CN102408469A

CN102408469A - 作为丝氨酸蛋白酶抑制剂的2-氨基-4-芳氧基-1-羰基吡咯烷衍生物

Info

Publication number: CN102408469A
Application number: CN2011102644673A
Authority: CN
Inventors: R·B·佩里; J·J·考特; S·D·布里特; J·皮特利克; J·H·范德里
Original assignee: Vertex Pharmaceuticals Inc
Current assignee: Vertex Pharmaceuticals Inc
Priority date: 2003-09-05
Filing date: 2004-09-07
Publication date: 2012-04-11
Also published as: US20130116169A1; NZ580205A; KR20060073610A; HK1095594A1; AR045596A1; MY148123A; CA2536436A1; US8217048B2; TW201127828A; IL173627A0; CN1845920B; CA2536436C; EP1667998A2; RU2440368C2; NZ545158A; US20080311079A1; JP2011157369A; JP4767852B2; TWI359147B; US20110104115A1

Abstract

本发明涉及抑制丝氨酸蛋白酶活性的化合物，特别是抑制丙型肝炎病毒NS3-NS4A蛋白酶的活性的化合物。因为这样，它们通过干扰丙型肝炎病毒的生活周期来起作用，并也可以用作抗病毒药。本发明也进一步涉及包括这些化合物的组合物，在活体外给予患有HCV感染的患者。本发明还涉及通过给予包括本发明化合物的组合物来治疗患者HCV感染的方法。本发明进一步涉及制备这些化合物的方法。

Description

作为丝氨酸蛋白酶抑制剂的2-氨基-4-芳氧基-1-羰基吡咯烷衍生物

本申请是申请号为200480025418.2(PCT/US2004/029093)、申请日为2004年9月7日、发明名称为“作为丝氨酸蛋白酶、特别是HCV NS3-NS4A蛋白酶的抑制剂的2-氨基-4-芳氧基-1-羰基吡咯烷衍生物”的中国专利申请的分案申请。

技术领域

本发明涉及抑制丝氨酸蛋白酶活性的化合物，特别是抑制丙型肝炎病毒NS3-NS4A蛋白酶活性的化合物。照此，它们通过干扰丙型肝炎病毒的生活周期来起作用，并也可以用作抗病毒药。本发明还涉及制备这些化合物的方法。本发明也进一步涉及包含这些化合物的组合物，在活体外使用或者给予患有HCV感染的患者。本发明还涉及通过给予包含本发明化合物的组合物来治疗患者HCV感染的方法。

背景技术

通过丙型肝炎病毒(“HCV”)的感染是引人注目的人类医学问题。HCV被认为是大部分非甲、非乙型肝炎的病原体，在世界上具有估计3％的人类血清发病率[A.Alberti等，“Natural History of Hepatitis C，”J.Hepatology，31.，(Suppl.1)，pp.17-24(1999)]。单在美国就有几乎四百万人可能被感染[M.J.Alter等，“The Epidemiology of Viral Hepatitis in the United States，Gastroenterol.Clin.North Am.，23，pp.437-455(1994)；M.J.Alter“Hepatitis C Virus Infection in the United States”J.Hepatology，31.，(Suppl.1)，pp.88-91(1999)]。

第一次接触HCV时，只有大约20％的感染个体发展为急性临床肝炎，而其他个体可以自发地消除感染。然而在将近70％的事例中，病毒产生了可持续数十年的慢性感染[S.Iwarson“The Natural Course of Chronic Hepatitis”FEMS Microbiology Reviews，14，pp.201-204(1994)；D.Lavanchy，“Global Surveillance and Control of Hepatitis C，”J.Viral Hepatitis，6，pp.35-47(1999)]。这通常导致复发性并逐渐地使肝脏炎症恶化，其常常导致更严重的疾病状态，例如肝硬化和肝细胞癌[M.C.Kew，“Hepatitis C and Hepatocellular Carcinoma”，FEMS Microbiology Reviews，14，pp.211-220(1994)；I.Saito等，“Hepatitis C Virus Infection is Associated with the Development of Hepatocellular Carcinoma，” Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87，pp.6547-6549(1990)]。令人遗憾的是，没有使慢性HCV的发展削弱的广泛有效的治疗法。

HCV基因组编码3010-3033个氨基酸的多蛋白[Q.L.Choo，等，“Genetic Organization and Diversity of the Hepatitis C Virus.” Proc.Natl.Acad.Sci.USA，88，pp.2451-2455(1991)；N.Kato等，“Molecular Cloning of the Human Hepatitis C Virus Genome From Japanese Patients with Non-A，Non-B Hepatitis”Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87，pp.9524-9528(1990)；A.Takamizawa等，“Structure and Organization of the Hepatitis C Virus Genome Isolated From Human Carriers，”J.Virol.，65，pp.1105-1113(1991)]。人们推测HCV非结构(NS)蛋白为病毒复制提供了必要的催化手段。通过多蛋白的蛋白酶剪切衍生出NS蛋白[R.Bartenschlager等，“Nonstructural Protein 3 of the Hepatitis C Virus Encodes a Serine-Type Proteinase Required for Cleavage at the NS3/4 and NS4/5 Junctions，”J.Virol.，67，pp.3835-3844(1993)；A.Grakoui等，“Characterization of the Hepatitis C Virus-Encoded Serine Proteinase：Determination of Proteinase-Dependent Polyprotein Cleavage Sites，”J.Virol.，67，pp.2832-2843(1993)；A.Grakoui等，“Expression and Identification of Hepatitis C Virus Polyprotein Cleavage Products”J.Virol.，67，pp.1385-1395(1993)；L.Tomei等，“NS3 is a serine protease required for processing of hepatitis C virus polyprotein”，J.Virol.，67，pp.4017-4026(1993)]。

HCV NS蛋白3(NS3)包含有助于加工大部分病毒酶的丝氨酸蛋白酶活性，并因此认为其对病毒复制和传染性是不可缺少的。众所周知，在黄热病毒NS3蛋白酶中的突变降低了病毒感染性[Chambers，T.J.等，“Evidence that the N-terminal Domain of Nonstructural Protein NS3 From Yellow Fever Virus is a Serine Protease Responsible for Site-Specific Cleavages in the Viral Polyprotein”，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，87，pp.8898-8902(1990)]。已经显示NS3的头181个氨基酸(病毒多蛋白的残基1027-1207)含有加工HCV多蛋白的所有四个下游位点的NS3的丝氨酸蛋白酶区域[C.Lin等，“Hepatitis C Virus NS3 Serine Proteinase：Trans-Cleavage Requirements and Processing Kinetics”，J.Virol.，68，pp.8147-8157(1994)]。

HCV NS 3丝氨酸蛋白酶与其有关的辅助因子NS4A有助于加工全部病毒酶，并因此认为其对病毒复制是不可缺少的。这种加工似乎类似于通过人类免疫缺陷性病毒天冬氨酰基蛋白酶所进行的加工，这种蛋白酶也包含在加工HIV蛋白酶抑制剂的病毒酶中，该抑制剂抑制病毒蛋白质加工，是人类有效的抗病毒药，表明阻断病毒生活周期的此阶段可以产生治疗活性剂。因而它对于药物发现是有吸引力的靶。

已经描述了一些可能的HCV蛋白酶抑制剂[PCT公开号WO02/18369，WO 02/08244，WO 00/09558，WO 00/09543，WO 99/64442，WO 99/07733，WO 99/07734，WO 99/50230，WO 98/46630，WO 98/17679和WO 97/43310，美国专利US 5,990,276，M.Llinas-Brunet等， Bioorg.Med.Chem.Lett.，8，pp.1713-18(1998)；W.Han等，Bioorg.Med.Chem.Lett.，10，711-13(2000)；R.Dunsdon等，Bioorg.Med.Chem.Lett.，10，pp.1571-79(2000)；M.Llinas-Brunet等，，Bioorg.Med.Chem.Lett.，10，pp.2267-70(2000)；和S.LaPlante等，Bioorg.Med.Chem.Lett.，10，pp.2271-74(2000)]。

目前没有任何令人满意的抗HCV药剂或治疗法。唯一确定的对于HCV疾病的疗法是干扰素治疗法。然而，干扰素具有显著的副作用[M.A.Wlaker等，“Hepatitis C Virus：An Overview of Current Approaches and Progress”DDT，4，pp.518-29(1999)；D.Moradpour等，“Current and Evolving Therapies for Hepatitis C，”Eur.J.Gastroenterol.Hepatol.，11，pp.1199-1202(1999)；H.L.A.Janssen等，“Suicide Associated with Alfa-Interferon Therapy for Chronic Viral Hepatitis，”J.Hepatol.，21，pp.241-243(1994)；P.F.Renault 等，“Side Effects of Alpha Interferon，”Seminars in Liver Disease，9，pp.273-277.(1989)]并只在一部分病例(～25％)中引起长期的症状缓解[O.Weiland“Interferon Therapy in Chronic Hepatitis C Virus Infection”，FEMS Microbiol.Rev.，14，pp.279-288(1994)]。此外，有效的抗HCV疫苗的前景仍然是不确定的。

因此，存在可用于抗HCV治疗的化合物的需要。这种化合物将具有作为蛋白酶抑制剂的治疗潜力，特别是作为丝氨酸蛋白酶抑制剂，且更特别是作为HCV NS3蛋白酶抑制剂。这些化合物将用作抗病毒药，特别是作为抗HCV药剂。特别需要具有改进的酶抑制作用或细胞活性的化合物。

发明内容

本发明通过提供式I的化合物来满足这些需要：

其中变量如本文中所定义。

本发明也涉及包括上述化合物的组合物与它们的用途。这种组合物可以用来预先处理嵌入进患者中的侵入性器件，以在给予患者之前处理生物样品例如血液，和用于直接给予患者。在所有情况下，使用该组合物抑制HCV复制并减少HCV感染的严重程度的危险。

