CN1225471C - 具有生长激素释放特性的化合物 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了通式(I)的新的合成肽，其中A、B、D、E、F、G、J和m、n、p的定义见说明书。通式(I)化合物能促进人和动物生长激素的释放。还公开了含有通式(I)化合物作为活性成分的促生长组合物，刺激生长激素释放的方法以及式(I)化合物的用途。

Description

具有生长激素释放特性的化合物
                           技术领域
本发明涉及新的化合物，含有它们的组合物，及其治疗生长激素缺陷所造成疾病的用途。
                           背景技术
生长激素是一种刺激所有能生长组织生长的激素。另外，已知生长激素对代谢过程有许多影响，例如，刺激蛋白合成和游离脂肪酸流通，造成从糖到脂肪酸代谢的能量代谢转变。生长激素缺陷能引起许多严重疾病，如侏儒症。
生长激素是由脑垂体释放的。这种释放处于多种激素和神经递质直接或间接的严格控制下。生长激素的释放可被生长激素释放激素(G H R H)所刺激，而被抑生长素所抑制。这两种激素都是由下丘脑释放的，但它们的作用主要通过位于垂体中的特异受体介导。能刺激垂体释放生长激素的其他化合物也已有描述。例如，精氨酸、L-3，4-二羟苯基丙氨酸(L-多巴)、胰高血糖素、升压素、PACAP(脑垂体腺苷环化酶活化肽)、毒蝇碱性受体激动剂和合成六肽GHRP(生长激素释放肽)，通过直接作用于垂体或通过影响下丘脑中GHRH和/或抑生长素的释放来影响内源生长激素的释放。
在需要高生长激素水平的疾病中，生长激素的蛋白性质使得除胃肠外给药外其他途径均无效。另外，其他直接作用的天然促分泌素如GHRH和PACAP是较长的多肽，因而口服无效。
在此之前已提出了一些化合物用于提高哺乳动物中生长激素水平，例如EP 18072，EP 83864，WO 89/07110，WO 89/01711，WO 89/10933，WO 88/9780，WO 83/02272，WO 91/18016，WO 92/01711，WO 93/04081，WO 95/17422，WO 95/17423和WO 95/14666中所述。
生长激素释放化合物的组合物，其重要性在于其生长激素释放效力以及其生物利用度。因而，本发明的目的是提供具有生长激素释放特性的化合物，而且其特性比该类的已知肽有改善。
                             发明内容
本发明涉及通式I的化合物或其药用盐，
Figure C9619218400121
其中
n为0或1；
m为1或2；
p为0、1或2；
A为
-CH＝CH-或
Figure C9619218400124
其中R1为氢或C1-6烷基，
w为＝O或＝S；
B为
Figure C9619218400125
-CH＝CH-， 或
Figure C9619218400127
其中R2为氢或C1-6烷基，
w为＝O或＝S；
D为
或
Figure C9619218400131
其中R3、R4、R5、R6、R7和R8独立地为氢或可被卤原子、氨基、羟基或芳基任意取代的C1-6烷基；
R5和R6，R6和R7，R5和R8或R7和R8任选形成-(CH2)i-U-(CH2)j-，其中i和j独立地为1或2，
U为-O-，-S-或共价键；
M为-O-，-S-，-CH＝CH-，
或
Figure C9619218400133
任选被卤原子、氨基、羟基、C1-6烷基或C1-6烷氧基取代；o、r和t独立地为0、1、2、3或4；
q和s独立地为0或1；
r+s+t为1、2、3或4；
E为氢，
或
其中L为氢、-OR9、-CONR9R10、任选由羟基或C1-6烷氧基取代的C1-6烷基，
或者L为
或
Figure C9619218400137
其中R9和R10独立地为氢、C1-6烷基或一起形成-(CH2)k-U-(CH2)1-，
其中k和l独立地为1、2或3，且k+1为3、4、5或6，
U为-O-，-S-或共价键；
X为-N(R11)-，-O-或-S-，
V为-C(R12)＝或-N＝，
Y为-C(R13)＝或-N＝，
Z为-C(R14)＝或-N＝，
R12、R13和R14独立地为氢、-COOR15、-CONR16R17、-(CH2)vNR16R17、-(CH2)uOR15、卤原子、羟基、直链或支链C1-6烷基、苯基、噁唑-5-基、5-甲基-[1，2，4]噁二唑-3-基，
R11、R15、R16和R17独立地为氢或任选由芳基取代的直链或支链C1-6烷基，u和v独立地为0或1、2、3、4、5或6；
K为氢或
其中R18、R19、R20和R21独立地为氢、任选由卤原子、氨基、C1-6烷基氨基、羟基或芳基取代的C1-6烷基；R18和R19，R18和R21，R19和R20或R20和R21任选形成-(CH2)k′-2-(CH2)l′-，其中k′和l′独立地为1、2或3，且k′+l′为3、4、5或6；
Z为-O-、-S-或共价键；
b为0或1；
a和b独立地为0、1、2、3或4；
且a+b为1至4；
Q为＞CR22-或＞N-，
其中R22为氢或C1-6烷基，
F为
-CH＝CH-，
Figure C9619218400151
或
其中R23为氢或C1-6烷基，
W″为＝O或＝S；
G为氢，
Figure C9619218400154
或
任选由卤原子、氨基、羟基、C1-6烷基或C1-6烷氧基取代；J为
Figure C9619218400156
Figure C9619218400157
或
任选由卤原子、氨基、羟基、C1-6烷基或C1-6烷氧基取代，
该通式I化合物包括其任何光学异构体，分离的、纯的或部分纯化的光学异构体或其外消旋混合物。
对于上述通式I化合物，优选的取代基在从属权利要求中提到了。特别优选的取代基如下所示。
A的优选基团是：
或-CH＝CH-
其中R1和W如上文所定义。
R1的优选基团是C1-6烷基，更优选C1-3烷基，如甲基、乙基、环丙基和异丙基。
优选m为1和/或p为1。
B的优选基团是：
Figure C9619218400161
或-CH＝CH-
其中R2和W1如上文所定义。
R2优选为C1-6烷基，更优选C1-3烷基，如甲基、乙基、环丙基和异丙基。
D优选为
Figure C9619218400162
其中R5、R6、R7、R8、M、s、t、q和o如上文所定义。优选R5和R6，R6和R7，R5和R8或R7和R8任选形成-(CH2)i-U-(CH2)j-，其中U、i和j如上文所定义。
U优选为共价键。
M优选为-O-，-CH＝CH-或
Figure C9619218400163
o、r和t优选独立地为0、1、2或3。
特别优选的D是4-哌啶基、3-哌啶基、3-氨基甲基苯基、3-氨基-3-甲基-丁烯基或4-氨基-4-甲基-戊烯基。
K优选为氢。
F优选为 或
其中R23如上文所定义。
G优选为
Figure C9619218400171
或
Figure C9619218400172
上述优选取代基的定义不应看成本发明限于这种取代基。
本发明的代表性化合物包括：
3-氨甲基-N-((1R，2E，4S)-4-氨基甲酰基-5-(2-萘基)-1-(2-萘基)甲基戊-2-烯基)苯甲酰胺：
哌啶-4-羧酸((1R，2E，4S)-4-氨基甲酰基-5-(2-萘基)-1-(2-萘基)甲基戊-2-烯基)酰胺：
N-((1R)-1-((1R)-1-((1S)-5-氨基-1-(二甲氨基甲酰基)戊基氨基甲酰基)-2-苯基乙氧基)甲基-2-(2-萘基)乙基)-3-氨基甲基苯甲酰胺；
N-((1R，4S)-4-(((1S)-5-氨基-1-(二甲氨基甲酰基)戊基)氨基甲酰基-1-((2-萘基)甲基)-2-氧代-5-苯基戊基)-3-氨基甲基苯甲酰胺：
N-((1R，2R，4S)-4-(((1S)-5-氨基-1-(二甲氨基甲酰基)戊基)氨基甲酰基)-2-羟基-1-((2-萘基)甲基)-5-苯基戊基)-3-氨基甲基苯甲酰胺：
哌啶-3-羧酸((1R，2R，4S)-4-(((1S)-5-氨基-1-(二甲氨基甲酰基)戊基)氨基甲酰胺)-2-羟基-1-(2-萘基)甲基)-5-苯基戊基)酰胺：
Figure C9619218400192
5-((1R)-1-(N-甲基-N-((2R)-3-(2-萘基)-2-(哌啶-4-羰基氨基)丙酰)氨基)-2-(2-萘基)乙基)-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯：
Figure C9619218400193
5-((1R)-1-(N-((2R)-2-(3-氨甲基苯甲酰氨基)-3-(2-萘基)丙酰)-N-甲基氨基)-2-(2-萘基)乙基)-[1，2，4]-噁二唑-3-羧酸乙酯：
Figure C9619218400201
5-((1R)-1-(N-((2R)-2-(3-氨甲基苯甲酰氨基)-3-(2-萘基)丙酰)-N-甲基氨基)-2-苯乙基)-[1，3，4]噁二唑-2-羧酸酰胺：
Figure C9619218400202
相信式I化合物对酶蛋白水解的抗降解能力提高了，因为它们是非天然的化合物，特别因为天然的酰胺键已由非天然的酰胺键模拟物代替。对蛋白水解降解耐受性的提高加上本发明化合物与已知生长激素释放肽相比体积减小，这有望使其生物利用度比现有技术文献中提及的肽有所改善。
在以上结构式中和整个说明书中，下列术语具有所指明的意义：
C1-6烷基意在包括具有所示长度的直链或支链或环形的烷基。直链烷基的例子有甲基、乙基、丙基、丁基、戊基和己基。支链烷基的例子有异丙基、仲丁基、叔丁基、异戊基和异己基。环烷基的例子有环丙基、环丁基、环戊基和环己基。
特别优选的C1-6烷基是C1-3烷基。优选的C1-3烷基为甲基、乙基、异丙基和环丙基。
C1-6烷氧基意在包括具有所示长度的直链或支链或环形烷氧基。直链烷氧基的例子有甲氧基、乙氧基、丙氧基、丁氧基、戊氧基和己氧基。支链烷氧基的例子有异丙氧基、仲丁氧基、叔丁氧基、异戊氧基和异己氧基。环形烷氧基的例子有环丙氧基、环丁氧基、环戊氧基和环己氧基。
特别优选的C1-6烷氧基是C1-3烷氧基。优选的C1-3烷氧基是甲氧基、乙氧基、异丙氧基和环丙氧基。
C1-6烷氨基意在包括具有所示长度的直链或支链或环形烷基氨基。直链烷氨基的例子有甲氨基、乙氨基、丙氨基、丁氨基、戊氨基和己氨基。支链烷氨基的例子有异丙氨基、仲丁氨基、叔丁氨基、异戊氨基和异己氨基。环形烷氨基的例子有环丙氨基、环丁氨基、环戊氨基和环己氨基。
特别优选的C1-6烷氨基为C1-3烷氨基。优选的C1-3烷氨基为甲氨基、乙氨基、异丙氨基和环丙氨基。
在本发明范围内，“芳基”意在包括任选被一个或多个C1-6烷基、C1-6烷氧基、氨基、卤原子或芳基取代的芳香环，如选自下组的碳环和杂环芳环：苯基、萘基、吡啶基、1-H-四唑-5-基、三唑基、咪唑基、吲哚基、喹啉基、嘧啶基、噻二唑基、吡唑基、噁唑基、异噁唑基、噻吩基、喹啉基、吡嗪基或异噻唑基。优选芳基为任选被卤原子、氨基、羟基、C1-6烷基或C1-6烷氧基取代的苯基、噻吩基、咪唑基、吡啶基、吲哚基或萘基。“卤原子”包括Cl、F、Br和I。
本发明化合物可有一个或多个不对称中心，本发明包括所有分离的、纯的或部分纯化的立体异构体或其外消旋混合物。
如下列一般方法A-E中所述，本发明化合物可从天然或非天然氨基酸残基制备，其中的起始氨基酸按本领域已知方法制备。
