CN101969973A

CN101969973A - 组织蛋白酶b抑制剂

Info

Publication number: CN101969973A
Application number: CN2009801090799A
Authority: CN
Inventors: 莱斯利·霍尔辛格
Original assignee: Virobay Inc
Current assignee: Virobay Inc
Priority date: 2008-02-07
Filing date: 2009-02-05
Publication date: 2011-02-09
Anticipated expiration: 2029-02-05
Also published as: JP5718647B2; US8211897B2; MX2010008371A; CA2713108A1; EA201001262A1; JP2015051985A; CN101969973B; EP2237793A4; EP2237793A1; WO2009100225A1; JP2011511089A; US20090203629A1; BRPI0907729A2

Abstract

本发明涉及一种采用式(I)化合物抑制组织蛋白酶B的方法。具体而言，本发明的化合物可用作治疗肿瘤侵入、转移、阿尔茨海默病、关节炎、炎性疾病如慢性和急性胰腺炎、炎性气道疾病、骨和关节疾病(包括骨质疏松症、骨关节炎、类风湿性关节炎)、银屑病和其他自身免疫疾病、肝纤维化(包括HCV相关的肝纤维化)、所有类型的脂肪变性(包括非酒精性脂肪性肝炎)和酒精相关的脂肪性肝炎、非酒精性脂肪肝病、各种形式的肺纤维化(包括特发性肺纤维化)、肺活检后间质性肺炎的病理诊断、肾纤维化、心脏纤维化、视网膜血管生成和眼内纤维化/胶质增生、硬皮病和系统性硬化症的治疗剂。式(I)的化合物也可用于治疗哺乳动物中患有HCV和纤维化、特别是肝纤维化的对象及确诊患有或有得HCV和肝纤维化风险的对象。

Description

组织蛋白酶B抑制剂

相关申请的交叉引用

本申请要求2008年2月7日提交的美国临时申请61/027,007的权益，所述临时申请通过引用整体并入本文。

对根据联邦资助的研究或开发取得发明的权利的声明

不适用。

通过光盘提交的“序列表”、表或电脑方法表

不适用。

发明背景

本发明涉及一种抑制组织蛋白酶B(一种溶酶体半胱氨酸蛋白酶)的方法。

半胱氨酸蛋白酶(如组织蛋白酶B、H、K、L、O和S)是一类特征为在酶的催化位点中存在半胱氨酸残基的肽酶。半胱氨酸蛋白酶与蛋白质的正常降解和加工有关。但是异常半胱氨酸蛋白酶活性例如因提高的表达或增强的活化而导致造成病理后果。在这点上，某些半胱氨酸蛋白酶与许多疾病状态有关，包括关节炎、肌营养不良、炎症、肿瘤侵入、肾小球肾炎、牙周病和异染性脑白质营养不良。例如，发现肿瘤中提高的组织蛋白酶B水平和酶的再分布，从而证明该酶在肿瘤侵入和转移中的作用。此外，异常的组织蛋白酶B活性涉及诸如阿尔茨海默病、关节炎、炎性疾病如慢性和急性胰腺炎、炎性气道疾病、骨和关节疾病(包括骨质疏松症、骨关节炎、类风湿性关节炎)、银屑病和其他自身免疫疾病的疾病状态。

组织蛋白酶B也与纤维化疾病(包括HCV相关的肝纤维化)、所有类型的脂肪变性(包括非酒精性脂肪性肝炎)和酒精相关的脂肪性肝炎、非酒精性脂肪肝病、各种形式的肺纤维化(包括特发性肺纤维化)、肺活检后间质性肺炎的病理诊断、肾纤维化、心脏纤维化、视网膜血管生成和眼内纤维化/胶质增生、硬皮病和系统性硬化症有关。

鉴于众多与组织蛋白酶B的正常活性或提高的表达相关的疾病或病况，能够抑制酶蛋白酶活性或表达的化合物将因此是有用的。

2006年6月28日提交的美国专利申请公开2007/0054864和美国专利申请60/878,544(二者的全部公开内容由此通过引用并入)中公开的化合物表现出具有抑制HCV复制的能力并因此可用于治疗丙型肝炎。

出人意料地，我们已经发现这些化合物及这些化合物的类似物也可用作半胱氨酸蛋白酶组织蛋白酶B的抑制剂。因此，这类化合物可用作治疗肿瘤侵入、转移、阿尔茨海默病、关节炎、炎性疾病如慢性和急性胰腺炎、炎性气道疾病、骨和关节疾病(包括骨质疏松症、骨关节炎、类风湿性关节炎)、银屑病和其他自身免疫疾病、肝纤维化(包括HCV相关的肝纤维化)、所有类型的脂肪变性(包括非酒精性脂肪性肝炎)和酒精相关的脂肪性肝炎、非酒精性脂肪肝病、各种形式的肺纤维化(包括特发性肺纤维化)、肺活检后间质性肺炎的病理诊断、肾纤维化、心脏纤维化、视网膜血管生成和眼内纤维化/胶质增生、硬皮病和系统性硬化症的治疗剂。

显然，单一化合物能够抑制哺乳动物中HCV复制和组织蛋白酶B是一种有利的性质，这是因为病毒(包括慢性HCV感染)促进炎症和肝损伤。作为该炎症和肝损伤的直接结果，HCV可以导致进行性肝纤维化，大量慢性HCV感染的患者最终发展为肝硬化。大部分与慢性HCV感染有关的严重并发症由肝硬化引起。用能够抑制HCV复制并直接减轻纤维化疾病的这类化合物治疗对象将改善临床结果。

发明简述

在一个方面，本发明涉及一种抑制哺乳动物中组织蛋白酶B活性的方法，包括向哺乳动物施用治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

E选自-COCONR⁵R⁶、-COCF₂CONR⁵R⁶、-COCF₂C(O)OR⁵、-COCOR⁷、-COCF₂R⁸、-COR⁹、-COCOOR¹⁰、-CONR¹¹R¹²和-B(OR¹³)₂，其中R⁵、R⁶、R⁷、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²和各个R¹³独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、杂环基和杂环基烷基，R⁸选自卤素、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、杂环基和杂环基烷基，E中的脂肪族、脂环族和芳族基团任选被独立地选自羟基、烷氧基、卤代烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、烷硫基、芳硫基、杂芳硫基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、羧基、烷氧基羰基、烯氧基羰基、炔氧基羰基、烯基氨基羰基、酰基氨基、氨基羰基、卤素和氰基的一个、两个或三个R^a取代，R^a中的芳族或脂环族环任选被独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、羧基和羧基烷基的一个、两个或三个取代基取代；任选地，R⁵和R⁶、R¹¹和R¹²可和与其相连的氮结合以形成五到七元环；

R¹选自烷基、卤代烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、杂环基和杂环基烷基，其中R¹中的脂肪族、脂环族和芳族基团任选被独立地选自羟基、烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、烷硫基、芳硫基、杂芳硫基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、羧基、烷氧基羰基、酰基氨基、氨基羰基、卤素和氰基的一个或两个R^b取代，R^b中的芳族或脂环族环任选被独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、羧基和羧基烷基的一个、两个或三个取代基取代；

X选自-O-、-NR¹⁴-、-S-、-SO-和-SO₂-；

R³选自烷基、卤代烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、杂环基和杂环基烷基，其中R³中的脂肪族、脂环族和芳族基团任选被独立地选自羟基、烷氧基、卤代烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、烷硫基、芳硫基、杂芳硫基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、羧基、烷氧基羰基、酰基氨基、氨基羰基、卤素和氰基的一个或两个R^c取代，R^c中的芳族或脂环族环任选被独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、羧基和羧基烷基的一个、两个或三个取代基取代；

Y选自-C(O)NH-、-OC(O)NH-、-NR¹⁴-C(O)NH-和-NR¹⁴C(O)O-。对于X和Y中的每一个，当存在时各个R¹⁴独立地选自氢和烷基，所述烷基任选被卤素、羟基、烷氧基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、芳基、杂芳基或杂环基取代，各个芳基、杂芳基和杂环基任选被独立地选自卤素和烷基的一个、两个或三个取代基取代；

R²选自杂芳基和-CO-(稠合杂环基)环，其中所述杂芳基和稠合杂环基环任选被独立地选自氢、烷基、环烷基、烯基、炔基、烷硫基、羟基、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、羧基、羧基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、氨基烷基、烷基磺酰基、烷基羰基、芳基、芳烷基、芳基磺酰基、芳基羰基、芳氧基羰基、氨基磺酰基、氨基羰基、杂芳基、杂芳烷基、杂芳基磺酰基、杂芳基羰基、杂芳氧基羰基、杂环基、杂环基烷基、杂环基磺酰基、杂环基羰基、杂环氧基羰基、氨基、单取代氨基和二取代氨基的一个、两个、三个或四个R^d取代，或当两个R^d位于相邻的碳原子上时，它们与其所连接的碳原子一起形成包含选自氮、氧、硫和-SO₂-的一个或两个杂原子的四、五或六元杂环基环，所述杂环基环任选被一个或两个烷基取代；R^d中的芳族或脂环族环任选被独立地选自烷基、烷基羰基氨基、烷氧基羰基氨基、环烷基、环烷基烷基、环烷氧基羰基氨基、环烷基烷氧基羰基氨基、硝基、烷氧基、环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羧基、烷氧基羰基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、酰基氨基和脲基的一个、两个或三个R^e取代，R^e中的环烷基和环烷基烷基任选被一个、两个或三个烷基取代；和

R⁴选自烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、杂环基和杂环基烷基；其中R⁴中的任何芳族或脂环族环任选被独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、羧基、羧基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、氨基烷基、烷基磺酰基、烷基羰基、芳基、芳烷基、芳基磺酰基、芳基羰基、芳氧基羰基、氨基磺酰基、氨基羰基、杂芳基、杂芳烷基、杂芳基磺酰基、杂芳基羰基、杂芳氧基羰基、杂环基、杂环基烷基、杂环基磺酰基、杂环基羰基、杂环氧基羰基、单取代氨基和二取代氨基的一个、两个或三个R^f取代，R^f中的芳族或脂环族环任选被独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羧基、烷氧基羰基、单取代氨基、二取代氨基和酰基氨基的一个、两个或三个取代基取代。

为清楚起见，特指出Y基团与R⁴基团的连接位置如下：R⁴C(O)NH-、R⁴OC(O)NH-、R⁴NR¹⁴-C(O)NH-或R⁴NR¹⁴C(O)O-。

在第二个方面，本发明涉及一种抑制哺乳动物中组织蛋白酶B活性的方法，包括向哺乳动物施用治疗有效量式(I)化合物或其药学上可接受的盐与一种或多种药学上可接受的赋形剂。

在第三个方面，本发明涉及一种治疗诊断患有HCV和纤维化的对象的方法，包括向所述哺乳动物施用有效量适于治疗HCV和纤维化的式(I)化合物。特别地，所述纤维化病况为肝纤维化。所述治疗方法也可用于治疗确诊患有HCV和肝纤维化的对象或有得HCV和肝纤维化风险的对象。

附图说明

图1示出测量在基于细胞活性的探针测定中鉴定为化合物1和化合物2的化合物的效力。

图2A和2B显示鉴定为化合物1的化合物在肝纤维化模型中使血浆ALT和AST降低。

图3显示鉴定为化合物1的化合物在肝纤维化模型中使肝羟脯氨酸水平降低。

发明详述

定义

除非另有指出，否则本说明书和权利要求书中使用的如下术语为本申请而定义并具有如下含义。

“脂环族”指特征在于碳原子排列成非芳族闭环结构(例如如本文中所定义的环烷基和杂环基环)的部分。

“脂肪族”指如本文中所定义的烷基(alkyl)、烯基或炔基。

除非另有指出，否则“烷基”本身指含一到八个碳原子的直链或支链饱和脂肪族基团，例如烷基包括甲基、乙基、丙基、异丙基、丁基、仲丁基、异丁基、叔丁基等。

“烷基羰基氨基”指-NHC(O)R基团，其中R为如上所定义的烷基，例如甲基羰基氨基、乙基羰基氨基等。

除非另有指出，否则“亚烷基”指具有一到六个碳原子数的直链或支链饱和脂肪族二价基团，例如亚甲基(-CH₂-)、亚乙基(-CH₂CH₂-)、三亚甲基(-CH₂CH₂CH₂-)、四亚甲基(-CH₂CH₂CH₂CH₂-)、2-甲基四亚甲基(-CH₂CH(CH₃)CH₂CH₂-)、五亚甲基(-CH₂CH₂CH₂CH₂CH₂-)等。

“烯基”指包含一个或两个双键的具有二到六个碳原子的直链一价烃基或具有三到六个碳原子的支链一价烃基，例如乙烯基、丙烯基(包括所有异构体形式)、1-甲基丙烯基、丁烯基(包括所有异构体形式)或戊烯基(包括所有异构体形式)等。

“烯氧基羰基”指-C(O)OR基团，其中R为如上所定义的烯基，例如3-丙烯-1-基氧基羰基等。

“烯基氨基羰基”指-C(O)NHR基团，其中R为如上所定义的烯基，例如3-丙烯-1-基氨基羰基等。

“炔基”指包含一个或两个三键的具有二到六个碳原子的直链一价烃基或具有三到六个碳原子的支链一价烃基，例如乙炔基、丙炔基(包括所有异构体形式)、1-甲基丙炔基、丁炔基(包括所有异构体形式)或戊炔基(包括所有异构体形式)等。

“炔氧基羰基”指-C(O)OR基团，其中R为如上所定义的炔基，例如3-丙炔-1-基氧基羰基等。

“烷硫基”指-SR基团，其中R为如本文中所定义的烷基，例如甲硫基、乙硫基、丙硫基或丁硫基等。

“烷基磺酰基”指-SO₂R基团，其中R为如本文中所定义的烷基，例如甲基磺酰基、乙基磺酰基等。

“烷氧基”指-OR基团，其中R为如上所定义的烷基，例如甲氧基、乙氧基等。

“烷氧基羰基氨基”指-NHC(O)OR基团，其中R为如上所定义的烷基，例如甲氧基羰基氨基、乙氧基羰基氨基等。

“烷氧基烷基”指被至少一个如上所定义的烷氧基、优选一个或两个如上所定义的烷氧基取代的具有一到六个碳原子的直链一价烃基或具有三到六个碳的支链一价烃基，例如2-甲氧基-乙基，1-、2-或3-甲氧基丙基，2-乙氧基乙基等。

“烷氧基羰基”指-C(O)OR基团，其中R为如上所定义的烷基，例如甲氧基羰基、乙氧基羰基等。

“氨基”指-NH₂基团。

“烷基氨基”指基团-NHR，其中R为如本文中所定义的烷基，例如甲基氨基，乙基氨基，正-、异-丙基氨基，正-、异-、叔-丁基氨基等。

“氨基烷基”指被至少一个、优选一个或两个-NRR’取代的具有一到六个碳原子的直链一价烃基或具有三到六个碳的支链一价烃基，其中R为氢、如本文中所定义的烷基、酰基、羟基烷基、烷氧基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基或杂环基烷基，R’为氢、如本文中所定义的烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、杂环基烷基、环烷基、环烷基烷基、氨基羰基或氨基磺酰基，例如氨基甲基、甲基氨基乙基、二甲基氨基乙基、1，3-二氨基丙基、乙酰氨基丙基等。

“酰基”指-COR基团，其中R为氢、如本文中所定义的烷基、卤代烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基或杂环基，例如甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基、苯甲酰基、哌嗪-1-基羰基等。当R为烷基时，其在本申请中称为烷基羰基。当R为芳基时，其在本申请中称为芳基羰基。当R为杂芳基时，其在本文中称为杂芳基羰基。当R为杂环基时，其在本申请中称为杂环基羰基。

“酰基氨基”指-NRCOR’基团，其中R为氢或如本文中所定义的烷基，R’为氢、如本文中所定义的烷基、卤代烷基、环烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基或杂环基，例如甲酰基、乙酰基、三氟乙酰基、苯甲酰基、哌嗪-1-基羰基等。

“氨基羰基”指-CONRR’基团，其中R和R’独立地选自氢、如本文中所定义的烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基或杂环基烷基，或R和R’和与其相连的氮原子一起形成如本文中所定义的杂环氨基。