本发明也涉及制备式I化合物的方法。

发明的详细说明：

本发明提供了式I的化合物：

其中：

Ar是5-至10-元芳香环，含有至多4个选自O、S、N(H)、SO和SO₂的杂原子，其中1至3个环原子任选并独立地被J取代；

R¹和R²独立地是：

(C1-C12)-脂族基团-，

(C3-C10)-环烷基-或-环烯基-，

[(C3-C10)-环烷基-或-环烯基]-(C1-C12)-脂族基团-，

(C6-C10)-芳基-(C1-C12)脂族基团-，

(C6-C10)-杂芳基-(C1-C12)脂族基团-，

其中在R¹和R²中的至多3个脂族基团碳原子可以以化学上稳定的排列方式被选自O、N、S、SO或SO₂的杂原子替代；

其中每个R¹和R²独立并任选被至多3个独立地选自J的取代基取代；

R³和R³′独立地是氢或(C1-C12)-脂族基团，其中任何氢任选被卤素替代；其中任何R³的末端碳原子任选被巯基或羟基取代；或

R³是苯基或-CH₂苯基，其中所述苯基任选被至多3个独立地选自J的取代基取代；或

R³和R³′与它们所结合的原子一起形成3至6元环，该环含有至多2个选自N、NH、O、SO或SO₂的杂原子；其中该环含有至多2个独立选自J的取代基；

R⁴和R⁴′独立地是：

氢，

(C1-C12)-脂族基团-，

(C3-C10)-环烷基-或-环烯基-，

(C3-C10)-环烷基-(C1-C12)-脂族基团-，

(C6-C10)-芳基-，

(C3-C10)-杂环基-；或

(C5-C10)-杂芳基-；

其中在R⁴和R⁴′中的至多两个脂族基团碳原子可以被选自O、N、S、SO或SO₂的杂原子替代；

其中每个R⁴和R⁴′独立并任选被至多3个独立地选自J的取代基取代；

W是：

其中每个R₆独立地是：

氢-，

(C1-C12)-脂族基团-，

(C6-C10)-芳基-，

(C6-C10)-芳基-(C1-C12)脂族基团-，

(C3-C10)-环烷基-或环烯基-，

[(C3-C10)-环烷基-或环烯基]-(C1-C12)-脂族基团-，

(C3-C10)-杂环基-，

(C3-C10)-杂环基-(C1-C12)-脂族基团-，

(C5-C10)杂芳基-，或

(C5-C10)杂芳基-(C1-C12)-脂族基团-，或

与相同氮原子结合的两个R₆基团与氮原子一起形成(C3-C10)-杂环；

其中R₆任选被至多3个J取代基取代；

其中每个R₈独立地是-OR′；或R₈基团与硼原子一起形成(C3-C10)-元杂环，该杂环含有除了硼之外的至多3个选自N、NH、O、SO和SO₂的额外杂原子；

T是：

(C1-C12)-脂族基团-；

(C6-C10)-芳基-，

(C6-C10)-芳基-(C1-C12)脂族基团-，

(C5-C10)杂芳基-，或

[C5-C10)杂芳基-(C1-C12)-脂族基团-；

其中每个T任选被至多3个J取代基取代；

J是卤素，-OR′，-NO₂，-CN，-CF₃，-OCF₃，-R′，氧代，硫代，1，2-亚甲基二氧基，1，2-亚乙基二氧基，＝N(R′)，＝N(OR′)，-N(R′)₂，-SR′，-SOR′，-SO₂R′，-SO₂N(R′)₂，-SO₃R′，-C(O)R′，-C(O)C(O)R′，-C(O)CH₂C(O)R′，-C(S)R′，-C(S)OR′，-C(O)OR′，-C(O)C(O)OR′，-C(O)C(O)N(R′)₂，-OC(O)R′，-C(O)N(R′)₂，-OC(O)N(R′)₂，-C(S)N(R′)₂，-(CH₂)_0-2NHC(O)R′，-N(R′)N(R′)COR′，-N(R′)N(R′)C(O)OR′，-N(R′)N(R′)CON(R′)₂，-N(R′)SO₂R′，-N(R′)SO₂N(R′)₂，-N(R′)C(O)OR′，-N(R′)C(O)R′，-N(R′)C(S)R′，-N(R′)C(O)N(R′)₂，-N(R′)C(S)N(R′)₂，-N(COR′)COR′，-N(OR′)R′，-C(＝NH)N(R′)₂，-C(O)N(OR′)R′，-C(＝NOR′)R′，-OP(O)(OR′)₂，-P(O)(R′)₂，-P(O)(OR′)₂，或-P(O)(H)(OR′)；

R′独立地选自：

氢-，

(C1-C12)-脂族基团-，

(C3-C10)-环烷基-或-环烯基-，

[(C3-C10)-环烷基或-环烯基]-(C1-C12)-脂族基团-，

(C6-C10)-芳基-，

(C6-C10)-芳基-(C1-C12)脂族基团-，

(C3-C10)-杂环基-，

(C6-C10)-杂环基-(C1-C12)脂族基团-，

(C5-C10)-杂芳基-，或

(C5-C10)-杂芳基-(C1-C12)-脂族基团-；

其中R′任选被至多3个J基团取代；

其中与相同原子结合的两个R′基团形成3至10元芳香或非芳香环，该环含有至多3个独立地选自N、O、S、SO或SO₂的杂原子，其中所述环任选与(C6-C10)芳基、(C5-C10)杂芳基、(C3-C10)环烷基或(C3-C10)杂环基稠合，其中任何环含有至多3个独立选自J的取代基。

这些化合物通过提供具有改善的酶和/或细胞活性的化合物而解决了上述问题。例如，本发明的化合物，特别是优选的化合物比WO 98/17679的化合物显示了更好的酶抑制作用。本发明的化合物还比其它报道的化合物具有更好的细胞数据(参见本文引用的文献)。

在一个实施方案中，如果R¹是环己基、R²是叔丁基、R³’是H、R³是正丙基、W是-C(O)C(O)N(H)-环丙基、T是

；则Ar是4-喹唑啉或5-氯-2-吡啶基。

本发明还提供了式I的化合物：

其中：

n是0或1；

Ar是5至10元芳香环，含有至多4个选自O、S、N(H)、SO和SO₂的杂原子，其中1至3个环原子任选并独立地被J取代；

R¹、R²、R¹²和R¹³独立地是：

(C1-C12)-脂族基团-，

(C3-C10)-环烷基-或-环烯基-，

[(C3-C10)-环烷基-或-环烯基]-(C1-C12)-脂族基团-，

(C6-C10)-芳基-(C1-C12)脂族基团-，

(C6-C10)-杂芳基-(C1-C12)脂族基团-，

其中在R¹和R²中的至多3个脂族基团碳原子可以以化学上稳定的排列方式被选自O、N、NH、S、SO或SO₂的杂原子替代；

其中每个R¹和R²在每个可取代的位置独立并任选被至多3个独立地选自J的取代基取代；

R³和R³′与它们所结合的原子一起形成3至6元环，该环含有至多2个选自N、NH、O、SO和SO₂的杂原子；其中该环含有至多2个独立选自J的取代基；

R⁴和R⁴′独立地是：

氢-，

(C1-C12)-脂族基团-，

(C3-C10)-环烷基-或-环烯基-，

(C3-C10)-环烷基-(C1-C12)-脂族基团-，

(C6-C10)-芳基-，

(C3-C10)-杂环基-；或

(C5-C10)-杂芳基-；

其中在R⁴和R⁴′中的至多两个脂族基团碳原子可以被选自O、N、S、SO和SO₂的杂原子替代；

W是：

其中

Y是-CO₂H、-CO₂H的衍生物或-CO₂H的生物电子等排体；

每个R₆独立地是：

氢-，

(C1-C12)-脂族基团-，

(C6-C10)-芳基-，

(C6-C10)-芳基-(C1-C12)脂族基团-，

(C3-C10)-环烷基-或环烯基-，

[(C3-C10)-环烷基-或环烯基]-(C1-C12)-脂族基团-，

(C3-C10)-杂环基-，

(C3-C10)-杂环基-(C1-C12)-脂族基团-，

(C5-C10)杂芳基-，或

(C5-C10)杂芳基-(C1-C12)-脂族基团-，或

其中R₆任选被至多3个J取代基取代；

T是：

(C1-C12)-脂族基团-；

(C6-C10)-芳基-，

(C6-C10)-芳基-(C1-C12)脂族基团-，

(C5-C10)杂芳基-，或

(C5-C10)杂芳基-(C1-C12)-脂族基团-；

其中每个T任选被至多3个J取代基取代；并且

其中在T中的至多3个脂族基团碳原子可以以化学上稳定的排列方式被选自O、N、NH、S、SO或SO₂的杂原子替代；

条件是如果T是吡咯，吡咯在3位不被J取代，其中J是-C(O)R′，-C(O)C(O)R′，-C(O)CH₂C(O)R′，-C(S)R′，-C(S)OR′，-C(O)OR′，-C(O)C(O)OR′，-C(O)C(O)N(R′)₂，-C(O)N(R′)₂，-C(S)N(R′)₂，-C(＝NH)N(R′)₂，-C(O)N(OR′)R′，或-C(＝NOR′)R′；

R′是：

氢-，

(C1-C12)-脂族基团-，

(C3-C10)-环烷基-或-环烯基-，

[(C3-C10)-环烷基或环烯基]-(C1-C12)-脂族基团-，

(C6-C10)-芳基-，

(C6-C10)-芳基-(C1-C12)脂族基团-，

(C3-C10)-杂环基-，

(C6-C10)-杂环基-(C1-C12)脂族基团-，

(C5-C10)-杂芳基-，或

(C5-C10)-杂芳基-(C1-C12)-脂族基团-；

其中R′任选被至多3个J基团取代；

其中与相同原子结合的两个R′基团形成3-至10-元芳香或非芳香环，该环含有至多3个独立地选自N、O、S、SO或SO₂的杂原子，其中所述环任选与(C6-C10)芳基、(C5-C10)杂芳基、(C3-C10)环烷基或(C3-C10)杂环基稠合，其中任何环含有至多3个独立选自J的取代基。

在一个实施方案中，如果R¹是环己基、R²是叔丁基、R³′是H、R³是正丙基、W是-C(O)C(O)N(H)-环丙基、T是

；则Ar不是4-喹唑啉或5-氯-2-吡啶基。

在另一个实施方案中，如果T是吡咯，吡咯不被J取代，但任选与5-元或6-元芳基或杂芳基环稠合。

在另一个实施方案中，如果T是吡咯，吡咯不在3位被J取代，但任选与5-元或6-元芳基或杂芳基环稠合。

在另一个实施方案中，T不是

在另一个实施方案中，T不是吡咯。

在一个更具体的实施方案中，本发明提供了一种化合物，其中n是0，并且该化合物具有式I-A的结构：

其中变量如本文任一实施方案中所下定义。在一种式A的化合物中，W优选：

在另一个具体的实施方案中，本发明提供了一种化合物，其中n是1，并且该化合物具有式I-B的结构：

其中变量如本文任一实施方案中所下定义。在式I-B的化合物中，W优选：

定义

本文中使用的术语“芳基”是指单环或双环碳环的芳香环系。苯基是一个单环芳香环系的例子。双环芳香环系包括两个环是芳香环的系统，例如萘基，和两个环中只有一个是芳香环的系统，例如四氢萘。

本文中使用的术语“生物电子等排体”-CO₂H是指在生物学活性分子中可以替代羧基的化学基团。在下列文献中公开了这种基团的例子：Christopher A.Lipinski“Bioisosteres in Drug Design”Annual Reports in Medicinal Chemistry，21，pp.286-88(1986)和C.W.Thornber“Isosterism and Molecular Modification in Drug Design” Chemical Society Reviews，pp.563-580(1979).这种基团的例子包括，但不局限于：-COCH₂OH，-CONHOH，SO₂NHR′，-SO₃H，-PO(OH)NH₂，-CONHCN，-OSO₃H，-CONHSO₂R′，-PO(OH)₂，-PO(OH)(OR′)，-PO(OH)(R′)，-OPO(OH)₂，-OPO(OH)(OR′)，-OPO(OH)(R′)，HNPO(OH)₂，-NHPO(OH)(OR′)，-NHPO(OH)(R′)

本文中使用的术语“杂环基”是指单环或双环的非芳香环系，在每个环中以化学稳定的排列方式含有1至3个选自O、N、NH、S、SO或SO₂的杂原子或杂原子基团。在“杂环基”的双环非芳香环系实施方案中，一个或两个环可以含有所述杂原子或杂原子基团。

杂环的例子包括：3-1H-苯并咪唑-2-酮，3-(1-烷基)-苯并咪唑-2-酮，2-四氢呋喃基，3-四氢呋喃基，2-四氢苯硫基，3-四氢苯硫基，2-吗啉基，3-吗啉基，4-吗啉基，2-硫吗啉代，3-硫吗啉代，4-硫吗啉代，1-吡咯烷基，2-吡咯烷基，3-吡咯烷基，1-四氢哌嗪基，2-四氢哌嗪基，3-四氢哌嗪基，1-哌啶基，2-哌啶基，3-哌啶基，1-吡唑啉基，3-吡唑啉基，4-吡唑啉基，5-吡唑啉基，1-哌啶基，2-哌啶基，3-哌啶基，4-哌啶基，2-噻唑烷基，3-噻唑烷基，4-噻唑烷基，1-咪唑烷基，2-咪唑烷基，4-咪唑烷基，5-咪唑烷基，二氢吲哚基，四氢喹啉基，四氢异喹啉基，苯并四氢噻吩(benzothiolane)，benzodithiane，以及1，3-二氢-咪唑-2-酮。

本文中使用的术语“杂芳基”是指单环或双环的芳香环系，在每个环中以化学稳定的排列方式含有1至3个选自O、N、NH或S的杂原子或杂原子基团。在这种“杂芳基”的双环芳香环系实施方案中：

-一或两个环可以是芳香环；和

-一或两个环可以含有所述杂原子或杂原子基团。

杂芳基的例子包括：2-呋喃基，3-呋喃基，N-咪唑基，2-咪唑基，4-咪唑基，5-咪唑基，苯并咪唑基，3-异

唑基，4-异

唑基，5-异

唑基，2-

唑基，4-

唑基，5-

唑基，N-吡咯基，2-吡咯基，3-吡咯基，2-吡啶基，3-吡啶基，4-吡啶基，2-嘧啶基，4-嘧啶基，5-嘧啶基，哒嗪基(例如，3-哒嗪基)，2-噻唑基，4-噻唑基，5-噻唑基，四唑基(例如，5-四唑基)，三唑基(例如，2-三唑基和5-三唑基)，2-噻吩基，3-噻吩基，苯并呋喃基，苯并噻吩基，吲哚基(例如，2-吲哚基)，吡唑基(例如，2-吡唑基)，异噻唑基，1，2，3-