一般方法A
反应路线I：
式I化合物可按反应路线I中所示从适当的N-保护氨基酸制得。N-保护氨基酸按已知方法转化为砜1(如Spaltenstein，有机化学杂志，1987，52，3759)。另一起始物2可从丙二酸二甲酯和芳烷基卤制得，经LiAlH4还原、用TBDMS单甲硅烷基化，再按已知方法(如Jenmalm，有机化学杂志1994，59，1139)在Swern条件下氧化成醛2。2和1之间的反应在适当溶剂如THF中用强碱如BuLi进行，然后还原(如钠汞齐)并按本领域已知的方法脱除甲硅烷保护基得到烯3(如，T.W.Greene，有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons 1991)。这些步骤可以按一罐混的方法进行或逐步进行。中间体3可用例如Jones试剂氧化成羧酸4，后者可用例如二硫酰氯和氨水处理转化为酰胺5。化合物5最后用适当缩合剂(如DCC)与保护的氨基酸反应，再用如T.W.Greene描述的方法(有机化学中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，1991)脱保护，形成化合物6，它是一种式I化合物。
一般方法B
反应路线II
式I化合物可按反应路线II中所示进行制备。先用例如A.E.DeCamp等的方法(四面体通讯，1991，32，1867-1870)合成中间体10：从3-碘丙酸8产生钛-高烯醇化物9，再加入适当的醛7。在例如乙酸中环化可得内酯11。内酯的烷基化可按例如A.H.Fray等描述的方法(有机化学杂志，1986，51，4828-4833)进行。用诸如六甲基二硅氮烷锂(LHDS)或二异丙基氨基锂(LDA)处理可产生烯醇化物，再与适当烷基化试剂如烷基氯反应，生成化合物12。按例如A.H.Fray等所述方法(有机化学杂志，1986，51，4828-4833)可将该内酯转变为甲硅烷基保护羟基的酸13。通过与EDAC和HOBT反应，它可与胺连结生成酰胺14，其中胺可以含有氨基保护基，如邻苯二甲酰亚氨基或FMOC。用本领域已知方法(如T.W.Greene，有机化学中的保护基，第2版，John Wiley和Sons 1991)将氨基脱保护后，再与例如EDAC和HOBT反应与适当的酸(可含保护基)连接，生成化合物16。最后按本领域已知方法(例如，T.W.Greene，有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，纽约1991)除去各片段上的保护基，得到最终产物17，它是一种式I化合物。
一般方法C
反应路线III：
式I化合物可按反应路线III所示制得。酰胺14与例如氟化四丁基铵反应脱保护，然后用适当的试剂如PCC或PDC氧化得到化合物19。用例如在乙酸乙酯中盐酸处理的方法脱氨基保护基，然后与适当的酸(可含有保护基)相连。最后按本领域已知的方法(例如，T.W.Greene，有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，纽约1991)除去不同片段上的保护基，得到最终产物20，它是一种式I化合物。
一般方法D
反应路线IV：
化合物I可按反应路线IV所示制备。氨基-醇21可与氯代乙酰氯按文献方法反应，例如E.D.Nicolaides等(药物化学杂志，1986，29，959-971)。与诸如THF中氢化钠的碱反应可产生吗啉酮23，后者用诸如LDA或LHDS的碱处理，然后加入适当的烷基化试剂如烷基氯进行烷基化。分离非对映异构体后，按例如R.E.TenBrink所述(有机化学杂志1987，52，418-422)与酸反应，可打开环，再保护氨基得到化合物25 。利用例如1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺(EDAC)和1-羟基苯并三唑(HOBT)，与适当的胺反应可以接上E片段，其中可以含有被保护官能团。在适当条件下，如乙酸乙酯中的氯化氢将26中的氨基脱保护，再与适当的酸(可含保护基)、EDAC和HOBT反应。按本领域中已知方法(例如T.W.Greene，有机合成中的保护基，第二版，John Wiley和Sons，纽约1991)除去所有保护基，产生最终产物28，它是一种通式I化合物。
一般方法E
反应路线V：
Figure C9619218400301
式I化合物可按反应路线V中所示来制备。 N-保护的氨基酸29可用例如EDAC活化，然后按已知方法(例如杂环化学杂志1989，26，125)与酰胺肟30在例如吡啶中反应，得到1，2，4-恶二唑衍生物31。用本领域中已知由例如T.W.Greene描述的方法(有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons 1991)将氨基脱保护后，该化合物可用醛和温和还原剂如氰基硼氢化钠进行还原烷基化，得到中间体33。33进一步与N-保护的天然或非天然氨基酸34按本领域描述的肽连接方法(例如DMF中的DCC连接)反应，可得中间体35，在适当溶剂如乙酸乙酯中用例如盐酸脱保护后，用已知的肽连接方法(如DMF中DCC连接法)与另一N-保护氨基酸37连接，得到的中间体用例如适当溶剂(如乙酸乙酯)中的盐酸脱氨基保护基，得到目标产物38，它是一种式I化合物。当R12为功能团(如酯)时，在该反应序列中的适当步骤中可被衍生化。
一般方法F：
反应路线VI
式I化合物可按反应路线VI中所示制备。内酯40可与氨反应得到酰胺41。在如M.S.Manhas等(J.Chem.Soc.Perkin Trans 1，1975，461-463)所述的Mitsunobu条件下反应可得到酯42，在酸性条件下脱保护。与适当的酸(可以含有保护的官能团)连接，可得化合物43，后者按本领域已知方法(如T.W.Greene，有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，纽约，1991)脱保护，得到终产物44，它是一种式I化合物。
一般方法G
反应路线VII
Figure C9619218400341
式I化合物可按路线VII中所示被制备。氨基酸45可用例如酸酐酰化，后处理后再用例如乙硼烷、硼氢化钠/碘或锂铝氢按例如M.J.Mckennon等所述(有机化学杂志，1993，58，3568-3571)在适当溶剂如THF、乙醚、二噁烷或烃中还原，得到氨基醇46。该醇可用本领域中已知例如T.W.Greene(有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，纽约，1991)所述方法，用例如二碳酸二叔丁氧基酯或苯甲酰基甲酰氯保护，得到保护的醇47。如 和Kral所述(Collect.Czech.Chem.Commun.，1992，57，525-530)，在醋酸铑催化下与重氮基乙酸乙酯反应，得到酯48。该酯可按本领域已知的例如T.W.Greene(有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，纽约，1991)描述的方法，用诸如氢氧化锂或氢氧化钾的碱皂化，得到酸49，后者可用例如1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐或1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐结合1-羟基-苯并三唑或1-羟基-7-氮杂苯并三唑活化，并与50反应，得酰胺51。按本领域已知的例如T.W.Greene(有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，纽约，1991)所述的方法，例如盐酸/乙酸乙酯或三氟乙酸脱除51中氨基保护基。酸34a可用例如1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐或1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐结合1-羟基-苯并三唑或1-羟基-7-氮杂苯并三唑活化，并在适当溶剂如DMF或二氯甲烷中与氨52反应，得酰胺53。按本领域已知的例如T.W.Greene(有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，纽约，1991)所述的方法，例如盐酸/乙酸乙酯或三氟乙酸脱除保护基。保护的酸37可用例如1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐或1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐结合1-羟基-苯并三唑或1-羟基-7-氮杂苯并三唑活化，并在适当溶剂如DMF或二氯甲烷中与胺54反应。按本领域已知的例如T.W.Greene(有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，纽约，1991)所述的方法，例如盐酸/乙酸乙酯或三氟乙酸脱除保护后，得到55，它是一种式I化合物。
一般方法H
反应路线VIII
Figure C9619218400361
Figure C9619218400371
式I化合物可按路线VIII中所示从氨基酸56制备。如S.Borg等所述(有机化学杂志1995，60，3112-3120)，56与乙醇在N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐和4-二甲氨基吡啶存在下反应可转变为酯57，然后与水合肼反应得酰肼58。58与乙基草酰氯(59)在诸如三乙胺的碱存在下反应可得酯60。例如用亚硫酰氯/吡啶处理然后加热可进行关环，得到[1，3，4]恶二唑61。酯残基在例如液氨中氨解可得酰胺62。按本领域已知的例如T.W.Greene所述的(有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，纽约，1991)方法脱氨基保护，例如用盐酸/乙酸乙酯或三氟乙酸，可得胺63。利用本领域已知的偶联剂，例如N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐或N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐结合1-羟基苯并三唑或1-羟基-7-氮杂苯并三唑，适当保护的氨基酸34a可连接到63上。按本领域已知的例如T.W.Greene所述(有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，纽约，1991)的方法脱保护，例如用盐酸/乙酸乙酯或三氟乙酸，可得氨65。利用本领域已知的偶联剂，例如N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐或N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐结合1-羟基苯并三唑或1-羟基-7-氮杂苯并三唑，与适当保护的氨基酸37连接。按本领域已知的例如T.W.Greene所述(有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，纽约，1991)的方法脱氨基保护，例如用盐酸/乙酸乙酯或三氟乙酸，可得66，它是一种式I化合物。