“氨基磺酰基”指-SO₂NRR’基团，其中R和R’独立地选自氢、如本文中所定义的烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基或杂环基烷基，或R和R’和与其相连的氮原子一起形成如本文中所定义的杂环氨基。

“动物”包括人、非人哺乳动物(如狗、猫、兔、牛、马、绵羊、山羊、猪、鹿等)和非哺乳动物(如禽类等)。

“芳族”指其中组成原子构成不饱和环体系的结构部分，所述环体系中所有原子均是sp²杂化的且π电子总数等于4n+2。

“芳基”指含6-10个环碳原子的单环或稠合双环环集合，其中每个环都是芳族的，例如苯基或萘基。

“芳氧基”指-O-R基团，其中R为如上所定义的芳基，例如苯氧基、萘氧基等。

“芳氧基羰基”指-C(O)OR基团，其中R为如上所定义的芳基，例如苯氧基羰基、萘氧基羰基等。

“芳烷基”指-(亚烷基)-R基团，其中R为如上所定义的芳基，例如苄基、苯乙基等。

“芳硫基”指-SR基团，其中R为如本文中所定义的芳基，例如苯硫基或萘硫基。

“芳基磺酰基”指-SO₂R基团，其中R为如本文中所定义的芳基，例如苯基磺酰基或萘基磺酰基。

“羧基”指-C(O)OH基团。

“羧基烷基”指被至少一个、优选一个或两个-C(O)OH基团取代的如本文中所定义的烷基，例如羧甲基，羧乙基，1-、2-或3-羧丙基等。

“环烷基”指含三到八个环碳原子的一价饱和单环状环，例如环丙基、环丁基、环戊基、环己基等。

“环烷基烷基”指-(亚烷基)-R基团，其中R为如上所定义的环烷基，例如环丙基甲基、环丁基乙基、环丁基甲基等。

“环烷氧基”指-OR基团，其中R为如上所定义的环烷基，例如环丙氧基、环戊氧基、环己氧基等。

“环烷氧基羰基氨基”指-NHC(O)OR基团，其中R为如上所定义的环烷基，例如环丙氧基羰基氨基、环戊氧基羰基氨基等。

“环烷基烷氧基羰基氨基”指-NHC(O)OR基团，其中R为如上所定义的环烷基烷基，例如环丙基甲氧基羰基氨基、环戊基甲氧基羰基氨基等。

“疾病”具体包括动物或其部分的任何不健康状况，并包括可由应用于动物的医学或兽医疗法所引起或所伴随的不健康状况，即所述疗法的“副作用”。

“二烷基氨基”指基团-NRR’，其中R和R’独立地为如本文中所定义的烷基，例如二甲基氨基、二乙基氨基、N，N-甲基丙基氨基或N，N-甲基乙基氨基等。

“二取代氨基”指基团-NRR’，其中R和R’独立地选自如本文中所定义的烷基、环烷基、环烷基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、氨基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基，例如二甲基氨基、二乙基氨基、N，N-甲基丙基氨基或N，N-甲基乙基氨基、甲基苯基氨基等。二烷基氨基是二取代氨基的子集。

“稠合杂环基”指稠合到如本文中所定义的芳基或杂芳基环的如本文中所定义的杂环基，例如2，3-二氢异吲哚-1-基、1，2，3，4-四氢异喹啉-1-基等。

“卤素”指氟、氯、溴或碘。

“卤代烷基”指被一个或多个、优选一到七个如本申请中所定义的“卤素”原子取代的如上所定义的烷基。卤代烷基包括一卤代烷基、二卤代烷基、三卤代烷基、全卤代烷基等，例如氯甲基、二氯甲基、二氟甲基、三氟甲基、2，2，2-三氟乙基、全氟乙基、2，2，2-三氟-1，1-二氯乙基等。

“卤代烷氧基”指-OR基团，其中R为如上所定义的卤代烷基，例如三氟甲氧基、2，2，2-三氟乙氧基、二氟甲氧基等。

“杂芳基”作为基团或基团的一部分是指其中一个或多个、优选一个、两个或三个环原子选自氮、氧或硫，其余环原子为碳的具有5-10个环原子的芳族单环或双环部分。代表性的杂芳基环包括但不限于吡咯基、呋喃基、噻吩基、

唑基、异

唑基、噻唑基、咪唑基、三唑基、四唑基、吡啶基、嘧啶基、吡嗪基、哒嗪基、吲哚基、苯并呋喃基、苯并噻吩基、苯并咪唑基、喹啉基、异喹啉基、喹唑啉基、喹喔啉基、吡唑基、噻吩并吡啶基(例如噻吩并[3，2-b]吡啶基、噻吩并[2，3-b]吡啶基等)、噻吩并嘧啶基(例如噻吩并[3，2-d]嘧啶基或噻吩并[2，3-d]嘧啶基等)。

“杂芳氧基”指-O-R基团，其中R为如上所定义的杂芳基，例如呋喃氧基、吡啶氧基、吲哚氧基等。

“杂芳氧基羰基”指-C(O)O-R基团，其中R为如上所定义的杂芳基，例如吡啶氧基羰基、嘧啶氧基羰基等。

“杂芳烷基”指-(亚烷基)-R基团，其中R为如上所定义的杂芳基，例如吡啶基甲基、1-或2-呋喃基乙基、咪唑基甲基等。

“杂芳烷氧基羰基”指-C(O)O-R基团，其中R为如上所定义的杂芳烷基，例如吡啶基甲氧基羰基、嘧啶基甲氧基羰基等。

“杂芳硫基”指-SR基团，其中R为如本文中所定义的杂芳基，例如吡啶硫基、呋喃硫基、噻吩硫基等。

“杂芳基磺酰基”指-SO₂R基团，其中R为如本文中所定义的杂芳基，例如吡啶基磺酰基、噻吩基磺酰基等。

“杂环基”指具有4、5、6或7个碳环原子的饱和或部分不饱和单或双环基团，其中一个或多个、优选一个、两个或三个环碳原子被选自-N＝、-N-、-O-、-S-、-SO-或-S(O)₂的杂原子替代，一个或两个环碳原子任选被酮基(-CO-)基团替代。杂环基环任选稠合到如本文中所定义的环烷基、芳基或杂芳基环上。代表性的实例包括但不限于咪唑烷基、吗啉基、硫代吗啉基、硫代吗啉-1-氧化物、硫代吗啉-1，1-二氧化物、四氢呋喃基、四氢吡喃基、四氢硫代吡喃基、1-氧代-四氢硫代吡喃基、1，1-二氧代四硫代吡喃基、吲哚啉基、哌嗪基、哌啶基、吡咯烷基、吡咯啉基、奎宁环基、3，4-二氢异喹啉基、二氢吲哚基等。当杂环基基团包含至少一个氮环原子时，其在本文中称为“杂环氨基”并为如上所定义的杂环基基团的子集。

“杂环基烷基”指-(亚烷基)-R基团，其中R为如上所定义的杂环基，例如吡咯烷基甲基、四氢呋喃基乙基、吡啶基甲基哌啶基甲基等。

“杂环氧基羰基”指-C(O)OR基团，其中R为如上所定义的杂环基，例如哌啶氧基羰基、四氢呋喃氧基羰基等。

“杂环基磺酰基”指-SO₂R基团，其中R为如本文中所定义的杂环基，例如哌啶-1-基磺酰基、吡咯烷-1-基磺酰基等。

“羟基”指-OH基团。

“羟基烷基”指被一个或两个羟基取代的具有一到六个碳原子的直链一价烃基或具有三到六个碳的支链一价烃基，条件是如果存在两个羟基，则其不同时在同一个碳原子上。代表性的实例包括但不限于羟基甲基、2-羟基乙基、2-羟基丙基、3-羟基丙基、1-(羟基甲基)-2-甲基丙基、2-羟基丁基、3-羟基丁基、4-羟基丁基、2，3-二羟基丙基、1-(羟基甲基)-2-羟基乙基、2，3-二羟基丁基、3，4-二羟基丁基和2-(羟基甲基)-3-羟基丙基，优选2-羟基乙基、2，3-二羟基丙基和1-(羟基甲基)-2-羟基乙基。

“异构体”指具有相同的分子式但在性质或其原子连接顺序上或在其原子空间排列上不同的式(I)化合物。在其原子空间排列上不同的异构体称为“立体异构体”。彼此不为镜像的立体异构体称为“非对映体”，镜像不可重叠的立体异构体称为“对映体”或有时称为“光学异构体”。与四个不同的取代基相连的碳原子称为“手性中心”。具有一个手性中心的具有相反手性的两种对映体形式的混合物称为“外消旋混合物”。具有超过一个手性中心的化合物具有2^n-1个对映体对，其中n为手性中心数。具有超过一个手性中心的化合物可以以单独的非对映体或以非对映体的混合物(称为“非对映体混合物”)存在。当存在一个手性中心时，立体异构体的特征可以在于该手性中心的绝对构型。绝对构型指与手性中心相连的取代基的空间排列。对映体的特征在于其手性中心的绝对构型并由Cahn-Ingold-Prelog的R-和S-排序规则描述。立体化学命名的惯例、确定立体化学的方法及立体异构体的分离是本领域熟知的(参见例如“Advanced Organic Chemistry”，4th edition，March，Jerry，John Wiley&Sons，New York，1992)。应理解，本申请中为描述式(I)化合物所使用的名称和说明意在涵盖所有可能的立体异构体。

“单取代氨基”指基团-NHR，其中R选自如本文中所定义的烷基、环烷基、环烷基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、氨基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基或杂芳烷基，例如甲基氨基、乙基氨基、丙基氨基、苯基氨基、苄基氨基等。

“任选的”或“任选地”或“可以是”指后面描述的事件或情况可以发生或可以不发生，该描述包括其中所述事件或情况发生的情形及其中所述事件或情况不发生的情形。例如，表述“其中R^a中的芳环任选被独立地选自烷基的一个或两个取代基取代”指在本发明的范围内该芳环可以被烷基取代或可以不被烷基取代。

本发明还涉及式(I)化合物的N-氧化物衍生物。N-氧化物衍生物指其中氮原子处于氧化态(即N→O)(如吡啶N-氧化物)并具有所需药学活性的式(I)化合物。

疾病的“病理学”指疾病的本质、原因和发展以及疾病过程所导致的结构和功能改变。

“药学上可接受的”指其可用于制备通常安全、无毒且不是生物学上或其他方面上不希望的药物组合物，并包括兽医用途及人药用途上可接受的。

“药学上可接受的盐”指如上所定义的药学上可接受并具有所需药理活性的式(I)化合物的盐。这类盐包括与无机酸如盐酸、氢溴酸、硫酸、硝酸、磷酸等形成的酸加成盐；或与有机酸如乙酸、丙酸、己酸、庚酸、环戊烷丙酸、乙醇酸、丙酮酸、乳酸、丙二酸、琥珀酸、苹果酸、马来酸、富马酸、酒石酸、柠檬酸、苯甲酸、邻-(4-羟基苯甲酰)苯甲酸、肉桂酸、扁桃酸、甲基磺酸、乙烷磺酸、1，2-乙烷二磺酸、2-羟基乙烷磺酸、苯磺酸、对-氯苯磺酸、2-萘磺酸、对-甲苯磺酸、樟脑磺酸、4-甲基双环[2.2.2]辛-2-烯-1-羧酸、葡庚糖酸、4，4’-亚甲基双(3-羟基-2-烯-1-羧酸)、3-苯基丙酸、三甲基乙酸、叔丁基乙酸、月桂基硫酸、葡糖酸、谷氨酸、羟基萘甲酸、水杨酸、硬脂酸、黏康酸等形成的酸加成盐。

药学上可接受的盐还包括碱加成盐，其可在当所存在的酸性质子能够与无机或有机碱反应时形成。可接受的无机碱包括氢氧化钠、碳酸钠、氢氧化钾、氢氧化铝和氢氧化钙。可接受的有机碱包括乙醇胺、二乙醇胺、三乙醇胺、三羟甲基氨基甲烷、N-甲基葡糖胺等。

本发明还涉及式(I)化合物的前药。前药指在体内可通过代谢途径(例如通过水解)转化为式(I)化合物的化合物。例如，含羟基的式(I)化合物的酯在体内可通过水解转化为母体分子。或者，含羧基的式(I)化合物的酯在体内可通过水解转化为母体分子。含羟基的式(I)化合物的适宜的酯为例如乙酸酯、柠檬酸酯、乳酸酯、酒石酸酯、丙二酸酯、草酸酯、水杨酸酯、丙酸酯、琥珀酸酯、富马酸酯、马来酸酯、亚甲基-双-βb-羟基萘甲酸酯、龙胆酸酯、羟乙基磺酸酯、二-对-甲苯甲酰酒石酸酯、甲基磺酸酯、乙烷磺酸酯、苯磺酸酯、对-甲苯磺酸酯、环己基氨基磺酸酯和奎尼酸酯。含羧基的式(I)化合物的适宜的酯为例如Leinweber，F.J.Drug Metab.Res.，1987，18，第379页中描述的那些。尤其有用的一类含羟基的式(I)化合物的酯可自选自Bundgaard et al.，J.Med.Chem.，1989，32，pp 2503-2507所述那些的酸部分形成，包括取代的(氨基甲基)-苯甲酸酯如二烷基氨基-甲基苯甲酸酯，其中两个烷基基团可连接在一起和/或被氧原子或任选取代的氮原子如烷基化氮原子所中断，更尤其是(吗啉基-甲基)苯甲酸酯如3-或4-(吗啉基甲基)苯甲酸酯和(4-烷基哌嗪-1-基)苯甲酸酯如3-或4-(4-烷基哌嗪-1-基)苯甲酸酯。应理解，本申请中为描述式(I)化合物所使用的名称和描述意在涵盖其所有可能的前药。

“被保护的衍生物”指其中反应位点被保护基所封闭的式(I)化合物的衍生物。式(I)化合物的被保护的衍生物可用于制备式(I)化合物或其本身可以是活性的组织蛋白酶S抑制剂。适宜的保护基的全面清单可见于T.W.Greene，Protective Groups in Organic Synthesis，3rd edition，John Wiley & Sons，Inc.1999。应理解，本申请中为描述式(I)化合物所使用的名称和描述意在涵盖其所有可能的被保护的衍生物。

“治疗有效量”指当向动物施用以治疗疾病时足以实现对疾病的这种治疗的量。

“治疗”指本发明化合物的任何施用，包括：

(1)预防疾病在可能易于患所述疾病但尚未经历或表现出所述疾病的病变或症状的动物中发生，

(2)抑制正在经历或表现出所述疾病的病变或症状的动物中的所述疾病(即阻止所述病变和/或症状的进一步发展)，或

(3)缓解正在经历或表现出所述疾病的病变或症状的动物中的所述疾病(即逆转病变和/或症状)。

“脲基”指基团-NHCONRR’，其中R为氢或烷基，R’为氢、烷基、环烷基或环烷基烷基。

本发明化合物的名称由ChemBioDraw Ultra版本11生成。

如上所述，式(I)化合物可用于治疗哺乳动物、特别是人对象中由组织蛋白酶B介导的HCV和疾病状态。应指出，由于炎症和肝损伤，慢性HCV感染可以导致进行性肝纤维化和最终肝硬化，患HCV的患者有发展为进行性纤维化肝病的风险。抑制HCV病毒复制的化合物因此将抑制肝的进一步纤维化。但这样的化合物不能治疗纤维化本身而仅减少进一步肝损伤的根源，而依靠其抑制组织蛋白酶B活性的能力，本发明化合物不仅抑制HCV而且逆转或减轻先前由伴随的HCV感染所导致的既有肝纤维化的严重性，这无疑是有利的。与仅抑制HCV病毒复制的化合物不同，本发明化合物依靠其抑制组织蛋白酶B的能力还将有利地治疗与HCV感染不相关而与其他慢性肝损伤(例如但不限于肝脂质变性)相关的肝纤维化。还应指出，本发明化合物不仅可用于治疗确诊患有HCV和肝纤维化的对象，而且可用于治疗借助纤维化的遗传标记或生物化学替代标记认为有发展为肝纤维化风险的对象。