二唑基，1，2，5-

二唑基，1，2，4-

二唑基，1，2，3-三唑基，1，2，3-噻二唑基，1，3，4-噻二唑基，1，2，5-噻二唑基，嘌呤基，吡嗪基，1，3，5-三嗪基，喹啉基(例如，2-喹啉基，3-喹啉基，4-喹啉基)和异喹啉基(例如，1-异喹啉基，3-异喹啉基，或 4-异喹啉基)。

本文中使用的术语“脂族基团”是指直链或支链烷基、烯基或炔基。当然，烯基或炔基实施方案在脂肪链中需要至少两个碳原子。术语“环烷基或环烯基”是指非芳香的单环或稠合或桥接的双环碳环系。环烯基环具有一个或多个不饱和单元。优选的环烷基基团包括环丙基，环丁基，环戊基，环己基，环己烯基，环庚基，环庚烯基，降冰片基(nornbornyl)，金刚烷基和十氢化萘基。

本文中使用的碳原子标号可以具有标明的整数和任何间隔的整数。例如，在(C1-C4)-烷基中的碳原子的数目是1、2、3或4。应该理解，这些标号是指在合适基团中的原子总数。例如，在(C3-C10)-杂环基中，碳原子和杂原子的总数是3(如在氮丙啶中)、4、5、6(如在吗啉中)、7、8、9或10。

本文中使用的短语“化学稳定的排列方式”是指使得化合物足够稳定、以通过本领域已知的方法来制备和给予哺乳动物的化合物结构。典型地，这种化合物在40℃或更低的温度下、在没有水份或其它化学反应条件的情况下能够至少稳定一周。

优选实施方案

在本发明的另一个实施方案中，Ar是苯基、吡啶基、喹啉基、嘧啶基或萘基，其中每个基团任选被1、2或3个J基团取代。

在本发明的另一个实施方案中，Ar是

在本发明的另一个实施方案中，Ar是：

在特别优选的实施方案中，Ar是：

在本发明的另一个实施方案中，Ar是含有0、1或2个氮杂原子的6或10-元芳香环，其中1、2或3个环原子任选并独立地被J取代。

在本发明的任一实施方案中，Ar上的每个J基团独立地是OR′，NO₂，CN，CF₃，OCF₃，R′，COR′，C(O)OR′，C(O)N(R′)₂，SO₂R′，SO₂N(R′)₂，1，2-亚甲基二氧基，1，2-亚乙基二氧基，或NR′C(O)OR′，NR′SO₂R′.

在本发明的任一实施方案中，Ar上的每个J基团优选并独立地是OR′、卤素、CN、CF₃、R′或COR′。更优选，J是卤素(特别是氯)。

在本发明的另一个实施方案中，Ar上的每个J基团独立地是卤素、三氟甲基、甲基或NO₂。

按照任一优选实施方案，T是(C6-C1O)-芳基-或(C5-C10)杂芳基-，其中每个T任选被1、2或3个J取代基取代。

在一个优选实施方案中，T是6元或10元芳基。在另一个优选实施方案中，T是任选与另一个5或6元芳基或杂芳基稠合的6元杂芳基。

更优选实施方案是其中T是下列的那些：

在一个更优选实施方案中，T是：

或吡嗪。

在本发明的某些实施方案中，任一T基团任选与5元或6元芳基或杂芳基稠合。

相应地，本发明的一个实施方案提供了其中T是下列的化合物：

其中每个T基团任选与一个5-元或6-元芳基或杂芳基稠合。

在另一个实施方案中，T是：

其中T任选与一个5-元或6-元芳基或杂芳基稠合。

在某些实施方案中，T不与另一个环稠合。

在本发明的任一实施方案中，T中的每个芳基或杂芳基任选并独立地被1、2或3个选自-CH₃、-H₂CH₃、卤素、乙酰基、-CO₂H、-(C1-C6-烷基)-CO₂H或-O₂R′的基团取代。

在某些实施方案中，T中的1个脂族基团碳原子以化学稳定的排列方式被一个选自O、N、NH、S、SO或SO₂的杂原子替代。该杂原子优选O或NH。在一个可供选择的实施方案中，没有脂族基团碳原子被T替代。

在本发明的某些化合物中，脂族基团将T与分子的残余部分连接。通常，在n是0的化合物中，优选在这些脂族基团连接物中的脂族基团碳原子被替代。在n是1的化合物中，脂族基团连接基团优选没有被杂原子替代。此外，其中n是1的化合物中，优选没有脂族基团连接基团。

按照一个优选实施方案，W是-C(O)-C(O)-R₆。优选，R₆是苯基，吡啶基，(C3-C6)-烷基，(C3-C6)-环烷基，-OH，-O-(C1-C6)-烷基，-N(H)-(C3-C6)-环烷基，-N(H)-C(H)(CH₃)-(C6-C10)芳基，-N(H)-C(H)(CH₃)-(C3-C10)-杂环基，或-N(H)-C(H)(CH₃)-(C5-C10)-杂芳基，其中每个芳基、杂环基和杂芳基任选被卤素取代。

优选实施方案选自：

更优选，R₆是异丙基。

按照一个实施方案，W是-C(O)-C(O)-OR₆.在该实施方案中，R₆优选氢，(C1-C12)-脂族基团(更优选，C1-C6-烷基)，(C6-C10)芳基，(C3-C10)-环烷基或-环烯基，(C3-C10)-杂环基，(C5-C10)杂芳基，或C3-C6-环烷基-(C1-C3)-烷基，其中环烷基优选环丙基。芳基任选被至多3个J基团取代，其中J是卤素，优选氯或氟。更优选，R₆是H或甲基。

按照另一个实施方案，W是-C(O)-C(O)-N(R₆)₂，其中R₆是氢，(C1-C6)-烷基，(C1-C6)-烯基，(C6-C10)-芳基-(C1-C6)-烷基-，或(C6-C10)-杂芳基-(C1-C6)-烷基-，其中R₆任选被至多3个J基团取代。优选，R₆是氢，(C3-C10)-环烷基或-环烯基，或(C3-C10)-杂环基。或者，一个R₆是氢且另一个R₆是(C6-C10)-芳基-(C1-C3)烷基-，其中烷基任选被CO₂H取代；(C3-C6)环烷基-；(C5)-杂环基-(C1-C3)烷基-；(C3-C6)烯基-；或每个R₆是(C1-C6)-烷基-。或者，每个R₆是(C1-C3)-烷基-。

最优选，W中的-NHR₆是：

在该实施方案中，在烷基和芳基上的优选的J取代基是卤素、羧基和杂芳基。在芳基上的更优选的取代基是卤素(优选氯或氟)，且在烷基上的更优选的J取代基是羧基和杂芳基。

按照式I的其它优选实施方案，W是：

其中NR₆R₆是-NH-(C1-C6脂族基团)，-NH-(C3-C6环烷基)，-NH-CH(CH₃)-芳基，或-NH-CH(CH₃)-杂芳基，其中所述芳基或所述杂芳基任选被至多3个卤素取代。

在W的任一优选实施方案中，NR₆R₆是：

在W的任一优选实施方案中，NR₆R₆是：

在W的任一更优选实施方案中，NR₆R₆是：

在W的任一更优选实施方案中，NR₆R₆是：

按照一个实施方案，R¹选自：

按照一个优选实施方案，R¹选自：

按照另一个优选实施方案，R¹是：

按照另一个优选实施方案，R¹是：

最优选，R¹是环己基。

按照一个实施方案，R²是：

按照另一个实施方案，R²是

按照任一优选实施方案，R²是：

按照任一更优选实施方案，R²是：

在任一最优选实施方案中，R²是叔丁基。

按照一个实施方案，R³是：

按照一个优选实施方案，R³是：

更优选，R³是丙基(优选，正丙基)。

在本发明的任一优选实施方案中，R³′是H。

按照另一个实施方案，R³和R³′与它们所结合的原子一起形成环系：

按照另一个实施方案，R³′是氢且R³是：

按照优选实施方案，R³′是氢且R³是：

在本发明的其它实施方案中，R³′是氢且R³是：

按照一个实施方案，R⁴或R⁴′中的一个是氢。

按照另一个实施方案，R⁴或R⁴′中的一个是(C1-C6)-烷基。

按照一个优选实施方案，R⁴和R⁴′是氢。

在某些实施方案中，R¹、R²、R³或R⁴中的1或2个碳原子任选并独立地被N、NH、O或S替代。

相应地，本发明的一个实施方案提供了一种R¹是环己基的化合物，其中1或2个碳原子任选被N、NH、O或S替代，并且其中每个原子任选和独立地被1、2或3个J基团取代，其中J是卤素，OH，OR′，NH，N(R′)₂(且R′优选是(C1-C6)-烷基)。

在某些其它实施方案中，R¹、R²、R³或R⁴中没有碳原子被N、NH、O或S替代。在其它实施方案中，这些基团没有J取代基。

本发明的化合物可以含有一个或多个不对称碳原子，并因此可以以消旋体和消旋混合物、单一对映体、非对映体混合物和单独的非对映体的形式出现。这些化合物的所有这样的异构形式明显包括在本发明内。每个立体碳可以是R或S构型。

优选，本发明的化合物具有在化合物1-76中描述的结构和立体化学。

上面列举的任一项优选实施方案，包括上述种类的那些实施方案，可以分别定义式I或合并，产生本发明的优选实施方案。

下述在反应路线、制备和实施例中使用的缩写是：

THF：四氢呋喃

DMF：N，N，-二甲基甲酰胺

EtOAc：乙酸乙酯

AcOH：乙酸

HOBt：1-羟基苯并三唑水合物

EDC：1-(3-二甲基氨基丙基)-3-乙基碳二亚胺盐酸盐

NMM：N-甲基吗啉

NMP：N-甲基吡咯烷酮

EtOH：乙醇

t-BuOH：叔丁醇

Et₂O：乙醚

BOC：叔丁氧羰基

BOC₂O：二碳酸二叔丁基酯

Cbz：苄氧羰基

Chg：环己基甘氨酸

TbG：叔丁基甘氨酸

Fmoc：9-芴基甲氧基羰基

DMSO：二甲亚砜

TFA：三氟乙酸

DCCA：二氯乙酸

DCE：二氯乙烷

DIEA：二异丙基乙胺

MeCN：乙腈

PyBrOP：三(吡咯烷基)溴代

六氟磷酸盐

TBTU或HATU：2-(1H-苯并三唑-1-基)-1，1，3，3-四甲基四氟硼酸盐

DMAP：4-二甲基氨基吡啶

PPTS：吡啶

对-甲苯磺酸盐

IBX：全碘代苯甲酸

AIBN：2，2′-偶氮二异丁腈

TEMPO：2，2，6，6-四甲基-1-哌啶基氧基，自由基)

rt或RT：室温

ON：过夜

ND：没有检出

MS：质谱

LC：液相色谱

一般合成方法：

通常本发明的化合物可以通过本领域技术人员已知的方法制备。下面的反应路线1-7说明了本发明化合物的合成路线。其它对于普通熟练的有机化学工作者显而易见的等效的反应路线，可以做为选择地用来合成分子的各种部分，正如下面的一般反应路线和下述的制备实施例所说明的那样。

反应路线1

上面的反应路线1提供了用于制备具有各种Ar基团的式I化合物的一般合成路线，其中T是吡嗪，R¹是环己基，R²是叔丁基，W是-C(O)C(O)-N(H)-环丙基。正如熟练的实践者所认识的那样，除了那些上述所描述的，带有T、R¹和R²的式I化合物可以通过变化的合成路线来制备。

例如，其中T不是吡嗪的式I化合物可以通过化合物5(去除Z基团以后)与式T-C(O)-OH的化合物在合适的偶合条件下反应来制备。

类似地，在化合物3至化合物4的转化中取代Z-Tbg-OH的另一个氨基酸衍生物、或在化合物4至化合物5的转化中取代Z-Chg-OH的另一个氨基酸衍生物，将会分别提供具有变化的R²和R¹基团的化合物。

