录物的至少一部分互补的核苷酸序列。当待治疗的生物体为哺乳动物(例如，人类)时，可以通过本领域已知的任意方式施用所述组合物，包括但不限于口服或非肠道途径，包括静脉、肌内、皮下、透皮、经气管(气溶胶)、鼻、直肠、阴道和局部(包括口含和舌下)施用。在优选的实施方案中，通过静脉输注或注射施用所述组合物。

除非另有定义，否则本文所使用的所有科技术语与本发明所属领域中普通技术人员通常所理解的意思相同。虽然在本发明的实施或检验中可以使用与本文所述的类似或等价的方法和材料，但下文中阐述了合适的方法和材料。本文提及的所有出版物、专利申请、专利和其它参考文献，包括定义均以其全文均通过引用方式并入本文。在有冲突的情况下，以包括定义的本说明书为准。另外，所述材料、方法和实施例的目的仅在于进行说明而不具有限定性。

实施例

Aha基因的基因步移(gene walking)

进行siRNA设计以鉴定靶向Aha1的siRNA。通过计算机分析检测人类(NM_012111.1)、小鼠(NM_146036.1)和黑猩猩(XM_510094.1)的Aha1以鉴定出19或21个核苷酸同源序列，从而产生在以上三个种属间具有交叉反应的RNAi试剂。在这些鉴定出的序列中，选出48个在大鼠中具有最小脱靶相互作用的序列(与大鼠基因组中其它任意基因至少有3个错配，或者与大鼠基因组中其它任意基因至少有2个错配，其中所述的至少有2个错配中的1个错配位于与相应RNAi试剂反义链(从5’数到3’)的第9或第10位点互补的位置)，并且合成相应的dsRNA以进行筛选(AL-DP-7301至AL-DP-7346，见表1)。还合成并筛选也与小鼠(NM_146036.1)和褐家鼠(XM_223680.3)Aha2发生交叉反应的AL-DP-7561、AL-DP-7562、AL-DP-7563和AL-DP-7564。另外，还选出40个预期在人类中具有最小脱靶相互作用的序列(与人类基因组中其它任意基因至少有3个错配，或者与人类基因组中其它任意基因至少有2个错配，其中所述的至少有2个错配中的1个错配位于与相应RNAi试剂反义链(从5’数到3’)的第9或第10位点互补的位置)，并且合成相应的dsRNA以进行筛选(AL-DP-9250至AL-DP-9289，见表2)。鉴定出17个序列同时属于上述两组(AL-DP-7301、AL-DP-7304、AL-DP-7305、AL-DP-7307、AL-DP-7310、AL-DP-7312、AL-DP-7315、AL-DP-7316、AL-DP-7317、AL-DP-7323、AL-DP-7324、AL-DP-7332、AL-DP-7336、AL-DP-7337、AL-DP-7338、AL-DP-7342和AL-DP-7344)。

dsRNA合成

试剂来源

在本文中未明确指出试剂来源时，可以从任意分子生物学试剂供货商处获得符合分子生物学应用的质量/纯度标准的所述试剂。

siRNA合成

使用Expedite 8909合成仪(Applied Biosystems，Applera DeutschlandGmbH，Darmstadt，Germany)并使用可控孔度玻璃(CPG，500

，ProligoBiochemie GmbH，Hamburg，Germany)作为固相支持物，通过1μ摩尔规模的固相合成产生单链RNA。分别使用相应的亚磷酰胺和2′-O-甲基亚磷酰胺(ProligoBiochemie GmbH，Hamburg，Germany)通过固相合成产生RNA和含2′-O-甲基核苷酸的RNA。利用标准的核苷亚磷酰胺化学法(例如，Current protocols innucleic acid chemistry，Beaucage，S.L.et al.(Edrs.)，John Wiley & Sons，Inc.，New York，NY，USA所述)，将这些构件单元引入寡核苷酸链序列中的选定位点。将碘氧化剂溶液替换成Beaucage试剂(Chruachem Ltd，Glasgow，UK)的乙腈溶液(1％)以引入硫代磷酸酯键。其它助剂可由Mallinckrodt Baker(Griesheim，Germany)获得。

根据常规方法，通过阴离子交换HPLC进行寡核苷酸粗品的脱保护和纯化。利用分光光度计(DU 640B，Beckman Coulter GmbH，Unterschleiβheim，Germany)通过在260nm波长下各RNA溶液的UV吸收测定收率和浓度。通过在退火缓冲液(20mM磷酸钠，pH6.8；100mM氯化钠)中混合等摩尔互补链，在85-90℃的水浴中加热3分钟并在3-4小时内冷却至室温，生成双链RNA。退火的RNA溶液在-20℃储存直至使用。

为了合成3′-偶联胆固醇的siRNA(本文中称为-Chol-3′)，在RNA合成中使用适当修饰的固体支持物。通过以下方法制备所述修饰的固体支持物：

2-氮杂丁烷-1，4-二羧酸二乙酯AA

将4.7M的氢氧化钠水溶液(50mL)加入到经搅拌、冰冷却的甘氨酸乙酯盐酸盐(32.19g，0.23摩尔)的水溶液(50mL)中。随后，加入丙烯酸乙酯(23.1g，0.23摩尔)并在室温下搅拌混合物直至通过TLC确认反应完成。19小时后，使用二氯甲烷(3×100mL)使溶液分层。使用无水硫酸钠干燥有机层、过滤并蒸除溶剂。蒸馏残留物以获得AA(28.8g，61％)。

3-{乙氧基羰甲基-[6-(9H-芴-9-基-甲氧基羰基-氨基)-己酰基]-氨基}-丙酸乙酯AB

将Fmoc-6-氨基-己酸(9.12g，25.83mmol)溶解于二氯甲烷(50mL)中，并用冰冷却。在0℃下，向所得溶液中加入二异丙基碳二亚胺(3.25g，3.99mL，25.83mmol)。随后，加入氮杂丁烷-1，4-二羧酸乙酯(5g，24.6mmol)和二甲基氨基吡啶(0.305g，2.5mmol)。使所得溶液达到室温，并进一步搅拌6小时。通过TLC确定反应完成。真空浓缩反应混合物并加入乙酸乙酯以沉淀二异丙基脲。过滤悬浮液。使用5％盐酸水溶液、5％碳酸氢钠和水清洗滤液。使用硫酸钠干燥合并的有机层并将其浓缩，得到粗产物，通过柱层析(50％EtOAC/己烷)纯化粗产物获得11.87g AB(88％)。

3-[(6-氨基-己酰基)-乙氧基羰甲基-氨基]-丙酸乙酯AC

在0℃下，将3-{乙氧基羰甲基-[6-(9H-芴-9-基甲氧基羰基-氨基)-己酰基]-氨基}-丙酸乙酯AB(11.5g，21.3mmol)溶解于含20％哌啶的二甲基甲酰胺溶液中。将溶液持续搅拌1小时。真空浓缩反应混合物，向残留物中添加水并使用乙酸乙酯萃取所得产物。将粗产物转化成其盐酸盐而进行纯化。

3-({6-[17-(1，5-二甲基-己基)-10，13-二甲基-2，3，4，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17-十四氢-1H-环戊二烯并[a]菲-3-基-氧基羰基氨基]-己酰基}乙氧基羰甲基-氨基)-丙酸乙酯AD