本发明的优选实施方案

在一个实施方案中，本发明涉及一种抑制哺乳动物中组织蛋白酶B活性的方法，包括施用治疗有效量的式(I)化合物，特别是其中R²为杂芳基的那些式(I)化合物，包括其中R²为含1、2或3个选自氮、氧和硫的杂原子的9或10元双环杂芳基的那些，尤其是其中所述双环任选被烷基、烷氧基或杂芳基取代。

在所述集合内，优选的子集包括其中E为-C(O)C(O)NR⁵R⁶的那些化合物，特别是其中R⁵为氢、R⁶为烷基或环烷基，尤其是其中R⁶为环丙基或环丁基。

第二优选的子集包括其中R¹为氢、烷基、环烷基或环烷基烷基的那些化合物，特别是其中R¹为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丙基甲基、环丁基或环丁基甲基。

第三优选的子集包括其中R³为氢、烷基、环烷基或环烷基烷基的那些化合物，特别是其中R³为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基或叔丁基。

第四优选的子集包括其中X为氧、Y为-NR¹⁴C(O)NH-的那些化合物，特别是其中R¹⁴为氢。

第五优选的子集包括其中R⁴为烷基、环烷基或环烷基烷基的那些化合物，特别是其中R⁴为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丙基甲基、环丁基或环丁基甲基，尤其是其中R⁴为叔丁基。

在第二个方面，本发明涉及一种治疗诊断患有HCV和纤维化的对象的方法，包括向所述哺乳动物施用有效量适于治疗HCV和纤维化的式(I)化合物：特别地，所述纤维化病况为肝纤维化。所述治疗方法也可用于治疗确诊患有HCV和肝纤维化的对象或有得HCV和肝纤维化风险的对象。在优选的实施方案中，式(I)化合物选自上面确认为优选实施方案的实施方案。

目前，特别优选的化合物包括：

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺；

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(6-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-2-羧酰胺；

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(6-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-2-羧酰胺；

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(6-乙氧基异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-2-羧酰胺；

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(6-乙氧基异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-2-羧酰胺；

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代庚烷-3-基)-4-(6-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-2-羧酰胺；

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(6-甲氧基-3-甲基异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-2-羧酰胺；

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺；

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(2-(吡啶-2-基)噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺；

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(5-(吡啶-2-基)噻吩并[3，2-b]吡啶-7-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺；

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(2-(吡啶-2-基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺；

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(2-(1，3-二甲基-1H-吡唑-5-基)噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺；

(2S，4R)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-1-((S)-2-(3-环丙基甲基)脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺；和

(2S，4R)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-1-((S)-3，3-二甲基-2-(3-新戊基脲基)丁酰基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺。

一般合成方案

本发明的化合物可通过下面所示的反应方案中描述的方法制备。

在这些化合物的制备中使用的原料和试剂可从商业供应商如Aldrich Chemical Co.，(Milwaukee，Wis.)、Bachem(Torrance，Calif.)或Sigma(St.Louis，Mo.)得到或可通过本领域技术人员熟知的方法按参考文献如Fieser and Fieser′s Reagents for Organic Synthesis，Volumes 1-17(John Wiley and Sons，1991)；Rodd′s Chemistry of Carbon Compounds，Volumes 1-5 and Supplementals(Elsevier Science Publishers，1989)；Organic Reactions，Volumes 1-40(John Wiley and Sons，1991)，March′s Advanced Organic Chemistry，(John Wiley and Sons，4th Edition)和Larock′s Comprehensive Organic Transformations(VCH Publishers Inc.，1989)中给出的方法制备。这些方案仅是可用来合成本发明化合物的一些方法的示意，阅读了本公开内容的本领域技术人员可对这些方案提出和作出各种改变。

如果需要，可采用常规技术对原料和反应中间体进行分离和纯化，所述常规技术包括但不限于过滤、蒸馏、结晶、层析等。这类材料可采用常规手段包括物理常数和光谱数据进行表征。

除非有相反规定，否则本文中描述的反应在大气压力下于约-78℃到约150℃、更优选约0℃到约125℃的温度范围内、最优选在约室温(或环境温度)如约20℃下进行。

在下文所述的反应中，当希望反应性官能团如羟基、氨基、亚氨基、硫基或羧基在最终产物中时，可能有必要保护这些反应性官能团以避免其不合需要地参与反应。可按标准方法使用常规保护基，例如参见T.W.Greene and P.G.M.Wuts in“Protective Groups in Organic Chemistry”John Wiley and Sons，1999。

其中Y为-OC(O)NH-，E为-COCONR⁵R⁶，X、R¹、R²、R³和R⁴为如发明简述中所定义的式(I)化合物可按如下反应方案1进行制备。

反应方案1

其中PG为适宜的羧基保护基优选甲基且X和R²为如发明简述中所定义的式1吡咯烷化合物中，氨基保护基PG₁如叔丁氧基羰基、苄氧基羰基等的去保护得到式2化合物。氨基保护基所采用的反应条件取决于保护基的性质。例如如果PG₁为叔丁氧基羰基，则其通过用酸如盐酸在有机溶剂如二氧六环、四氢呋喃等中处理1来去除。其他适宜氮保护基的添加和去除的反应条件可见于Greene，T.W.；and Wuts，P.G.M.；Protecting Groups in Organic Synthesis；John Wiley & Sons，Inc.1999中。式I化合物可通过本领域熟知的方法制备。一些这类方法描述于US 2003191067、US 6608027、US 6268207、US 6404397、US 6268207和WO 2005/028501中，其公开内容通过引用整体并入本文。

在肽偶联反应条件下用其中R³为如发明简述中所定义的式3氨基酸处理化合物2得到式4化合物，其中Y为-O-C(O)NH-，R⁴为烷基。该反应通常在适宜的偶联剂如苯并三唑-1-基氧基三吡咯烷基六氟磷酸盐(PyBOP

)、O-苯并三唑-1-基-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(HBTU)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)或1，3-二环己基-碳二亚胺(DCC)的存在下，任选在1-羟基-苯并三唑(HOBT)和碱如N，N-二异丙基乙胺、三乙胺、N-甲基吗啉等的存在下进行。该反应通常在20-30℃下、优选在约25℃下进行。适宜的反应溶剂为惰性有机溶剂如卤代有机溶剂(如二氯甲烷、氯仿等)、乙腈、N，N-二甲基甲酰胺、醚性溶剂如四氢呋喃、二氧六环等或其混合物。式3的氨基酸是商购的或它们可通过本领域熟知的方法制备。

在含水碱性水解反应条件下化合物4(PG＝烷基)中酯基团水解得到式5化合物。该反应通常采用碳酸铯、氢氧化锂、氢氧化钠等在水性醇如甲醇、乙醇等中进行。

在如上所述肽偶联反应条件下用式6的α-羟基氨基羧酰胺处理化合物5得到式7化合物。式6化合物可通过本领域熟知的方法制备，其中一些在执行实施例(下面的参考例A和B)中有详细描述。化合物6也可由化合物17(其合成在下面的方案3中描述)制备。简单地说，在将氨基基团适当保护(例如保护为t-Boc氨基甲酸酯)后，化合物17的酯基在碱性水解反应条件下被除去以形成相应的α-羟基酸。在偶联反应条件下用式NHR⁵R⁶的胺处理所述酸、随后进行所述胺保护基的酸催化水解得到式6化合物。

作为替代方案，上述偶联步骤可通过首先将5转化为活性酸衍生物如酰卤、琥珀酰亚胺酯等，然后使其与式6的α-羟基酮酰胺反应来进行。该反应中所采用的条件取决于活性酸衍生物的性质。例如，如果其为5的酰氯衍生物，则反应在适宜的碱(如三乙胺、二异丙基乙胺、吡啶等)的存在下进行。适宜的反应溶剂为极性有机溶剂如乙腈、N，N-二甲基甲酰胺、二氯甲烷或其任何适宜的混合物。用适宜的氧化剂如戴斯-马丁氧化剂氧化化合物8中的羟基得到式(I)化合物。

其中Y为-NHC(O)NH-，E为-COCONR⁵R⁶，X、R¹、R²、R³和R⁴为如发明简述中所定义的式(I)化合物可按如下反应方案2制备。

反应方案2

在酸水解反应条件下化合物4中Boc基团的去除得到式9的氨基化合物，其与烷基异氰酸酯反应即得到式10的脲基化合物。该反应在有机碱如三乙胺、吡啶等的存在下在适宜的有机溶剂如二氯甲烷等中进行。所述脲基化合物也可通过本领域熟知的其他方法如化合物9与氨基甲酰卤的反应制备。然后化合物10通过按上面方案1中所述进行而转化为式(I)化合物。同样，其中R⁴不为烷基的式(I)化合物可通过以芳基-、杂芳基-或芳烷基-异氰酸酯或氨基甲酰卤替代烷基异氰酸酯制得。

同样，其中Y为-CONH-或-SO₂NH-的式(I)化合物可通过使化合物9分别与酰化剂或式R⁴COL在本领域熟知的条件下反应制备。

作为替代方案，式(I)化合物可由化合物4通过去除酸保护基以得到相应的酸来制备。使所述酸与α-羟基氨基羧酰胺6反应，然后去除所得产物中的Boc[烷基OC(O)-]基团以得到游离氨基化合物。该氨基化合物与烷基异氰酸酯或氨基甲酰卤反应产生化合物12，然后化合物12在如上所述羟基氧化时转化为式(I)化合物。

其中E为-COCOOR¹⁰，X、Y、R¹、R²、R³、R⁴和R¹⁰为如发明简述中所定义的式(I)化合物可按如下反应方案3制备。

反应方案3

在本领域熟知的条件下用N，O-二甲胺处理式13的N-Boc-保护的氨基酸化合物得到式14的Weinreb酰胺化合物。式13的化合物可由市购的氨基酸与叔丁氧基羰基酸酐在本领域熟知的条件下制备。也可使用其他适宜的氨基保护基。在适宜的有机溶剂如四氢呋喃等中用适宜的还原剂如氢化铝锂处理化合物14得到式15的相应醛。用丙酮合氰化氢处理化合物15得到化合物16，然后在式R¹⁰OH(其中R¹⁰为如发明简述中所定义)的羟基化合物中使化合物16与酰卤反应得到式17的α羟基酯化合物。

在早先所述肽偶联条件下用式5的化合物处理化合物17、然后氧化所得产物中的羟基得到其中Y为-OC(O)NH-、R⁴为烷基的式(I)化合物。其中Y为-OC(O)NH-、R⁴为烷基的式(I)化合物可如上所述被转化为其中Y和R⁴为如发明简述中所定义的其他式(I)化合物。

其中E为-CONR¹¹R¹²，X、Y、R¹、R²、R³、R⁴、R¹¹和R¹²为如发明简述中所定义的式(I)化合物可按如下反应方案4制备。

反应方案4

在上述偶联反应条件下用式NHR¹¹R¹²的胺处理化合物13得到式18的化合物。在酸性水解反应条件下去除Boc基团得到化合物19，然后化合物19如上所述被转化为式(I)的化合物。

其中E为-COR⁹，X、Y、R¹、R²、R³、R⁴和R⁹为如发明简述中所定义的式(I)化合物可按如下反应方案5制备。

反应方案5

分别用式R⁹Li或R⁹MgX(其中R⁹为如发明简述中所定义)的有机锂或格氏试剂处理式15的化合物得到式20的化合物。该反应通常在低反应温度如-78℃下在有机溶剂如四氢呋喃等中进行。去除Boc基团得到化合物21，在上述偶联反应条件下与化合物5反应得到式22的化合物。然后将羟基氧化得到其中Y为-OC(O)NH-、R⁴为烷基的式(I)化合物。其中Y和R⁴为如发明简述中所定义的其他基团的式(I)化合物可如上所述制备。

其中E为-CHO，X、Y、R¹、R²、R³、R⁴和R⁸为如发明简述中所定义的式(I)化合物可按如下反应方案6制备。

反应方案6

在酸性水解反应条件下去除化合物23中的氨基保护基、然后偶联所得氨基化合物与式5化合物得到式24的化合物。然后如上面方法A或B中所示使化合物24转化为其中E为-CHO的式(I)化合物。

在方法A中，在碱性水解反应条件下使酯基水解得到式25的化合物，其再转化为式26的Weinreb酰胺。然后用适宜的还原剂如氢化铝锂还原26中的酰胺基得到其中E为-CHO、Y为-OC(O)NH-的式(I)化合物。

作为替代方案，可用适宜的还原剂如氢化铝锂还原化合物24中的酯基以提供式27的相应醇，其用氧化剂处理得到其中E为-CHO、Y为-OC(O)NH-的式(I)化合物。其中Y不为-OC(O)NH-的式(I)化合物按如上所述制备。

反应方案7

可采用如USSN 11/478,337的实施例14中概括描述的方法实现32或33向目标化合物的转化，其全部公开内容由此通过引用并入。

以类似的方式，反应方案8示出杂芳基取代的嘧啶并噻吩35的制备及其向关键中间体36和37的转化。

反应方案8

如上所述，可采用如USSN 11/478,337的实施例14中概括描述的方法实现37向目标化合物的转化，其全部公开内容由此通过引用并入。

反应方案9中示出异构体嘧啶并噻吩中间体的制备。

反应方案9

反应方案10示出吡唑取代的嘧啶并噻吩44的制备及其与脯氨酸衍生物偶联以形成中间体45和46。

反应方案10

反应方案11示出吡啶取代的嘧啶并噻吩50的制备，嘧啶并噻吩50可与脯氨酸衍生物反应以形成与方案10中45和46类似的中间体以引入最终分子中。

反应方案11

反应方案12示出如WO 99/24440和美国专利6,492,383中所制备并用于引入如方案1中所示最终分子中的中间体52。

反应方案12

反应方案13示出

唑取代的嘧啶并噻吩56的制备，嘧啶并噻吩56可与脯氨酸衍生物反应形成与反应方案10中所示的45和46类似的中间体以引入最终分子中。

反应方案13

式(I)化合物可被转化为其他式(I)化合物。例如：

含羟基的式(I)化合物可通过烷氧基/苄氧基取代基的去-烷基化/苄基化来制备；含酸基的那些可通过酯基的水解来制备；含氰基的那些可通过替代相应式(I)化合物上的溴原子来制备。含氰基的式(I)化合物可通过氰基的水解转化为相应的含羧基的化合物。所述羧基又可转化为酯基。

式(I)的化合物可通过使游离碱形式的化合物与药学上可接受的无机或有机酸反应制备为药学上可接受的酸加成盐。作为替代方案，可通过使游离酸形式的化合物与药学上可接受的无机或有机碱反应来制备式(I)化合物的药学上可接受的碱加成盐。适于制备式(I)化合物的药学上可接受的盐的无机和有机酸和碱在本申请的定义部分中给出。作为替代方案，可用原料或中间体的盐制备盐形式的式(I)化合物。

游离酸或游离碱形式的式(I)化合物可由相应的碱加成盐或酸加成盐形式制备。例如，酸加成盐形式的式(I)化合物可通过用适宜的碱(如氢氧化铵溶液、氢氧化钠等)处理而转化为相应的游离碱。碱加成盐形式的式(I)化合物可通过用适宜的酸(如盐酸等)处理而转化为相应的游离酸。

式(I)化合物的N-氧化物可通过本领域技术人员熟知的方法来制备。例如，N-氧化物可通过在适宜的惰性有机溶剂(如卤代烃如二氯甲烷)中在约0℃下用氧化剂(如三氟过氧乙酸、过氧马来酸、过氧苯甲酸、过氧乙酸、间氯过氧苯甲酸等)处理未氧化形式的式(I)化合物来制备。作为替代方案，式(I)化合物的N-氧化物可由适宜原料的N-氧化物制备。

未氧化形式的式(I)化合物可由式(I)化合物的N-氧化物通过在适宜的惰性有机溶剂(如乙腈、乙醇、二氧六环水溶液等)中在0-80℃下用还原剂(如硫、二氧化硫、三苯基膦、硼氢化锂、硼氢化钠、三氯化磷、三溴化物等)处理来制备。