反应路线2

上述反应路线2提供了用于制备化合物59的一般合成路线。

反应路线3

在反应路线3中描述了可供选择的制备本发明化合物的方法。在该方法中，使4-羟脯氨酸衍生物13与化合物14反应，以形成化合物15。在反应路线3中，P¹是氢或合适的胺保护基，P²是氢或合适的羧基保护基，Ar如本文所定义，X是合适的离去基团。在下面列出的一个实施方案中，P¹是叔丁氧羰基，P²是氢，Ar是4-氯-2-吡啶，X是Cl，且13和14是在tBuOK、DMSO和THF的存在下反应。

正如熟练的实践者所理解的那样，然后化合物15可以继续通过常规方法形成式I的化合物。一种这样的方法描述在下面反应路线4中。

反应路线5描述了用于制备本发明化合物(59)的可供选择的方法。在反应路线5中使用的步骤可以通过例如使用不同的试剂或以不同的顺序进行反应来改进。

反应路线6

反应路线6描述了制备化合物28的方法。在该实施方案中，在氢解条件下，化合物27通过去除苄氧基羰基保护基转变为化合物28。反应路线6可以使用熟练的实践者已知的技术进行改进，以得到化合物28。

反应路线7

反应路线7描述了制备本发明化合物的可供选择的方法。在反应路线7中，变量如本文中所描述。

相应地，本发明的一个实施方案提供了一种用于制备式I化合物的方法，正如在本文任一实施方案中所定义的那样，包括步骤：在式III的化合物的存在下，式II的化合物反应形成式IV的化合物：

其中：

R¹⁰是胺保护基、本文中描述的HCV蛋白酶抑制剂的P3-残基、或本文中描述的HCV蛋白酶抑制剂的P4-P3-残基，且其中P3和P4-P3残基任选是保护氨基-末端的封端基团；

R¹¹是羧基保护基或本文中描述的HCV蛋白酶抑制剂的P1残基。其中P1残基任选被羧基末端保护基或W保护。Ar如本文任一实施方案中所下定义。X是合适的离去基团。正如熟练的实践者所理解的那样，可以原位产生合适的离去基团。

在一个可供选择的实施方案中，式II中的4-羟基可以转变为离去基团。在这样一个实施方案中，X是亲核的氧，其与II起反应以形成IV。

如本文中所使用的，P1、P3、P4指的是本领域所下定义且熟练的实践者所熟知的HCV蛋白酶抑制剂的残基。

式IV的化合物可以按照本文中描述的方法继续形成式I的化合物。

尽管在下面描绘和描述了某些典型的实施方案，应理解，本发明的化合物可以按照上述通常描述的方法、使用通常对于本领域普通技术人员可得到的合适起始原料来制备。

本发明的另一个实施方案提供了包括式I化合物或它们的药学可接受的盐的组合物。按照一个优选实施方案，式I的化合物以有效降低样品或患者中的病毒的数量存在，其中所述病毒编码病毒生活周期所必需的丝氨酸蛋白酶，和药学可接受的载体。

[0105]如果本发明化合物的药学可接受的盐在组合物中使用，优选源于无机或有机酸和碱的那些盐。在这种酸性盐之中包括下列：醋酸盐，己二酸盐，藻朊酸盐，天冬氨酸盐，苯甲酸盐，苯磺酸盐，硫酸氢盐，丁酸盐，柠檬酸盐，樟脑酸盐，樟脑磺酸盐，环戊烷-丙酸盐，二葡糖酸盐(digluconate)，十二烷基硫酸盐，乙磺酸盐，富马酸盐，葡糖庚酸盐，甘油磷酸盐，半硫酸盐，庚酸盐，己酸盐，盐酸盐，氢溴酸盐，氢碘酸盐，2-羟基乙磺酸盐，乳酸盐，马来酸酯，甲磺酸盐，2- 萘磺酸盐，烟酸盐，草酸盐，双羟萘酸盐，果胶酯酸盐(pectinate)，过硫酸盐，3-苯基-丙酸盐，苦味酸盐，新戊酸盐，丙酸盐，琥珀酸盐，酒石酸盐，硫氰酸盐，甲苯磺酸盐和十一烷酸盐。碱盐包括铵盐，碱金属盐例如钠和钾盐，碱土金属盐例如钙和镁盐，与有机碱成的盐例如二环己基胺盐、N-甲基-D-葡糖胺和与氨基酸例如精氨酸、赖氨酸成的盐，等等。

同样，含有碱性氮的基团可以用例如下列试剂季铵化：低级卤烃类，例如甲基、乙基、丙基和丁基氯化物、溴化物和碘化物；二烷基硫酸酯，例如二甲基、二乙基、二丁基和二戊基硫酸酯，长链卤化物例如癸基、月桂基、十四烷基和十八烷基氯化物、溴化物和碘化物，芳烷基卤化物，例如苄基和苯乙基溴化物及其它。从而获得水溶或油溶的或可分散的产物。

在本发明的组合物和方法中使用的化合物，也可以通过添加合适的官能团来改性，以提高有选择性的生物学特性。这种改性在本领域是已知的，并且包括下列：提高到所给定生物学体系(例如血液，淋巴系统，中枢神经系统)的生物学渗透，提高口服利用度，增加溶解性以注射给药，改变代谢作用和改变排泄速率。

可以用于这些组合物的药学可接受的载体包括但不局限于：离子交换树脂，氧化铝，硬脂酸铝，卵磷脂，血清蛋白，例如人血清白蛋白，缓冲物质例如磷酸脂，甘氨酸，山梨酸，山梨酸钾，饱和植物脂肪酸的偏甘油酯混合物，水，盐或电解液，例如硫酸鱼精蛋白，磷酸氢二钠，磷酸氢钾，氯化钠，锌盐，胶态二氧化硅，三硅酸镁，聚乙烯基吡咯烷酮，纤维素基物质，聚乙二醇，羧甲基纤维素钠，聚丙烯酸酯，石蜡，聚乙烯-聚氧化丙烯-嵌段聚合物，聚乙二醇和羊毛脂。

按照一个优选实施方案，可以将本发明的组合物配制成用于药学给予哺乳动物优选人的形式。

本发明的这种药物组合物可以通过口服、胃肠外、吸入喷雾剂、局部、直肠、鼻、面颊、阴道或借助于嵌入式储库形式进行给予。本文中使用的术语“肠胃外的”包括皮下的、静脉内的、肌肉内的、关节内的、滑液内的、胸骨内的、鞘内的、肝内的、损伤内的和颅内的注射或输液技术。优选，组合物以口服或静脉内的方式给予。

本发明组合物的无菌注射形式可以是含水的或油性的悬浮液。这些悬浮液可以按照本领域已知的技术、使用合适的分散或润湿剂和悬浮剂来配制。无菌注射制剂还可以是在无毒的胃肠外可接受的稀释剂或溶剂中的无菌注射溶液或悬浮液，例如在1，3-丁二醇中的溶液。可以采用的可接受的赋形剂和溶剂是水、林格溶液和等渗氯化钠溶液。另外，通常使用无菌的不挥发油作为溶剂或悬浮培养基。为此目的，可以使用任何温和的不挥发油包括合成的单-或二酸甘油酯。脂肪酸，例如油酸和其甘油脂衍生物可有效用于注射剂的制备，例如天然的药学-可接受的油类，比如橄榄油或蓖麻油，特别是它们的聚氧乙烯形式。这些油剂或悬浮液还可以含有长链醇稀释剂或分散剂，例如羧甲基纤维素或类似的分散剂，它们通常用在药学可接受的剂型包括乳剂和悬浮液的制剂中。为制剂的目的，也可以使用其它通常使用的表面活性剂，例如Tweens、Spans及其它乳化剂或生物利用率增强剂，它们通常用于制造药学可接受的固体、液体、或其它剂型。

在用于抗病毒的预防和治疗、特别是抗HCV介导的疾病的单疗法中，本文中描述的蛋白酶抑制剂化合物的每天剂量水平在大约0.01和大约100毫克/千克体重之间，优选在大约0.5和大约75毫克/千克体重之间。典型地，本发明的药物组合物每天给药约1到5次，或者连续输液。这样的给药方式可用于慢性的或急性的疗法。可以与载体材料结合以制备单一剂型的活性组分的量可根据所治疗的宿主和具体的给药方式加以改变。典型的制剂将含有约5％到约95％的活性化合物(w/w)。优选，这样的制剂含有约20％到约80％的活性化合物。正如熟练的实践者所认识到的那样，用IU典型地标识测定干扰素的剂量(例如大约4百万IU至大约12百万IU)。

当本发明的组合物包括式I化合物和一种或多种辅助治疗剂或预防剂的联用时，化合物和辅助试剂两者的剂量水平应该在单疗法方案的通常给药剂量的约10％到100％之间，且更优选在10至80％之间。

本发明的药物组合物可以以任一口服可接受的剂型包括但不限于胶囊、片剂、水悬浮液或溶液的形式口服给予。在用于口服使用的片剂的情况下，通常使用的载体包括乳糖和玉米淀粉。也可典型地加入润滑剂，例如硬脂酸镁。对于以胶囊的形式口服给药，有用的稀释剂包括乳糖和干燥的玉米淀粉。当需要口服使用水悬浮液时，活性组分与乳化剂和悬浮剂相结合。如果需要的话，也可以加入某些甜味剂、调味剂或着色剂。

或者本发明的药物组合物可以以用于直肠给药的栓剂的形式给予。这些可以通过将试剂与合适的无刺激性的赋形剂混合来制备，该赋形剂在室温下是固体，但在直肠温度下是液体，因此能在直肠中融化以释放药物。这种材料包括可可脂，蜂蜡和聚乙二醇。

本发明的药物组合物也可以局部给予，特别是当治疗的靶位包括通过局部施用易达到的部位或器官的时候，包括眼病、皮肤疾病或下部肠道疾病。可容易地制备对于这些部位或器官中的每个合适的局部制剂。

用于下部肠道的局部施用可以以直肠栓制剂(参见上面)或合适的灌肠制剂的形式来实施。也可以使用局部-透皮贴片。

就局部施用而言，可以将药物组合物配制成含有悬浮于或溶于一种或多种载体中的活性组分的合适的油膏形式。用于本发明化合物的局部给药的载体包括但不局限于矿物油，液体矿脂，白凡士林，丙二醇，聚氧化乙烯，聚氧化丙烯化合物，乳化蜡和水。或者，可以将药物组合物配制成含有悬浮于或溶于一种或多种药学可接受的载体中的活性组分的合适的洗剂或乳膏剂。合适的载体包括但不局限于矿物油，单硬脂酸山梨糖醇酐酯，聚山梨酸酯60，鲸蜡基酯蜡，鲸蜡硬脂醇，2-辛基十二烷醇，苯甲醇和水。

就眼科用途而言，药物组合物可以配制成在等渗、pH值调整的无菌生理盐水中的微粉化悬浮液，或优选配制成在等渗的、pH值调整的无菌生理盐水中的溶液，药物组合物中有或没有防腐剂例如苯扎氯铵存在。或者，对于眼科用途，可以将药物组合物配制在油膏比如凡士林中。

本发明的药物组合物也可以经鼻用气雾剂或吸入剂给予。这样的组合物是按照药物制剂领域所众所周知技术来制备的，并且可以制成生理盐水溶液，采用苯甲醇或其它合适的防腐剂、提高生物利用度的吸收促进剂、氟碳化合物和/或其它常规的增溶或分散剂。

最优选的是配制成口服的药物组合物。

在另一个实施方案中，本发明的组合物另外包括另一种抗病毒药剂，优选抗HCV药剂。这种抗病毒药剂包括，但不局限于：免疫调节药剂，例如α-、β-和γ-干扰素，PEG化的(pegylated)衍生干扰素-α化合物，和胸腺素；其它抗病毒药剂，例如三氮唑核苷(病毒唑)、三环癸胺和汰比夫定(telbivudine)；其它丙型肝炎蛋白酶抑制剂(NS2-NS3抑制剂和NS3-NS4A抑制剂)；其它HCV生活周期中的靶向抑制剂，包括解螺旋酶和聚合酶抑制剂；核糖体内部进入抑制剂；广谱病毒抑制剂，例如IMPDH抑制剂(例如，美国专利US 5,807,876，6,498,178，6,344,465，6,054,472，WO 97/40028，WO 98/40381，WO 00/56331中的化合物，和霉酚酸和它们的衍生物，且包括但不限于VX-497，VX-148和/或VX-944)；或上述任一项的联用。还参见W.Markland等， Antimicrobial & Antiviral Chemotherapy，44，p.859(2000)和U.S.专利6,541,496。

本文使用下列定义(到本申请的申请日期时止，具有对应于可获得的产品的商标)。

“Peg-Intron”是指PEG-

聚乙二醇干扰素(peginteferon)α-2b，得自于Schering Corporation，Kenilworth，NJ；

[0125]“Intron”是指Intron-

干扰素α-2b得自于Schering Corporation，Kenilworth，NJ；

[0126]“病毒唑”是指病毒唑(1-β-D-呋喃核糖基-1H-1，2，4-三唑-3-甲酰胺，得自于ICN Pharmaceuticals，Inc.，Costa Mesa，CA；在Merck Index，entry 8365，Twelfth Edition中描述；也可以

从Schering Corporation，Kenilworth，NJ得到，或以

从Hoffmann-La Roche，Nutley，NJ得到；

[0127]“派罗欣”是指

聚乙二醇干扰素α-2a得自于Hoffmann-La Roche，Nutley，NJ；

[0128]“Roferon”是指

重组细胞干扰素α-2a，得自于Hoffmann-La Roche，Nutley，NJ；

[0129]“Berefor”是指

干扰素α-2，得自于Boehringer Ingelheim Pharmaceutical，Inc.，Ridgefield，CT；

天然α干扰素例如Sumiferon的纯化混合物，得自于Sumitomo，Japan；

干扰素αn1，得自于Glaxo_Wellcome LTd.，Great Britain；

天然α干扰素的混合物，Interferon Sciences生产，得自于Purdue Frederick Co.，CT；

本文中使用的术语“干扰素”是指抑制病毒复制和细胞增殖和调节免疫应答的高度同源种特异性蛋白的一个家族成员，例如干扰素α(alpha)，干扰素β(beta)，或干扰素γ(gamma)。The Merck Index，entry 5015，Twelfth Edition.