将3-[(6-氨基-己酰基)-乙氧基羰甲基-氨基]-丙酸乙酯AC的盐酸盐(4.7g，14.8mmol)加入二氯甲烷中。将悬浮液在冰上冷却至0℃。向悬浮液中添加二异丙基乙胺(3.87g，5.2mL，30mmol)。向所得溶液中添加氯甲酸胆固醇酯(6.675g，14.8mmol)。将反应混合物搅拌过夜。使用二氯甲烷稀释反应混合物并使用10％盐酸洗涤。通过快速层析纯化产物(10.3g，92％)。

1-{6-[17-(1，5-二甲基-己基)-10，13-二甲基-2，3，4，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17-十四氢-1H-环戊二烯并[a]菲-3-基-氧基羰基氨基]-己酰基}-4-氧代-吡咯烷-3-羧酸乙酯AE

在30mL干甲苯中使叔丁醇钾(1.1g，9.8mmol)成浆状。将所得混合物在冰上冷却至0℃，并在搅拌下于20分钟内加入5g(6.6mmol)AD二酯。在添加过程中将温度保持在5℃以下。在0℃下持续搅拌30分钟，并加入1mL冰醋酸，随后立即加入含4g NaH₂PO₄·H₂O的40mL水。将所得混合物由二氯甲烷萃取两次(每次100mL)，使用磷酸盐缓冲液将合并的有机萃取物洗涤两次(每次10mL)，干燥并蒸发至干。将残留物溶解于60mL甲苯中，冷却至0℃并由三份50mL pH9.5的冷碳酸盐缓冲液进行萃取。使用磷酸将水性萃取物调整至pH 3，并使用5份40mL氯仿进行萃取，将萃取液合并、干燥并蒸发至干。使用25％乙酸乙酯/己烷通过柱层析纯化得到1.9g b-酮酯(39％)。

[6-(3-羟基-4-羟甲基-吡咯烷-1-基)-6-氧代-己基]-氨基甲酸17-(1，5-二甲基-己基)-10，13-二甲基-2，3，4，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17-十四氢-1H-环戊二烯并[a]菲-3-基酯AF

在1小时内将甲醇(2mL)滴加到含b-酮酯AE(1.5g，2.2mmol)和硼氢化钠(0.226g，6mmol)的四氢呋喃(10mL)回流混合物中。在回流温度下持续搅拌1小时。冷却至室温后，加入1N HCl(12.5mL)，用乙酸乙酯(3×40mL)萃取所得混合物。使用无水硫酸钠干燥合并的乙酸乙酯层，真空浓缩，柱层析(10％MeOH/CHCl₃)纯化，得到产物(89％)。

(6-{3-[双-(4-甲氧基-苯基)-苯基-甲氧基甲基]-4-羟基-吡咯烷-1-基}-6-氧代-己基)-氨基甲酸17-(1，5-二甲基-己基)-10，13-二甲基-2，3，4，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17-十四氢-1H-环戊二烯并[a]菲-3-基酯AG

在真空下与吡啶(2×5mL)一起蒸发从而干燥AF二醇(1.25gm 1.994mmol)。在搅拌下加入无水吡啶(10mL)和4，4′-二甲氧基三苯甲基氯(0.724g，2.13mmol)。在室温下反应过夜。通过加入甲醇终止反应。真空浓缩反应混合物，并向残留物加入二氯甲烷(50mL)。用1M碳酸氢钠水溶液洗涤有机层。使用无水硫酸钠干燥有机层、过滤并浓缩。通过与甲苯进行蒸发除去残留的吡啶。通过柱层析(2％MeOH/氯仿，在5％MeOH/CHCl₃中，Rf＝0.5)纯化粗产物(1.75g，95％)。

琥珀酸单-(4-[双-(4-甲氧基-苯基)-苯基-甲氧基甲基]-1-{6-[17-(1，5-二甲基-己基)-10，13-二甲基-2，3，4，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17-十四氢-1H-环戊二烯并[a]菲-3-基-氧基羰基氨基]-己酰基}-吡咯烷-3-基)酯_AH

将化合物AG(1.0g，1.05mmol)与琥珀酸酐(0.150g，1.5mmol)和DMAP(0.073g，0.6mmol)混合并在40℃下真空干燥过夜。将所得混合物溶解于无水二氯乙烷(3mL)中，加入三乙胺(0.318g，0.440mL，3.15mmol)，并在室温和氩气气氛中将所得溶液搅拌16小时。随后，使用二氯甲烷(40mL)稀释，并使用冰冷的柠檬酸水溶液(5wt％，30mL)和水(2×20mL)洗涤。使用无水硫酸钠干燥有机相，并浓缩至干。将所得残留物直接用于下一个步骤。

胆固醇衍生的CPG AI

将琥珀酸酯AH(0.254g，0.242mmol)溶解于二氯甲烷/乙腈的混合物(3∶2，3mL)中。向所得溶液中连续加入DMAP(0.0296g，0.242mmol)的乙腈溶液(1.25mL)、2，2′-二硫代-双(5-硝基吡啶)(0.075g，0.242mmol)的乙腈/二氯乙烷(3∶1，1.25mL)溶液。向所得溶液中加入三苯基膦(0.064g，0.242mmol)的乙腈溶液(0.6ml)。反应混合物的颜色变为亮橙色。使用手动震荡器短暂地搅拌溶液(5分钟)。加入长链烷基胺-CPG(LCAA-CPG)(1.5g，61mM)。将悬浮液搅拌2小时。通过烧结漏斗过滤CPG，并依次使用乙腈、二氯甲烷和乙醚洗涤。利用乙酸酐/吡啶掩蔽未反应的氨基基团。采用UV测量法计算所获取的CPG的载量(37mM/g)。

根据WO 2004/065601中的描述合成具有5′-12-月桂酸双癸酰胺基团(本文称为“5′-C32-”)或5′-胆固醇基衍生基团(本文称为“5′-Chol-”)的siRNA，不同的是，对于胆固醇基衍生物，使用Beaucage试剂进行氧化步骤以在核酸寡聚物的5′末端引入硫代磷酸酯键。

使用标准命名法，特别是表2的缩写来表示以下核酸序列。

表3：在核酸序列表示法中所使用的核苷酸单体的缩写。可以理解这些单体存在于寡核苷酸中时通过5’-3’-磷酸二酯键相互连接。

缩写^a	核苷酸
		A，a	2’-脱氧-腺苷-5’-磷酸酯，腺苷-5’-磷酸酯
C，c	2’-脱氧-胞苷-5’-磷酸酯，胞苷-5’-磷酸酯
		G，g	2’-脱氧-鸟苷-5’-磷酸酯，鸟苷-5’-磷酸酯
T,t	2’-脱氧-胸苷-5’-磷酸酯，胸苷-5’-磷酸酯
		U，u	2’-脱氧-尿苷-5’-磷酸酯，尿苷-5’-磷酸酯
N，n	任意2’-脱氧-核苷酸/核苷酸(G，A，C或T，g，a，c或u)
		Am	2’-O-甲基腺苷-5’-磷酸酯
Cm	2’-O-甲基胞苷-5’-磷酸酯
		Gm	2’-O-甲基鸟苷-5’-磷酸酯
Tm	2’-O-甲基-胸苷-5’-磷酸酯
		Um	2’-O-甲基尿苷-5’-磷酸酯
Af	2’-氟-2’-脱氧-腺苷-5’-磷酸酯
		Cf	2’-氟-2’-脱氧-胞苷-5’-磷酸酯
Gf	2’-氟-2’-脱氧-鸟苷-5’-磷酸酯
		Tf	2’-氟-2’-脱氧-胸苷-5’-磷酸酯
Uf	2’-氟-2’-脱氧-尿苷-5’-磷酸酯
		A，C，G，T，U，a，c，g，t，u	下划线：核苷-5’-硫代磷酸酯
am，cm，gm，tm，um	下划线：2-O-甲基-核苷-5’-硫代磷酸酯