式(I)化合物的前药衍生物可通过本领域技术人员熟知的方法(关于更进一步的细节，参见例如Saulnier et al.(1994)，Bioorganic and Medicinal Chemistry Letters，Vol.4，第1985页)制备。例如，适宜的前药可通过使式(I)的未衍生化化合物与适宜的氨基甲酰化剂(如氯碳酸1，1-酰氧基烷基酯、碳酸对硝基苯基酯等)反应来制备。

式(I)化合物的被保护的衍生物可通过本领域技术人员熟知的方法制备。适用于产生保护基及其去除的技术的详细描述可见于T.W.Greene，Protecting Groups in Organic Synthesis，3^rd edition，John Wiley & Sons，Inc.1999。

本发明的化合物可在本发明工艺过程中作为溶剂化物(如水合物)而方便地制得或形成。本发明化合物的水合物可通过使用有机溶剂如二

英、四氢呋喃或甲醇从水/有机溶剂混合物中重结晶而方便地制得。

式(I)的化合物可制备为具有不同物理性质(如熔点、沸点、溶解度、反应性等)的非对映体并可容易地利用这些不同点进行分离。非对映体可通过层析或优选通过基于溶解度差异的分离/拆分技术分离。然后光学纯异构体通过不会导致其手性中心外消旋化的任何实用方法回收。适用于从其外消旋混合物拆分化合物立体异构体的技术的更详细描述可见于Jean Jacques Andre Collet，Samuel H.Wilen，Enantiomers，Racemates and Resolutions，John Wiley & Sons，Inc.(1981)。

药理学和效用

本发明的化合物为组织蛋白酶B(一种溶酶体半胱氨酸蛋白酶)的抑制剂，因此可用于治疗与组织蛋白酶B的正常活性或提高的表达相关的病况，例如肿瘤侵入、转移、阿尔茨海默病、关节炎、炎性疾病如慢性和急性胰腺炎、炎性气道疾病、骨和关节疾病(包括骨质疏松症、骨关节炎、类风湿性关节炎)、银屑病和其他自身免疫疾病、肝纤维化(包括HCV相关的肝纤维化)、所有类型的脂肪变性(包括非酒精性脂肪性肝炎)和酒精相关的脂肪性肝炎、非酒精性脂肪肝病、各种形式的肺纤维化(包括特发性肺纤维化)、肺活检后间质性肺炎的病理诊断、肾纤维化、心脏纤维化、视网膜血管生成和眼内纤维化/胶质增生、硬皮病和系统性硬化症。本发明的化合物可单独使用或任选与一种或多种抗病毒剂一起使用。

式(I)化合物的抑制活性可通过本领域技术人员熟知的方法测定。测量本发明化合物抑制组织蛋白酶B的能力的适宜体外测定在下面的生物实施例1中给出，测定人细胞中组织蛋白酶B的抑制的方法在生物实施例2中描述。

在一个实施方案中，本发明的化合物特别可用于治疗纤维化(包括肝纤维化，如HCV相关的肝纤维化)和治疗患有HCV和肝纤维化的对象或患与HCV不相关的慢性肝损伤(如肝脂质变性)的对象。这样的活性通过本领域熟知的手段，例如通过测量肝损伤的小鼠中血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、然后在施用本发明化合物后测定小鼠中的ALT、AST和肝羟脯氨酸水平来证实。特别地，生物实施例3更详细地描述了这样的方法并提供了这样的试验的结果。

存在若干确定化合物是否可有效减轻肝纤维化的其他公认方法。肝纤维化的减轻通过分析肝活检样品确定。肝活检的分析包括评价两个主要部分：由“级”评价的坏死发炎作为严重性和进行性疾病活动度的量度，由“期”评价的纤维化损伤和实质或血管重构来反映长期疾病进展。参见例如Brunt(2000)Hepatol.31：241-246和METAVIR(1994)Hepatology 20：15-20。基于肝活检分析打分。存在许多提供纤维化程度和严重性的定量评价的标准化评分体系。这些体系包括METAVIR、Knodell、Scheuer、Ludwig和Ishak评分体系。

施用和药物组合物

一般而言，式(I)化合物通过本领域熟知的任何常规并可接受的方式以治疗有效量单独或与一种或多种治疗剂组合地施用。治疗有效量可根据疾病的严重性、对象的年龄和相对健康程度、所用化合物的效力及其他因素广泛变化。例如，式(I)化合物的治疗有效量可为约10微克每千克体重(μg/kg)每天到约100毫克每千克体重(mg/kg)每天，通常为约100μg/kg/天到约10mg/kg/天。因此，对于80kg病人来说治疗有效量可为约1mg/天到约8g/天，通常为约1mg/天到约800mg/天。一般而言，本领域技术人员依靠个人知识和本申请的公开内容将能够确定式(I)化合物治疗给定疾病的治疗有效量。

式(I)化合物可通过如下途径中的一种以药物组合物施用：口服、全身(如透皮、鼻内或通过栓剂)或胃肠外(如肌内、静脉内或皮下)。组合物可采取片剂、丸剂、胶囊剂、半固体剂、粉末、持续释放制剂、溶液剂、混悬剂、酏剂、气雾剂或任何其他适宜的组合物的形式，通常由式(I)化合物与至少一种药学上可接受的赋形剂组成。可接受的赋形剂是无毒的，有助于施用，不会对活性成分的疗效造成不利影响。这样的赋形剂可以是本领域技术人员通常可得到的任何固体、液体、半固体或在气溶胶组合物的情况下气态的赋形剂。

固体药物赋形剂包括淀粉、纤维素、滑石、葡萄糖、乳糖、蔗糖、明胶、麦芽、稻米、面粉、白垩、硅胶、硬脂酸镁、硬脂酸钠、单硬脂酸甘油酯、氯化钠、脱脂乳粉等。液体和半固体赋形剂可选自水、乙醇、甘油、丙二醇和各种油，包括石油、动物、植物或合成来源的那些(如花生油、大豆油、矿物油、芝麻油等)。优选的液体载体(特别是对于注射溶液)包括水、盐水、葡萄糖水溶液和甘油。

组合物中式(I)化合物的量可根据剂型、单位剂量的大小、赋形剂的种类和药学领域技术人员熟知的其他因素广泛地变化。一般而言，用于治疗给定疾病的式(I)化合物的组合物包含0.01重量％到90重量％、优选5重量％到50重量％的活性成分，其余为赋形剂。对于连续治疗，优选药物组合物以单一单位剂型施用或当明确需要缓解症状时以单一单位剂型随意施用。包含式(I)化合物的代表性药物制剂在下面描述。

实施例

下面通过实施例进一步说明本发明，这些实施例示意了根据本发明的式(I)化合物的制备，但本发明不限于这些实施例。

参考例A

叔丁基(3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己烷-3-基氨基甲酸酯的合成

步骤1

在搅拌下用30分钟向Boc-NVa-OH(25g，0.115mol)、N，O-二甲基羟胺盐酸盐(12.34g，0.127mol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)(33.07g，0.173mol)和1-羟基苯并三唑(HOBT)(22.9g，0.15mol)在二氯甲烷(300mL)中的混合物中缓慢加入N-甲基吗啉(34.9g，0.35mol)。反应在室温下进行2小时，然后用2000mL乙酸乙酯稀释，用碳酸氢钠、水、盐水洗涤，并用硫酸镁干燥。减压除去溶剂，得到20g呈无色油的(S)-叔丁基1-甲氧基(甲基)氨基-1-氧代戊烷-2-基氨基甲酸酯。

步骤2

在-78℃和氩气下向(S)-叔丁基1-甲氧基(甲基)氨基-1-氧代戊烷-2-基氨基甲酸酯(7.2g，27.7mmol)在无水四氢呋喃(100mL)中的溶液中缓慢加入氢化铝锂(在四氢呋喃中的1M溶液，27.7mL)。2小时后，通过缓慢加入1N HCl(20mL)猝灭反应混合物，然后使其温热至室温。用乙酸乙酯(600mL)稀释反应混合物，用1N HCl、H₂O、然后盐水洗涤，并用硫酸镁干燥。减压除去溶剂，得到呈油状的(S)-叔丁基1-氧代戊烷-2-基氨基甲酸酯(4.8g)。

步骤3

在0℃下向环丙基异腈(1.91g，28.5mmol)、(S)-叔丁基1-氧代戊烷-2-基氨基甲酸酯(3.8g，19mmol)在二氯甲烷(100mL)中的溶液中加入乙酸(2.28g，38mmol)。加入完成后，使反应混合物温热至25℃并搅拌6小时。用乙酸乙酯(200mL)稀释反应混合物，然后用碳酸氢钠饱和溶液和盐水(30mL)洗涤，并用硫酸镁干燥。减压除去溶剂，粗产物从50mL的乙酸乙酯和己烷(v/v＝1/1)中结晶，得到呈白色固体的叔丁基(3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己烷-3-基氨基甲酸酯(4.8g)。

步骤4

在室温下向叔丁基(3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己烷-3-基氨基甲酸酯(4.8g，14.6mmol)在甲醇(50mL)中的溶液中加入氢氧化钠水溶液(1N，22mL)。2小时后，减压除去甲醇，浓缩物用乙酸乙酯(300mL)萃取。乙酸乙酯层用盐水洗涤并用硫酸镁干燥。减压除去溶剂后，残余物从100mL的乙酸乙酯和己烷(v/v＝3/1)中结晶，得到呈白色固体的叔丁基(3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己烷-3-基氨基甲酸酯(3.5g)。

参考例B

叔丁基(2S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代丁烷-2-基氨基甲酸酯的合成

步骤1

在搅拌下用30分钟向Boc-L-环丁基丙氨酸的二异丙胺盐(10.33g，30mmol)、N，O-二甲基羟胺盐酸盐(3.22g，33mmol)、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDC)(8.63g，45mmol)、1-羟基苯并三唑(HOBT)(5.52g，36mmol)在二氯甲烷(200mL)中的混合物中缓慢加入N-甲基吗啉(9.11g，90mmol)。2小时后，用乙酸乙酯(1000mL)稀释反应混合物，用碳酸氢钠、水、然后盐水洗涤，并用硫酸镁干燥。减压除去溶剂，得到呈无色油的(S)-叔丁基3-环丁基-1-(甲氧基(甲基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基氨基甲酸酯(7.1g)。

步骤2

在-78℃和氩气下向(S)-叔丁基3-环丁基-1-(甲氧基(甲基)氨基)-1-氧代丙烷-2-基氨基甲酸酯(4.3g，15mmol)在无水四氢呋喃(100mL)中的溶液中缓慢加入氢化铝锂(在四氢呋喃中的1M溶液，15mL，15mmol)。2小时后，通过缓慢加入1N HCl(15mL)猝灭反应混合物，在加入完成后使其温热至室温。用乙酸乙酯(500mL)稀释反应混合物，用1N HCl、H₂O、然后盐水洗涤，并用硫酸镁干燥。减压除去溶剂，得到呈油状的(S)-叔丁基1-环丁基-3-氧代丙烷-2-基氨基甲酸酯(2.95g)。

步骤3

在0℃下向环丙基异腈(1.21g，18mmol)、(S)-叔丁基1-环丁基-3-氧代丙烷-2-基氨基甲酸酯(2.95g，13mmol)在二氯甲烷(20mL)中的溶液中加入乙酸(1.56g，26mmol)。加入完成后，使反应混合物温热至25℃并再搅拌4小时。用200mL乙酸乙酯稀释反应混合物，用碳酸氢钠饱和溶液、然后盐水洗涤，并用硫酸镁干燥。减压除去溶剂，粗产物从50mL的乙酸乙酯和己烷(v/v＝1/1)中结晶，得到呈白色固体的(3S)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-环丁基-1-(环丙基氨基)-1-氧代丁烷-2-基乙酸酯(3.8g)。

步骤4

在室温下向(3S)-3-(叔丁氧基羰基氨基)-4-环丁基-1-(环丙基氨基)-1-氧代丁烷-2-基乙酸酯(3.8g，10.7mmol)在甲醇(50mL)中的溶液中加入氢氧化钠水溶液(1N，15mL)。2小时后，减压除去甲醇，浓缩物用乙酸乙酯萃取。乙酸乙酯层用盐水洗涤并用硫酸镁干燥。减压除去溶剂后，残余物从100mL的乙酸乙酯和己烷(v/v＝3/1)中结晶，得到呈白色固体的叔丁基(2S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代丁烷-2-基氨基甲酸酯(2.9g)。

实施例1

(2S，4R)-1-((S)-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基]-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)-喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺的合成

步骤1

在0℃下向市购的N-叔-Boc-顺式-4S-羟基-L-脯氨酸甲酯(370mg，1.51mmol)和7-甲氧基-2-吡唑-1-基-喹啉-4-醇(PCT申请公开WO 2000059929)(400mg，1.66mmol)在无水四氢呋喃(15mL)中的溶液中加入三苯基膦(594mg，2.27mmol)，然后在N₂下缓慢加入偶氮二羧酸二异丙酯(DIAD)(0.36mL，1.81mmol)。使反应混合物缓慢温热至室温并搅拌18小时。然后浓缩粗反应混合物并通过快速色谱纯化，得到(2S，4R)-1-叔丁基-2-甲基-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)-吡咯烷-1，2-二羧酸酯，产率为69％。

步骤2

向(2S，4R)-1-叔丁基-2-甲基-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)-吡咯烷-1，2-二羧酸酯(200mg，0.43mmol)在二氯甲烷(1mL)中的溶液中加入4.0M在二氧六环中的HCl(3.0mL)。1小时后，浓缩反应混合物并干燥，得到呈白色固体的(2S，4R)-甲基-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)-吡咯烷-2-羧酸酯盐酸盐。

步骤3

向(2S，4R)-甲基-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)-吡咯烷-2-羧酸酯盐酸盐(67mg，0.165mmol)在二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(2.0mL，1∶1)中的溶液中加入Boc-L-叔-Leu-OH(38.1mg，0.165mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(69mg，0.182mmol)和二异丙基乙胺(0.1mL，0.5mmol)，在室温下搅拌混合物。16小时后，用乙酸乙酯稀释反应混合物并用1N HCl、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。乙酸乙酯层用硫酸镁干燥、过滤并减压蒸发至干，以定量产率得到(2S，4R)-甲基-1-((S)-叔丁氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)-吡咯烷-2-羧酸酯。

步骤4

向(2S，4R)-甲基-1-((S)-叔丁氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)-吡咯烷-2-羧酸酯在二氯甲烷(1mL)中的溶液中加入4.0M在二氧六环中的HCl(3.0mL)。1小时后，浓缩反应混合物并干燥，得到呈白色固体的(S)-1-((2S，4R)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)-2-(甲氧基羰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸盐酸盐，其不经进一步纯化即用于下一步中。

步骤5

向(S)-1-((2S，4R)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)-2-(甲氧基羰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸盐酸盐(0.165mmol)在二氯甲烷(3.0mL)中的溶液中加入三乙胺(0.06mL，0.413mmol)和叔丁基异氰酸酯(0.02mL，0.165mmol)，在室温下搅拌反应混合物。16小时后，用二氯甲烷稀释反应混合物并用1N HCl、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。然后将二氯甲烷层蒸发至干，得到(2S，4R)-甲基-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)-吡咯烷-2-羧酸酯。

步骤6

用甲醇(6.0mL)、四氢呋喃(3.0mL)和1N氢氧化钠(6.mL)处理(2S，4R)-甲基-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)-吡咯烷-2-羧酸酯。在室温下1小时后，浓缩反应混合物，用1N HCl酸化并用乙酸乙酯萃取。然后用盐水洗涤合并的乙酸乙酯层并干燥(MgSO₄)。然后过滤乙酸乙酯层并蒸发至干，得到(2S，4R)-甲基-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)-吡咯烷-2-羧酸。