一般方法J
反应路线IX
Figure C9619218400391
式I化合物可按路线IX中所示从适当保护的醇(如47)制备。47按本领域已知方法用试剂如DMSO/草酰氯/三乙胺(A.E.De-Camp，A.T.Kawaguchi，R.P.Volante，I.Shinkai，四面体通讯，1991，32，1867-1870；J.R.Luly，J.F.Dellaria，J.J.Plattner，J.L.Soderquist，N.Yi，有机化学杂志，1987，52，1487-1492)或DMSO/氧化硫(IV)吡啶鎓复合物/三乙胺(J.S.Ng，C.A.Przybyla，C.Liu，J.C.Yen，F.W.Muellner，C.L.Weyker四面体1995，51，6397-6410；P.L.Beaulieu，D.Wernic，J.-S.Duceppe，Y.Guin-don，四面体通讯，1995，36，3317-3320)氧化成醛67。该醛可与格氏试剂如烯丙基溴化镁反应，得到不饱和化合物68。与例如9-硼杂双环[3，3，1]壬烷进行硼氢化反应，然后用过氧化氢和氢氧化钠处理，得到二醇69 。按本领域已知的例如T.W.Greene所述(有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，纽约，1991)的方法，与例如盐酸/乙酸乙酯或三氟乙酸反应脱氨基保护，可得70。利用本领域已知的偶联剂，例如1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐或1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐结合1-羟基苯并三唑或1-羟基-7-氮杂苯并三唑，在适当溶剂如DMF或二氯甲烷中，适当保护的氨基酸34a可连接到70上得到71。按本领域已知的例如T.W.Greene所述(有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，纽约，1991)的方法脱保护，例如用三氟乙酸，可得胺72。利用本领域已知的偶联剂，例如1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)-碳化二亚胺盐酸盐或1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐结合1-羟基苯并三唑或1-羟基-7-氮杂苯并三唑，在适当溶剂如DMF或二氯甲烷中，适当保护的氨基酸37可连接到72上。按本领域已知的例如T.W.Greene所述(有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，纽约，1991)的方法，通过与例如三氟乙酸反应脱保护，可得73。73按本领域已知的例如T.W.Greene所述(有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，纽约，1991)的方法与例如氢氧化钾或氢氧化钠反应皂化得到74，这是一种式I化合物。
一般方法K
反应路线X
Figure C9619218400411
醚48可用本领域已知方法还原，例如用硼氢化锂、硼氢化钠或二异丁基氢化铝，得到醇75。按本领域已知的例如T.W.Greene所述(有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，纽约，1991)的方法，例如与盐酸/乙酸乙酯或三氟乙酸反应脱氨基保护，可得胺76。利用本领域已知的偶联剂，例如1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐或1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐结合1-羟基苯并三唑或1-羟基-7-氮杂苯并三唑，在适当溶剂如DMF或二氯甲烷中，适当保护的氨基酸34a可连接到76上。按本领域已知的例如T.W.Greene所述(有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，纽约，1991)的方法脱保护，例如用盐酸/乙酸乙酯或三氟乙酸，可得胺78。利用本领域已知的偶联剂，例如1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐或1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐结合1-羟基苯并三唑或1-羟基-7-氮杂苯并三唑，在适当溶剂如DMF或二氯甲烷中，适当保护的氨基酸37可连接到78上。按本领域已知的例如T.W.Greene所述(有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，纽约，1991)的方法，脱保护，与例如三氟乙酸反应脱保护后，可得79，这是一种式I化合物。为了提高收率，粗产品用本领域中已知的例如T.W.Greene描述(有机合成中的保护基，第2版，John Wiley和Sons，纽约，1991)的试剂进行皂化，例如用甲醇中的氢氧化钾，以裂解可能已在酰胺连接步骤中形成的酯。
一般方法L
反应路线XI
可按与方法K中相同的方法制得硫代酰胺81。它们可通过Lawesson试剂的作用从相应的酰胺80制得。该方法描述在S.Scheiby，B.S.Pederson，S.O.Lawesson，比利时化学协会杂志，1978，229-38中。
一般方法M
反应路线XII
Figure C9619218400441
可用方法K中的相同方法制得酰胺82的四唑类似物83。通过三苯膦、偶氮二羧酸二乙酯和三甲基甲硅烷基叠氮化物作用于82样的酰胺上来制备它们。该方法描述在J.V.Dunica，M.E.Pierce，J.B.Santella III，有机化学杂志，1991，56，2395-2400中。
一般方法N
三唑89可按方法F中的相同方法制备。亚胺84用强碱如叔丁醇钾或二异丙基氨基锂和酰化试剂如酰氯85进行酰化。生成的3-酮-氨基酸86按已知方法如利用诸如氯代甲酸异丁酯的试剂作为偶联试剂的不对称酸酐法，可偶联成二肽88。二肽88可经多种方法环化生成目标三唑89，例如用Lawessons试剂(LR)。该方法描述在T.D.Gordon，J.Singh，P.H.Hansen，B.A.Morgan，四面体通讯，1993，1901-1904中。
式I化合物的药用酸加成盐包括该化合物与无机或有机酸反应制得的盐，例如与盐酸、氢溴酸、硫酸、乙酸、磷酸、乳酸、马来酸、邻苯二甲酸、柠檬酸、戊二酸、葡糖酸、甲磺酸、水杨酸、琥珀酸、酒石酸、甲苯磺酸、三氟乙酸、氨基磺酸或富马酸的盐。
另一方面，本发明涉及含有作为活性成分的通式I化合物或其药用盐和药用载体或稀释剂的药物组合物。
可按常规技术制备含有本发明化合物的药物组合物，例如Rem-ington药物科学(1985)中所述技术。这种组合物可以以常规形式出现，例如胶囊、片剂、气溶胶、溶液、悬液或表皮施用剂。
所用药用载体或稀释剂可以是常规固态或液态载体。固态载体的例子有乳糖、石膏粉、蔗糖、环糊精、滑石、明胶、琼脂、果胶、阿拉伯树胶、硬脂酸镁、硬脂酸或纤维素低级烷基醚。液态载体的例子有糖浆、花生油、橄榄油、磷脂、脂肪酸、脂肪酸胺、聚氧乙烯或水。
这种载体或稀释剂还可以包括本领域中已知的任何缓释物质，如甘油单硬脂酸酯或甘油二硬脂酸酯单用或与蜡混合。
如果固态载体用于口服给药，可将制剂压成片，以粉末或小丸形式装入硬明胶胶囊中，或呈锭剂或糖锭形式。固态载体的量变化范围很宽，但一般为约25mg到约1g。如果使用液态载体，制剂形式可以是糖浆、乳液、软明胶胶囊或灭菌注射液，如水性或非水性液体悬液或溶液。
可用常规压片技术制备的典型片剂可含有：
药核：
活性化合物(游离化合物或其盐)  100mg
胶态二氧化硅(Aerosil)         1.5mg
微晶纤维素(Avicel)            70mg
改性纤维素胶(Ac-Di-Sol)       7.5mg
硬脂酸镁
包衣：
HPMC                          约9mg
*Mywacett 9-40T               约0.9mg
*用作膜包衣增塑剂的酰化单甘油酯。
对鼻内给药，制剂可含有溶解或悬浮在液态载体，特别是水性载体中的式I化合物，以气溶胶形式施用。载体中可含有添加剂，如增溶剂(如丙二醇)、表面活性剂、吸收增效剂如卵磷脂(磷脂酰胆碱)或环糊精、或防腐剂如对羟苯甲酸。
本发明化合物一般以剂量单位形式配药，每个单位剂量含有50-200mg活性成分和药用载体。
当本发明化合物作为药物给予患者(如人)时，适当剂量为0.1-500mg/天，例如每剂约5-50mg，如约10mg/剂。
已证明通式I化合物具有体内释放内源性生长激素的能力。因而这些化合物可用于治疗需要提高血浆生长激素水平的疾病，例如生长激素缺陷病人或老年病人或家禽中。
因而本发明另一方面涉及用于刺激脑垂体释放生长激素的药物组合物，该组合物包括作为活性成分的通式I化合物或其药用盐和药用载体或稀释剂。
另一方面，本发明涉及刺激脑垂体释放生长激素的方法，该方法包括给予有关主体有效量的通式I化合物或其药用盐。
再一方面，本发明涉及通式I化合物或其药用盐在制备刺激脑垂体释放生长激素的药物中的用途。
本领域技术人员熟知，生长激素在人体中的现有和潜在的用途是多种多样的。使用式I化合物的目的是刺激脑垂体释放生长激素，从而具有与生长激素本身相似的效果或用途。生长激素的用途可综合如下：刺激老年人体中生长激素的释放；防止糖皮质激素的代谢副作用，预防和治疗骨质疏松，刺激免疫系统，加速伤口愈合，加速骨折修复，治疗生长迟缓，治疗由生长迟缓造成的肾衰或肾功能不全，治疗生理性身材矮小-包括生长激素缺陷儿童和由慢性病引起的身材矮小，治疗肥胖和与肥胖有关的生长迟缓，治疗与Prader-Willi综合症和Turner氏综合症有关的生长迟缓；加速烧伤病人康复和缩短住院期；治疗子宫内生长迟缓、骨骼发育不良、皮质醇过多症和Cushing氏综合症，诱导博动性生长激素释放；重病人中更换生长激素，治疗骨软骨发育不良、Noonan氏综合症、精神分裂症、抑郁、Alzheimer病、伤口愈合缓慢和精神失常(psychosocial deprivation)，治疗肺功能不全和换气器依赖性，减小大手术后的蛋白代谢反应，减小由诸如癌或艾滋病引起的恶病质和蛋白损失；治疗包括成胰岛细胞瘤的高胰岛素血症，排卵诱导的辅助治疗；刺激胸腺发育和预防胸腺功能随年龄减退，治疗免疫低下病人，改善肌肉强度、可动性，维持年老体弱者皮肤厚度、代谢自身稳定、肾功能自身稳定，刺激骨生成、骨再造和软骨生长，刺激宠物的免疫系统和治疗庞物的老年疾病，刺激家畜生长及刺激绵羊毛的生长。
对于以上适应症的剂量将随着所用的式I化合物、给药方法和所需治疗而变化。但一般给予病人或动物的剂量水平在0.0001-100mg/kg体重/天范围内，以达到有效的内源性生长激素释放。通常，适于口服、鼻内、肺内或透皮途径给药的剂量形式包含约0.0001mg到约100mg，优选约0.001mg到约50mg的式I化合物和与其混合的药用载体或稀释剂。