^a 大写字母表示2’-脱氧核糖核酸(DNA)，小写字母表示核糖核酸(RNA)

dsRNA表达载体

在本发明的另一方面，由插入到DNA或RNA载体的转录单位表达调节Aha1基因表达活性的Aha1特异性dsRNA分子(参见，例如Couture，A，et al.，TIG.(1996)，12：5-10；Skillern，A.，et al.，国际PCT公开号WO 00/22113；Conrad，国际PCT公开号WO 00/22114和Conrad，美国专利第6,054,299号)。可将这些转基因作为线性构建物、环状质粒或病毒载体引入，并可以作为整合到宿主基因组的转基因使其并入基因中进行遗传。也可构建所述转基因使其作为染色体外质粒进行遗传(Gassmann，et al.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1995)92：1292)。

可通过位于共转染到同一靶细胞的两个单独表达载体上的启动子转录dsRNA的两条单链。或者，通过位于同一表达质粒的两个启动子转录dsRNA的各条单链。在优选实施方案中，将dsRNA表达为通过多核苷酸序列接头连接的反向重复，从而使所述dsRNA具有茎环结构。

重组dsRNA表达载体通常为DNA质粒或病毒载体。表达dsRNA的病毒载体可以基于但不限于腺相关病毒(综述可参见Muzyczka，et al.，Curr.Topics Micro.Immunol.(1992)158：97-129))、腺病毒(参见，例如Berkner，et al.，BioTechniques(1998)6：616)；Rosenfeld et al.(1991，Science 252：431-434)，andRosenfeld et al.(1992)，Cell 68：143-155))或甲病毒以及其它本领域已知的病毒进行构建。现已使用逆转录病毒将多种基因引入到包括上皮细胞在内的体外和/或体内的多种不同细胞类型中(参见，例如Eglitis，et al.，Science(1985)230：1395-1398；Danos and Mulligan，Proc.NatI.Acad.Sci.USA(1998)85：6460-6464；Wilson et al.，1988，Proc.NatI.Acad.Sci.USA 85：3014-3018；Armentano et al.，1990，Proc.NatI.Acad.Sci.USA 87：61416145；Huber et al.，1991，Proc.NatI.Acad.Sci.USA 88：8039-8043；Ferry et al.，1991，Proc.NatI.Acad.Sci.USA 88：8377-8381；Chowdhury et al.，1991，Science 254：1802-1805；van Beusechem.et al.，1992，Proc.Nad.Acad.Sci.USA 89：7640-19；Kay et al.，1992，Human Gene Therapy 3：641-647；Dai et al.，1992，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 89：10892-10895；Hwu et al.，1993，J.Immunol.150：4104-4115；美国专利第4,868,116号；美国专利第4,980,286号；PCT申请WO 89/07136；PCT申请WO 89/02468；PCT申请WO 89/05345；和PCT申请WO 92/07573)。可以通过将重组逆转录病毒基因组转染到合适的包装细胞系(例如，A317和Psi-CRIP)中从而产生能够进行转导并表达插入到细胞基因组中基因的重组逆转录病毒载体(Comette et al.，1991，Human Gene Therapy 2：5-10；Cone et al.，1984，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 81：6349)。重组腺病毒载体可以用于感染易感宿主(例如，大鼠、仓鼠、狗和黑猩猩)中的多种细胞和组织(Hsu et al.，1992，J.Infectious Disease，166：769)，并且具有不需要用于感染的有丝分裂活性细胞的优点。

在本发明DNA质粒或病毒载体中驱动dsRNA表达的启动子可以是真核RNA聚合酶I(例如，核糖体RNA启动子)、RNA聚合酶II(例如，CMV早期启动子或肌动蛋白启动子或U1 snRNA启动子)，或通常为RNA聚合酶III启动子(例如，U6 snRNA或7SK RNA启动子)或者原核启动子(例如，T7启动子)，前提是该表达质粒还编码T7启动子转录所需的T7 RNA聚合酶。所述启动子还可以引导转基因在胰腺的表达(参见，例如胰腺的胰岛素调控序列，(Bucchini et al.，1986，Proc.Natl.Acad.Sci.USA 83：2511-2515))。

另外，可以通过利用如可诱导的调控序列和表达系统精确调控转基因的表达，例如通过使用对特定生理调节剂(例如，循环系统葡萄糖浓度或激素)敏感的调控序列进行调控(Docherty et al.，1994，FASEB J.8：20-24)。适合在细胞或哺乳动物中控制转基因表达的可诱导表达系统包括通过蜕皮激素、雌激素、孕酮、四环素、二聚作用的化学诱导剂和异丙基-β-D1-硫代半乳糖吡喃糖苷(EPTG)进行的调控。本领域的技术人员能够根据dsRNA转基因的期望用途选择适当的调控/启动子序列。

通常，如下文所述将表达dsRNA分子的重组载体递送到并保留在靶细胞中。或者，可使用提供dsRNA分子瞬时表达的病毒载体。如果需要，可以重复施用此类载体。所述dsRNA一经表达即与靶标RNA结合并调节其功能或表达。可以全身性地递送表达dsRNA的载体，例如通过静脉或肌肉内施用，通过施用于来自患者的外植靶细胞随后将其重新引入到患者体内，或可将其引入到所需靶细胞的任意其它方式进行递送。

通常将表达dsRNA的DNA质粒与阳离子脂质载体(例如，Oligofectamine)或基于脂质的非阳离子载体(例如，Transit-TKO^TM)一起作为复合体转染到靶细胞中。预期本发明的多重脂质转染可在一周或更长的时间内对单个Aha1基因的不同区域或多个Aha1基因进行dsRNA介导的靶向敲除。可使用多种已知方法监测本发明载体向宿主细胞的成功引入。例如，在瞬时转染中，可使用报告子，例如荧光标记(例如，绿色荧光蛋白(GFP))发出信号。可使用向转染细胞提供对特定环境因子(例如，抗生素和药物)抗性，例如，潮霉素B抗性的标记，从而确保离体细胞的稳定转染。

也可将Aha1特异性dsRNA分子插入到载体中并作为基因治疗载体用于人类患者。例如，可以通过静脉注射、局部施用(参见美国专利第5,328,470号)，或者通过立体定位注射(参见，例如Chen et al.(1994)Proc.Natl.Acad.Sci.USA 91：3054-3057)将基因治疗载体递送至受试者中。基因治疗载体的药物制剂可以包括基因治疗载体的可接受稀释液溶液，或者可以包含包埋有基因递送载体的慢释(slow release)基质。在可以完整地从重组细胞中产生完全基因递送载体(例如，逆转录病毒载体)时，所述药物制剂也可以包含一种或多种产生基因递送系统的细胞。

Aha1 siRNA体外筛选

在HeLa细胞和MLE 12细胞中的单剂量筛选

从美国典型菌种保藏中心(American Type Culture Collection)获取HeLa细胞(Rockville，MD，cat.No.HB-8065)，并且在37℃、5％ CO₂气氛的条件下，将其培养在加湿培养箱(Heraeus HERAcell，Kendro Laboratory Products，Langenselbold，Germany)中的补充有10％胎牛血清(FCS)(Biochrom AG，Berlin，Germany，cat.No.S0115)、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素(Biochrom AG，Berlin，Germany，cat.No.A2213)的Ham’s F12(Biochrom AG，Berlin，Germany，cat.No.FG0815)中。