步骤7

将叔丁基-(3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代-3-基氨基甲酸酯(48mg，0.165mmol)溶解在二氯甲烷(3.0mL)中并加入四氟乙酸(3.0mL)。在室温下搅拌1小时后，将反应混合物蒸发至干，得到呈白色固体的(3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基己酰胺三氟乙酸盐。向该(3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基己酰胺三氟乙酸盐中加入(2S，4R)-甲基-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)-吡咯烷-2-羧酸在二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(1∶1，6.0mL)中的溶液，然后加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(75mg，0.198mmol)和二异丙基乙胺(0.1mL，0.7mmol)。在室温下24小时后，用乙酸乙酯稀释反应混合物并用1NHCl、碳酸氢钠和盐水洗涤。乙酸乙酯层用硫酸镁干燥，过滤，并减压蒸发至干。然后将粗产物溶解在无水二氯甲烷(10.0mL)中并加入戴斯-马丁氧化剂(112mg，0.264mmol)。在室温下搅拌2小时后，用0.26M的在饱和碳酸氢钠中的硫代硫酸钠猝灭反应混合物并用乙酸乙酯萃取。然后用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤合并的乙酸乙酯层。通过制备HPLC纯化，得到(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺，HPLC纯度＞99％。

1H NMR：(DMSO-d₆)δ8.76-8.70(m，2H)；8.22(d，J＝6.8Hz，1H)；8.11(d，J＝9.6Hz，1H)；7.87(d，J＝1.2Hz，1H)；7.45(s，1H)；7.27(d，J＝2.4Hz，1H)；7.00-6.97(dd，J＝2.8和9.6Hz，1H)；6.64-6.62(m，1H)；5.92(brs，1H)；5.49(brs，1H)；5.00-4.96(m，1H)；4.55-4.49(m，2H)；4.18(d，J＝5.6Hz，1H)；3.90(s，3H)；3.91-3.82(m，1H)；3.54(brs，1H)；2.75-2.72(m，1H)；2.54-2.51(m，1H)；2.17-2.14(m，1H)；1.69-1.66(m，1H)；1.40-1.34(m，3H)；1.13(m，9H)；0.93(m，9H)；0.90-0.82(m，3H)；0.65-0.53(m，4H)。MS(M⁺+1)733。

实施例2

(2S，4R)-1-((S)-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基]-N-((S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)-喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺的合成

步骤1

将叔丁基-(2S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代丁烷-2-基氨基甲酸酯(51mg，0.165mmol)溶解在二氯甲烷(3.0mL)中并加入三氟乙酸(3.0mL)。在室温下搅拌1小时后，将反应混合物蒸发至干，得到呈白色固体的(3S)-3-氨基-4-环丁基-N-环丙基-2-羟基-丁酰胺三氟乙酸盐。向该(3S)-3-氨基-4-环丁基-N-环丙基-2-羟基-丁酰胺三氟乙酸盐中加入(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酸在二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(1∶1，6.0mL)中的溶液，然后加入O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(75mg，0.198mmol)和二异丙基乙胺(0.1mL，0.7mmol)。在室温下24小时后，用乙酸乙酯稀释反应混合物并用1N HCl、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。干燥乙酸乙酯层(硫酸镁)，过滤，并减压蒸发至干。然后将粗产物溶解在无水二氯甲烷(10.0mL)中并加入1，1，1-三乙酰氧基-1，1-二氢-1，2-苯碘酰基-3(1H)-酮(戴斯-马丁氧化试剂，112mg，0.264mmol)。在室温下搅拌2小时后，用0.26M的在饱和碳酸氢钠中的硫代硫酸钠猝灭反应混合物并用乙酸乙酯萃取。然后用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤合并的乙酸乙酯层。通过制备HPLC纯化，得到(2S，4R)-1-((S)-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基]-N-((S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)-喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺，HPLC纯度＞99％。

¹H NMR：(DMSO-d₆)δ8.76-8.69(m，2H)；8.19(d，J＝8.0Hz，1H)；8.10(d，J＝8.0Hz，1H)；7.87-7.86(m，1H)；7.45(s，1H)；7.27(d，J＝2.8Hz，1H)；7.00-6.97(dd，J＝2.8和9.6Hz，1H)；6.64-6.62(m，1H)；5.93(brs，1H)；5.48(brs，1H)；5.00-4.96(m，1H)；4.53-4.49(m，2H)；4.18(d，J＝9.2Hz，1H)；3.90(s，3H)；3.91-3.82(m，1H)；3.42(brs，2H)；2.75-2.72(m，1H)；2.54-2.51(m，1H)；2.17-2.14(m，1H)；1.96-1.89(m，2H)；1.78-1.50(m，6H)；1.13(m，9H)；0.94(m，9H)；0.65-0.53(m，4H)。

MS(M⁺+1)759。

实施例3

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(5-氯-吡啶-2-基氧基)-N-((S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代丁烷-2-基))吡咯烷-2-羧酰胺的合成

在23℃下用15分钟向在二甲基亚砜中的市购t-Boc-(2S，4R)-羟脯氨酸(1mmol)中以小份加入叔丁醇钾(3mmol)。在23℃下搅拌混合物30分钟，然后冷却至0℃，再用10分钟以小份加入2，5-二氯吡啶(1.1mmol)。在23℃下搅拌反应混合物16小时。将所得悬浮体倒进5％的柠檬酸水溶液中并用乙酸乙酯萃取。用盐水洗涤合并的乙酸乙酯层并用硫酸镁干燥。过滤有机部分并减压浓缩，得到白色固体。将该固体物质溶解在4.0M在二氧六环中的HCl(10mL)中。1小时后，减压浓缩反应混合物并干燥，得到(2S，4R)-甲基-4-(5-氯吡啶-2-基氧基)吡咯烷-2-羧酸酯盐酸盐。

步骤1

向在二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(10mL，1∶1)中的(2S，4R)-甲基-4-(5-氯吡啶-2-基氧基)吡咯烷-2-羧酸酯盐酸盐(242mg，0.829mmol)中加入Boc-L-叔-Leu-OH(192mg，0.829mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(347mg，0.912mmol)和二异丙基乙胺(0.37mL，2.07mmol)，在室温下搅拌反应混合物。16小时后，用乙酸乙酯稀释反应混合物并用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。乙酸乙酯层用硫酸镁干燥、过滤并减压蒸发至干，以定量产率得到(2S，4R)-甲基-1-((S)-2-(3-叔丁氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(5-氯-吡啶-2-基氧基)-吡咯烷-2-羧酸酯。

步骤2

用甲醇(5.0mL)、四氢呋喃(3.0mL)和1N氢氧化钠(5.0mL)处理(2S，4R)-甲基-1-((S)-2-(3-叔丁氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(5-氯-吡啶-2-基氧基)-吡咯烷-2-羧酸酯。在室温下2小时后，浓缩反应混合物，用1N HCl酸化并用乙酸乙酯萃取。然后用盐水洗涤合并的乙酸乙酯层并用硫酸镁干燥。然后过滤乙酸乙酯层并减压蒸发至干，得到(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(5-氯-吡啶-2-基氧基)-吡咯烷-2-羧酸。

步骤3

向(3S)-3-氨基-4-环丁基-N-环丙基-2-羟基丁酰胺(214mg，0.83mmol)中加入4.0M在二氧六环中的HCl(11.0mL)。1小时后，浓缩反应混合物并干燥，得到呈白色固体的(3S)-3-氨基-4-环丁基-N-环丙基-2-羟基-丁酰胺HCl盐。向该盐中加入在二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(1∶1，10.0mL)中的(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(5-氯-吡啶-2-基氧基)-吡咯烷-2-羧酸、1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐(EDCI)(238mg，1.24mmol)、1-羟基苯并三唑(HOBT)(190mg，1.24mmol)和N-甲基吗啉(0.6mL，3.32mmol)。在室温下16小时后，用乙酸乙酯稀释反应混合物，用饱和碳酸氢钠、盐水洗涤，并用硫酸镁干燥。然后过滤乙酸乙酯层，减压浓缩，残余物经快速色谱纯化，得到叔丁基(2S)-1-((2S，4R)-4-(5-氯-吡啶-2-基氧基)-2-((2S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代丁烷-2-基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸酯，产率为58％。

步骤4

向在二氯甲烷(2mL)中的叔丁基(2S)-1-((2S，4R)-4-(5-氯-吡啶-2-基氧基)-2-((2S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代丁烷-2-基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸酯(313mg，0.482mmol)中加入4.0M在二氧六环中的HCl(3.0mL)。1小时后，减压浓缩反应混合物并干燥，得到呈白色固体的(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-(5-氯-吡啶-2-基氧基)-N-((2S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代丁烷-2-基)吡咯烷-2-羧酰胺HCl盐。

步骤5

向(2S，4R)-1-((S)-2-氨基-3，3-二甲基丁酰基)-4-(5-氯-吡啶-2-基氧基)-N-((2S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代丁烷-2-基)吡咯烷-2-羧酰胺HCl盐(45mg，0.077mmol)在二氯甲烷(3.0mL)中的溶液中加入三乙胺(0.02mL，0.154mmol)。在室温下5分钟后，加入叔丁基异氰酸酯(0.01mL，0.077mmol)，在室温下搅拌反应混合物。16小时后用二氯甲烷稀释反应混合物并用1N HCl、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤。然后将二氯甲烷层减压蒸发至干，得到(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(5-氯吡啶-2-基氧基)-N-((2S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代丁烷-2-基)吡咯烷-2-羧酰胺。

步骤6

将(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(5-氯吡啶-2-基氧基)-N-((2S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代丁烷-2-基)吡咯烷-2-羧酰胺溶解在无水二氯甲烷(4.0mL)中并加入戴斯-马丁氧化剂(44mg，0.103mmol)。在室温下搅拌2小时后，用0.26M的在饱和碳酸氢钠中的硫代硫酸钠猝灭反应混合物并用乙酸乙酯萃取。然后用饱和碳酸氢钠和盐水洗涤合并的乙酸乙酯层，有机层用硫酸镁干燥，并减压除去溶剂。残余物用制备HPLC纯化，得到(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(5-氯-吡啶-2-基氧基)-N-((S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代丁烷-2-基))吡咯烷-2-羧酰胺，HPLC纯度＞90％。

¹H NMR：(DMSO)8.91-8.73(m，1H)；8.30-8.24(m，2H)；7.92-7.7.80(m，1H)；6.94-6.84(m，1H)；5.97(brs，1H)；5.50(s，1H)；5.00-4.95(m，1H)；4.54-4.52(m，1H)；4.17-3.88(m，3H)；2.75-2.72(m，1H)；2.54-2.51(m，1H)；2.40-2.32(m，1H)；2.17-1.60(m，10H)；1.13(m，9H)；0.91(m，9H)；0.67-0.58(m，4H)。MS(M⁺+1)648。

实施例4

叔丁基(S)-1-((2S，4R)-2-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基氨基甲酰基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸酯的合成

类似地，按照上面实施例1的方法，但省去步骤4和5，得到叔丁基(S)-1-(2S，4R)-2-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基氨基甲酰基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸酯。MS：734(M+1)。

实施例5

叔丁基(S)-1-((2S，4R)-2-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基氨基甲酰基)-4-(7-甲氧基-2-苯基喹啉-4-基氧基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸酯的合成

类似地，按照上面实施例4的方法，但用7-甲氧基-2-苯基-喹啉-4-醇替代7-甲氧基-2-吡唑-1-基-喹啉-4-醇，得到叔丁基(S)-1-(2S，4R)-2-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基氨基甲酰基)-4-(7-甲氧基-2-苯基喹啉-4-基氧基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸酯。MS：744(M+1)。

实施例6

叔丁基(S)-1-((2S，4R)-4-(5-氯吡啶-2-基氧基)-2-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸酯的合成

类似地，按照上面实施例4的方法，但用4R-(5-氯吡啶-2-基氧基)吡咯烷-2-羧酸甲酯盐酸盐替代4R-(7-甲氧基-2-吡唑-1-基-喹啉-4-基氧基)-吡咯烷-2S-羧酸甲酯盐酸盐，得到标题化合物。MS：622(M+1)。

实施例7

叔丁基-1-((2S，4R)-4-(5-氯吡啶-2-基氧基)-2-((S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代丁烷-2-基氨基甲酰基)吡咯烷-1-基)-3，3-二甲基-1-氧代丁烷-2-基氨基甲酸酯的合成

类似地，按照上面实施例4的方法，但用4R-(5-氯-吡啶-2-基氧基)吡咯烷-2-羧酸甲酯盐酸盐替代4R-(7-甲氧基-2-吡唑-1-基-喹啉-4-基氧基)-吡咯烷-2S-羧酸甲酯盐酸盐并用(1S-环丁基甲基-2-环丙基氨基甲酰基-2-羟乙基)-氨基甲酸叔丁基酯替代[1S-(环丙基氨基甲酰基羟甲基)丁基]氨基甲酸叔丁基酯，得到标题化合物。MS：648(M+1)。

实施例8

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基]-4-(5-氯-吡啶-2-基氧基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)吡咯烷-2-羧酰胺的合成

类似地，按照上面实施例3的方法，但用[1S-(环丙基-氨基甲酰基羟甲基)丁基]氨基甲酸叔丁基酯替代(1S-环丁基甲基-2-环丙基氨基甲酰基-2-羟乙基)-氨基甲酸叔丁基酯，得到标题化合物。MS：621(M+1)。

实施例9

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(6-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-2-羧酰胺的合成

步骤1

在0℃下向3-甲氧基肉桂酸(5.3g，29.7mmol)和三乙胺(8.3mL，59.4mmol)在丙酮(35mL)中的溶液中逐滴加入氯甲酸乙酯(4.3mL，44.5mmol)。在0℃下1小时后，逐滴加入叠氮化钠水溶液(3.1g，47.5mmol，16mL水)，在23℃下搅拌反应混合物16小时。向混合物中加入水(50mL)并减压除去挥发物。用甲苯(3×25mL)萃取所得浆料，并用硫酸镁干燥合并的有机层。过滤经干燥的溶液并逐滴加到190℃的二苯基甲烷(25mL)和三丁胺(14.2mL，59.4mmol)的溶液中。随加入蒸出甲苯。加入完成后，将反应温度升至210℃达2小时。冷却后，过滤收集沉淀产物，用己烷洗涤并真空干燥，得到6-甲氧基异喹啉-1(2H)-酮(1.7g，9.7mmol，产率33％)。MS m/z 176(M⁺+H)。

步骤2

在110℃下将6-甲氧基异喹啉-1(2H)-酮(900mg，5.1mmol)在三氯氧化磷(POCl₃，4mL)中的悬浮体加热3小时(加热时获得澄清溶液)。3小时后，减压浓缩反应混合物。将残余物倒进冰水(10mL)中，然后用3N的氢氧化钠将pH调节至10，用氯仿(3×25mL)萃取混合物。用盐水洗涤合并的氯仿层并用硫酸镁干燥。然后过滤有机层，减压浓缩，并通过快速色谱(50％的乙酸乙酯/己烷)纯化，得到呈白色固体的1-氯-6-甲氧基异喹啉(720mg，3.7mmol，产率73％)。¹H NMR(CD₃OD)：8.23(d，1H，J＝8.8Hz)；8.11(d，1H，J＝6.0Hz)；7.69(d，1H，J＝6.0Hz)；7.37-7.33(m，2H)；3.97(s，3H)。MS m/z 194(M⁺+H)。

步骤3

在23℃下用15分钟向在二甲基亚砜(20mL)中的市购的N-t-Boc-(2S，4R)-羟脯氨酸(684mg，2.96mmol)中以小份加入叔丁醇钾(997mg，8.88mmol)，加完。在23℃下搅拌混合物30分钟，然后冷却至0℃。然后用10分钟以小份加入1-氯-6-甲氧基-异喹啉(600mg，3.11mmol)。在23℃下搅拌反应混合物16小时。将所得悬浮体倒进5％的柠檬酸水溶液(100mL)中并用乙酸乙酯(3×50mL)萃取。用盐水洗涤合并的乙酸乙酯层并用硫酸镁干燥。然后过滤有机层并减压浓缩，得到呈白色固体的(2S，4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(6-甲氧基-异喹啉-1-基氧基)吡咯烷-2-羧酸(1.04g，2.68mmol，产率91％)。MS m/z 389(M⁺+H)。该物质不经进一步纯化即以粗产物用于下一步中。