式I化合物可以以药用酸加成盐形式或适当时作为碱金属盐或碱土金属盐或低级烷基铵盐的形式给药。相信这种盐形式显示与游离碱形式大致相同等级的活性。
任选地，本发明的药物组合物中，式I化合物可与一种或多种不同活性的化合物结合，如与抗生素或其他药理活性物质。
给药途径可以是能有效地转运活性化合物至适当的作用位点的任何途径，如口服、鼻内、肺内、透皮或胃肠外途径，优选口服途径。
除式I化合物的药物用途外，它们还可用作研究生长激素释放调节的体外工具。
式I化合物还可用作测评脑垂体生长激素释放能力的体内工具。例如，测定给予这些化合物前后血清样品中的生长激素。比较每个血清样品中的生长激素可直接确定病人脑垂体释放生长激素的能力。
也可以将式I化合物给予商业上重要的动物，以提高其生长速度和程度，提高奶或毛产量。
式I的生长激素促分泌化合物的又一用途是与其他促分泌素如GHRP(2或6)、GHRH和其类似物、生长激素或其类似物或包括IGF-1和IGF-2的生长调节素联合使用。
药理方法
可在大鼠脑垂体原代培养物中体外评价式I化合物释放生长激素的效能和效力。
大鼠垂体细胞的分离采用O.Sartor等《内分泌学》116，1985，pp952-957的改良方法。雄性白化Spragne-Dawley大鼠(250+/-25克)从丹麦Lille Shensved，Mφllegaard购得。将大鼠分组置于笼中(4只动物/笼)，放在12小时循环照明的室中。室温为19-24℃，湿度为30-60％。
切下鼠头并取出脑垂体。去除神经中间叶，剩余组织立即置于冰冷的分离缓冲液中(Gey氏培养基(Gibco 041-04030)，其中补有0.25％D-葡萄糖、2％非必需氨基酸(Gibco 043-01140)和1％牛血清白蛋白(BSA)(Sigma A-4503)。将组织切成小块，转移到补有3.8mg/ml胰蛋白酶(Worthington#3707 TRL-3)和330μg/mlDNA酶(Sigma D-4527)的分离培养基中。该混合物在95/5％的O2/CO2气氛下37℃下以70转/分钟培养35分钟。然后将组织在上述缓冲液中洗三次。用标准巴氏吸管将组织抽吸成单细胞。分散后将细胞通过尼龙滤膜(160μm)过滤以除去未消化组织。该细胞悬液用补有胰蛋白酶抑制剂(0.75mg/ml Worthington#2829)的分离缓冲液洗涤三次，最后悬浮在培养用培养基DMEM(Gibco 041-01965)中，其中补有25mM HEPES(Sigma H-3375)，4mM谷氨酰胺(Gibco 043-05030H)，0.075％碳酸氢钠(Sigma S-8875)，0.1％非必需氨基酸，2.5％胎牛血清(FCS，Gibco 011-06290)，3％马血清(Gibco 034-06050)，10％新鲜鼠血清，1nM T3(Sigma，T-2752)和40μg/L地塞米松(Sigma D4902)，pH为7.3，细胞密度为2×105细胞/ml。将细胞以200μl/孔种在微滴定板(Nunc，丹麦)上，37℃及8％CO2下培养3天。
化合物测定
培养后，细胞用刺激缓中液洗两次(汉氏平衡盐溶液(Gibco 041-04020)，补有1％BSA(Sigma A-4503)，0.25％D-葡萄糖(SigmaG-5250)和25mM HEPES(Sigma H-3375)pH7.3)，37℃下预培养1小时。用90μl刺激缓冲液(37℃)更换缓冲液。加入10μl试验化合物溶液，培养板在37℃和5％CO2下保温15分钟。滗出培养液，在rGH SPA系统中分析GH含量。
所有化合物在10pM到100μM剂量范围内测试。用Hill方程建立剂量-响应关系(图P，Biosoft)。效能(最大GH释放，Emax)用GHRP-6的Emax的百分数表示。效力(EC50)为产生半数最大GH释放刺激的浓度。
还评价了式I化合物的代谢稳定性。
将化合物以1μg/μl的浓度溶解在水中。将25μl这种溶液加入到175μl各种酶溶液中(使酶与底物比(w/w)为约1∶5)。37℃放置溶液过夜。将10μl各种降解溶液对照相应的零样品分析，用流式注射电子喷射质谱(ESMS)，选择分子离子进行离子鉴测。如果该信号比零样品降低20％以上，则剩余的溶液用HPLC和质谱分析，以确认精确的降解程度和位点。
在稳定性试验中还包括了几个标准肽(ACTH 4-10，血管紧张肽1-14和胰高血糖素)，以验证这些不同的溶液具有降解肽的能力。
标准肽(血管紧张肽1-14，ACTH 4-10和胰高血糖素)购自Sigma，MO，USA。
酶(胰蛋白酶、糜蛋白酶、弹性蛋白酶、氨基肽酶M和羧肽酶Y和B)均购自Boehringer Mannheim GmbH(德国Mannheim)。
胰酶混合物：100mM碳酸氢铵pH8.0中的胰蛋白酶糜蛋白酶和弹性蛋白酶(浓度均为0.025μg/μl)。
羧肽酶混合物：50mM乙酸铵pH4.5中羧肽酶Y和B(浓度均为0.025μg/μl)。
氨基肽酶M溶液：100mM碳酸氢铵(pH8.0)中的氨基肽酶M(0.025μg/μl)。
用两种不同的质谱仪进行质谱分析。装有电子喷射离子源的Sciex APIIII三联四极LC-MS仪(Sciex仪，Thornhill，Ontario)和Bio-Ion 20飞行时间等离子吸收仪(Bio-Ion Nordic AB，Uppsala，瑞典)。
在APIIII仪器上流式注射分析物，在有关的分子离子处进行单离子监测，对降解前和后的化合物定量。用ABI 140B HPLC单元(Perkin-Elmer应用生物系统分部，福斯特城，CA)控制100μl/分的液流(MeOH∶水＝1∶1)。仪器参数设置在标准操作条件下，用最强的分子离子(大多数情况下这相当于双电荷分子离子)进行SIM监测。
对降解产物的鉴定还涉及等离子吸收质谱(PDMS)的使用，将样品涂在硝基纤维素包衣的靶子上，应用标准仪器设置进行测定。这样测得的质量，其精确度一般好于0.1％。
降解产物的分离用HY-TACH  C-18反相4.6×105mmHPILC柱(Hewlett-Packard公司，Palo-Alto，CA)和标准的乙腈：TEA分离梯度进行。所用HPLC系统为HP1090M(Hewlett-Packard公司，Palo-Alto，CA)。
肽衍生物     MW/SIM离子(amu) 羧肽酶混合物 胰酶混合物
    标准
    ACTH 4-10     1124.5/562.8     +     -
    胰高血糖素     3483/871.8     -     -
    胰岛素(B23-29)     859.1/430.6
    血管紧张肽1-14     1760.1/881.0     -     -
    GHRP-2     817.4/409.6     -     -
    GHRP-6     872.6/437.4     -     -
+稳定(在降解溶液中24小时后SIM信号降低小于20％)
-不稳定(在降解溶液中24小时后SIM信号降低大于20％)。
本文描述的任何新特征或特征组合都视为对本发明是必需的。
                  具体实施方式
实施例：
式I化合物的制备方法和含有它们的制剂在下列实施例中将得到进一步的说明，但这些实施例不构成限制。
化合物的结构由元素分析(MA)、核磁共振(NMR)或质谱(MS)确证。NMR位移(δ)用百万分数表示(ppm)，而且仅给出了所选择峰的位移。mp为熔点，以℃表示。柱层析用W.C.Still等《有机化学杂志》1978，43，2923-2925中描述的方法在Merck硅胶60(Art9385)上进行。用作起始物的化合物要么是已知化合物，要么易于由本身已知的方法制备。
缩写：
TLC：薄层层析
DMSO：二甲基亚砜
min：分钟
h：小时
ESMS：电子喷射质谱
PDMS：离子对吸收质谱
HPLC分析：
方法a.
用Lichrosorp RP-18 5μm柱以1ml/分钟的速度洗脱，在254nm处紫外检测进行RP-HPLC分析。使用了两种溶剂系统：
溶剂系统I：乙腈中0.1％三氟乙酸
溶剂系统II：水中0.1％三氟乙酸
用由20％溶剂系统I和80％溶剂系统II组成的混合物平衡柱子。注射样品后，溶剂系统I在溶剂系统II中从20％到80％的梯度进行30分钟。然后在5分钟内梯度扩张到100％的溶剂系统I，接下来用100％该系统等梯度洗脱6分钟。
方法b.
在214、254、276和301nm处紫外检测，在218 TP54 4.6mm×250mm5μC-18硅胶柱(分离组，Hesperia)上42℃下以1ml/分速度洗脱来进行RP分析。用4M硫酸调至pH2.5的0.1M硫酸铵缓冲液中的5％乙腈平衡柱子。注射样品后用50分钟内相同缓冲液中5％-60％乙腈的梯度洗脱。
实施例1
(3R)-哌啶-3-羧酸[(1R)-1-((1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基]酰胺：
按照方法E制备
(R)-[1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基]氨基甲酸叔丁基酯：
将1，3-二环己基碳化二亚胺(10.1g，49mmol)溶解在二氯甲烷(100ml)中，加入到0-5℃(R)-叔丁氧羰基-苯丙氨酸(10.0g，37.7mmol)的二氯甲烷(250ml)溶液中。加热反应混合物至20℃，在此温度下搅拌1小时。将乙酰胺肟(3.63g，49mmol)悬浮在吡啶(200ml)和N，N-二甲基甲酰胺(40ml)中，加入到反应混合物中。蒸去二氯甲烷，在回流温度下加热反应混合物18小时。冷却至0℃，过滤。滤液用乙酸乙酯(100ml)稀释，用柠檬酸水溶液(10％，3×50ml)和水(3×50ml)洗涤。用硫酸镁干燥后真空浓缩溶液，从乙酸乙酯和庚烷中结晶，得到5.48g(R)-(1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基]氨基甲酸叔丁基酯。
mp 94-98℃
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.30(s，9H)；2.32(s，3H)；4.90-5.10(m，1H)；7.15-7.30(m，5H).
HPLC：Rt＝26.7min(方法a)
(R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基胺盐酸盐：
Figure C9619218400532
将(R)-[1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基]氨基甲酸叔丁酯(2.4g，7.9mmol)溶解在氯化氢的饱合乙酸乙酯溶液(40ml)中。20℃下5小时后，真空浓缩反应混合物。残余物在乙酸乙酯中结晶，得2.05g(R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙胺盐酸盐。
m.p.144-148℃.
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.35(s，3H)；3.21(dd，1H)；3.49(dd，1H)；5.05(dd，1H)；7.13-7.35(m，5H).