按照本发明的一个实施方案，干扰素是α-干扰素。按照另一个实施方案，本发明的治疗组合使用天然的α干扰素2a。或者，本发明的治疗组合使用天然的α干扰素2b。在另一个实施方案中，本发明的治疗组合使用重组α干扰素2a或2b。在又一个实施方案中，干扰素是PEG化的α干扰素2a或2b。适合于本发明的干扰素包括：

(a)Intron(干扰素-α2B，Schering Plough)，

(b)Peg-Intron，

(c)Pegasys，

(d)Roferon，

(e)Berofor，

(f)Sumiferon，

(g)Wellferon，

(h)同感α干扰素，得自于Amgen，Inc.，Newbury Park，CA，

(i)Alferon；

(j)

(k)

正如熟练的专业人员所认识到的那样，优选口服给予蛋白酶抑制剂。通常不口服给予干扰素。尽管如此，对于任何具体剂型或方式，本文中不限制本发明的方法或组合。因此，按照本发明的组合中的每个组份可以单独、一起或以它们的任何组合形式给予。

在一个实施方案中，蛋白酶抑制剂和干扰素是以分开的剂型的方式给予的。在一个实施方案中，任何附加的药剂是以含有蛋白酶抑制剂的单一剂型的一部分的方式或作为分开的剂型给予的。当本发明涉及化合物的组合时，每个化合物的具体数量可以取决于组合中的每个其它化合物的具体数量。正如熟练的专业人员所认识到的那样，通常用IU标识测定干扰素的剂量(例如大约4百万IU至大约12百万IU)。

[0137]相应地，可以在与本发明化合物的组合中使用的药剂(无论起免疫调节药剂作用或者其它的)包括但是不局限于：干扰素-α2B(Intron A，Schering Plough)；Rebatron(Schering Plough，Inteferon-α2B+Ribavirin)；PEG化的干扰素α(Reddy，K.R.等，“Efficacy and Safety of Pegylated(40-kd)interferon alpha-2a compared with interferon alpha-2a in noncirrhotic patients with chronic hepatitis C(Hepatology，33，pp.433-438(2001)；同感干扰素(Kao，J.H.，等，“Efficacy of Consensus Interferon in the Treatement of Chronic Hepatitis”J.Gastroenterol.Hepatol.15，pp.1418-1423(2000)，干扰素-α2A(Roferon A；Roche)，成淋巴细胞类或“天然的”干扰素；干扰素tau(Clayette，P.等，“IFN-tau，A New Interferon Type I with Antiretroviral activity”Pathol.Biol.(Paris)47，pp.553-559(1999)；白介素2(Davis，G.L.等，“Future Options for the Management of Hepatitis C.”Seminars in Liver Disease，19，pp.103-112(1999)；白介素6(Davis等，“Future Options for the Management of Hepatitis C.”Seminars in Liver Disease 19，pp.103-112(1999)；白介素12(Davis，G.L.等，“Future Options for the Management of Hepatitis C.”Seminars in Liver Disease，19，pp.103-112(1999)；病毒唑；和提高1型协助T细胞应答的进展的化合物(Davis等，“Future Options for the Management of Hepatitis C.”Seminars in Liver Disease，19，pp.103-112(1999)。干扰素可以通过施加直接的抗病毒作用和/或通过调整对于感染的免疫应答来改善病毒感染。干扰素的抗病毒素作用常常通过抑制病毒穿过或脱壳、病毒RNA的合成、病毒蛋白的翻译和/或病毒组装和释放来介导。

在细胞中刺激干扰素合成的化合物(Tazulakhova，E.B.等，“Russian Experience in Screening，analysis，and Clinical Application of Novel Interferon Inducers”J.Interferon Cytokine Res.，21 pp.65-73)包括但不局限于：单独或与托普霉素(tobramycin)组合的双链RNA和咪喹莫特(Imiquimod)(3M Pharmaceuticals；Sauder，D.N.“Immunomodulatory and Pharmacologic Properties of Imiquimod”J.Am.Acad.Dermatol.，43 pp.S6-11(2000)。

其它非免疫调节或免疫调节化合物可以与本发明的化合物组合使用，包括但不限于：在WO 02/18369中具体说明的那些，将其引入本文中作为参考(参见，例如，第273页，第9-22行和第274页，第4行至第276页，第11行)。

本发明也可以涉及给予细胞色素P450单加氧酶抑制剂。CYP抑制剂可以在增加的化合物肝脏浓度和/或增加的血液水平中使用，该化合物是通过CYP抑制的。

如果本发明的实施方案涉及CYP抑制剂，任何可提高相关NS3/4A蛋白酶的药物动力学的CYP抑制剂可以在本发明的方法中使用。这些CYP抑制剂包括但是不局限于：利托那韦(WO 94/14436)，酮康唑，三乙酰夹竹桃霉素(troleandomycin)，4-甲基吡唑，环孢菌素，氯美噻唑，甲腈咪胍，伊曲康唑，氟康唑，咪康唑，伏氟沙明，氟西汀，奈法唑酮，舍曲林，茚地那韦，奈非那韦，安普那韦，佛萨普那韦，沙奎那维，洛匹那韦，地拉韦啶，红霉素，VX-944和VX-497。优选的CYP抑制剂包括利托那韦，酮康唑，三乙酰夹竹桃霉素，4-甲基吡唑，环孢菌素和氯美噻唑。对于优选的利托那韦的剂型，见美国专利US 6,037,157和其中引用的文献：美国专利US 5,484,801，美国申请08/402,690和国际申请WO 95/07696和WO 95/09614).

化合物抑制细胞色素P50单加氧酶活性的测定方法是已知的(参见US 6,037,157和Yun，等，Drug Metabolism & Disposition，vol.21，pp.403-407(1993).

[0143]随着病人病情的改善，可以给予本发明的化合物、组合物或联用药的维持剂量，如果需要的话。随后，可以将作为病征参数的给药的剂量或次数，或两者，降低至维持改善的状况的水平，当病征已经减轻到所需要的水平时，治疗应该停止。然而，在病征再发生的情况下病人可能需要以长期方式的间歇疗法。

还应该了解对于任一具体患者的具体剂量和治疗方案取决于各种因素，包括所采用的具体化合物的活性、年龄、体重、常规健康状态、性别、饮食、给药的时间、排泄速度、药物组合、和治疗医师的判断和所治疗的具体的疾病的严重程度。活性组分的量也将取决于组合物中的具体描述的化合物和存在或不存在、和附加的抗病毒药剂的性质。

[0145]按照另一个实施方案，本发明通过给予所述患者本发明的药学可接受的组合物，提供了一种用于治疗感染了以病毒编码丝氨酸蛋白酶为特征的病毒的患者的方法，该丝氨酸蛋白酶是病毒的生活周期所必需的。优选，使用本发明的方法来治疗患有HCV感染的患者。这种治疗可以彻底地根除病毒感染或降低它们的严重程度。更优选，患者是人。

在另一种实施方案中，本发明的方法另外包括给予所述患者抗病毒药剂优选抗HCV药剂的步骤。这种抗病毒药剂包括但是不局限于：免疫调节药剂，例如α-、β-、和γ-干扰素、PEG化的衍生干扰素-α化合物和胸腺素；其它抗病毒药剂，例如病毒唑和三环癸胺；其它丙型肝炎蛋白酶抑制剂(NS2-NS3抑制剂和NS3-NS4A抑制剂)；HCV生活周期中的其它靶向抑制剂，包括解螺旋酶和聚合酶抑制剂；核糖体内部进入抑制剂；广谱病毒抑制剂，例如IMPDH抑制剂(IMPDH抑制剂公开在美国专利5,807,876中，霉酚酸和它们的衍生物)；或上述任一项的组合。

这种附加的药剂可以以单剂型的一部分的方式给予所述患者，单剂型包括本发明的化合物和附加的抗病毒药剂。或者，可以作为多重剂型的一部分从本发明的化合物中单独给予，其中所述附加的药剂是在给予包含本发明化合物的组合物之前、一起、或之后给予。

[0148]在另一个实施方案中，本发明提供了为给予患者设计的预治疗生物学物质的方法，包括将所述生物学物质与包含本发明化合物的药学可接受的组合物接触的步骤。这种生物学物质包括但是不局限于：血液与其组分，例如血浆、血小板、血细胞的亚群等等；器官例如肾脏、肝脏、心脏、肺等等；精液和卵；骨髓和其组分，及其它注入患者中的液体，例如生理盐水、葡萄糖等等。

按照另一个实施方案，本发明提供了处理那些可以潜在接触到病毒的材料的方法，该病毒以病毒生活周期所必需的病毒编码丝氨酸蛋白酶为特征。该方法包括将所述材料与按照本发明的化合物接触的步骤。这种材料包括，但不局限于：外科器械和衣装(例如衣服，手套，围裙，长袍，面罩，眼镜，鞋类，等等)；实验室器械和衣装(例如衣服，手套，围裙，长袍，面罩，眼镜，鞋类，等等)；血液采集装置和材料；和侵入的器件，例如分流器、支架等等。

在另一个实施方案中，本发明的化合物可以作为实验室手段来使用，以帮助分离病毒编码的丝氨酸蛋白酶。该方法包括下列步骤：提供一种附着于固体载体的本发明的化合物；在能够引起所述蛋白酶与所述固体载体结合的条件下，将所述固体载体与含有病毒丝氨酸蛋白酶的样品接触；和将所述丝氨酸蛋白酶从所述固体载体中洗脱。优选，通过该方法分离的病毒丝氨酸蛋白酶是HCV NS3-NS4A蛋白酶。

为了更充分地了解本发明，给出下面的制备和试验实施例。这些实施例仅仅为了举例说明的目的，不能看作是以任何方式限制本发明的范围。

具体实施方式

使用Bruker AMX 500仪器、在500MHz处记录¹H-NMR谱。质谱样品是在MicroMass ZQ或Quattro II质谱仪上分析的，该质谱仪是用电喷射离子化以单一MS模式操作的。使用流动注射(FIA)或色谱法将样品引入到质谱仪中。对于所有的质谱分析，流动相由含有0.2％甲酸改性剂的乙腈-水混合物构成。

本文中使用的术语“R_t(min)”或“RT”是指HPLC保留时间，以分钟为单位，与化合物有关。列举的HPLC保留时间是从质谱数据或使用下列方法(方法B)获得的：

仪器：Hewlett Packard HP-1050；

柱：YMC C₁₈(Cat.No.326289C46)；

梯度/梯度时间：10-90％CH₃CN/H₂O 9分钟，然后100％CH₃CN 2分钟；

流速：0.8ml/min；

检测器波长：215nM和245nM。

对于本文中选择的化合物的化学命名是使用CambridgeSoft Corporations ChemDraw version 7.0.1提供的命名方案完成的。

实施例1

化合物59的制备

4-羟基-吡咯烷-1，2-二元羧酸1-苄基酯2-叔丁基酯(3)

将可商业购买的(Bachem)Z-羟基脯氨酸(1)(10g，42.51mmol)溶解在90ml的THF(四氢呋喃)中，并用冰水浴冷却至0℃。借助于滴液漏斗，用30分钟向其中加入先前制备的叔丁基N，N′-二异丙基-亚氨基甲氨酸酯(2)(27ml，135mmol)。加入以后，除去冷却浴，将反应在室温下搅拌24小时。减少反应的体积，然后加入二乙醚，用饱和碳酸氢钠、然后0.5M盐酸、然后水、最后用盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机层，真空浓缩，得到15g粗品。将物质流过SiO₂填料，用45％EtOAc-己烷洗脱，得到4-羟基-吡咯烷-1，2-二羧酸1-苄基酯2-叔丁基酯3无色油11.0g(81％)

¹H NMR(CDCl₃，ppm)δ7.35(m，5H)，5.2(m，2H)，4.3(m，2H)，4.65(m，3H)，2.35(m，1H)，2.1(t，1H)，1.35，1.55(旋转异构体，1.45，9H).