从美国典型菌种保藏中心获取MLE 12细胞(Rockville，MD，cat.No.CRL-2110)，并且在37℃、5％ CO₂气氛的条件下，将其培养在加湿培养箱(Heraeus HERAcell，Kendro Laboratory Products，Langenselbold，Germany)中的补充有2％胎牛血清(FCS)(Biochrom AG，Berlin，Germany，cat.No.S0115)、100U/ml青霉素、100μg/ml链霉素(Biochrom AG，Berlin，Germany，cat.No.A2213)、4mM L-谷氨酰胺(Biochrom AG，Berlin，Germany，cat.No：K0282)、1×胰岛素/运铁蛋白/亚硒酸钠(Na-Selenit)(Gibco：51500-056)、10nM皮质醇(Sigma Munich，Germany，cat.No：H6909)、10nM β-雌二醇(Sigma Munich，Germany，cat.No：E2257)和10mM HEPES(USB Europe GmBH，Staufen，Germany cat.No.：16926)的HITES培养基(以1∶1混合的Dulbecco’s MEM(Biochrom AG，Berlin，Germany，cat.No：F0435)+Ham’s F12(Biochrom AG，Berlin，Germany，cat.No：FG0815))中。

转染和mRNA的定量

为了进行siRNA转染，将HeLa细胞和MLE 12细胞以2.0×10⁴细胞/孔的密度接种到96孔板中，并进行直接转染。根据制造商的描述使用lipofectamine 2000(Invitrogen GmbH，Karlsruhe，Germany，cat.No.11668-019)进行siRNA(30nM)转染。转染24小时后，裂解细胞，并根据制造商的方案使用Quantigene Explore试剂盒(Genosprectra，Dumbarton Circle Fremont，USA，cat.No.QG-000-02)对Aha1 mRNA水平进行定量。相对于GAP-DHmRNA的水平对Aha1 mRNA水平进行标准化。获取每条siRNA的读取数据(一式四份)。使用与Aha1基因无关的siRNA双链作为对照。给定Aha1特异性siRNA双链的活性表示为经处理细胞中的Aha1 mRNA浓度相对于使用对照siRNA双链处理的细胞中的Aha1 mRNA浓度的百分比。

表4：在定量人类(hs)Aha1的过程中与Quantigene Explore试剂盒(Genospectra)一起使用的探针序列

FPL名称	功能	序列
			hsAha1 001	CE	GATGTAAATTCCCATTGCTTCTCTTTTTTCTCTTGGAAAGAAAGT
hsAha1 002	CE	TGAACTCTGTTTTGAGGGTGCTTTTTTCTCTTGGAAAGAAAGT
			hsAha1 003	CE	GGGTCTACTGACTCTCCATTCATTGTTTTTCTCTTGGAAAGAAAGT
hsAha1 004	CE	CCTTGCGCTCCTCAGTTTTCTTTTTCTCTTGGAAAGAAAGT
			hsAha1 005	CE	GGTTTTTGAAGGAGCAGGCTTAGTTTTTCTCTTGGAAAGAAAGT
hsAha1 006	LE	ACGCTGTTTTCATCAGACAAATTTTTTTAGGCATAGGACCCGTGTCT
			hsAha1 007	LE	GCTCACACTAATCTCCACTTCATCCTTTTTAGGCATAGGACCCGTGTCT
hsAha1 008	LE	TCATTAAGGCCACGAGATTTGTTTTTTAGGCATAGGACCCGTGTCT
			hsAha1 009	LE	TAGGTAAGATCATGCCCTGGGTTTTTAGGCATAGGACCCGTGTCT
hsAha1 010	LE	ACTCCAACAGGTCTGGCCTGTTTTTAGGCATAGGACCCGTGTCT
			hsAha1 011	BL	GTCAGGCTCATCTTTGGCAAG
hsAha1 012	BL	TAGAAGTTTCACCCCTTCTTCCT
			hsAha1 013	BL	AGTGCTGGCTGCCCCACT

表5：在定量小鼠(mm)Aha1的过程中与Quantigene Explore试剂盒(Genospectra)一起使用的探针序列

FPL名称	功能	序列
			mmAhsa 1001	CE	CTCGAACGGCCAGGAACATTTTTCTCTTGGAAAGAAAGT
mmAhsa 1002	CE	GCACTTGCCCTCTTCATTTTCTATTTTTCTCTTGGAAAGAAAGT
			mmAhsa 1003	CE	TTGATGGATGCCTCCCCATTTTTTCTCTTGGAAAGAAAGT
mmAhsa 1004	CE	AACTCTGTCTTGAGGGTGCTGATTTTTTCTCTTGGAAAGAAAGT
				CE	TTTGGCCTGGCTTTTTGAATTTTTCTCTTGGAAAGAAAGT
	LE	CAAGCTTGTTCACTTCGGTCACCTCTTTTTAGGCATAGGACCCGTGTCT
				LE	CCTGACTTAGAGGTACCTGTCCAGTTTTTTTAGGCATAGGACCCGTGTCT
	LE	GATTTCCACATGTCCTTTGTACTGCACTTTTTTAGGCATAGGACCCGTGTCT
				LE	ATTTTCATCAGACAAATTGGGTTTTTAGGCATAGGACCCGTGTCT
	LE	TAATCTCCACTTCATCCACGCTTTTTTAGGCATAGGACCCGTGTCT
				LE	ACTGTGGGCAAGATCATGCCCTGAGTATTTTTAGGCATAGGACCCGTGTCT
	LE	TTTCACCCCGTCTTCCTTCATTTTTAGGCATAGGACCCGTGTCT
				BL	AAGATAAGTTTGCCTTTCCTGTTG
	BL	CAGTTTGATGGTCCACTCATAGAAG
				BL	CATCTTTGGCAAGGCTCACAC
	BL	TTAAGGCCACGAGATTTGTGTCAGGCT
				BL	GTAAATTCCCACTGCTTCTCTCAGAAG
	BL	CACTGGATCTACTGACTCTCCATTC
				BL	CTCAGTCTTTAGTGCTGGCTGGCC
	BL	GGAGCAGACTTAGCCTTGCAAGT

HeLa细胞的剂量响应曲线

转染和mRNA定量：为了进行siRNA转染，将HeLa细胞以2.0×10⁴细胞/孔的密度接种到96孔板中，并进行直接转染。根据制造商的描述使用lipofectamine 2000(Invitrogen GmbH，Karlsruhe，Germany，cat.No.11668-019)进行siRNA转染。使用三倍稀释法将siRNA从30nM浓缩至14pM。转染24小时后，裂解细胞，并根据制造商的方案使用Quantigene Explore试剂盒(Genosprectra，Dumbarton Circle Fremont，USA，cat.No.QG-000-02)对Aha1mRNA水平进行定量。相对于GAP-DH mRNA的水平对Aha1 mRNA水平进行标准化(归一化)。针对每条siRNA，收集4个单独的数据点。使用与Aha1基因无关的siRNA双链作为对照。将给定Aha1特异性siRNA双链的活性表示为经处理细胞中的Aha1 mRNA浓度相对于使用对照siRNA双链处理的细胞中的Aha1 mRNA浓度的百分比。使用XL-fit计算IC₅₀值。

表6提供本发明的各dsRNA分子对Aha1表达的抑制值。

表6：经Aha1特异性RNAi试剂的30nM溶液处理后HeLa和MLE 12细胞中残留Aha1 mRNA的百分比(与对照之比)，以及在HeLa细胞中测定的所选RNAi试剂的IC₅₀