HPLC：Rt＝9.2min(方法a)
{(1R)-1[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酸叔丁酯：
Figure C9619218400541
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(6.3g，32.9mmol)和1-羟基苯并三唑单水合物(5.0g，32.9mmol)加入到(R)N-叔丁氧羰基-3-(2-萘基)-丙氨酸(10.4g，32.9mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(140ml)溶液中。 20℃下1小时后加入N，N-二甲基甲酰胺(100ml)中的1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙胺盐酸盐(5.6g，23.5mmol)和三乙胺(2.37g，23.5mmol)的混合物。20℃下18小时后将反应混合物倾入水中，用乙酸乙酯萃取数次(总体积1.4L)。合并有机相，用柠檬酸(10％，200ml)、饱合碳酸氢钠溶液(200ml)和水(3×200ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，从乙酸乙酯和庚烷中结晶，得9.45g{(1R)-1-(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基}氨基甲酸叔丁酯。
m.p.148-150℃.
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.25(s，9H)；2.29(s，3H)；4.25-4.35(m，1H)；5.25-5.35(s，1H)；7.15-7.85(m，12H).
HPLC：Rt＝29.6min(方法a)
      计算值：C29H32N4O4：
C，69.58；H，6.44；N，11.19％；实测值：
C，69,40；H，6.65；N，10.93％.
(2R)-2-氨基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺盐酸盐：
Figure C9619218400551
将{(1R)-1-{(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基}氨基甲酸叔丁酯(4.5g，8.99mmol)悬浮在乙酸乙酯(50ml)中，加入氯化氢在乙酸乙酯(45ml)中的饱合混合物。20℃下3小时后，过滤混合物，得到3.17g(2R)-2-氨基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺盐酸盐
mp 197-199℃.
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.28(s，3H)；3.15-3.35(m，4H)；4.15(t，1H)；5.35(q，1H)；7.20-7.90(m，12H).
HPLC：Rt＝18.5min(方法a)
      计算值：C24H24N4O2，HCl：
C，65.97；H，5.77；N，12.82％；实测值：
C，66,20；H，5.90；N，12.57％.
(3R)-3-{(1R)-1-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基}哌啶-1-羧酸叔丁酯：
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.42g，2.18mmol)和1-羟基苯并三唑单水合物(0.33g，2.18mmol)加入到(R)-N-叔丁氧羰基-3-哌啶羧酸(0.50g，2.18mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(7ml)溶液中。 20℃下30分钟后加入(2R)-2-氨基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺盐酸盐(0.68g，1.56mmol)和三乙胺(0.16g，1.56mmol)在N，N-二甲基甲酰胺(8ml)中的混合物。20℃下18小时后，将反应混合物倾入冰水(90ml)中，用乙酸乙酯(共90ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，15ml)、碳酸氢钠饱和溶液(3×15ml)和水(3×15ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，在硅胶(90g)上快速层析纯化，乙酸乙酯和庚烷(3∶2)洗脱，得到0.83g(3R)-3-{(1R)-1-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.37(s，9H)；2.30(s，3H)；4.60-4.70(m，1H)；5.25-5.35(m，1H)；7.15-7.85(m，12H).
HPLC：Rt＝31.6min(方法a)
将3-{(1R)-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.80g，1.31mmol)溶解在乙酸乙酯(20ml)中，加入氯化氢的饱和乙酸乙酯(20ml)溶液。20℃下2小时后，真空浓缩反应混合物，在甲醇和乙酸乙酯的混合物中结晶，得到0.66g标题化合物。
m.p.198-200℃
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.10-1.80(m，4H)；2.30(s，3H)；4.60-4.70(m，1H)；5.25-5.35(m，1H)；7.20-7.90(m，12H).
HPLC：Rt＝20.9min(方法a)
      计算值：C30H33N5O5，HCl：
C，65.74；H，6.25；N，12.78％；实测值：
C，65,57；H，6.35；N，12.46％.
实施例2
4-氨基-4-甲基-戊-2-烯酸[(1R)-1-{(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基]酰胺
按方法E制备
N-2-羟基-1，1-二甲基乙基氨基甲酸叔丁酯：
Figure C9619218400581
将2-氨基-2-甲基-丙-1-醇(10.0g，112mmol)溶解在四氢呋喃(100ml)中，加入1N氢氧化钠水溶液(112ml，112mmol)。15分钟内加入二碳酸二叔丁酯(29.3g，134mmol)的四氢呋喃(100ml)溶液。20℃下搅拌16小时，加入水(100ml)，分离各相。水相用乙酸乙酯(3×150ml)萃取，合并有机相，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，粗产物在硅胶(180g)上用乙酸乙酯/庚烷1∶1洗脱，层析得到19.6gN-2-羟基-1，1-二甲基乙基氨基甲酸叔丁酯。
mp 53℃
1H-NMR (CDCl3)：δ1.22(s，6H)；1.45(s，9H)；3.58(d，2H)；4.05(br，1H)；4.65(br，1H).
2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基丙醛：
将DMSO(12.4ml，174.4mmol)溶解在二氯甲烷(240ml)中，并将溶液冷却至-78℃，滴加入草酰氯(76ml，87mmol)。-78℃下搅拌15分钟。滴加N-2-羟基-1，1-二甲基乙基氨基甲酸叔丁酯的二氯甲烷(30ml)溶液，-78℃下搅拌30分钟。慢慢加入三乙胺(55.23ml，396.3mmol)。-78℃下5分钟后将溶液温热至20℃，用二氯甲烷(300ml)稀释，用1N盐酸(3×200ml)洗涤。水相合并后用二氯甲烷(2×200ml)萃取。合并有机相，用饱和碳酸氢钠溶液(2×200ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，粗产品在硅胶(180g)上用乙酸乙酯/庚烷1∶4洗脱，层析得到13.4g 2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基丙醛。
mp 84-85℃
1H-NMR(CDCl3)δ1.35(s，6H)；1.45(s，9H)；5.00(br，1H)；9.45(s，1H).
(2E)-4-叔丁氧羰基氨基-4-甲基戊-2-烯酸乙酯：
Figure C9619218400591
将二氧磷基乙酸三乙酯(9.6ml，48mmol)慢慢加入到叔丁醇钾(5.39g，48mmol)的四氢呋喃(100ml)悬液中。20℃下30分钟后加入2-叔丁氧羰基氨基-2-甲基丙醛(5.0g，26mmol)。 20℃下2.5小时后，慢慢加入1N盐酸(80ml)。用乙酸乙酯(120ml，2×50ml)萃取该混合物，合并的有机相用饱和碳酸氢钠(100ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空蒸去溶剂，粗产品在硅胶(100g)上用乙酸乙酯/庚烷(1∶4)洗脱，层析得到5.7g(2E)-4-叔丁氧羰基氨基-4-甲基-戊-2-烯酸乙酯。
mp 40-41℃(庚烷)
1H-NMR (CDCl3)：δ1.29(t，3H)；1.41(s，6H)；1.43(s，9H)；4.19(q，2H)；4.65(br，1H)；5.84(d，J＝15.9Hz，1H)；6.99(d，J＝16.0Hz，1H).
(2E)-4-叔丁氧羰基氨基-4-甲基-戊-2-烯酸：
Figure C9619218400592
将(2E)-4-叔丁氧羰基氨基-4-甲基戊-2-烯酸乙酯(5.0g，19.4mmol)溶解在二噁烷(50ml)中，加入氢氧化锂(0.61g，25.3mmol)水(25ml)溶液。20℃下搅拌16小时，加入乙酸乙酯(75ml)和水(20ml)，分离各相。水相用乙酸乙酯(20ml)萃取，合并的有机相用1N氢氧化钠溶液(30ml)萃取。合并的水相用1N硫酸氢钠溶液酸化至pH＝2。再用乙酸乙酯(2×50ml)萃取水相。合并的有机相用硫酸镁干燥，真空除去溶剂。粗产品(2E)-4-叔丁氧羰基氨基-4-甲基戊-2-烯酸用于进一步合成。
1H-NMR(CDCl3)：δ1.39(s，6H)；1.43(s，9H)；4.79(br，1H)；5.75(d，1H)；7.12(d，1H)；9.50-11.50(br，1H).
{1，1-二甲基-3-[(1R)-1((1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基]烯丙基}氨基甲酸叔丁酯
Figure C9619218400601
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.42g，2.18mmol)和1-羟基苯并三唑单水合物(0.33g，2.18mmol)加入到4-叔丁氧羰基氨基-4-甲基戊-2-烯酸(0.50g，2.18mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(7ml)溶液中。 20℃下30分钟后，加入N，N-二甲基甲酰胺(8ml)中的(2R)-2-氨基-N-[(1 R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺盐酸盐(0.68g，1.56mmol)和三乙胺(0.16g，1.56mmol)的混合物。 20℃下18小时后，将反应混合物倾入冰水(90ml)中，用乙酸乙酯(共90ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，15ml)，饱合碳酸氢钠溶液(3×15ml)和水(3×15ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，在硅胶(95g)上用乙酸乙酯和庚烷(1∶1)洗脱进行快速层析。得到0.90g{1，1-二甲基-3-[(1R)-1-((1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基]烯丙基}氨基甲酸叔丁酯。
1H-NMR (DMSO-d6)δ1.22(s，3H)；2.28(s，3H)；4.70-4.80(m，1H)；5.72-5.82(m，1H)；5.89(d，1H)；6.72(d，1H)；7.15-7.85(m，12H).
HPLC：Rt＝30.3min(方法a)
将{1，1-二甲基-3-[(1R)-1-((1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基]烯丙基}氨基甲酸叔丁酯(0.90g，1.47mmol)溶解在乙酸乙酯(10ml)中，加入氯化氢的饱和乙酸乙酯(20ml)溶液。20℃下3小时后，真空浓缩反应混合物，得到0.70g标题化合物。
mp 161-167℃
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.32(s，3H)；1.34(s，3H)；2.28(s，3H)；4.75-4.83(m，1H)；5.23-5.33(m，1H)；6.12(d，1H)；6.61(d，1H)；7.15-7.88(m，12H).
HPLC：Rt＝20.6min(方法a)
      计算值：C30H33N5O5，HCl，0.75H2O：
C，64.16；H，6.45；N，12.47％；实测值：
C，64,42；H，6.43；N，12.03％.
实施例3
3-氨基甲基-N-[(1R)-1-{(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基]苯甲酰胺：
Figure C9619218400611
按方法E制备：
(3-{(1R)-1-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基}苄基)氨基甲酸叔丁酯：
Figure C9619218400621
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.92g，4.82mmol)和1-羟基苯并三唑单水合物(0.74g，4.83mmol)加入到N-叔丁氧羰基-3-氨基苯甲酸(1.21g，4.82mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液(15ml)中。20℃下1小时后，加入N，N-二甲基甲酰胺(15ml)中的(2R)-2-氨基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺盐酸盐(1.50g，3.43mmol)和三乙胺(0.35g，3.46mmol)的混合物。20℃下18小时后，将反应混合物倾入冰水(180ml)中，用二氧甲烷(共180ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，25ml)、饱和碳酸氢钠溶液(3×25ml)和水(3×25ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，从乙酸乙酯中分离，得到1.80g(3-{(1R)-1-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲基酰)-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基}苄基)氨基甲酸叔丁酯。
mp＝176-178℃
1H-NMR (DMSO-d6)δ1.39(s，9H)；2.30(s，3H)；4.70-4.80(m，1H)；5.29-5.39(m，1H)；7.15-7.85(m，17H).