步骤4

向叔丁基-(3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代-己烷-3-基氨基甲酸酯(100mg，0.35mmol)中加入4.0M在二氧六环中的HCl(10mL)。1小时后，浓缩反应混合物并干燥，得到呈白色固体的相应HCl盐。向在二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(8∶3，11.0mL)中的上面的胺HCl盐中加入(2S，4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(6-甲氧基异喹啉-1-基氧基)吡咯烷-2-羧酸(136mg，0.35mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(160mg，0.42mmol)和二异丙基乙胺(0.2mL，1.05mmol)。在室温下2小时后，用乙酸乙酯稀释反应混合物并用1N HCl(2x)、碳酸氢钠(1x)和盐水(1x)洗涤。用硫酸镁干燥乙酸乙酯层，过滤并减压蒸发至干，得到(2S，4R)-叔丁基-2-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己烷-3-基氨基甲酰基)-4-(6-甲氧基-异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-1-羧酸酯。

步骤5

向上面的粗化合物中加入4.0M在二氧六环中的HCl(10mL)。1小时后，浓缩反应混合物并干燥，得到呈白色固体的相应HCl盐。向在二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(8∶3，11.0mL)中的胺HCl盐中加入2S-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基-丁酸(81.0mg，0.35mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(160mg，0.42mmol)和二异丙基乙胺(0.2mL，1.05mmol)。在室温下16小时后，用乙酸乙酯稀释反应混合物并用1N HCl(2x)、碳酸氢钠(1x)和盐水(1x)洗涤。用硫酸镁干燥乙酸乙酯层，过滤并减压蒸发至干。

步骤6

然后将该粗产物溶解在无水二氯甲烷(10.0mL)中并加入戴斯-马丁氧化剂(223mg，0.525mmol)。在室温下搅拌2小时后，用0.26M的在饱和碳酸氢钠中的硫代硫酸钠猝灭反应混合物并用乙酸乙酯(3x)萃取。然后用饱和碳酸氢钠(2x)和盐水(1x)洗涤合并的乙酸乙酯层。通过制备HPLC纯化，得到(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(6-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-2-羧酰胺，HPLC纯度＞95％。¹H NMR：(DMSO-d₆)8.74(d，1H，J＝4.8Hz)；8.28(d，1H，J＝7.2Hz)；8.15(d，1H，J＝9.2Hz)；7.97(d，1H，J＝6.0Hz)；7.34-7.32(m，2H)；7.11-7.08(m，1H)；5.94(brs，1H)；5.72-5.70(m，1H)；5.04-5.00(m，1H)；4.58(t，1H，J＝8.4Hz)；4.34-4.22(m，2H)；3.91(s，3H)；3.90-3.86(m，1H)；2.79-2.74(m，1H)；2.54-2.51(m，1H)；2.18-2.11(m，1H)；1.77-1.70(m，1H)；1.48-1.38(m，3H)；1.15(m，9H)；0.91(m，9H)；0.90-0.86(m，3H)；0.69-0.56(m，4H).MS m/z 667(M⁺+H)，689(M⁺+Na)，665(M⁺-H)。

实施例10

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(6-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-2-羧酰胺的合成

步骤1

向在二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(5∶1.5，6.5mL)中的(3S)-3-氨基-N-二环丙基-2-羟基-丁酰胺HCl盐(47mg，0.2mmol)中加入(2S，4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(6-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-2-羧酸(78mg，0.2mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(91mg，0.4mmol)和二异丙基乙胺(0.1mL，0.6mmol)。在室温下16小时后，用乙酸乙酯稀释反应混合物并用1N HCl(2x)、碳酸氢钠(1x)和盐水(1x)洗涤。用硫酸镁干燥乙酸乙酯层，过滤并减压蒸发至干，得到(2S，4R)-叔丁基-2-((2S)-1-环丙基-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代丁烷-2-基氨基甲酰基)-4-(6-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-1-羧酸酯。

步骤2

向上面的粗化合物中加入4.0M在二氧六环中的HCl(5.0mL)。1小时后，浓缩反应混合物并干燥，得到呈白色固体的相应HCl盐。向在二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(7∶3，10.0mL)中的上面的胺HCl盐中加入S-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酸(46mg，0.2mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(91mg，0.24mmol)和二异丙基乙胺(0.1mL，0.6mmol)。在室温下3小时后，用乙酸乙酯稀释反应混合物并用1N HCl(2x)、碳酸氢钠(1x)和盐水(1x)洗涤。用硫酸镁干燥乙酸乙酯层，过滤并减压蒸发至干。

步骤3

然后将该粗产物溶解在无水二氯甲烷(8.0mL)中并加入戴斯-马丁氧化剂(127mg，0.3mmol)。在室温下搅拌2小时后，用0.26M的在饱和碳酸氢钠中的硫代硫酸钠猝灭反应混合物并用乙酸乙酯(3x)萃取。然后用饱和碳酸氢钠(2x)和盐水(1x)洗涤合并的乙酸乙酯层。通过制备HPLC纯化，得到(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(6-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-2-羧酰胺，HPLC纯度＞95％。MS m/z 679(M⁺+H)，701(M⁺+Na)，677(M⁺-H)。

实施例11

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(6-乙氧基异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-2-羧酰胺的合成

步骤1

在0℃下向3-乙氧基肉桂酸(5.71g，29.7mmol)和三乙胺(8.3mL，59.4mmol)在丙酮(35mL)中的溶液中逐滴加入氯甲酸乙酯(4.3mL，44.5mmol)。在0℃下1小时后，逐滴加入叠氮化钠水溶液(3.1g，47.5mmol，16mL水)，在23℃下搅拌反应混合物16小时。向混合物中加入水(50mL)并真空除去挥发物。用甲苯(3×25mL)萃取所得浆料，并干燥(MgSO₄)合并的有机层。过滤经干燥的溶液并在190℃下逐滴加到二苯基甲烷(25mL)和三丁胺(14.2mL，59.4mmol)的溶液中。随加入蒸出甲苯。加入完成后，将反应温度升至210℃达2小时。冷却后，过滤收集沉淀产物，用己烷洗涤并真空干燥，得到6-乙氧基-2H-异喹啉-1-酮(1.92g，10.2mmol，产率34％)。MS m/z 190(M⁺+H)。

步骤2

在110℃下将6-乙氧基-2H-异喹啉-1-酮(896mg，4.74mmol)在三氯氧化磷(POCl₃，4mL)中的悬浮体加热3小时(加热时获得澄清溶液)。3小时后，减压浓缩反应混合物。将残余物倒进冰水(10mL)中，用3N的氢氧化钠将pH调节至10，用氯仿(3×25mL)萃取混合物。用盐水洗涤合并的氯仿层并用硫酸镁干燥。然后过滤有机层并减压浓缩，得到呈棕黄色固体的1-氯-6-乙氧基异喹啉(866mg，4.18mmol，产率88％，纯度＞90％)。MS m/z 208(M⁺+H)。

步骤3

在23℃下用15分钟以小份向在二甲基亚砜(20mL)中的市购的N-t-Boc-(2S，4R)-羟脯氨酸(531mg，2.30mmol)中加入叔丁醇钾(774mg，6.9mmol)。在23℃下搅拌混合物30分钟，然后冷却至0℃。在0℃下用10分钟以小份向该混合物中加入1-氯-6-乙氧基-异喹啉(500mg，2.41mmol)。在23℃下搅拌反应混合物16小时。将所得悬浮体倒进水中，混合物用乙醚(2x)和乙酸乙酯(2x)洗涤。水层用1N HCl水溶液酸化至约pH 4并用二氯甲烷(3x)萃取。用盐水洗涤合并的二氯甲烷层并用硫酸镁干燥。然后过滤有机层并减压浓缩，得到(2S，4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(6-乙氧基异喹啉-1-基氧基)吡咯烷-2-羧酸(粗产物重量＝1.18g，纯度＞90％)。MS m/z 403(M⁺+H)，401(M⁺-H)，303(M⁺-Boc)。该物质不经进一步纯化即以粗产物用于下一步中。

步骤4

向在二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(10∶3，13mL)中的(3S)-3-氨基-N，4-二环丙基-2-羟基丁酰胺HCl盐(66mg，0.28mmol)中加入(2S，4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(6-乙氧基异喹啉-1-基氧基)吡咯烷-2-羧酸(114mg，0.28mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(128mg，0.34mmol)和二异丙基乙胺(0.15mL，0.84mmol)。在室温下1小时后，用乙酸乙酯稀释反应混合物并用1N HCl(2x)、碳酸氢钠(1x)和盐水(1x)洗涤。用硫酸镁干燥乙酸乙酯层，过滤并减压蒸发至干，得到(2S，4R)-叔丁基-2-((2S)-1-环丙基-4-(环丙基氨基)-3-羟基-4-氧代丁烷-2-基氨基甲酰基)-4-(6-乙氧基-异喹啉-1-基氧基)吡咯烷-1-羧酸酯。

步骤5

向上面的粗化合物中加入4.0M在二氧六环中的HCl(10mL)。1小时后，浓缩反应混合物并干燥，得到呈白色固体的相应HCl盐。向在二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(10∶3，13mL)中的上面的胺HCl盐中加入2S-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基-丁酸(64mg，0.28mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(128mg，0.34mmol)和二异丙基乙胺(0.15mL，0.84mmol)。在室温下1小时后，用乙酸乙酯稀释反应混合物并用1N HCl(2x)、碳酸氢钠(1x)和盐水(1x)洗涤。用硫酸镁干燥乙酸乙酯层，过滤并减压蒸发至干。

步骤6

然后将该粗产物溶解在无水二氯甲烷(10.0mL)中并加入戴斯-马丁氧化剂(154mg，0.364mmol)。在室温下搅拌1小时后，用0.26M的在饱和碳酸氢钠中的硫代硫酸钠猝灭反应混合物并用乙酸乙酯(3x)萃取。然后用饱和碳酸氢钠(2x)、盐水(1x)洗涤合并的乙酸乙酯层，并用硫酸镁干燥。然后过滤有机层，减压浓缩，并通过快速色谱(65％的乙酸乙酯/己烷)纯化，得到呈白色固体的(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(6-乙氧基异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-2-羧酰胺(80.7mg，0.116mmol，产率42％)。¹H NMR：(DMSO)8.67(d，1H，J＝5.6Hz)；8.26(d，1H，J＝6.8Hz)；8.06(d，1H，J＝8.8Hz)；7.89(d，1H，J＝5.6Hz)；7.24-7.22(m，1H)；7.01-6.98(dd，1H，J＝2.4，8.8Hz)；5.90-5.85(m，2H)；5.65-5.62(m，1H)；5.06-5.01(m，1H)；4.53(t，1H，J＝8.0Hz)；4.26-4.23(m，1H)；4.16-4.08(m，3H)；3.84-3.80(m，1H)；2.69-2.65(m，1H)；2.11-2.04(m，1H)；1.64-1.57(m，1H)；1.35-1.29(m，3H)；1.15(m，9H)；0.91(m，9H)；0.89-0.81(m，3H)；0.61-0.48(m，4H)；0.36-0.27(m，2H).MS m/z693(M⁺+H)，715(M⁺+Na)，691(M⁺-H)。

实施例12

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(6-乙氧基异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-2-羧酰胺

步骤1

向叔丁基-(3S)-1-(环丙基氨基)-1-氧代己烷-3-基氨基甲酸酯(75mg，0.26mmol)中加入4.0M在二氧六环中的HCl(6.0mL)。1小时后，浓缩反应混合物并干燥，得到呈白色固体的(3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基己酰胺HCl盐。向在二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(10∶3，13mL)中的该盐中加入(2S，4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(6-乙氧基异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-2-羧酸(106mg，0.26mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(119mg，0.31mmol)和二异丙基乙胺(0.15mL，0.78mmol)。在室温下1小时后，用乙酸乙酯稀释反应混合物并用1NHCl(2x)、碳酸氢钠(1x)和盐水(1x)洗涤。用硫酸镁干燥乙酸乙酯层，过滤并减压蒸发至干，得到(2S，4R)-1-(叔丁基-2-((3S)-1-环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己烷-3-基氨基甲酰基)-4-(6-乙氧基异喹啉-1-基氧基)吡咯烷-1-羧酸酯。

步骤2

向上面的粗化合物中加入4.0M在二氧六环中的HCl(10mL)。1小时后，浓缩反应混合物并干燥，得到呈白色固体的相应去保护的HCl盐。向在二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(10∶3，13mL)中的该盐中加入(S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酸(60mg，0.26mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(128mg，0.34mmol)和二异丙基乙胺(0.15mL，0.84mmol)。在室温下1小时后，用乙酸乙酯稀释反应混合物并用1N HCl(2x)、碳酸氢钠(1x)和盐水(1x)洗涤。用硫酸镁干燥乙酸乙酯层，过滤并蒸发至干。

步骤3

然后将该粗产物溶解在无水二氯甲烷(10.0mL)中并加入戴斯-马丁氧化剂(143mg，0.338mmol)。在室温下搅拌1小时后，用0.26M的在饱和碳酸氢钠中的硫代硫酸钠猝灭反应混合物并用乙酸乙酯(3x)萃取。然后用饱和碳酸氢钠(2x)、盐水(1x)洗涤合并的乙酸乙酯层，并干燥(MgSO₄)。然后过滤有机层，浓缩，并通过快速色谱(65％的乙酸乙酯/己烷)纯化，得到呈白色固体的(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(6-乙氧基异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-2-羧酰胺(28)(75.7mg，0.11mmol，产率43％)。¹H NMR：(DMSO-d₆)8.75(d，1H，J＝4.8Hz)；8.28(d，1H，J＝7.2Hz)；8.13(d，1H，J＝8.8Hz)；7.96(d，1H，J＝6.0Hz)；7.31-7.29(m，2H)；7.10-7.06(dd，1H，J＝2.4，9.2Hz)；5.94-5.92(m，2H)；5.72-5.70(m，1H)；5.04-5.00(m，1H)；4.58(t，1H，J＝7.6Hz)；4.34-4.30(m，1H)；4.23-4.17(m，3H)；3.90-3.86(m，1H)；2.79-2.74(m，1H)；2.54-2.51(m，1H)；2.18-2.11(m，1H)；1.77-1.70(m，1H)；1.48-1.38(m，3H)；1.15(m，9H)；0.91(m，9H)；0.89-0.86(m，3H)；0.69-0.59(m，4H).MS m/z 681(M⁺+H)，703(M⁺+Na)，679(M⁺-H)。

实施例13

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代庚烷-3-基)-4-(6-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-2-羧酰胺的合成

步骤1

向在二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(10∶3，13mL)中的(3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基庚酰胺HCl盐(96mg，0.40mmol)中加入(2S，4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(6-甲氧基-异喹啉-1-基氧基)吡咯烷-2-羧酸(157mg，0.40mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(200mg，0.53mmol)和二异丙基乙胺(0.35mL，2.0mmol)。在室温下1小时后，用乙酸乙酯稀释反应混合物并用1N HCl(2x)、碳酸氢钠(1x)和盐水(1x)洗涤。用硫酸镁干燥乙酸乙酯层，过滤并减压蒸发至干，得到(2S，4R)-叔丁基-2-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代庚烷-3-基氨基甲酰基)-4-(6-甲氧基-异喹啉-1-基氧基)吡咯烷-1-羧酸酯。MS m/z 571(M⁺+H)，593(M⁺+Na)，569(M⁺-H)，471(M⁺-Boc)。

步骤2

向上面的粗化合物中加入4.0M在二氧六环中的HCl(10mL)。在室温下1小时后，浓缩反应混合物并干燥，得到呈白色固体的相应HCl盐。向在二氯甲烷/N，N-二甲基甲酰胺(10∶3，13mL)中的该盐中加入(S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酸(93mg，0.40mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(200mg，0.53mmol)和二异丙基乙胺(0.35mL，2.0mmol)。在室温下1小时后，用乙酸乙酯稀释反应混合物并用1N HCl(2x)、碳酸氢钠(1x)和盐水(1x)洗涤。用硫酸镁干燥乙酸乙酯层，过滤并减压蒸发至干。MS m/z 683(M⁺+H)，705(M⁺+Na)，681(M⁺-H)。