1-(2-{2-环己基-2-[(吡嗪-2-羰基)-氨基]-乙酰氨基}-3，3-二甲基-丁酰基)-4-羟基-吡咯烷-2-羧酸叔丁基酯(6)

在EtOH中混合(3)，加入催化量的10％钯/碳，然后使用气球在1大气压的氢气条件下搅拌。12小时以后，通过薄层色谱证明反应完成，过滤催化剂，并用EtOH洗涤。浓缩滤液，并在高真空条件下干燥，得到胺黄色固体，将其继续进行下一步。将Z-Tbg-OH(8.3g，31.1mmol)溶于NMP中，并向其中加入EDC(6.0g，31.1mmol)、HOBT(4.2g，31.1mmol)、DMAP(340mg，2.8mmol)，使用冰-水浴将其冷却至0℃。向该混合物中加入胺的NMP溶液，并将反应搅拌2天。将反应物倾倒在冰中，用0.5N盐酸酸化至pH值5，然后用EtOAc提取。将有机提取物用饱和碳酸氢钠、然后水、最后用盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机层，真空浓缩，得到14.8g粗品。使用硅胶色谱进行纯化，用50％EtOAc-己烷洗脱。浓缩均质部分，得到10.5克4的无色泡沫(85％)，按现状在下一步中使用。

向4(10.5g，24.16mmol)的EtOH混合物中加入催化量的10％钯/碳，然后使用气球在1大气压的氢气条件下搅拌。12小时以后，通过薄层色谱证明反应完成，过滤催化剂，并用EtOH洗涤。浓缩滤液，并在高真空条件下干燥，得到胺黄色固体，将其继续进行下一步。将Z-Chg-OH(7.7g，26.6mmol)溶于NMP中，并向其中加入EDC(5.1g，26.7mmol)、HOBT(3.6g，26.6mmol)，使用冰-水浴将其冷却至0℃。向该混合物中加入先前制备的胺的NMP溶液，并将反应搅拌2天。将反应物倾倒在冰和盐水中，然后用EtOAc提取。将有机提取物用0.5N盐酸、饱和碳酸氢钠、水、最后用盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机提取物，真空浓缩，得到15.31g 5的粗品，将其按现状在下一步中使用。

向5(5.6g，9.76mmol)的EtOH溶液中加入催化量的10％钯/碳，然后使用气球在1大气压的氢气条件下搅拌。12小时以后，通过薄层色谱证明反应完成，过滤催化剂，并用EtOH洗涤。浓缩滤液，并在高真空条件下干燥，得到胺非晶形固体，将其继续进行下一步。将吡嗪-2-羧酸(1.45g，11.7mmol)溶于NMP中，向其中加入EDC(2.24g，11.7mmol)、HOBT(1.34g，11.7mmol)，使用冰浴将其冷却至0℃。向该混合物中加入先前制备的胺的NMP溶液，并将反应搅拌2天。将反应物倾倒在冰和盐水中，然后用EtOAc提取。将有机提取物用0.5N盐酸、饱和碳酸氢钠、水、最后用盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机提取物，真空浓缩，得到5.3g(99％)6的无色泡沫，将其按现状在下一步中使用。

吡嗪-2-羧酸({1-(4-(5-氯-吡啶-2-基氧基)-2-(1-环丙基氨基乙二酰-丁基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基氨基甲酰基}-环己基-甲基)-酰胺(59)

向6(0.15g，0.28mmol)的无水THF溶液中加入三苯基膦(0.131g，0.5mmol)、2-羟基-4-氯-吡啶(65mg，0.5mmol)，并最后加入二乙基偶氮二羧酸酯(0.100mL，1.85mmol)。将反应在室温下搅拌18小时，或直到HPLC显示反应中没有6残留为止。从反应中除去THF，然后将物质溶解在EtOAc中，用0.1N NaOH、0.5N盐酸、水、最后用盐水洗涤。用硫酸钠干燥有机提取物，真空浓缩，得到粗品叔丁基酯。通过用50％二氯甲烷中的三氟乙酸处理3小时，将叔丁基酯基团水解为羧酸。真空除去溶剂，然后用0.1N NaOH处理残余物，用EtOAc洗涤。用5％柠檬酸酸化水相，然后用EtOAc提取。将得到的有机相用水、然后用盐水洗涤，然后用硫酸钠干燥有机提取物，真空浓缩，得到4-(5-氯-吡啶-2-基氧基)-1-(2-{2-环己基-2-[(吡嗪-2-羰基)-氨基]-乙酰氨基}-3，3-二甲基-丁酰基)-吡咯烷-2-羧酸7a无色泡沫，将其按现状在下一步中使用。

向7a的2ml二甲基甲酰胺溶液中加入TBTU(0.15g，0.47mmol)、DIEA(0.15mL，1.1mmol)，并将反应搅拌1.5小时，然后将胺10[U.Schoellkogf等，Justus Liebigs Ann.Chem.GE，pp.183-202(1976)和J.Semple等，Org.Letts.，2，pp.2769-2772(2000)]加入到混合物中，而后加入4-甲基吗啉(0.2mL，1.82mmol)。将反应在室温下搅拌12小时，然后倾倒在水中，用EtOAc提取。用硫酸钠干燥有机提取物，真空浓缩，得到吡嗪-2-羧酸[(1-{4-(5-氯-吡啶-2-基氧基)-2-[1-(环丙基氨甲酰基-羟基-甲基)-丁基氨基甲酰基]-吡咯烷-1-羰基}-2，2-二甲基-丙基氨基甲酰基)-环己基-甲基]-酰胺11a(40mg)无色泡沫，将其按现状在下一步中使用。向11a(40mg)的二氯甲烷(4ml)溶液中加入叔丁醇0.1ml和Dess-Martin高碘烷(periodinane)(40mg，0.086mmol)，然后在室温搅拌6小时。向反应中加入1mL的1N硫代硫酸钠和饱和碳酸氢钠的1∶1混合物。15分钟以后，将反应物用EtOAc提取，然后在真空下除去溶剂。使用色谱在SiO₂上进行纯化，用50％EtOAc-己烷洗脱。浓缩均质部分，得到0.095克59的无色泡沫(4.5％，以0.28mmol的6为基准)。

¹H NMR(CDCl₃，ppm)δ9.39(s，1H)，8.76(s，1H)，8.56(s，1H)，8.24(d，1H，J＝9.6Hz)，8.08(s，1H)，7.8(d，1H，6.4Hz)，7.69(s，1H)，7.47-7.40(m，2H)，7.47(d，1H，J＝8.75Hz)，5.63(s，1H)，5.60-5.50(m，1H)，4.90(m，1H)，4.70(m，1H)，4.11(d，1H，J＝11.6Hz)，4.0(m，1H)，2.90(m，1H)2.60(m，1H)，2.25(m，1H)，2.0(m，1.90-1.4(m，1H)，1.25-0.8(m，18H)，(0.73(m，2H)；LC/MS ：RT＝3.61min，4.15min(10-90％CH₃CN/7min)；MH+＝767.3，M-＝765.5。

实施例2

化合物59的替代的制备方法

Boc-Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-OH(15a)

将Boc-Hyp-OH(130g，562.16mmol)溶于无水DMSO(1.6L)中，并向此溶液中加入1M叔丁醇钾的THF溶液(1.4L，140mmol)，内部温度保持在25℃以下。在室温下搅拌溶液1.5h以后，加入2，5-二氯-吡啶 (90.0g，608.15mmol)，并在室温下搅拌反应混合物18h。将混合物倾倒在水(2.5L)中，并用乙醚(1L)提取，以除去过量的2，5-二氯-吡啶。然后将水层用1N HCl(0.8L)酸化，并用乙酸乙酯(2.5L)提取两次。将有机层合并用盐水洗涤。将乙酸乙酯用硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩，得到～210g粗品棕色油。

Boc-Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-烯丙酯(16)

将Boc-Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-OH(15a)(～210g，557mmol)溶于无水乙睛(1.5L)中，依次加入2，3，4，6，7，8，9，10-八氢-嘧啶并[1，2-a]氮杂

(DBU)(0.13L，869.28mmol)和烯丙基溴(81.5g，673.66mmol)，在室温下搅拌反应混合物18h。浓缩混合物，将得到的油用乙酸乙酯(2L)稀释，并依次用500mL水两次和500mL盐水洗涤。用硫酸镁干燥乙酸乙酯层，过滤并减压浓缩，得到棕色油，将其用二氯甲烷施加于二氧化硅柱，用25％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到黄色油181g、472.77mmol，两步收率84％。

Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-烯丙酯(17)

将Boc-Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-烯丙酯(16)(181g，427.77mmol)用0℃的冷(440毫升)90∶10三氟乙酸∶二氯甲烷处理。将混合物升至室温，并搅拌3小时。3小时以后，将400mL甲苯加入到混合物中，将其减压浓缩，得到(17)的粗制三氟乙酸盐。

Boc-Tbg-Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-烯丙酯(18)

将Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-烯丙酯(17)(187g，理论值)、粗品三氟乙酸盐与0℃的冷Boc-Tbg-OH(110g，475.56mmol)、NMM(155mL，1,410mmol)、EDC(99g，518.32mmo l)、HOBt(70g，518.32mmol)的400mL二氯甲烷溶液偶合。使混合物升温至室温，搅拌18小时。浓缩混合物，将得到的油用乙酸乙酯(2L)稀释，并依次用500mL 0.5N HCL两次、500mL水、500mL盐水洗涤。用硫酸镁干燥乙酸乙酯层，过滤并减压浓缩，得到棕色油，用二氯甲烷将其施加于二氧化硅柱，用15％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到浅黄色泡沫，180g，362.83mmol，77％。

Tbg-Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-烯丙酯(19)

将Boc-Tbg-Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-烯丙酯(18)(180g，362.83mmol)用0℃的冷(330毫升)90∶10三氟乙酸∶二氨甲烷处理。将混合物升至室温，并搅拌3小时。3小时以后，将甲苯(200mL)加入到混合物中，将其减压浓缩，得到黄色油，向其中依次加入二氯甲烷(100mL)、乙醚(1.5L)。搅拌混合物，加入4N HCL二烷(50mL)，持续搅拌1h，将粗品HCL二肽盐过滤，用0℃的冷乙醚洗涤，得到142.5g、323.86mmol、91％。

Boc-Chg-Tbg-Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-烯丙酯(20)

将Tbg-Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-烯丙酯(19)(142.5g，323.86mmol)与0℃的冷Boc-Chg-OH(94g，365.29mmol)、NMM(109mL，994.18mmol)、EDC(69g，361.26mmol)、HOBt(48.77g，361.26mmol)的400mL二氯甲烷溶液偶合。使混合物升温至室温，搅拌18小时。浓缩混合物，将得到的油用乙酸乙酯(2L)稀释，并依次用500mL 0.5N HCL两次、500mL水、500mL盐水洗涤。用硫酸镁干燥乙酸乙酯层，过滤并减压浓缩，得到棕色油，将其用二氯甲烷施加于二氧化硅柱，用25％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到浅黄色泡沫，180g，362.83mmol，77％。