HPLC：Rt＝31.4min(方法a)
      计算值：C37H39N5O5：
C，70.12；H，6.20；N，11.05％；实测值：
C，70.20；H，6.34；N，10.86％.
将(3-{(1R)-1-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基}苄基)氨基甲酸叔丁酯(5.51g，2.38mmol)悬浮在乙酸乙酯(20ml)中，加入氯化氢的饱和乙酸乙酯(30ml)溶液。20℃下4小时后，真空浓缩反应混合物，从乙酸乙酯中结晶得到1.26g标题化合物。
mp.240-241℃
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.31(s，3H)；4.03(s，2H)；4.75-4.85(m，1H)；5.38-5.48(m，1H)；7.15-7.90(m，16H).
HPLC：Rt＝24.6min(方法a)
      计算值：C32H32N5O3，HCl：
C，67.42；H，5.66；N，12.28％；实测值：
C，67.26；H，5.76；N，12.00％.
实施例4：
哌啶-4-羧酸N-[(1R)-1-{(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基]酰胺：
按方法E制备：
4-{(1R)-1-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]恶二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲基酰]-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基}哌啶-1-羧酸叔丁酯
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.92g，4.82mmol)和1-羟基苯并三唑单水合物(0.74g，4.83mmol)加入到4-叔丁氧羰基-4-哌啶羧酸(1.10g，4.80mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液(15ml)中。20℃下30分钟后，加入N，N-二甲基甲酰胺(15ml)中的(2R)-2-氨基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]恶二唑-5-基)-2-苯乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺盐酸盐(1.50g，3.43mmol)和三乙胺(0.35g，3.46mmol)的混合物。 20℃下18小时后，将反应混合物倾入冰水(180ml)中，用乙酸乙酯(共180ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，25ml)、饱和碳酸氢钠溶液(3×25ml)和水(3×25ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，从乙酸乙酯中结晶，得到1.84g 4-{(1R)-1-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]恶二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲基酰)-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。
mp 152-155℃
1H-NMR (DMSO-d6)δ1.35(s，9H)；2.29(s，3H)；4.60-4.70(m，1H)；5.25-5.35(m，1H)；7.15-7.85(m，12H).
HPLC：Rt＝31.3min(方法a)
      计算值：C35H41N5O5：
C，68.72；H，6.76；N，11.45％；实测值：
C，68.65；H，6.95；N，11.34％.
将4-{(1R)-1-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲基酰基]-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.57g，2.57mmol)溶解在乙酸乙酯(20ml)中，加入氯化氢的饱和乙酸乙酯(30ml)溶液。20℃下4小时后，过滤反应混合物，得到1.34标题化合物。
mp 238-241℃
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.30(s，3H)；4.60-4.70(m，1H)；5.25-5.35(m，1H)；7.20-7.85(m，12H).
HPLC：Rt＝23.7min(方法a)
      计算值：C30H33N5O5，HCl：
C，64.74；H，6.25；N，12.78％；实测值：
C，65,91；H，6.39；N，12.42％.
实施例5：
5-{(1R)-1-[(2R)-2-(3-氨基甲基苯甲酰氨基)-3-(2-萘基)丙酰氨基]-2-苯乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯，三氟乙酸盐。
按方法E制备。
(R)-5-(1-叔丁氧羰基氨基-2-苯乙基)-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯
Figure C9619218400652
将1，3-二环己基碳化二亚胺(2.1g，10mmol)溶解在二氯甲烷(25ml)中，0-5℃下加入到(R)N-叔丁氧羰基苯丙氨酸(2.2g，10mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液中。加热反应混合物至20℃，在此温度下搅拌30分钟。将2-氨基-2-(羟基亚氨基)乙酸乙酯(1.3g，10mmol)溶解在吡啶(50ml)中，并加入到反应混合物中。蒸去二氯甲烷，在回流温度下加热反应混合物18小时。将反应混合物冷却至0℃，过滤。滤液用乙酸乙酯(2.5ml)稀释，并用柠檬酸水溶液(10％，3×15ml)和水(3×15ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，在硅胶(90g)上用乙酸乙酯和庚烷(1∶1)洗脱，快速层析得到1.68g(R)-5-(1-叔丁氧羰基氨基-2-苯乙基)-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯。
mp 72-76℃
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.30(s，9H)；1.32(t，3H)；3.10-3.30(m，2H)；4.41(q，2H)；5.10(q，1H)；7.20-7.50(m，5H).
(R)5-(1-氨基-2-苯乙基)-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯盐酸盐：
Figure C9619218400661
将(R)-5-(1-叔丁氧羰基氨基-2-苯乙基)-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯(1.5g，4.2mmol)溶解在氯化氢的乙酸乙酯(40ml)饱和溶液中。20℃下5小时后，真空浓缩反应混合物，得到1.2g(R)-5-(1-氨基-2-苯乙基)-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯盐酸盐。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.32(t，3H)；4.41(q，2H)，5.20(dd，1H)；7.10-7.30(m，5H).
5-[(1R)-1-{(2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(2-萘基)丙酰氨基}-2-苯乙基][1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯
Figure C9619218400671
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.77g，4.03mmol)和1-羟基苯并三唑单水合物(0.62g，32.9mmol)加入到(R)-N-叔丁氧羰基氨基-3-(2-萘基)丙氨酸(1.27g，4.03mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液(20ml)中。20℃下30分钟后，加入N，N-二甲基甲酰胺(8ml)中的(R)-5-(1-氨基-2-苯乙基)-[1，2，4]恶二唑-3-羧酸乙酯盐酸盐(1.20g，4.03mmol)溶液。50℃下3小时后，将反应混合物倾入水(400ml)中，用二氯甲烷(共350ml)萃取几次。合并有机相，用饱和碳酸氢钠溶液(2×50ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，在硅胶(40g)上用乙酸乙酯和庚烷(3∶7)洗脱进行快速层析，得到0.41g 5-[(1R)-1-{(2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(2-萘基)丙酰氨基}-2-苯乙基]-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.23(s，9H)；1.32(t，3H)；4.25-4.35(m，1H)，4.38-4.45(q，2H)；5.38-5.48(m，1H)；7.20-7.85(m，12H).
5-[(1R)-1-{(2R)-2-氨基-3-(2-萘基)丙酰基}氨基-2-苯乙基]-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯盐酸盐：
Figure C9619218400672
将5-[(1R)-1-{(2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(2-萘基)丙酰氨基}-2-苯乙基-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯(0.41g，0.7mmol)悬浮在氢化氢的乙酸乙酯(10ml)饱和混合物中。20℃下18小时后，过滤反应混合物，得到0.39g 5-[(1R)-1-{(2R)-2-氨基-3-(2-萘基)丙酰氨基}-2-苯乙基]-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯盐酸盐。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.32(t，3H)；4.10-4.20(m，1H)；4.40-4.45(m，2H)；5.40-5.50(m，1H).
5-[(1R)-1-{(2R)-2-((3-叔丁氧羰基氨基甲基)苯甲酰氨基)-3-(2-萘基)丙酰氨基}-2-苯乙基]-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯：
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.23g，1.20mmol)和1-羟基苯并三唑单水合物(0.18g，1.2mmol)加入到3-(叔丁氧羰基氨基甲基)苯甲酸(0.30g，1.2mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液(8ml)中。20℃下1小时后，加入N，N-二甲基甲酰胺(2ml)中的5-[(1R)-{(2R)-2-氨基-3-(2-萘基)丙酰氨基}-2-苯乙基]-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯盐酸盐(0.39g，0.79mmol)和三乙胺(0.08g，0.79mmol)的混合物。20℃下18小时后，将反应混合物倾入水(70ml)中，用乙酸乙酯(共80ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，15ml)、饱和碳酸氢钠溶液(10ml)和水(3×10ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，从乙酸乙酯和庚烷中结晶，得到0.44g 5-[(1R)-{(2R)-2-(3-叔丁氧羰基氨基甲基)苯甲酰氨基)-3-(2-萘基)丙酰氨基}-2-苯乙基]-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯。
mp＝170-176℃
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.30-1.40(m，12H)；4.42(q，2H)，4.80-4.90(m，1H)；5.40-5.50(m，1H).
将5-[(1R)-1-{(2R)-2-((3-叔丁氧羰基氨基甲基)苯甲酰氨基)-3-(2-萘基)丙酰氨基}-2-苯乙基]-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯(0.40g，0.58mmol)悬浮在氯化氢的饱和乙酸乙酯(10ml)溶液中。20℃下5小时后，真空浓缩反应混合物，在硅胶(40g)上用二氯甲烷和10％氨/乙醇(9∶1)的混合物洗涤，层析得到0.14g标题化合物。该化合物再经半制备性HPLC纯化三次，柱子为25mm×250mm柱，内装7μC-18硅胶，柱子用0.5M硫酸铵溶液(用4M硫酸调节至pH2.5)中的30％乙腈预平衡，用0.5M硫酸铵(pH2.5)中24％-50％乙腈梯度40℃下以10ml/min的流速洗脱47分钟，收集主峰流份，用三倍体积的水稀释，上样于Sep-Pak C-18柱上(Waters part#WAT036915)。用0.1％TFA预平衡后，用70％TFA从Sep-Pak柱上洗脱，从洗脱液中冷冰干燥分离到化合物。
1H-NMR (DMSO-d6)δ1.35(t，3H)；4.40(q，2H)；4.85-4.95(m，1H)；5.35-5.45(m，1H)；7.10-7.85(m，16H).
HPLC：Rt＝28.4min(方法：0-90％0.1％TFA/乙腈，50分钟)
      计算值：C34H33N5O5，TFA，1.5H2O：
C，59.01；H，5.09；N，9.56％；实测值：
C，68,89；H，5.10；N，9.74％.