步骤3

然后将该粗产物溶解在无水二氯甲烷(10.0mL)中并加入戴斯-马丁氧化剂(223mg，0.53mmol)。在室温下搅拌2小时后，用0.26M的在饱和碳酸氢钠中的硫代硫酸钠猝灭反应混合物并用乙酸乙酯(3x)萃取。然后用饱和碳酸氢钠(2x)、盐水(1x)洗涤合并的乙酸乙酯层，并用硫酸镁干燥。然后过滤有机层，减压浓缩，并通过快速色谱(45％的乙酸乙酯/己烷)纯化，得到呈白色固体的(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代庚烷-3-基)-4-(6-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-吡咯烷-2-羧酰胺(30)(83.5mg，0.12mmol，产率31％)。¹H NMR：(DMSO)8.74(d，1H，J＝4.8Hz)；8.27(d，1H，J＝7.2Hz)；8.15(d，1H，J＝9.2Hz)；7.97(d，1H，J＝6.0Hz)；7.33-7.31(m，2H)；7.10-7.08(dd，1H，J＝2，8.8Hz)；5.96(s，1H)；5.94(d，1H，J＝9.6Hz)；5.71-5.69(m，1H)；5.02-4.98(m，1H)；4.60(t，1H，J＝8.4Hz)；4.34-4.22(m，1H)；4.23(d，1H，J＝9.2Hz)；3.91(s，3H)；3.90-3.87(m，1H)；2.78-2.73(m，1H)；2.54-2.51(m，1H)；2.17-2.11(m，1H)；1.77-1.72(m，1H)；1.43-1.33(m，5H)；1.20(m，9H)；0.95(m，9H)；0.88-0.85(m，5H)；0.69-0.58(m，4H).MS m/z 681(M⁺+H)，703(M⁺+Na)，680(M⁺-H)。

实施例14

步骤1

3-环丙基-6-甲氧基异喹啉。通过在-15℃下逐滴地用n-BuLi(1.6M在己烷中；8.0mmol)处理在四氢呋喃(17mL)中的2，2，6，6-四甲基哌啶(1.0g，7.0mmol)来制备四甲基哌啶锂。在-15℃下15分钟后，逐滴加入N-(4-甲氧基-2-甲基亚苄基)-环己胺(660mg，2.86mmol)在四氢呋喃(3mL)中的溶液，得到紫色溶液。用20分钟使反应混合物温热至0℃，然后在0℃下一次性加入N-甲基-N-甲氧基环丙烷羧酰胺(630mg，4.4mmol)在四氢呋喃(2mL)中的溶液。使该反应混合物在室温下保持30分钟，然后加到饱和氯化铵水溶液中。用二乙醚萃取溶液，有机相用盐水洗涤，干燥，并减压浓缩。

将残余物溶解在浓氨水(15mL)中，用乙酸(1mL)处理，然后加热至回流。混合物用水稀释，所得溶液用二乙醚萃取。将醚萃取物用水、盐水洗涤，然后干燥并减压浓缩。层析(SiO₂；4∶1的己烷/乙酸乙酯)得到160mg(28％)的3-环丙基-6-甲氧基异喹啉。用1.5g亚胺实施该工艺得到400mg(30％)3-环丙基-6-甲氧基异喹啉。

步骤2

1-氯-3-环丙基-6-甲氧基-异喹啉。将3-环丙基-6-甲氧基异喹啉溶解在二氯甲烷(8mL)中并冷却至0℃。用间氯过氧苯甲酸(mCPBA，412mg，2.4mmol)在二氯甲烷(8mL)中的溶液处理该溶液，在室温下搅拌混合物2小时。用二甲基硫(100μL)猝灭反应混合物并再搅拌15分钟。用饱和碳酸氢钠水溶液(20mL)处理该混合物并分离层。用二氯甲烷萃取水相，并用硫酸镁干燥合并的有机相，减压浓缩，并层析(SiO₂；10％的在二氯甲烷中的甲醇)，得到405mg(94％)3-环丙基-6-甲氧基异喹啉N-氧化物。

将该N-氧化物溶解在二氯甲烷(5mL)中并加入1mL三氯氧化磷。在回流下加热该混合物2小时，冷却并倒到冰上。用氢氧化铵处理该混合物至pH 8，所得溶液用乙酸乙酯萃取。有机相用盐水洗涤，干燥，并减压浓缩。粗产物经层析(SiO₂；己烷/乙酸乙酯4∶1)纯化，得到310mg(总共66％)1-氯-3-环丙基-6-甲氧基-异喹啉。

步骤3

(2S，4R)-叔丁基4-(3-环丙基-6-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-2-((S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己烷-3-基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸酯

在室温下将N-BOC-4-羟基-L-脯氨酸(192mg，830μmol)溶解在二甲基亚砜(5mL)中，然后加入叔丁醇钾(270mg，2.4mmol)。在室温下搅拌所得溶液1.5小时，然后加入1-氯-3-环丙基-6-甲氧基异喹啉(4，192mg，820μmol)。将所得溶液搅拌过夜，用15mL 5％的柠檬酸水溶液稀释，并用乙酸乙酯萃取。有机相用盐水洗涤，干燥并减压浓缩，得到375mg N-BOC-4-羟基-L-脯氨酸的芳醚粗品。

将该芳醚粗品溶解在N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中并加入(O-7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)，380mg，830μmol)，然后加入3-(S)-氨基-2-(RS)-羟基己酸-N-环丙基羧酰胺盐酸盐(190mg，830μmol)和N，N-二异丙基乙胺(800μL)。将所得混合物搅拌过夜，然后用水稀释。过滤所得沉淀，用水洗涤并干燥，得到460mg(93％)(2S，4R)叔丁基4-(3-环丙基-6-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-2-((S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己烷-3-基氨基甲酰基)吡咯烷-1-羧酸酯。

步骤4

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(3-环丙基-6-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己烷-3-基)吡咯烷-2-羧酰胺

将来自步骤3的化合物溶解在4N在1，4-二氧六环中的HCl(2mL)中并在室温下搅拌1小时。减压浓缩反应混合物并将残余物溶解在N，N-二甲基甲酰胺(2mL)中。用(S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酸(100mg，440μmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(200mg，520μmol)和二异丙基乙胺(800mL)处理该溶液。用水稀释反应混合物，过滤所得沉淀，用水洗涤并干燥，得到250mg(80％)相应的2-羟基羧酰胺。将该固体溶解在二氯甲烷(20mL)中并用1，1，1-三(乙酰氧基)-1，1-二氢-1，2-苯碘酰基-3-(1H)-酮(220mg；660μmol)处理。在室温下搅拌反应混合物2小时。用二乙醚(40mL)稀释该溶液，然后加入饱和硫代硫酸钠水溶液(10mL)和10mL碳酸氢钠水溶液(10mL)。将该双相混合物搅拌10分钟并分离层。有机相用盐水洗涤，干燥并减压浓缩。残余物通过层析(SiO₂；己烷/乙酸乙酯1∶1)纯化，然后将分离出的物质从乙腈和0.01％的HCl水溶液中冻干，得到150mg(46％)(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(3-环丙基-6-甲氧基异喹啉-1-基氧基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己烷-3-基)吡咯烷-2-羧酰胺。质谱(M+Na)705。

实施例15

步骤1

4-乙酰基-6-甲氧基异色满-1，3-二酮。按文献方法(Ind.J.Chem.Sec.B，1986，25B，640-643)，将2-羧甲基-4-甲氧基苯甲酸(1.0g，4.8mmol)溶解在吡啶(1.4mL)和乙酸酐(8.6mL，9.3g，91mmol)的混合物中，然后搅拌3小时，在此期间形成固体。用二乙醚稀释该悬浮体，过滤，滤饼用二乙醚洗涤。得到905mg(81％)4-乙酰基-6-甲氧基异色满-1，3-二酮。

步骤2

6-甲氧基-3-甲基异喹啉-1(2H)-酮。将步骤1的环状酸酐(405mg，1.73mmol)溶解在氢氧化铵水溶液中并加热回流1.5小时。使混合物冷却至室温，过滤固体，然后干燥过夜，得到270mg(74％)6-甲氧基-3-甲基异喹啉-1(2H)-酮。

步骤3

1-氯-6-甲氧基-3-甲基异喹啉。将步骤2的异喹啉溶解在三氯氧化磷(2.5mL)中并加热回流1小时。减压除去过量的三氯氧化磷，将残余物溶解在氯仿中。所得溶液用1N的氢氧化钠水溶液、水和盐水洗涤。减压蒸发除去溶剂，得到粗品1-氯-6-甲氧基-3-甲基异喹啉，其直接用于下一步中。

步骤4

(2S，4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(6-甲氧基-3-甲基异喹啉-1-基氧基)吡咯烷-2-羧酸。在室温下将N-BOC-4-羟基-L-脯氨酸(A，281mg，1.21mmol)溶解在二甲基亚砜(3mL)中，然后加入叔丁醇钾(270mg，2.4mmol)。在室温下搅拌所得溶液2小时，然后冷却至0℃。然后向该冷的溶液中逐滴加入1-氯-6-甲氧基-3-甲基异喹啉在二甲基亚砜(3mL)中的溶液，然后加入t-BuOK，并使混合物温热至室温。将溶液搅拌16小时。用5％的柠檬酸水溶液将反应混合物酸化至pH＝4。用乙酸乙酯萃取该溶液，有机相用水、然后用盐水洗涤。减压浓缩有机相，得到(2S，4R)-1-(叔丁氧基羰基)-4-(6-甲氧基-3-甲基异喹啉-1-基氧基)吡咯烷-2-羧酸。

步骤5

(2S，4R)-叔丁基2-((S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己烷-3-基氨基甲酰基)-4-(6-甲氧基-3-甲基异喹啉-1-基氧基)吡咯烷-1-羧酸酯。通过如上面反应方案14步骤3中所述与3-(S)-氨基-2-(RS)-羟基己酸-N-环丙基羧酰胺盐酸盐反应将步骤4中产生的化合物(196mg，487μmol)转化为(2S，4R)-叔丁基2-((S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己烷-3-基氨基甲酰基)-4-(6-甲氧基-3-甲基异喹啉-1-基氧基)吡咯烷-1-羧酸酯，得到(2S，4R)-叔丁基2-((S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己烷-3-基氨基甲酰基)-4-(6-甲氧基-3-甲基异喹啉-1-基氧基)吡咯烷-1-羧酸酯(210mg，产率77％)，其不经进一步纯化即用于下一步中。

步骤6

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(6-甲氧基-3-甲基异喹啉-1-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺。如前所述将步骤5中产生的化合物(210mg，368μmol)转化为相应的HCl盐。然后采用与前面所述相同的条件通过与(S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酸及O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)反应将该HCl盐转化为三肽。如前所述采用戴斯-马丁氧化试剂在二氯甲烷中将由此产生的化合物转化为(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(6-甲氧基-3-甲基异喹啉-1-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺。粗产物经层析(SiO₂，45％的在己烷中的乙酸乙酯)纯化，得到85mg(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(6-甲氧基-3-甲基异喹啉-1-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺(34％)。质谱(M+)680。

实施例16

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(2-(吡啶-2-基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺(62)的合成

步骤1

通过与4.0M在二氧六环中的HCl(6.0mL)在二氯甲烷(2mL)中反应将(2S，4R)-1-叔丁基2-甲基4-(2-(吡啶-2-基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-1，2-二羧酸酯(8)(1mmol，如反应方案8中所示及WO 2006/043145中所述制备)转化为(57)。1小时后，蒸发反应混合物至干，得到(2S，4R)-甲基4-(2-(吡啶-2-基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酸酯盐酸盐(57)。

步骤2

通过将0.165mmol(57)溶解在二氯甲烷/二甲基甲酰胺(2.0mL，1∶1)中并加入Boc-L-叔-Leu-OH(0.165mmol)、O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-N，N，N，N’-四甲基脲六氟磷酸盐(O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU))(0.182mmol)和二异丙基乙胺(0.5mmol)且在室温下搅拌混合物16小时，将(2S，4R)-甲基4-(2-(吡啶-2-基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酸酯盐酸盐(57)转化为(58)。用乙酸乙酯稀释反应混合物，用1N盐酸、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤，分离乙酸乙酯层，用硫酸镁干燥，过滤并蒸发至干，得到(2S，4R)-甲基1-((S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(2-(吡啶-2-基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酸酯(58)。

步骤3

通过首先在二氯甲烷(2mL)中用4.0M在二氧六环中的HCl(3.0mL)处理步骤2中制得的粗物质以除去t-Boc基团、然后在减压蒸发除去溶剂后使所得粗产物与三乙胺(0.413mmol)和叔丁基异氰酸酯(0.165mmol)在二氯甲烷(3.0mL)中在室温下反应16小时，将(2S，4R)-甲基1-((S)-2-(叔丁氧基羰基氨基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(2-(吡啶-2-基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酸酯(58)转化为(59)。在水/有机处理(用二氯甲烷稀释并用1N盐酸、饱和碳酸氢钠和盐水洗涤)并减压蒸发至干之后，分离(2S，4R)-甲基1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(2-(吡啶-2-基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酸酯(59)。

步骤4

通过在室温下用甲醇(6.0mL)、四氢呋喃(3.0mL)和1N氢氧化钠(6mL)处理1小时将(2S，4R)-甲基1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(2-(吡啶-2-基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酸酯(59)转化为(60)。通过水/有机处理(浓缩反应混合物、用1N盐酸酸化、用乙酸乙酯萃取、用盐水洗涤、用硫酸镁干燥并减压蒸发至干)分离(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(2-(吡啶-2-基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酸(60)。

步骤5

在O-(7-氮杂苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸盐(HATU)(1.2mmol)和二异丙基乙胺(4mmol)的存在下于二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺中偶联(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(2-(吡啶-2-基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酸(60)(1mmol)与(3S)-3-氨基-N-环丙基-2-羟基己酰胺(1mmol，如参考例A中所制备)，在水/有机萃取处理后得到呈粗品固体的(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己烷-3-基)-4-(2-(吡啶-2-基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺(61)。

步骤6

在无水二氯甲烷中用戴斯-马丁氧化剂(1.2mmol)氧化(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((3S)-1-(环丙基氨基)-2-羟基-1-氧代己烷-3-基)-4-(2-(吡啶-2-基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺(61)(1mmol)，在水/有机处理并用硅胶色谱纯化粗产物后，得到(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(2-(吡啶-2-基)噻吩并[2，3-d]嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺(62)。

实施例17

类似地，按照实施例16的方法，但从(2S，4R)-1-叔丁基2-甲基4-(2-(吡啶-2-基)噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-1，2-二羧酸酯(39)(如反应方案9中所示及WO 2006/043145中所述制备)开始转化为(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(2-(吡啶-2-基)噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺(63)。

实施例18

类似地，按照实施例16的方法，但从(2S，4R)-1-叔丁基2-甲基4-(2-(1，3-二甲基-1H-吡唑-5-基)噻吩并[3，2-d]嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-1，2-二羧酸酯(45)(如反应方案10中及WO 2006/043145中所述制备)开始转化为(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(2-(1，3-二甲基-1H-吡唑-5-基)噻吩并[3，2-d嘧啶-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺(64)。

实施例19

类似地，按照实施例16的方法，但从(2S，4R)-1-叔丁基2-甲基4-(5-(吡啶-2-基)噻吩并[3，2-b]吡啶-7-基氧基)吡咯烷-1，2-二羧酸酯(33)(如反应方案7中及WO 2006/043145中所述制备)开始通过在步骤5中使用(3S)-3-氨基-4-环丁基-N-环丙基-2-羟基丁酰胺(如参考例B中制备)转化为(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(5-(吡啶-2-基)噻吩并[3，2-b]吡啶-7-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺(65)。

生物实施例

生物实施例1

用于测定组织蛋白酶B抑制的生化测定方案

将式(I)的试验化合物溶解在二甲基亚砜(DMSO)中并稀释在测定缓冲液中。完成8点剂量应答曲线以评价组织蛋白酶B酶活性抑制的IC₅₀值(IC₅₀定义为抑制最大酶活性的50％的浓度)。该测定方案由Barrett，1980调整而来。在测定缓冲液(50mM的乙酸钠，pH 5.5，1mM的二硫苏糖醇(DTT)，2mM的乙二胺四乙酸(EDTA)和20uM的肽底物(Boc-Leu-Arg-Arg-AMC)及由DMSO储备液稀释的化合物或单独地DMSO载体)中孵育人肝组织蛋白酶B。测定中最终DMSO浓度保持在1％。在25℃下将试验化合物与酶预孵育15分钟。加入底物开始反应，并在25℃下进行30分钟。采用甲基香豆素酰胺(AMC)的荧光光谱定量来监测底物的裂解。

参考文献：

Barrett AJ (1980).Fluorimetric assays for Cathepsin B and Cathepsin H with methylcoumarylamide substrates.Biochem J.187：909-912.