Chg-Tbg-Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-烯丙酯(21)

将Boc-Chg-Tbg-Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-烯丙酯(20)(65g，102.33mmol)用0℃的冷(250毫升)90∶10三氟乙酸∶二氯甲烷处理。将混合物升至室温，并搅拌3小时。3小时以后，将甲苯(200mL)加入到混合物中，将其减压浓缩，得到黄色油，向其中依次加入二氯甲烷(200mL)、乙醚(1.5L)，搅拌混合物，过滤粗品TFA三肽盐，用0℃的冷乙醚洗涤，得到66g、101.53mmol、98％。

吡嗪-2-羰基-Chg-Tbg-Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-烯丙酯(22)

将Chg-Tbg-Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-烯丙酯(21)(66g，101.53mmol)、粗品TFA盐与0℃的冷吡嗪-2-羧酸(13.6g，109.69mmol)、NMM(44mL，400.19mmol)、EDC(21g，109.95mmol)、HOBt(14.85g，109.95mmol)的500mL二氯甲烷溶液偶合。使混合物升温至室温，搅拌18小时。浓缩混合物，将得到的油用乙酸乙酯(2L)稀释，并依次用500mL0.5N HCL两次、500mL水、500mL盐水洗涤。用硫酸镁干燥乙酸乙酯层，过滤并减压浓缩，得到棕色油，将其用二氯甲烷施加于二氧化硅柱，用45％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到浅黄色泡沫64.66g、100.85mmol、99％。

吡嗪-2-羰基-Chg-Tbg-Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-OH(23)

将吡嗪-2-羰基-Chg-Tbg-Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-烯丙酯(22)(64.66g，100.85mmo l)溶于无水50∶50的乙腈∶二氯甲烷的混合物(250毫升)中。加入四(三苯基膦)-钯(0)催化剂(1.5g，1.30mmol)，而后加入吡咯烷(8.55mL，102.44mmol)。将反应混合物在室温下搅拌18小时。18h后蒸发溶剂。将油溶于乙酸乙酯(2L)中，用10％柠檬酸(250mL)两次、盐水(250mL)提取。将乙酸乙酯层用硫酸镁干燥，过滤并减压浓缩，得到浅黄色固体58.5g、97.32mmol、96％。

3-氨基-2-羟基-己酸环丙基酰胺(24)

将[1-(环丙基氨甲酰基-羟基-甲基)-丁基]-氨基甲酸苄基酯(48g，149.82mmol)溶于甲醇(1L)中，用氮脱气五分钟，加入10wt％钯/活性碳(2.5g)，然后加入18h氢气。18h以后，除去氢气，用氮将反应脱气，过滤，将得到的滤液蒸发并高真空干燥，得到白色固体26.9g、144.42mmol、97％。

吡嗪-2-羰基-Chg-Tbg-Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-Nva-羟基环丙基酰胺(25)

将3-氨基-2-羟基-己酸环丙基酰胺(24)(20g，107.37mmol)与在250毫升二氯甲烷中的吡嗪-2-羰基-Chg-Tbg-Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-OH(23)58.5g，97.32mmol、NMM(11.76毫升，106.96mmol)、EDC(20.45g，107.07mmol)、HOBt(14.45g，107.07mmol)偶合。将混合物搅拌18小时。浓缩混合物，将得到的油用乙酸乙酯(2L)稀释，并依次用500mL 0.5N HCL两次、500mL水、500mL盐水洗涤。用硫酸镁干燥乙酸乙酯层，过滤并减压浓缩，得到棕色油，将其用二氯甲烷施加于二氧化硅柱，用2％甲醇/乙酸乙酯洗脱，得到浅黄色泡沫61.5g、 79.94mmol、74％。

吡嗪-2-羧酸({1-[4-(5-氯-吡啶-2-基氧基)-2-(1-环丙基氨基乙二酰-丁基氨基甲酰基)-吡咯烷-1-羰基]-2，2-二甲基-丙基氨基甲酰基}-环己基-甲基)-酰胺(59)

向配备有上部搅拌器、热电偶和活性氮进口的4L圆底烧瓶中加入EDC(229.0g，151.83mmol)，而后加入无水乙酸乙酯1230mL，开始搅拌至产生浓浆液。向其中加入吡嗪-2-羰基-Chg-Tbg-Pro(4(R)-5-氯-吡啶-2-基氧基)-Nva-羟基环丙基酰胺(25)(61.5g，79.94mmol)、溶解的乙酸乙酯(250mL)，然后加入无水DMSO(460mL)。使用冷却浴将内部温度降至7℃。加入7℃的冷二氯乙酸(65.94mL，787.20mmol)的乙酸乙酯(100mL)溶液，这样使内部温度保持在12和25℃之间。除去冷却浴，将稀浆液搅拌1小时。使用冷却浴，并用1N HCL(1，230mL)淬灭反应，同时保持温度在15和25℃之间。分离有机层，用水(200mL)3次、盐水(200mL)洗涤。用硫酸镁干燥乙酸乙酯层，过滤并减压浓缩，至浴温不超过40℃，得到棕色油，将其用二氯甲烷施加于二氧化硅柱，用90％乙酸乙酯/己烷洗脱，得到浅黄色泡沫44.0g、57.34mmol、72％。

H NMR(CDCl₃)9.391H(s)，8.761H(s)，8.551H(s)，8.221H(d)，8.081H(s)，7.471H(NH)，7.451H(d)7.351H(NH)，7.011H(NH)，6.491H(d)，5.631H(m)，5.531H(m)，4.881H(m)，4.701H(d)，4.671H(m)，4.111H(m)，4.011H(m)，2.861H(m)，2.571H(m)，2.251H(m)，1.961H(m)，1.801H(m)，1.706H(m)，1.602H(m)，1.502H(m)，1.253H(m)，0.9612H(m)，0.912H(m)，0.722H(m).

实施例3

已经基本上按照本文描述制备了化合物1-72和74-76。这些化合物的分析数据与化合物的公开的结构一致。在下面提供了进一步选择的数据：

LC质谱数据

RT-保留时间

方法A：Hypersil BDS C18柱5um，2.1x50mm流速：1.0ml/min运行时间：2.39min溶剂：0-95％MeCN.

方法B：参见上面。

实施例4

HCV复制子细胞测定方案

将含有丙型肝炎病毒(HCV)复制子的细胞在含有10％胎儿牛血清(FBS)、0.25mg/ml G418以及合适的补充物的DMEM(培养基A)中培养。

在第1天，用胰蛋白酶：EDTA的混合物处理复制子细胞单层，除去，然后将培养基A稀释至100,000个细胞每毫升的最后浓度。将100μl中的10,000个细胞涂覆入96孔组织培养平皿中的每个孔中，并在37℃下、在组织培养恒温箱中培养过夜。

在第2天，将化合物(在100％DMSO中)系列稀释到含有2％FBS、0.5％DMSO以及合适的补充物的DMEM(培养基B)中。贯穿整个稀释系列，DMSO的最后浓度维持在0.5％。

将复制子细胞单层上的培养基除去，然后加入含有各种浓度化合物的培养基B。将不含任何化合物的培养基B加入到其它孔中，作为不含化合物的对照物。

在37℃下，在组织培养恒温箱中，将细胞与化合物或0.5％DMSO在培养基B中培养48小时。在48小时培养结束时，除去培养基，用PBS洗涤复制子细胞单层一次，并在RNA提取之前在-80℃下储存。

将含有处理的复制子细胞单层的培养皿解冻，并将固定量的另一种RNA病毒例如牛病毒性腹泻病毒(BVDV)加入到每个孔中的细胞中。立即将RNA提取试剂(例如源于RNeasy试剂盒的试剂)加入到细胞中，以避免RNA的降解。按照制造商提供的说明书来提取总RNA，稍加改进以提高提取效率和一致性。最后，将总细胞RNA，包括HCV复制子RNA，洗脱并在-80℃下储存，直到进一步的加工。

用两套特异性引物和探针建立Taqman实时RT-PCR定量测定法。一个用于HCV，另一个用于BVDV。将得自于处理了的HCV复制子细胞的总RNA提取物加入到PCR反应中，用于相同PCR孔中的HCV和BVDV RNA的定量分析。基于每个孔中的BVDV RNA的水平标记实验失败并加以排除。按照同一PCR平皿中得到的标准曲线，计算每个孔中HCV RNA的水平。使用DMSO或不含化合物的对照物作为0％抑制，计算由于化合物处理而产生的HCV RNA水平的抑制或降低的百分比。由任一给定化合物的滴定曲线计算IC50值(观察到HCV RNA水平受到50％抑制时的浓度)。

实施例5

HCV Ki测定方案

用于分离5AB底物和产物的微柱HPLC方法

底物：

NH2-Glu-Asp-Val-Val-(α)Abu-Cys-Ser-Met-Ser-Tyr-COOH

在DMSO w/0.2M DTT中制备20mM 5AB(或所选择的浓度)贮液。将其在-20℃下以等分试样储存。

缓冲液：50mM HEPES，pH值7.8；20％甘油；100mM NaCl

[0182]总测定体积是100μl

将缓冲液、KK4A、DTT和tNS 3合并；96孔平皿的每个孔中分配78μL。将其在30℃培养～5-10分钟。

将2.5μL合适浓度的试验化合物溶于DMSO(仅DMSO时用于对照物)中，并加入到每个孔中。将其在室温下培养15分钟。

通过加入20μL的250μM 5AB底物(25μM浓度是等效的，或略微地比5AB的Km低)引发反应。

在30℃培养20分钟。

通过加入25μL的10％TFA终止反应

将120μL等分试样转移至HPLC管形瓶中

通过下列方法将源于底物和KK4A的SMSY产物分离：

微柱分离方法：

仪器：Agilent 1100

脱气装置G1322A

二元泵G1312A

自动进样器G1313A

柱恒温室G1316A

二极管阵列检测器G1315A

柱：

Phenomenex Jupiter；5微米C18；300angstroms；150x2mm；P/O OOF-4053-B0

柱恒温：40℃

注射体积：100μL

溶剂A＝HPLC级水+0.1％TFA

溶剂B＝HPLC级乙腈+0.1％TFA

停止时间：17min

平衡时间：10min.

在实施例4和/或实施例5的试验中已经试验了本发明的化合物，并显示其具有HCV NS3-NS4A蛋白酶抑制活性。本发明某些优选化合物具有类似的细胞(实施例4)和酶学(实施例5)数据。化合物2，7，12，13，14，18，22，24，26，34，45，50，53，54，55，57，59，61，65 和66具有类似的细胞和酶数据。更优选的化合物是具有类似的酶和细胞数据、并且两种数据属于A类的24、45、53、54、59和61。

按照实施例5(酶)试验了本发明的化合物，并且发现其具有Ki值＜0.1μM(A类)；0.1-0.3μM(B类)；和＞0.3μM(C类)，如同下述。

A类：15，19，20，24，32，35，36，37，38，39，40，41，42，43，44，45，46，49，51，52，53，54，56，58，59，61，64，67和69。

B类：1，2，3，4，5，7，8，10，12，13，14，16，18，22，23，25，30，31，33，26，34，48，50，55，57，60，65，66，70，71和76。

C类：6，9，11，17，21，27，28，29，47，74，75和76。

按照实施例4(细胞)试验了本发明的化合物，并且发现其具有IC50值＜0.5μM(A类)；0.5-1.0μM(B类)；和＞1.0μM(C类)，如同下述。

A类：7，12，13，14，15，18，19，22，24，34，35，36，38，39，40，42，43，44，45，46，47，48，50，53，54，55，56，26，57，58，59，61，64，65，66和67。

B类：1，2，3，4，5，8，10，16，20和70。

C类：6，11，41，46，47，48，49，51，60和71。

尽管我们已经描述了许多本发明的实施方案，但是很明显可以改变我们的基础实施倒，提供利用本发明的化合物和方法的其它实施方案。因此，应理解本发明的范围是通过附加的权利要求而不是通过已经通过上述实施例表示的具体实施方案来定义的。所有引用的文献引入本文中作为参考。