实施例6：
5-{1-[2-(3-氨基甲基苯甲酰基氨基)-3-(2-萘基)丙酰基-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯：
按方法E制备。
(R)-3-(2-萘基)丙氨酸甲酯
Figure C9619218400702
将亚硫酰氯(5ml)在35℃下15分钟内滴加到(R)-3-(2-萘基)丙氨酸(5.0g)的甲醇(50ml)悬液中。加入后，60℃下加热反应混合物1小时，冷却并真空除去溶剂。加入水(75ml)和乙酸乙酯(125ml)，用碳酸钠调节pH至8.5。分离有机相，用硫酸镁干燥后得到4.86g(R)-3-(2-萘基)丙氨酸甲酯。
1H-NMR (CDCl3)d1.50(s(br)，2H)；3.03(dd，1H)；3.27(dd，1H)；3.71(s，3H)；3.84(dd，1H)；7.30-7.82(m，7H).
(R)-2-(3-(叔丁氧羰基氨基甲基)苯甲酰氨基)-3-(2-萘基)丙酸甲酯：
Figure C9619218400703
将3-(叔丁氧羰基氨基甲基)苯甲酸(5.32g，21.2mmol)溶解在N，N-二甲基甲酰胺(20ml)中。加入1-乙基-3-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(4.06g，21.2mmol)，搅拌反应混合物20分钟。加入(R)-3-(2-萘基)丙氨酸甲酯(4.85g，21.2mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(20ml)溶液和三乙胺(4.4ml)，继续搅拌18小时。用乙酸乙酯(400mmol)稀释混合物，有机相用水(200ml)、10％硫酸氢钠水溶液(50ml)、5％碳酸氢钠水溶液(100ml)和水(100ml)洗涤。分离各相，干燥(硫酸镁)有机相，真空除去溶剂，得到8.9g(R)-2-(3-(叔丁氧羰基氨基甲基)-3-(2-萘基)丙酸甲酯。
1H-NMR(CDCl3)δ1.44(s，9H)；3.40(t，2H)；3.76(s，3H)4.28(d，2H)；5.00(s(br)，1H)；5.18(q，1H)；6.75(d，1H)；7.20-7.80(m，11H)
(R)-2-(3-(叔丁氧羰基氨基甲基)苯甲酰氨基)-3-(2-萘基)丙酸：
Figure C9619218400711
将(R)-2-(3-叔丁氧羰基氨基甲基)苯甲酰氨基)-3-(2-萘基)丙酸甲酯(8.8g，19.1mmol)溶解在甲醇(100ml)中，加入氢氧化锂(0.55g，22.2mmol)。2小时后，加入二氯甲烷(200ml)、水(200ml)和3M硫酸氢钠(50ml)。分离有机相，用水(100ml)洗涤。干燥(硫酸镁)有机相，真空除去溶剂，得到7.9g(R)-2-(3-(叔丁氧羰基氨基甲基)苯甲酰氨基)-3-(2-萘基)丙酸。
1H-NMR(DMSO)δ1.38，1.39(两个s，9H)；3.30(m，2H)；4.12(d，2H)；4.71(m，1H)；6.10(s(br)，1H)；7.30-7.90(m，11H)；8.75(d，1H)；12.80(s(br)，1H).
(R)-5-(1-(N-甲基-叔丁氧羰基氨基)-2-(2-萘基)乙基)-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯：
将1，3-二环己基碳化二亚胺(1.88g，9.1mmol)溶解在二氯甲烷(25ml)中，0-5℃下加入到(R)-N-叔丁氧羰基-(2-萘基)丙氨酸(3.0g，9.1mmol)的二氯甲烷(50ml)溶液中。加热反应混合物至20℃，在此温度下搅拌30分钟。将2-氨基-2-羟基亚氨基)乙酸乙酯(1.2g，9.1mmol)溶解在吡啶(50ml)中，并加入到反应混合物中。蒸发二氯甲烷后，反应混合物在回流温度下加热18小时。冷却至0℃，过滤。真空浓缩滤液，重溶于乙酸乙酯(25ml)中，用柠檬酸水溶液(10％，3×15ml)和水(3×15ml)洗涤。干燥(硫酸镁)后，真空浓缩溶液，在硅胶(90g)上用乙酸乙酯和庚烷(1∶4)进行快速层析纯化，得到1.59g (R)-5-(1-(N-甲基叔丁氧羰基氨基)-2-(2-萘基)乙基)-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.30-1.40(m，3H)；4.40-4.50(m，2H)；5.70-5.90(m，1H)；7.45-7.90(m，7H).
(R)-5-(1-甲基氨基-2-(2-萘基)乙基)-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯盐酸盐：
Figure C9619218400722
将(R)5-(1-(N-甲基叔丁氧羰基氨基)-2-(2-萘基))乙基-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯(0.77g，1.8mmol)溶解在氯化氢的饱和乙酸乙酯(15ml)溶液中。20℃下5小时后，真空浓缩反应混合物，得到0.72g(R)5-(1-甲基氨基-2-(2-萘基)乙基)-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯盐酸盐。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.32(t，3H)；2.71(s，3H)；4.40(q，2H)；5.45(q，1H)；7.30-7.90(m，7H).
HPLC：Rt＝19.7min(方法a)
5-{1-[2-(3-叔丁氧羰基氨基甲基)苯甲酰氨基)-3-(2-萘基)丙酰基-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯：
Figure C9619218400731
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.51g，2.6mmol)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.36g，2.6mmol)加入到2-(3-叔丁氧羰基氨基甲基)苯甲酰氨基)-3-(2-萘基)丙酸(1.18g，2.6mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(15ml)溶液中。20℃下30分钟后，加入N，N-二甲基甲酰胺(10ml)中的(R)-5-(1-甲基氨基-2-(2-萘基)乙基)-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯盐酸盐(0.69g，1.9mmol)和三乙胺(0.19g，1.9mmol)的混合物。20℃下18小时后，将反应混合物倾入水(175ml)中，用乙酸乙酯(共175ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，20ml)、饱和碳酸氢钠溶液(25ml)和水(3×25ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，在硅胶(80g)上用乙酸乙酯和庚烷(2∶3)洗脱进行快速层析，得到0.8g 5-{1-[2-(3-叔丁氧羰基氨基甲基)苯甲酰氨基)-3-(2-萘基)丙酰-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯两个非对映异构体的1∶1混合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.30-1.42(m，12H)，4.40-4.48(m，2H)；4.90-5.20(m，1H)；6.00-6.10(m，1H).
HPLC：非对映异构体I；Rt＝25.6min(方法a)
      非对映异构体II；Rt＝30.81min(方法a)
将5-{1-[2-(3-(叔丁氧羰基氨基甲基)苯甲酰氨基)-3-(2-萘基)丙酰-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯(0.34g，0.5mmol)悬浮在三氟乙酸和二氯甲烷(1∶1，20ml)的混合物中。20℃下10分钟后，真空浓缩反应混合物，在硅胶(40g)上用二氯甲烷和氨/甲醇10％混合物(85∶15)洗脱进行快速层析纯化，得到0.14g标题化合物两个非对映异构体。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.35-1.50(m，3H)；4.40-4.50(m，2H)；5.00-5.20(m，1H)；5.98-6.13(m，1H).
HPLC：  非对映异构体I；Rt＝26.9min(方法a)
        非对映异构体II；Rt＝37.7min(方法a)
计算值：C39H37N5O5：
C，71.43；H，5.69；N，10.68％；实测值：
C，71.05；H，5.54；N，10.41％.
实施例7
5-{(1R)-1-[(2R)-2-(哌啶-4-羰基氨基)-3-(2-萘基)丙酰-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯：
Figure C9619218400741
按照方法E制备。
5-{(1R)-1-[(2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(2-萘基)丙酰-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯：
Figure C9619218400751
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.54g，2.8mmol)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.38g，2.8mmol)加入到(R)-N-叔丁氧羰基-3-(2-萘基)丙氨酸(0.88g，2.8mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(15ml)溶液中。20℃下30分钟后，加入N，N-二甲基甲酰胺(15ml)中的(R)-5-(1-甲基氨基-2-(2-萘基)乙基)[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯盐酸盐(0.7g，2.0mmol)溶液。 50℃下3小时后，将反应混合物倾入水(180ml)中，用乙酸乙酯(共200ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，25ml)、饱和碳酸氢钠溶液(30ml)和水(3×30ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，得到1.3g 5-{(1R)-1-[(2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(2-萘基)丙酰-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.00-1.40(m，12H)；4.45(q，2H)；5.90-6.20(m，1H).
5-{(1R)-1-[(2R)-2-氨基-3-(2-萘基)丙酰基-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯：
Figure C9619218400761
将5-{(1R)-1-[(2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(2-萘基)丙酰-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯(1.3g，2.0mmol)悬浮在三氟乙酸和二氯甲烷的饱和混合物(1∶1，50ml)中。20℃下10分钟后，真空浓缩反应混合物，在硅胶(100g)上用二氯甲烷和10％氨/乙醇混合物(95∶5)洗脱进行快速层析纯化，得到0.9g 5-{(1R)-1-[(2R)-2-氨基-3-(2-萘基)丙酰-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.35(i，3H)；4.45(q，2H)；5.88-6.20(m，1H).4-((1R)-1-{[(1R)-1-(3-乙氧羰基-[1，2，4]恶二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)-乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯：
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.40g，2.1mmol)和1-羟基苯并三唑单水合物((0.32g，2.1mmol)加入到N-叔丁氧羰基-4-哌啶羧酸(0.48g，2.1mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(10ml)溶液中。20℃下1小时后，加入N，N-二甲基甲酰胺(2ml)中的5-{(1R)-1-[(2R)-2-氨基-3-(2-萘基)丙酰)-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]恶二唑-3-羧酸乙酯(0.73g，1.4mmol)的溶液。20℃下18小时后，将反应混合物倾入水(120ml)中，用乙酸乙酯(共140ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，15ml)、饱和碳酸氢钠溶液(15ml)和水(3×20ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，在硅胶(40g)上用乙酸乙酯和庚烷(1∶1)洗脱进行快速层析，得到0.90g 4-((1R)-1-{[(1R)-1-(3-乙氧羰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲基酰)-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.30-1.45(m，9H)；6.00-6.15(m，1H).
HPLC：Rt＝33.9min(方法a)
将4-((1R)-1{[(1R)-1-(3-乙氧羰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.21g，0.29mmol)溶解在三氟乙酸和二氯甲烷的混合物(1∶1，12ml)中。20℃下10分钟后，真空浓缩反应混合物。在硅胶(40g)上用二氯甲烷和10％氨/乙醇混合物(4∶1)洗脱进行快速层析纯化，得到0.12g标题化合物。
1H-NMR (DMSO-d6)δ1.30-1.40(m，3H)；2.80-2.90(2s，3H)，4.40-4.50(m，2H)；5.98-6.20(m，1H).
HPLC：Rt＝25.0min(方法a)
计算值：C37H39N5O5，H2O：
C，68.19；H，6.34；N，10.75％；实测值：
C，68,23；H，6.25；N，10.60％.