Canbay A et al.(2003).Cathepsin B inactivation attenuates hepatic injury and fibrosis during cholestasis.J.Clin.Invest.112：152-159.

Guicciardi ME et al.(2001).Cathepsin B Knockout mice are resistant to tumor necrosis factor-alpha-mediated hepatocyte apoptosis and liver injury.Amer J Pathology 159：2045-2054.

Baskin-Bey ES et al.(2005).Cathepsin B inaactivation attenuates hepatocyte apoptosis and liver damage in steatotic livers after cold ischemia-warm reperfusion injury.Am J Physiol Gastrointest Liver Physiol.288：G396-G402.

结果

组织蛋白酶B IC₅₀：27nM：

组织蛋白酶B IC₅₀：56nM：

组织蛋白酶B IC₅₀：49nM：

组织蛋白酶B IC₅₀：45nM：

组织蛋白酶B IC₅₀：28nM：

组织蛋白酶B IC₅₀：＜500nM：

组织蛋白酶B IC₅₀：32nM：

(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(7-亚甲基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺；

组织蛋白酶B IC₅₀：＜500nM：

组织蛋白酶B IC₅₀：33nM：

组织蛋白酶B IC₅₀：86nM：

组织蛋白酶B IC₅₀：45nM：

组织蛋白酶B IC₅₀：72nM：

(2S，4R)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-1-((S)-2-(3-环丙基甲基)脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-4-(7-基氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺；

组织蛋白酶B IC₅₀：83nM：

(2S，4R)-N-((S)-1-(环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-1-((S)-3，3-二甲基-2-(3-新戊基脲基)丁酰基)-4-(7-基氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺；

组织蛋白酶B IC₅₀：61nM：

生物实施例2

用于测定人细胞中组织蛋白酶B抑制的生化测定方案

证实试验化合物是人细胞中有效的组织蛋白酶B抑制剂并测定了细胞中50％的组织蛋白酶B抑制所需的浓度(细胞IC₅₀)。细胞中组织蛋白酶B的活性用基于活性的放射性探针在全细胞酶占有测定中测量。该方法用于确定细胞内环境中化合物对组织蛋白酶B的特异性效力。所用探针为与组织蛋白酶(包括组织蛋白酶B)有力且不可逆地结合的重氮甲基酮肽。该细胞可透性探针与活性组织蛋白酶B结合，并且该结合可量化以确定细胞中组织蛋白酶B活性水平。细胞中已与抑制剂结合的组织蛋白酶B酶活性不高，故不可与基于活性的探针结合。

采用该方法，测得(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺的基于细胞的IC₅₀为19nM，测得(2S，4R)-1-((S)-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基]-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)-喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺的IC₅₀为24nM。测定数据在附图中示出。该数据表明(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺和(2S，4R)-1-((S)-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基]-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)-喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺是细胞内环境中组织蛋白酶B的有效抑制剂。该数据也能够预测抑制组织蛋白酶B以在体内达到治疗效果所需的浓度。

测定方法：

所用方法基于已发表方法(Falgueyret J-P，et al.2004.Anal.Biochem.335：218-227)的变化形式。使人脐静脉内皮细胞(HUVEC)在24孔板中于标准生长条件下生长。实验当天用未加入任何血清但添加了2％Nutridoma-HU的HUVEC培养基(其被称为无血清培养基)洗涤细胞两次。用适宜的化合物稀释物处理细胞4小时。留下一个孔不作处理以作为无药物对照组。该化合物处理在无血清培养基中进行。

在与试验化合物进行的4小时预孵育结束时，加入基于活性的探针。所用探针为与¹²⁵I缀合的Z-Tyr-Ala-重氮甲基酮，其比活度为2000Ci/mmol，称为¹²⁵I-DMK。向各个样品孔中加入¹²⁵I-DMK，每孔4μL。将细胞放回组织培养箱中再培养1小时。在PBS中洗涤细胞，然后溶解在冰冷的溶解缓冲液如RIPA中。将溶解产物转移到管中并加入等体积的1X SDS-PAGE凝胶稀释样品上样缓冲液。

为分析探针标记的蛋白质，使样品沸腾5分钟并通过SDS-PAGE分析。加入¹⁴C-甲基化蛋白质分子量标记物以观察分子量。在置于Whatman纸上的轻轻转动的摇床上于脱色液(50mL甲醇、50mL乙酸、400mL水)中洗涤凝胶并定影45分钟，并在真空凝胶干燥器上于70℃干燥2小时。使干燥的凝胶暴露于-80℃的膜并通过自动射线照相术照相。测定自动射线照片上的谱带强度。用Microtek ScanMakeri 900扫描仪扫描自动射线照片，用方法如BioRad Imaging program QuantityOne或ImageJ量化。化合物效力计算为无抑制剂对照组的％，IC₅₀值使用适宜的方法如GraphPad Prism自剂量响应曲线外推得到。

图1：(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺(化合物1)和(2S，4R)-1-((S)-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基]-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)-喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺(化合物2)在基于细胞活性的探针测定中的效力。

生物实施例3

用于测定肝纤维化的抑制的生化测定方案

方法

通过用28天的时间(第0-28天)每5天腹腔内施用四氯化碳诱导小鼠中肝纤维化。在第11天，测定代表性小鼠的血浆丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平和天门冬氨酸氨基转移酶(AST)以确认肝损伤。从第12天开始，治疗性地施用(2S，4R)-1-((S)-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基]-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)-喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺，每天一次，持续约4周。在第33天，评价终点血浆AST和ALT、肝羟脯氨酸、PK/PD和组织学。

结果：(2S，4R)-1-((S)-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基]-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)-喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺在所评价的两种剂量(250mg/kg和50mg/kg)下均降低血浆AST和ALT(图2A和2B)及羟脯氨酸(图3)。

药物制剂实施例

包含式(I)化合物的代表性药物制剂

口服制剂

式(I)化合物 10-100mg

柠檬酸一水合物 105mg

氢氧化钠 18mg

香料

水适量至100mL

静脉内制剂

式(I)化合物 0.1-10mg

葡萄糖一水合物适量至使等渗

柠檬酸一水合物 1.05mg

氢氧化钠 0.18mg

注射用水适量至1.0mL

片剂制剂

式(I)化合物 1％

微晶纤维素 73％

硬脂酸 25％

硅胶 1％

为清楚和理解的目的，前面已通过说明和实施例较为详细地描述了本发明。在所附权利要求的范围内可进行改变和变化，这对于本领域技术人员来说将是显而易见的。因此，应理解，上面的描述是示意性而非限制性的。因此本发明的范围不应根据上面的描述确定，而应根据所附权利要求以及这些权利要求所赋予的等同方式的全部范围确定。

Claims

1.一种治疗哺乳动物中由组织蛋白酶B介导的疾病的方法，包括向哺乳动物施用治疗有效量的式(I)化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

E选自-COCONR⁵R⁶、-COCF₂CONR⁵R⁶、-COCF₂C(O)OR⁵、-COCOR⁷、-COCF₂R⁸、-COR⁹、-COCOOR¹⁰、-CONR¹¹R¹²和-B(OR¹³)₂，其中R⁵、R⁶、R⁷、R⁹、R¹⁰、R¹¹、R¹²和各个R¹³独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、杂环基和杂环基烷基，R⁸选自卤素、烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、杂环基和杂环基烷基，E中的脂肪族、脂环族和芳族基团任选被独立地选自羟基、烷氧基、卤代烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、烷硫基、芳硫基、杂芳硫基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、羧基、烷氧基羰基、烯氧基羰基、炔氧基羰基、烯基氨基羰基、酰基氨基、氨基羰基、卤素和氰基的一个、两个或三个R^a取代，R^a中的芳族或脂环族环任选被独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、羧基和羧基烷基的一个、两个或三个取代基取代；任选地，R⁵和R⁶、R¹¹和R¹²可和与其相连的氮结合以形成五到七元环；

R¹选自烷基、卤代烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、杂环基和杂环基烷基，其中R¹中的脂肪族、脂环族和芳族基团任选被独立地选自羟基、烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、烷硫基、芳硫基、杂芳硫基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、羧基、烷氧基羰基、酰基氨基、氨基羰基、卤素和氰基的一个或两个R^b取代，R^b中的任何芳族或脂环族环任选被独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、羧基和羧基烷基的一个、两个或三个取代基取代；

X选自-O-、-NR¹⁴-、-S-、-SO-和-SO₂-；

R³选自烷基、卤代烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、杂环基和杂环基烷基，其中R³中的任何脂肪族、脂环族和芳族基团任选被独立地选自羟基、烷氧基、卤代烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、烷硫基、芳硫基、杂芳硫基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、羧基、烷氧基羰基、酰基氨基、氨基羰基、卤素和氰基的一个或两个R^c取代，R^c中的任何芳族或脂环族环任选被独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、羧基和羧基烷基的一个、两个或三个取代基取代；

Y选自-C(O)NH-、-OC(O)NH-、-NR¹⁴-C(O)NH-和-NR¹⁴C(O)O-，其中各个R¹⁴选自氢和烷基，所述烷基任选被卤素、羟基、烷氧基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、芳基、杂芳基或杂环基取代，各个芳基、杂芳基和杂环基任选被选自卤素和烷基的一个、两个或三个取代基取代；

R²选自杂芳基和-CO-(稠合杂环基)，其中所述杂芳基和稠合杂环基环任选被独立地选自氢、烷基、烯基、炔基、烷硫基、羟基、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、羧基、羧基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、氨基烷基、烷基磺酰基、烷基羰基、芳基、芳烷基、芳基磺酰基、芳基羰基、芳氧基羰基、氨基磺酰基、氨基羰基、杂芳基、杂芳烷基、杂芳基磺酰基、杂芳基羰基、杂芳氧基羰基、杂环基、杂环基烷基、杂环基磺酰基、杂环基羰基、杂环氧基羰基、氨基、单取代氨基和二取代氨基的一个、两个、三个或四个R^d取代，或当两个R^d位于相邻的碳原子上时，它们与其所连接的碳原子一起形成包含选自氮、氧、硫和-SO₂-的一个或两个杂原子的四、五或六元杂环基环，所述杂环基环任选被一个或两个烷基取代；R^d中的任何芳族或脂环族环任选被独立地选自烷基、烷基羰基氨基、烷氧基羰基氨基、环烷基、环烷基烷基、环烷氧基羰基氨基、环烷基烷氧基羰基氨基、硝基、烷氧基、环烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羧基、烷氧基羰基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、酰基氨基和脲基的一个、两个或三个R^e取代，R^e中的环烷基和环烷基烷基任选被一个、两个或三个烷基取代；和

R⁴选自烷基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、杂环基和杂环基烷基；其中R⁴中的任何芳族或脂环族环任选被独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、氰基、羧基、羧基烷基、羟基烷基、烷氧基烷基、氨基烷基、烷基磺酰基、烷基羰基、芳基、芳烷基、芳基磺酰基、芳基羰基、芳氧基羰基、氨基磺酰基、氨基羰基、杂芳基、杂芳烷基、杂芳基磺酰基、杂芳基羰基、杂芳氧基羰基、杂环基、杂环基烷基、杂环基磺酰基、杂环基羰基、杂环氧基羰基、单取代氨基和二取代氨基的一个、两个或三个R^f取代，R^f中的任何芳族或脂环族环任选被独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、羟基、羧基、烷氧基羰基、单取代氨基、二取代氨基和酰基氨基的一个、两个或三个取代基取代。

2.权利要求1的方法，其中X为氧，R²为杂芳基。

3.权利要求2的方法，其中R²为包含选自氮、氧和硫的1、2或3个杂原子的9或10元双环杂芳基。

4.权利要求3的方法，其中所述9或10元双环杂芳基任选被选自烷基、烷氧基、卤素和单环杂芳基的1、2或3个基团取代。

5.权利要求4的方法，其中E为-C(O)C(O)NR⁵R⁶。

6.权利要求5的方法，其中R⁵为氢，R⁶为烷基或环烷基。

7.权利要求6的方法，其中R⁶为环丙基或环丁基。

8.权利要求7的方法，其中R¹为氢、烷基、环烷基和环烷基烷基。

9.权利要求8的方法，其中R¹为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丙基甲基、环丁基和环丁基甲基。

10.权利要求9的方法，其中R³为氢、烷基、环烷基和环烷基烷基，R⁴为烷基、环烷基和环烷基烷基。

11.权利要求10的方法，其中R³为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基和叔丁基，R⁴为甲基、乙基、正丙基、异丙基、正丁基、异丁基、叔丁基、环丙基、环丙基甲基、环丁基和环丁基甲基。

12.权利要求11的方法，其中Y为-NR¹⁴C(O)NH-，R⁴为烷基或环烷基。

13.权利要求12的方法，其中R³和R⁴均为叔丁基，R¹⁴为氢。

14.权利要求13的方法，其中R²为任选被烷氧基和杂芳基取代的喹啉基或异喹啉基。

15.权利要求14的方法，其中R²为被甲氧基和吡唑基取代的喹啉基或异喹啉基。

16.权利要求1的方法，其中所述式(I)化合物选自：

17.权利要求16的方法，其中所述式(I)化合物为(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺。

18.权利要求17的方法，其中所述式(I)化合物为(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺。

19.权利要求1的方法，其中所述由组织蛋白酶B介导的疾病选自阿尔茨海默病、关节炎、肌营养不良、炎症、肾小球肾炎、牙周病、异染性脑白质营养不良、肿瘤侵入、转移、慢性和急性胰腺炎、炎性气道疾病、骨质疏松症、骨关节炎、类风湿性关节炎、银屑病、纤维化疾病、HCV相关的肝纤维化、脂肪变性、非酒精性脂肪性肝炎、酒精相关的脂肪性肝炎、非酒精性脂肪肝病、肺纤维化、特发性肺纤维化、肾纤维化、心脏纤维化、视网膜血管生成、眼内纤维化/胶质增生、硬皮病和系统性硬化症。

20.权利要求19的方法，其中所述由组织蛋白酶B介导的疾病为纤维化疾病。

21.权利要求20的方法，其中所述纤维化疾病为肝纤维化。

22.权利要求21的方法，其中所述肝纤维化与HCV相关。

23.一种治疗哺乳动物中诊断患有HCV和纤维化的对象的方法，包括向所述哺乳动物施用有效量适于治疗HCV和纤维化的式(I)化合物或其药学上可接受的盐：

其中：

X选自-O-、-NR¹⁴-、-S-、-SO-和-SO₂-；

R³选自烷基、卤代烷基、烯基、炔基、环烷基、环烷基烷基、芳基、芳烷基、杂芳基、杂芳烷基、杂环基和杂环基烷基，其中R³中的脂肪族、脂环族和芳族基团任选被独立地选自羟基、烷氧基、卤代烷氧基、芳氧基、杂芳氧基、烷硫基、芳硫基、杂芳硫基、氨基、单取代氨基、二取代氨基、烷基磺酰基、芳基磺酰基、羧基、烷氧基羰基、酰基氨基、氨基羰基、卤素和氰基的一个或两个R^c取代，R^c中的任何芳族或脂环族环任选被独立地选自烷基、烷氧基、卤素、卤代烷基、卤代烷氧基、羧基和羧基烷基的一个、两个或三个取代基取代；

24.权利要求23的方法，其中所述纤维化为肝纤维化。

25.权利要求24的方法，其中所述对象被确诊患有HCV和肝纤维化。

26.权利要求24的方法，其中所述对象有得HCV和肝纤维化的风险。

27.权利要求23的方法，其中所述式(I)化合物为(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丙基氨基)-1，2-二氧代己烷-3-基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺或(2S，4R)-1-((S)-2-(3-叔丁基脲基)-3，3-二甲基丁酰基)-N-((S)-1-环丁基-4-(环丙基氨基)-3，4-二氧代丁烷-2-基)-4-(7-甲氧基-2-(1H-吡唑-1-基)喹啉-4-基氧基)吡咯烷-2-羧酰胺。