双链名称	HeLa细胞中残留的mRNA[％]	HeLa细胞中的IC₅₀[nM]	MLE12细胞中残留的mRNA[％]
				AL-DP-7299	19±3		105±17
AL-DP-7300	7±2		94±13
				AL-DP-7301	3±1	0.035	14±3
AL-DP-7302	17±5		61±16
				AL-DP-7303	5±2		23±5
AL-DP-7304	7±3		30±7
				AL-DP-7305	6±2		26±6
AL-DP-7306	27±8		45±11
				AL-DP-7307	16±6	1.1	27±8
AL-DP-7308	13±5	0.21	20±7
				AL-DP-7309	10±3	0.36	22±8
AL-DP-7310	51±13		59±13
				AL-DP-7311	4±3	0.07	16±4
AL-DP-7312	14±3		40±8
				AL-DP-7313	63±14		80±10
AL-DP-7314	97±21		88±10
				AL-DP-7315	76±24		77±10
AL-DP-7316	7±2	0.34	23±6
				AL-DP-7317	11±3		44±12
AL-DP-7318	4±2	0.29	16±3
				AL-DP-7319	38±7		73±21
AL-DP-7320	16±4	0.07	15±5
				AL-DP-7321	130±36		81±16
AL-DP-7322	4±2	0.045	10±3
				AL-DP-7323	24±6		55±11
AL-DP-7324	3±2	0.089	12±4
				AL-DP-7325	5±2	0.3	12±4
AL-DP-7326	3±1	0.27	19±7
				AL-DP-7327	3±1	0.08	13±7
AL-DP-7328	49±14		67±10
				AL-DP-7329	6±2	0.2	18±5
AL-DP-7330	64±19		78±10
				AL-DP-7331	5±2	0.55	13±5
AL-DP-7332	95±20		82±15
				AL-DP-7333	2±1	0.27	9±3
AL-DP-7334	94±17		83±19
				AL-DP-7335	11±5		57±11
AL-DP-7336	22±4		63±12
				AL-DP-7337	6±2	0.29	20±5
AL-DP-7338	39±6		56±10
				AL-DP-7339	10±1		35±6
AL-DP-7340	8±2	0.61	19±6
				AL-DP-7341	17±4		55±16
AL-DP-7342	6±4	0.5	15±3
				AL-DP-7343	26±4		103±19
AL-DP-7344	5±2		38±11
				AL-DP-7345	53±22		63±15
AL-DP-7346	22±4		44±11
				AL-DP-9250	4±1
AL-DP-9251	51±9
				AL-DP-9252	19±2
AL-DP-9253	11±1
				AL-DP-9254	7±1
AL-DP-9255	5±0
				AL-DP-9256	5±0
AL-DP-9257	7±0
				AL-DP-9258	9±1
AL-DP-9259	7±1
				AL-DP-9260	15±3
AL-DP-9261	21±2
				AL-DP-9262	24±4
AL-DP-9263	25±6
				AL-DP-9264	7±2
AL-DP-9265	8±1
				AL-DP-9266	11±2
AL-DP-9267	45±4
				AL-DP-9268	9±1
AL-DP-9269	5±1
				AL-DP-9270	6±1
AL-DP-9271	6±2
				AL-DP-9272	26±8
AL-DP-9273	11±1
				AL-DP-9274	7±1
AL-DP-9275	8±1
				AL-DP-9276	4±1
AL-DP-9277	10±1
				AL-DP-9278	2±0
AL-DP-9279	3±0
				AL-DP-9280	12±1
AL-DP-9281	8±2
				AL-DP-9282	3±0
AL-DP-9283	6±1
				AL-DP-9284	39±2
AL-DP-9285	4±1
				AL-DP-9286	61±11
AL-DP-9287	3±1
				AL-DP-9288	27±5
AL-DP-9289	6±1

总之，AL-DP-7301、AL-DP-7308、AL-DP-7318、AL-DP-7320、AL-DP-7322、AL-DP-7324、AL-DP-7325、AL-DP-7326、AL-DP-7327、AL-DP-7329、AL-DP-7331、AL-DP-7333、AL-DP-7340和AL-DP-7342对HeLa细胞和MLE 12细胞中的Aha1表达至少抑制80％；AL-DP-7303、AL-DP-7305、AL-DP-7307、AL-DP-7309、AL-DP-7316和AL-DP-7337对HeLa细胞中的Aha1表达至少抑制80％，对MLE 12细胞中的Aha1表达至少抑制70％；AL-DP-7304、AL-DP-7312、AL-DP-7339和AL-DP-7344对HeLa细胞中的Aha1表达至少抑制80％，对MLE 12细胞中的Aha1表达至少抑制60％；AL-DP-7306、AL-DP-7317和AL-DP-7346对HeLa细胞中的Aha1表达至少抑制70％，对MLE 12细胞中的Aha1表达至少抑制50％；AL-DP-7310、AL-DP-7323、AL-DP-7335、AL-DP-7338和AL-DP-7341对HeLa细胞和MLE12细胞中的Aha1表达至少抑制40％；AL-DP-7302、AL-DP-7315、AL-DP-7328、AL-DP-7330、AL-DP-7336和AL-DP-7345对HeLa细胞和MLE12细胞中的Aha1表达抑制至少20％。

另外，AL-DP-9250、AL-DP-9252、AL-DP-9253、AL-DP-9254、AL-DP-9255、AL-DP-9256、AL-DP-9257、AL-DP-9258、AL-DP-9259、AL-DP-9260、AL-DP-9264、AL-DP-9265、AL-DP-9266、AL-DP-9268、AL-DP-9269、AL-DP-9270、AL-DP-9271、AL-DP-9273、AL-DP-9274、AL-DP-9275、AL-DP-9276、AL-DP-9277、AL-DP-9279、AL-DP-9280、AL-DP-9281、AL-DP-9282、AL-DP-9283、AL-DP-9285、AL-DP-9287和AL-DP-9289对HeLa细胞中的Aha1表达至少抑制80％；AL-DP-9261、AL-DP-9262、AL-DP-9263、AL-DP-9272和AL-DP-9288对HeLa细胞中的Aha1表达至少抑制70％；AL-DP-9263对HeLa细胞中的Aha1表达至少抑制60％；AL-DP-9267对HeLa细胞中的Aha1表达至少抑制50％；AL-DP-9251对HeLa细胞中的Aha1表达至少抑制40％；AL-DP-9286对HeLa细胞中的Aha1表达至少抑制30％。

序列表

<110>阿尔尼拉姆医药品有限公司(Alnylam Pharmaceuticals，Inc.)