Claims

1.式I的化合物：

其中：

R¹和R²独立地是：

(C1-C12)-脂族基团-，

(C3-C10)-环烷基-或-环烯基-，

[(C3-C10)-环烷基-或-环烯基]-(C1-C12)-脂族基团-，

(C6-C10)-芳基-(C1-C12)脂族基团-，

(C6-C10)-杂芳基-(C1-C12)脂族基团-，

R³和R³′独立地是氢或(C1-C12)-脂族基团，其中任何氢任选被卤素替代；其中任何R³的末端碳原子任选被巯基或羟基取代；或者R³是苯基或-CH₂苯基，其中所述苯基任选被至多3个独立地选自J的取代基取代；或

R⁴和R⁴′独立地是：

氢-，

(C1-C12)-脂族基团-，

(C3-C10)-环烷基-或-环烯基-，

(C3-C10)-环烷基-(C1-C12)-脂族基团-，

(C6-C10)-芳基-，

(C3-C10)-杂环基-；或

(C5-C10)-杂芳基-；

W是：

其中每个R₆独立地是：

氢-，

(C1-C12)-脂族基团-，

(C6-C10)-芳基-，

(C6-C10)-芳基-(C1-C12)脂族基团-，

(C3-C10)-环烷基-或环烯基-，

[(C3-C10)-环烷基-或环烯基]-(C1-C12)-脂族基团-，

(C3-C10)-杂环基-，

(C3-C10)-杂环基-(C1-C12)-脂族基团-，

(C5-C10)杂芳基-，或

(C5-C10)杂芳基-(C1-C12)-脂族基团-，或

其中R₆任选被至多3个J取代基取代；

T是：

(C1-C12)-脂族基团-；

(C6-C10)-芳基-，

(C6-C10)-芳基-(C1-C12)脂族基团-，

(C5-C10)杂芳基-，或

(C5-C10)杂芳基-(C1-C12)-脂族基团-；

其中每个T任选被至多3个J取代基取代；

J是卤素，-OR′，-NO₂，-CN，-CF₃，-OCF₃，-R′，氧代，硫代，1，2-亚甲基二氧基，1，2-亚乙基二氧基，＝N(R′)，＝N(OR′)，-N(R′)₂，-SR′，-SOR′，-SO₂R′，-SO₂N(R′)₂，-SO₃R′，-C(O)R′，-C(O)C(O)R′，-C(O)CH₂C(O)R′，-C(S)R′，-C(S)OR′，-C(O)OR′，-C(O)C(O)OR′，-C(O)C(O)N(R′)₂，-OC(O)R′，-C(O)N(R′)₂，-OC(O)N(R′)₂，-C(S)N(R′)₂，-(CH₂)_0-2NHC(O)R′，-N(R′)N(R′)COR′，-N(R′)N(R′)C(O)OR′，-N(R′)N(R′)CON(R′)₂，-N(R′)SO₂R′，-N(R′)SO₂N(R′)₂，-N(R′)C(O)OR′，-N(R′)C(O)R′，-N(R′)C(S)R′，-N(R′)C(O)N(R′)₂，-N(R′)C(S)N(R′)₂，-N(COR′)COR′，-N(OR′)R′，-C(＝NH)N(R′)₂，-C(O)N(OR′)R′，-C(＝NOR′)R′，OP(O)(OR′)₂，-P(O)(R′)₂，-P(O)(OR′)₂，或-P(O)(H)(OR′)；

R′是：

氢-，

(C1-C12)-脂族基团-，

(C3-C10)-环烷基-或-环烯基-，

[(C3-C10)-环烷基或-环烯基]-(C1-C12)-脂族基团-，

(C6-C10)-芳基-，

(C6-C10)-芳基-(C1-C12)脂族基团-，

(C3-C10)-杂环基-，

(C6-C10)-杂环基-(C1-C12)脂族基团-，

(C5-C10)-杂芳基-，或

(C5-C10)-杂芳基-(C1-C12)-脂族基团-；

其中R′任选被至多3个J基团取代；

2.式I的化合物：

其中：

n是0或1；

R¹、R²、R¹²和R¹³独立地是：

(C1-C12)-脂族基团-，

(C3-C10)-环烷基-或-环烯基-，

[(C3-C10)-环烷基-或-环烯基]-(C1-C12)-脂族基团-，

(C6-C10)-芳基-(C1-C12)脂族基团-，

(C6-C10)-杂芳基-(C1-C12)脂族基团-，

R⁴和R⁴′独立地是：

氢-，

(C1-C12)-脂族基团-，

(C3-C10)-环烷基-或-环烯基-，

(C3-C10)-环烷基-(C1-C12)-脂族基团-，

(C6-C10)-芳基-，

(C3-C10)-杂环基；或

(C5-C10)-杂芳基-；

其中在R⁴和R⁴′中的至多两个脂族基团碳原予可以被选自O、N、S、SO和SO₂的杂原子替代；

W是：

其中

Y是-CO₂H、-CO₂H的衍生物或-CO₂H的生物电子等排体；

每个R₆独立地是：

氢-，

(C1-C12)-脂族基团-，

(C6-C10)-芳基-，

(C6-C10)-芳基-(C1-C12)脂族基团-，

(C3-C10)-环烷基-或环烯基-，

[(C3-C10)-环烷基-或环烯基]-(C1-C12)-脂族基团-，

(C3-C10)-杂环基-，

(C3-C10)-杂环基-(C1-C12)-脂族基团-，

(C5-C10)杂芳基-，或

(C5-C10)杂芳基-(C1-C12)-脂族基团-，或

其中R₆任选被至多3个J取代基取代；

T是：

(C1-C12)-脂族基团-；

(C6-C10)-芳基-，

(C6-C10)-芳基-(C1-C12)脂族基团-，

(C5-C10)杂芳基-，或

(C5-C10)杂芳基-(C1-C12)-脂族基团-；

其中每个T任选被至多3个J取代基取代；并且

条件是如果T是吡咯，吡咯在3位不被J取代，其中J是-C(O)R′，-C(O)C(O)R′，-C(O)CH₂C(O)R′，-C(S)R′，-C(S)OR′，-C(O)OR′，-C(O)C(O)OR′，-C(O)C(O)N(R′)₂，-C(O)N(R′)₂，-C(S)N(R′)₂，-C(＝NH)N(R′)₂，-C(O)N(OR′)R′，-C(＝NOR′)R′；

R′是：

氢-，

(C1-C12)-脂族基团-，

(C3-C10)-环烷基-或-环烯基-，

[(C3-C10)-环烷基或-环烯基]-(C1-C12)-脂族基团-，

(C6-C10)-芳基-，

(C6-C10)-芳基-(C1-C12)脂族基团-，

(C3-C10)-杂环基-，

(C6-C10)-杂环基-(C1-C12)脂族基团-，

(C5-C10)-杂芳基-，或

(C5-C10)-杂芳基-(C1-C12)-脂族基团-；

其中R′任选被至多3个J基团取代；

3.按照权利要求1或权利要求2的化合物，其中Ar是苯基、吡啶基、喹啉基、嘧啶基或萘基，其中每个基团任选被1、2或3个J基团取代。

4.按照权利要求或权利要求2的化合物，其中Ar是

5.按照权利要求1或权利要求2的化合物，其中Ar是：

6.按照权利要求1或权利要求2的化合物，其中Ar是含有0、1或2个氮杂原子的6或10元芳香环，其中1、2或3个环原子任选并独立地被J取代。

7.按照权利要求1-6的任一项的化合物，其中Ar上的每个J基团独立地是OR′，NO₂，CN，CF₃，OCF₃，R′，COR′，C(O)OR′，C(O)N(R′)₂，SO₂R′，SO₂N(R′)₂，1，2-亚甲基二氧基，1，2-亚乙基二氧基，或NR′C(O)OR′，NR′SO₂R′.

8.按照权利要求1-6的任一项的化合物，其中Ar上的每个J基团独立地是OR′、卤素、CN、CF₃、R′或COR′。

9.按照权利要求1-6的任一项的化合物，其中Ar上的每个J基团独立地是卤素、三氟甲基、甲基或NO₂。

10.按照权利要求1-9的任一项的化合物，其中W是：

11.按照权利要求1-10的任一项的化合物，其中在W中，NR₆R₆是：

12.按照权利要求1-10的任一项的化合物，其中在W中，NR₆R₆是：

13.按照权利要求1-10的任一项的化合物，其中在W中，NR₆R₆是：

14.按照权利要求1-10的任一项的化合物，其中在W中，NR₆R₆是：

15.按照权利要求1-14的任一项的化合物，其中R³′是氢且R³是：

16.按照权利要求1-14的任一项的化合物，其中R³′是氢且R³是：

17.按照权利要求1-16的任一项的化合物，其中R²是：

18.根据权利要求17的化合物，其中R²是：

19.按照权利要求18的化合物，其中R²是：

20.按照权利要求1-19的任一项的化合物，其中R¹是：

21.按照权利要求20的化合物，其中R¹是：

22.按照权利要求21的化合物，其中R¹是环己基。

23.按照权利要求1-22的任一项的化合物，其中T是(C6-C10)-芳基-或(C5-C10)杂芳基-，其中每个T任选被1、2或3个J取代基取代。

24.按照权利要求1-22的任一项的化合物，其中T是：

其中每个T基团任选与5元或6元芳基或杂芳基稠合。

25.权利要求24的化合物，其中T是：

26.按照权利要求1的化合物，其中化合物是：

27.一种组合物，包含以有效抑制丝氨酸蛋白酶量的按照权利要求1-26的任一项的化合物或其药学可接受的盐、以及可接受的载体、助剂或赋形剂。

28.按照权利要求27的组合物，其中将所述组合物配制成用于给予患者的制剂。

29.按照权利要求28的组合物，其中所述组合物包含选自下列的额外药剂：免疫调节剂；抗病毒剂；HCV蛋白酶的第二抑制剂；HCV生活周期中的另一种靶向抑制剂；细胞色素P-450抑制剂；或其组合。

30.按照权利要求29的组合物，其中所述免疫调节剂是α-、β-或γ-干扰素或胸腺素；抗病毒剂是病毒唑、氨基三环癸烷或汰比夫定；或HCV生活周期中的另一种靶向抑制剂是HCV解螺旋酶、聚合酶或金属蛋白酶的抑制剂。

31.按照权利要求30的组合物，其中所述细胞色素P-450抑制剂是利托那韦。

32.一种抑制丝氨酸蛋白酶活性的方法，包括将所述丝氨酸蛋白酶与按照权利要求1-26的任一项的化合物接触的步骤。

33.按照权利要求32的方法，其中所述蛋白酶是HCV NS3蛋白酶。

34.一种治疗患者中HCV感染的方法，包括给予所述患者按照权利要求27的组合物的步骤。

35.按照权利要求34的方法，包括给予所述患者额外药剂的额外步骤，所述额外药剂选自：免疫调节剂；抗病毒剂；HCV蛋白酶的第二抑制剂；HCV生活周期中的另一种靶向抑制剂；或其组合；其中所述额外药剂是作为所述按照权利要求30组合物的一部分或作为独立剂型给予所述患者的。

36.按照权利要求35的方法，其中所述免疫调节剂是α-、β-或γ-干扰素或胸腺素；所述抗病毒剂是利巴韦林或金刚烷胺；或所述HCV生活周期中的另一种靶向抑制剂是HCV解螺旋酶、聚合酶或金属蛋白酶的抑制剂。

37.一种消除或减少生物样品或医学或实验室器材的HCV污染的方法，包括将所述生物样品或医学或实验室器材与按照权利要求1-26的任一项的化合物接触的步骤。

38.按照权利要求37的方法，其中所述样品或器材选自体液、生物学组织、外科器械、外科衣装、实验室器械、实验室衣装、血液或其它体液采集装置；血液或其它体液的贮存用具。

39.按照权利要求38的方法，其中所述体液是血液。

40.一种用于制备如权利要求1-26的任一项所定义的式I化合物的方法，包括步骤：使式II的化合物在式III化合物的存在下反应，以提供式IV的化合物：

其中：R¹⁰是胺保护基、本文中描述的HCV蛋白酶抑制剂的P3-残基、或本文中描述的HCV蛋白酶抑制剂的P4-P3-残基，且其中P3和P4-P3残基任选是保护氨基-末端的封端基团；R¹¹是羧基保护基或本文中描述的HCV蛋白酶抑制剂的P1残基，其中P1残基是在末端羧基位置任选被羧基保护基或W取代的。