<120>Aha基因的RNAi调控及其治疗性应用(RNAi MODUATION OF AHA AND THERAPEUTIC USES THEREOF)

<130>14174-132WO1

<140>PCT/US07/69229

<141>2007-05-18

<150>US60/801,840

<151>2006-05-19

<160>217

<210>1

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1，2，3，4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>1

auugguccac ggauaagcut t 21

<210>2

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>2

agcuuauccg uggaccaaut t 21

<210>3

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>3

gugaguaagc uugauggagt t 21

<210>4

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>4

cuccaucaag cuuacucact t 21

<210>5

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>5

agucaaaauc cccacuugut t 21

<210>6

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>6

acaagugggg auuuugacut t 21

<210>7

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>7

aaaucucgug gccuuaaugt t 21

<210>8

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>8

cauuaaggcc acgagauuut t 21

<210>9

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>9

gagauuagug ugagccuugt t 21

<210>10

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>10

caaggcucac acuaaucuct t 21

<210>11

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>11

aaucucgugg ccuuaaugat t 21

<210>12

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>12

ucauuaaggc cacgagauut t 21

<210>13

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>13

agauuagugu gagccuugct t 21

<210>14

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>14

gcaaggcuca cacuaaucut t 21

<210>15

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>15

cgggcggacg ccaccaacgt t 21

<210>16

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>16

cguugguggc guccgcccgt t 21

<210>17

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>17

ggcggacgcc accaacguct t 21

<210>18

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O甲基-对应碱基″

<400>18

gacguuggug gcguccgcct t 21

<210>19

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>19

gggcggacgc caccaacgut t 21

<210>20

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>20

acguuggugg cguccgccct t 21

<210>21

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>21

caacgucaac aacuggcact t 21

<210>22

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>22

gugccaguug uugacguugt t 21

<210>23

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>23

gcgggcggac gccaccaact t 21

<210>24

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>24

guugguggcg uccgcccgct t 21

<210>25

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>25

aucucguggc cuuaaugaat t 21

<210>26

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>26

uucauuaagg ccacgagaut t 21

<210>27

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>27

acgucaacaa cuggcacugt t 21

<210>28

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>28

cagugccagu uguugacgut t 21

<210>29

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>29

accaacguca acaacuggct t 21

<210>30

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>30

gccaguuguu gacguuggut t 21

<210>31

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>31

acgcuggauc guggaggagt t 21

<210>32

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>32

cuccuccacg auccagcgut t 21

<210>33

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified-base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>33

agacccacgc uggaucgugt t 21

<210>34

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>34

cacgauccag cgugggucut t 21

<210>35

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>35

gacccacgcu ggaucguggt t 21

<210>36

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>36

ccacgaucca gcguggguct t 21

<210>37

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>37

gaauuuacau cagcacccut t 21

<210>38

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>38

agggugcuga uguaaauuct t 21

<210>39

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>39

gggaauuuac aucagcacct t 21

<210>40

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>40

ggugcugaug uaaauuccct t 21

<210>41

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>41

ugggaauuua caucagcact t 21

<210>42

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>42

gugcugaugu aaauucccat t 21

<210>43

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>43

ccaacgucaa caacuggcat t 21

<210>44

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>44

ugccaguugu ugacguuggt t 21

<210>45

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>45

aaguggggug agggagacct t 21

<210>46

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>46

ggucucccuc accccacuut t 21

<210>47

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>47

acacaaaucu cguggccuut t 21

<210>48

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>48

aaggccacga gauuugugut t 21

<210>49

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>49

acccacgcug gaucguggat t 21

<210>50

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>50

uccacgaucc agcgugggut t 21

<210>51

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>51

gagucaaaau ccccacuugt t 21

<210>52

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>52

caagugggga uuuugacuct t 21

<210>53

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>53

gagcucuaua gaguguuuat t 21

<210>54

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>54

uaaacacucu auagagcuct t 21

<210>55

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>55

ggcagcggua cuacuuugat t 21

<210>56

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>56

ucaaaguagu accgcugcct t 21

<210>57

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>57

gacacaaauc ucguggccut t 21

<210>58

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>58

aggccacgag auuuguguct t 21

<210>59

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>59

agcgggcgga cgccaccaat t 21

<210>60

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>60

uugguggcgu ccgcccgcut t 21

<210>61

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O甲基-对应碱基″

<400>61

caaaaucccc acuuguaagt t 21

<210>62

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>62

cuuacaagug gggauuuugt t 21

<210>63

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>63

gagacccacg cuggaucgut t 21

<210>64

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>64

acgauccagc gugggucuct t 21

<210>65

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1，2，3，_4，5，6，7，8，9，10，11，12，13，14，15，16，17，18，19

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>65

gagccuugcc aaagaugagt t 21

<210>66

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>66

cucaucuuug gcaaggcuct t 21

<210>67

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>67

ugacacaaau cucguggcct t 21

<210>68

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>68

ggccacgaga uuugugucat t 21

<210>69

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>69

ggagcucuau agaguguuut t 21

<210>70

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>70

aaacacucua uagagcucct t 21

<210>71

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>71

cccacgcugg aucguggagt t 21

<210>72

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>72

cuccacgauc cagcgugggt t 21

<210>73

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>73

gauccccaau uugucugaut t 21

<210>74

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>74

aucagacaaa uuggggauct t 21

<210>75

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>75

gagaucccca auuugucugt t 21

<210>76

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>76

cagacaaauu ggggaucuct t 21

<210>77

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>77

agccugacac aaaucucgut t 21

<210>78

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>78

acgagauuug ugucaggcut t 21

<210>79

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>79

agauccccaa uuugucugat t 21

<210>80

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>80

ucagacaaau uggggaucut t 21

<210>81

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>81

agggagaccc acgcuggaut t 21

<210>82

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>82

auccagcgug ggucucccut t 21

<210>83

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>83

gagggagacc cacgcuggat t 21

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<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>84

uccagcgugg gucucccuct t 21

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<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>85

gccaaguggg gugagggagt t 21

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<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>86

cucccucacc ccacuuggct t 21

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<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>87

uggcagcggu acuacuuugt t 21

<210>88

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>88

caaaguagua ccgcugccat t 21

<210>89

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>89

ugagggagac ccacgcuggt t 21

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<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

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<400>90

ccagcguggg ucucccucat t 21

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<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>91

aguggagauu agugugagct t 21

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<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>92

gcucacacua aucuccacut t 21

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<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>93

aggagcucua uagaguguut t 21

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<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>94

aacacucuau agagcuccut t 21

<210>95

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>95

agcgguacua cuuugagggt t 21

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<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>96

cccucaaagu aguaccgcut t 21

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<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>97

cgcuggaucg uggaggagct t 21

<210>98

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>98

gcuccuccac gauccagcgt t 21

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<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>99

gcuggaucgu ggaggagcgt t 21

<210>100

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>100

cgcuccucca cgauccagct t 21

<210>101

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>101

cuggaucgug gaggagcggt t 21

<210>102

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>102

ccgcuccucc acgauccagt t 21

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<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>103

uggaucgugg aggagcgggt t 21

<210>104

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<223>/mod_base＝″2’-O-甲基-对应碱基″

<400>104

cccgcuccuc cacgauccat t 21

<210>105

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>105

gccugacaca aaucucgugt t 21

<210>106

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>106

cacgagauuu gugucaggct t 21

<210>107

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>107

ccugacacaa aucucguggt t 21

<210>108

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>108

ccacgagauu ugugucaggt t 21

<210>109

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>109

acgccaccaa cgucaacaat t 21

<210>110

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>110

uuguugacgu ugguggcgut t 21

<210>111

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>111

agcucuauag aguguuuact t 21

<210>112

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>112

guaaacacuc uauagagcut t 21

<210>113

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>113

gggcuggcag cgguacuact t 21

<210>114

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>114

guaguaccgc ugccagccct t 21

<210>115

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>115

cuggcagcgg uacuacuuut t 21

<210>116

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>116

aaaguaguac cgcugccagt t 21

<210>117

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>117

ggaugaagug gagauuagut t 21

<210>118

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>118

acuaaucucc acuucaucct t 21

<210>119

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>119

accagaggag cucuauagat t 21

<210>120

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

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ucuauagagc uccucuggut t 21

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<222>1..19

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aaguggagau uagugugagt t 21

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<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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<220>

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<222>1..19

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cucacacuaa ucuccacuut t 21

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<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

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<220>

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<222>1..19

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gaggagcucu auagagugut t 21

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<220>

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<222>1..19

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acacucuaua gagcuccuct t 21

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<212>DNA

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<220>

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<222>1..19

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gggagaccca cgcuggauct t 21

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<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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<220>

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gauccagcgu gggucuccct t 21

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<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

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ugagccugac acaaaucuct t 21

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<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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gagauuugug ucaggcucat t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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<222>1..19

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gcggacgcca ccaacgucat t 21

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ugacguuggu ggcguccgct t 21

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<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

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<222>1..19

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cggacgccac caacgucaat t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

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<220>

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<222>1..19

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uugacguugg uggcguccgt t 21

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

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<222>1..19

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gaaguggaga uuagugugat t 21

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<212>DNA

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<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

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<220>

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<222>1..19

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ucacacuaau cuccacuuctt 21

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<212>DNA

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<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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<220>

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<222>1..19

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cucguggccu uaaugaaggt t 21

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<212>DNA

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<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

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<222>1..19

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ccuucauuaa ggccacgagt t 21

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<212>DNA

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<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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<220>

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<222>1..19

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ucguggccuu aaugaaggat t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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<222>1..19

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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aaugggaauu uacaucagct t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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gcugauguaa auucccauut t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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ggaauuuaca ucagcaccct t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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gggugcugau guaaauucct t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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ggagauuagu gugagccuut t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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<222>1..19

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aaggcucaca cuaaucucct t 21

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

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<400>145

cacaaaucuc guggccuuat t 21

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<212>DNA

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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<222>1..19

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uaaggccacg agauuugugt t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

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<222>1..19

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acaaaucucg uggccuuaat t 21

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

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<222>1..19

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uuaaggccac gagauuugut t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

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<222>1..19

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ggagacccac gcuggaucgt t 21

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<212>DNA

<213>人工序列

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

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cgauccagcg ugggucucct t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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ggacgccacc aacgucaact t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

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<222>1..19

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guugacguug guggcgucct t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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gaugaagugg agauuagugt t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

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<222>1..19

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cacuaaucuc cacuucauct t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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gugagccuug ccaaagaugt t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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<222>1..19

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caucuuuggc aaggcucact t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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caaugaaugg agagucagut t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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<220>

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<222>1..19

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<400>158

acugacucuc cauucauugt t 21

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<212>DNA

<213>人工序列

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

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<222>1..19

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auuaguguga gccuugccat t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

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<222>1..19

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uggcaaggcu cacacuaaut t 21

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<213>人工序列

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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<220>

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<222>1..19

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agaugagccu gacacaaaut t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

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<222>1..19

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auuuguguca ggcucaucut t 21

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

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<400>163

uagugugagc cuugccaaat t 21

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<212>DNA

<213>人工序列

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<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

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<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

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<400>164

uuuggcaagg cucacacuat t 21

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<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>165

uuugccacca ucaccuugat t 21

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<212>DNA

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<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

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<400>166

ucaaggugau gguggcaaat t 21

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<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

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acggagagag augcuucaat t 21

<210>168

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>168

uugaagcauc ucucuccgut t 21

<210>169

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>169

cggagagaga ugcuucaaat t 21

<210>170

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>170

uuugaagcau cucucuccgt t 21

<210>171

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>171

aaaaucccca cuuguaagat t 21

<210>172

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>172

ucuuacaagu ggggauuuut t 21

<210>173

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>173

auccccaauu ugucugaugt t 21

<210>174

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>174

caucagacaa auuggggaut t 21

<210>175

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>175

ucaaaauccc cacuuguaat t 21

<210>176

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>176

uuacaagugg ggauuuugat t 21

<210>177

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>177

aaauccccac uuguaagaut t 21

<210>178

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>178

aucuuacaag uggggauuut t 21

<210>179

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>179

uccccaauuu gucugaugat t 21

<210>180

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>180

ucaucagaca aauuggggat t 21

<210>181

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>181

auggccaagu ggggugaggt t 21

<210>182

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>182

ccucacccca cuuggccaut t 21

<210>183

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-应碱基″

<400>183

ggagucaaaa uccccacuut t 21

<210>184

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于下调Aha1的RNAi试剂

<220>

<223>5’-末端核酸是核苷，即：碱基+糖，但缺少5’-磷酸酯

<220>

<221>modified_base

<222>1..19

<223>/mod_base＝″2’-羟基-对应碱基″

<400>184

aaguggggau uuugacucct t 21

<210>185

<211>45

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量人Aha1的bDNA探针序列

<400>185

gatgtaaatt cccattgctt ctcttttttc tcttggaaag aaagt 45

<210>186

<211>43

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量人Aha1的bDNA探针序列

<400>186

tgaactctgt tttgagggtg cttttttctc ttggaaagaa agt 43

<210>187

<211>46

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量人Aha1的bDNA探针序列

<400>187

gggtctactg actctccatt cattgttttt ctcttggaaa gaaagt 46

<210>188

<211>41

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量人Aha1的bDNA探针序列

<400>188

ccttgcgctc ctcagttttc tttttctctt ggaaagaaag t 41

<210>189

<211>44

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量人Aha1的bDNA探针序列

<400>189

ggtttttgaa ggagcaggct tagtttttct cttggaaaga aagt 44

<210>190

<211>47

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量人Aha1的bDNA探针序列

<400>190

acgctgtttt catcagacaa atttttttag gcataggacc cgtgtct 47

<210>191

<211>49

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量人Aha1的bDNA探针序列

<400>191

gctcacacta atctccactt catccttttt aggcatagga cccgtgtct 49

<210>192

<211>46

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量人Aha1的bDNA探针序列

<400>192

tcattaaggc cacgagattt gttttttagg cataggaccc gtgtct 46

<210>193

<211>45

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量人Aha1的bDNA探针序列

<400>193

taggtaagat catgccctgg gtttttaggc ataggacccg tgtct 45

<210>194

<211>44

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量人Aha1的bDNA探针序列

<400>194

actccaacag gtctggcctg tttttaggca taggacccgt gtct 44

<210>195

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量人Aha1的bDNA探针序列

<400>195

gtcaggctca tctttggcaa g 21

<210>196

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量人Aha1的bDNA探针序列

<400>196

tagaagtttc accccttctt cct 23

<210>197

<211>18

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量人Aha1的bDNA探针序列

<400>197

agtgctggct gccccact 18

<210>198

<211>39

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>198

ctcgaacggc caggaacatt tttctcttgg aaagaaagt 39

<210>199

<211>44

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>199

gcacttgccc tcttcatttt ctatttttct cttggaaaga aagt 44

<210>200

<211>40

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>200

ttgatggatg cctccccatt ttttctcttg gaaagaaagt 40

<210>201

<211>44

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>201

aactctgtct tgagggtgct gattttttct cttggaaaga aagt 44

<210>202

<211>40

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>202

tttggcctgg ctttttgaat ttttctcttg gaaagaaagt 40

<210>203

<211>49

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>203

caagcttgtt cacttcggtc acctcttttt aggcatagga cccgtgtct 49

<210>204

<211>50

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>204

cctgacttag aggtacctgt ccagtttttt taggcatagg acccgtgtct 50

<210>205

<211>52

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>205

gatttccaca tgtcctttgt actgcacttt tttaggcata ggacccgtgt ct 52

<210>206

<211>45

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>206

attttcatca gacaaattgg gtttttaggc ataggacccg tgtct 45

<210>207

<211>46

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>207

taatctccac ttcatccacg cttttttagg cataggaccc gtgtct 46

<210>208

<211>44

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>208

tttcaccccg tcttccttca tttttaggca taggacccgt gtct 44

<210>209

<211>51

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>209

actgtgggca agatcatgcc ctgagtattt ttaggcatag gacccgtgtc t 51

<210>210

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>210

aagataagtt tgcctttcct gttg 24

<210>211

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>211

cagtttgatg gtccactcat agaag 25

<210>212

<211>21

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>212

catctttggc aaggctcaca c 21

<210>213

<211>27

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>213

ttaaggccac gagatttgtg tcaggct 27

<210>214

<211>27

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>214

gtaaattccc actgcttctc tcagaag 27

<210>215

<211>25

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>215

cactggatct actgactctc cattc 25

<210>216

<211>24

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>216

ctcagtcttt agtgctggct ggcc 24

<210>217

<211>23

<212>DNA

<213>人工序列

<220>

<223>用于定量小鼠Aha1的bDNA探针序列

<400>217

ggagcagact tagccttgca agt 23

Claims

1.一种抑制细胞内人Aha基因表达的双链核糖核酸dsRNA，其中所述dsRNA包含至少两个彼此互补的序列，并且其中正义链包含第一序列，反义链包含第二序列，所述第二序列包含与编码Aha基因的mRNA的至少一部分基本互补的互补区，并且其中所述互补区的长度小于30个核苷酸，且其中所述dsRNA影响第二dsRNA的靶序列内编码Aha基因的mRNA的剪切，所述第二dsRNA具有SEQ ID NO：51的正义链，以及与该正义链互补且为SEQ ID NO：52的反义链。

2.如权利要求1所述的dsRNA，其中所述Aha基因为Aha1基因。

3.如权利要求2所述的dsRNA，其中所述Aha1基因为人类Aha1基因。

4.如权利要求1或2所述的dsRNA，其中所述dsRNA与表达Aha基因的细胞接触，则使所述细胞内所述Aha基因的表达至少抑制20％。

5.如权利要求4所述的dsRNA，其中在HeLa细胞和/或MLE12细胞中获得对Aha基因表达的至少20％的抑制。

6.如权利要求1或2所述的dsRNA，其中所述dsRNA为AL-DP-7324。

7.如权利要求6所述的dsRNA，其中所述dsRNA包含至少一个修饰核苷酸。

8.如权利要求7所述的dsRNA，其中所述修饰核苷酸选自下组：2’-O-甲基修饰核苷酸、包含5’-硫代磷酸酯基团的核苷酸以及与胆固醇衍生物或十二酸双癸酰胺基团连接的末端核苷酸。

9.如权利要求7所述的dsRNA，其中所述修饰核苷酸选自下组：2’-脱氧-2’-氟代修饰核苷酸、2’-脱氧-修饰核苷酸、锁核苷酸、无碱基核苷酸、2’-氨基-修饰核苷酸、2’-烷基-修饰核苷酸、吗啉代核苷酸、氨基磷酸酯和包含非天然碱基的核苷酸。

10.包含如以上权利要求中任一项所述的dsRNA的细胞。

11.抑制生物体内Aha基因表达的药物组合物，其包含dsRNA和药学上可接受的载体，其中所述dsRNA包含至少两条彼此互补的序列，并且其中正义链包含第一序列，反义链包含第二序列，所述第二序列包含与编码Aha基因的mRNA的至少一部分基本互补的互补区，并且其中所述互补区的长度小于30个核苷酸，且其中所述dsRNA影响第二dsRNA的靶序列内编码Aha基因的mRNA的剪切，所述第二dsRNA具有SEQ ID NO：51的正义链，以及与该正义链互补且为SEQ ID NO：52的反义链。

12.如权利要求11所述的药物组合物，其中所述Aha基因为Aha1基因。

13.如权利要求12所述的药物组合物，其中所述Aha1基因为人类Aha1基因。

14.如权利要求11或12所述的药物组合物，其中所述dsRNA与表达Aha基因的细胞接触，则使细胞内所述Aha基因的表达至少抑制20％。

15.如权利要求14所述的药物组合物，其中在HeLa细胞和/或MLE12细胞中获得对Aha基因表达的至少20％的抑制。

16.如权利要求11或12所述的药物组合物，其中所述dsRNA为AL-DP-7324。

17.如权利要求16所述的药物组合物，其中所述dsRNA包含至少一个修饰核苷酸。

18.如权利要求17所述的药物组合物，其中所述修饰核苷酸选自下组：2’-O-甲基修饰核苷酸、包含5’-硫代磷酸酯基团的核苷酸以及与胆固醇衍生物或十二酸双癸酰胺基团连接的末端核苷酸。

19.如权利要求17所述的药物组合物，其中所述修饰核苷酸选自下组：2’-脱氧-2’-氟代修饰核苷酸、2’-脱氧-修饰核苷酸、锁核苷酸、无碱基核苷酸、2’-氨基-修饰核苷酸、2’-烷基-修饰核苷酸、吗啉代核苷酸、氨基磷酸酯和包含非天然碱基的核苷酸。

20.体外抑制细胞内Aha基因表达的方法，所述方法包括：

(a)向所述细胞引入双链核糖核酸dsRNA，其中所述dsRNA包含至少两个彼此互补的序列，并且其中正义链包含第一序列，反义链包含第二序列，所述第二序列包含与编码Aha1的mRNA的至少一部分基本互补的互补区，并且其中所述互补区的长度小于30个核苷酸，且其中所述dsRNA影响第二dsRNA的靶序列内编码Aha基因的mRNA的剪切，所述第二dsRNA具有SEQ ID NO：51的正义链，以及与该正义链互补且为SEQ ID NO：52的反义链；和

(b)将步骤(a)得到的细胞维持足够长的时间以降解Aha基因的mRNA转录本，从而抑制所述细胞内Aha基因的表达。

21.如权利要求20所述的方法，其中所述基因为Aha1基因。

22.如权利要求21所述的方法，其中所述Aha1基因为人类Aha1基因。

23.如权利要求20或21所述的方法，其中所述dsRNA为AL-DP-7324。

24.治疗有效量或预防有效量的dsRNA在用于制备治疗、预防或控制由Aha表达介导的病理过程的药物的用途，其中所述dsRNA包含至少两个彼此互补的序列，并且其中正义链包含第一序列，反义链包含第二序列，所述第二序列包含与编码Aha1的mRNA的至少一部分基本互补的互补区，并且其中所述互补区的长度小于30个核苷酸，且其中所述dsRNA影响第二dsRNA的靶序列内编码Aha基因的mRNA的剪切，所述第二dsRNA具有SEQ ID NO：51的正义链，以及与该正义链互补且为SEQ ID NO：52的反义链。

25.如权利要求24所述的方法，其中所述dsRNA为AL-DP-7324。

26.抑制细胞内Aha基因表达的载体，其中所述载体包含可操作地连接于编码dsRNA中至少一条链的核苷酸序列的调控序列，其中所述dsRNA的一条链与编码Aha1的mRNA的至少一部分基本互补，并且其中所述dsRNA的长度小于30个碱基对，且其中所述dsRNA影响第二dsRNA的靶序列内编码Aha基因的mRNA的剪切，所述第二dsRNA具有SEQ ID NO：51的正义链，以及与该正义链互补且为SEQ ID NO：52的反义链。

27.包含如权利要求26所述载体的细胞。