实施例8
哌啶-4-羧酸(1-{[1-(3-氨基甲酰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基乙基)酰胺：
按方法E制备。
4-(1-{[1-(3-氨基甲酰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]甲基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将4-((1R)-1-{[(1R)-1-(3-乙氧羰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.67g，0.91mmol)悬浮在1atm下回流的液氨中。18小时后真空浓缩反应混合物，得到0.58g 4-(1-{[1-(3-氨基甲酰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯两个非对映异构体。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.30-1.40(m，9H)；4.80-4.95(m，1H)；6.00-6.13(m，1H).
HPLC：非对映异构体I：Rt＝28.9min(方法a)
      非对映异构体II：Rt＝29.4min(方法a)
将4-(1-{1-(3-氨基甲酰基[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基)甲基氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)-哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.58g，0.29mmol)的非对映体混合物溶解在三氟乙酸和二氯甲烷的混合物(1∶1，12ml)中。 20℃下5分钟后真空浓缩反应混合物。在硅胶(80g)上用二氯甲烷和10％氨/乙醇的混合物(7∶3)洗脱进行快速层析纯化，得到0.44g标题化合物的两个非对映异构体。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.88-2.92(2s，3H)；4.79-5.00(m，1H)；6.00-6.13(m，1H).
HPLC：非对映异构体I：Rt＝21.2min(方法a)
      非对映异构体II：Rt＝22.1min(方法a)
实施例9：
3-氨基甲基-N-((1R，2E)-4-(羟甲基)-1-((2-萘基)甲基-5-苯基戊-2-烯基)苯甲酰胺：
Figure C9619218400791
按方法A制备。
((1R，2E)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-1-(2-萘基)甲基-5-苯基戊-2-烯基)氨基甲酸叔丁酯
将二异丁基氢化铝(17.9ml 25％甲苯溶液；26.6mmol)置于氮气下用冰浴冷却，再用无水甲醇(1.1ml，26.6mmol)慢慢处理制得二异丙基铝甲醇盐溶液。((1R)-1-苯磺酰基甲基-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.14g；5.0mmol)(用Spaltenstein等《有机化学杂志》，52，3759-66，1987的方法制备)在无水四氢呋喃(250ml)中回流。冷却反应混合物至-70℃，在10分钟内加入正丁基锂(3.92ml；己烷中2.5M，9.8mmol)，搅拌溶液30分钟。将外消旋2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-3-苯基丙醛(2.1g；7.6mmol)(按Jenmalm等《有机化学杂志》，59，1139-48，1994的方法制备)在无水四氢呋喃(10ml)中的溶液在氮气下冷却至-70℃，用前述制备的二异丙基铝甲醇盐溶液(5.4ml，7.6mmol)处理。加完后立即向此砜-阴离子溶液中通过套管加入铝复合物。维持冷却30分钟，加入氯化铵水溶液(40ml，10％)、水(200ml)和二氯甲烷(200ml)。分离各相，干燥(硫酸镁)有机相，真空除去溶剂，得到5.50g油。将该油悬浮在甲醇(150ml)中沉淀出固体，过滤并弃去沉淀。向甲醇溶液中加入磷酸氢二钠(1.7g)，冷却至5℃用钠汞齐(150g，2％)处理。20℃下4小时后真空除去溶剂，残余物在硅胶(80g)上用乙醚/庚烷(1∶6)洗脱进行层析，得到0.85g((1R，2E)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-1-(2-萘基)甲基-5-苯基戊-2-烯基)氨基甲酸叔丁酯异构体混合物，不经进一步纯化用于下步。
1H-NMR(CDCl3)δ-0.02-0.08(四个s，6H)；0.85-0.90(四个s，9H)；1.40-1.45(四个s，9H)；2.40-3.60(m，7H)；4.45(s(br)，2H)；5.20-5.46(m，2H)；7.02-7.82(m，12H).
Rf：0.2乙醚/庚烷(1∶6)
((1R，2E)-4-羟基甲基-1-(2-萘基)甲基-5-苯基戊-2-烯基)氨基甲酸叔丁酯
将((1R，2E)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-1-(2-萘基)甲基-5-苯基戊-2-烯基)氨基甲酸叔丁酯(0.75g，1.38mmol)溶解在2％氟化氢/乙腈(50ml)中，室温下搅拌3小时。真空除去溶剂，残余物在硅胶(80g)上用二氯甲烷/庚烷/甲醇(4/10/1)洗脱进行层析。分离到含有Rf0.1-0.2的化合物的三种流份。真空浓缩主要流份(第二个被洗脱)，得到0.35g((1R，2E)-4-羟基甲基-1-(2-萘基)甲基-5-苯基戊-2-烯基)氨基甲酸叔丁酯非对映异构体混合物。
1H-NMR(CDCl3).d1.38，1.40(两个s，9H)；2.46-3.55(m，7H)；4.35(m，1H)；4.55(s(br)，1H)；5.28-5.43(m，2H)；7.01-7.82(m，12H).(3E，5R)-5-氨基-2-苄基-6-(2-萘基)己-3-烯-1-醇
Figure C9619218400812
将((1R，2E)-4-羟基甲基-1-(2-萘基)甲基-5-苯基戊-2-烯基)氨基甲酸叔丁酯(350mg，0.81mmol)溶解在二氯甲烷中，加入三氟乙酸(5ml)。 90分钟后真空除去溶剂，残余物溶解在二氯甲烷(5ml)中再蒸发。最后将混合物在用4M HCl(2ml)酸化的水中冷冻干燥，得到0.3g(3E，5R)-5-氨基-2-苄基-6-(2-萘基)己-3-烯-1-醇盐酸盐，不经进一步纯化用于下步反应。
1H-NMR (CDCl3)d1.8(s(br)，2H)；2.45-3.70(m，7H)；4.35(m，1H)；5.32-5.60(m，2H)；7.03-7.72(m，12H).
将3-(叔丁氧羰基氨基甲基)苯甲酸(407mg)溶解在二氯甲烷(6ml)，然后与N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(155mg)搅拌10分钟转变为对称酸酐。向此混合物中加入(3E，5R)-5-氨基-2-苄基-6-(2-萘基)己-3-烯-1-醇盐酸盐(149mg)和N，N-二异丙基乙基胺(70μl)的二氯甲烷(3ml)溶液，然后在20℃下反应20小时。将反应混合物浓缩成油，重溶于乙酸乙酯(50ml)中。用5％碳酸氢钠(100ml)和水(2×100ml)连续萃取该溶液。合并有机层，用硫酸钠干燥，真空浓缩成油。将该油溶解在二氯甲烷/三氟乙酸1∶1(6ml)中，搅拌10分钟。用氮气流浓缩该混合物，形成的油重溶于乙酸(1ml)，然后加入水(40ml)和乙腈(12ml)。在填有7μC-18硅胶的25mm×250mm柱上分五次以半制备HPLC纯化标题化合物粗品溶液。该柱用0.05M硫酸铵(用4M硫酸调至pH2.5)中30％乙腈预平衡。40℃下以10ml/min的流速用0.05M硫酸铵(pH2.5，用4M硫酸调)中的30％-45％乙腈梯度洗脱47分钟，收集相应于两主组分的流份，用3倍体积的水稀释，上样于两个串联Sep-PakC18柱(Waters part.#：51910)上，该柱用1％三氟乙酸预平衡。用70％乙腈/0.1％三氟乙酸从Sep-Pak柱上洗脱化合物，用水稀释后冷冻干燥从洗脱液中分离化合物。
用分析型RP-HPLC(保留时间)和离子对吸收质谱(分子量)鉴定所得最终产物。测得异构体I和异构体II的分子量分别为464.1和464.5，这在该方法的试验误差范围(±0.9amu)内与预期结构相符。
用214nm处紫外检测和Vydac 218Tp54 4.6mm×250mm5μC18硅胶柱(“分离组”，Hesperia)进行RP-HPLC，用两种不同的洗脱条件在42℃下以1ml/分洗脱：
A1：用0.1M硫酸铵缓冲液(用4M硫酸调至pH2.5)中5％乙腈预平衡，用相同缓中液中5％-60％乙腈梯度洗脱50分钟。
B1：用5％乙腈/0.1％三氟乙酸/水预平衡，用5％乙腈/0.1％三氟乙酸/水到60％的乙腈/0.1％三氟乙酸/水梯度洗涤50分钟。
洗涤条件A1和B1下的保留时间分别为：异构体I 32.97分和34.52分，异构体II33.67分和33.67分。
实施例10
(3R)哌啶-3-羧酸((1R，2E)-4-羟基甲基-1-(2-萘基)甲基-5-苯基戊-2-烯基)酰胺
按方法A制备。
用与实施例10中相似的方法步骤制备和鉴定(3R)哌啶-3-羧酸((1R，2E)-4-羟基甲基-1-(2-萘基)甲基-5-苯基戊-2-烯基)酰胺。测得异构体I和异构体II的分子量分别为442.6和442.5，这与所预期结构在实验误差范围内(±0.9amu)是一致的。
在洗脱条件A1和B1下的RP-HPLC保留时间分别为：异构体I30.02分和31.30分，异构体II30.56分和31.95分。
实施例11：
(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸{(1R)-1-[N-甲基-N-((1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基}酰胺
按方法E制备。
3-羟基-1，1-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯：
0℃下将氯代甲酸乙酯(1.10ml，11.5mmol)滴加到3-叔丁氧羰基氨基-3-甲基丁酸(2.50g，11.5mmol)和三乙胺(1.92ml，13.8mmol)在THF(10ml)中的溶液中。0℃下搅拌40分钟，滤去形成的沉淀，用THF(20ml)洗涤。将液体立即冷却至0℃，滴加2M硼氢化锂的THF溶液(14.4ml，28.8mmol)。0℃下搅拌2小时，然后在4小时内温热至室温。冷却至0℃，小心加入甲醇(5ml)，加入1N盐酸(100ml)。用乙酸乙酯(2×100ml，3×50ml)萃取该溶液，合并有机层，用饱合碳酸氢钠溶液(100ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，粗产品在硅胶(110g)上用乙酸乙酯/庚烷(1∶2)洗脱，得到1.84g
3-羟基-1，1-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯。
400MHz-1H-NMR(CDCl3)：1.33(s，6H)；1.44(s，9H)；1.88(t，2H)；1.94(br，1H)；3.75(q，2H)；4.98(br，1H).
3-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲基丁醛：
Figure C9619218400843
-78℃下向草酰氯(1.1ml，12.9mmol)的二氯甲烷(15ml)溶液中加入DMSO(1.22ml，17.2mmol)。-78℃下搅拌15分钟，于15分钟内滴加3-羟基-1，1-二甲基丙基氨基甲酸叔丁酯(1.75g，8.6mmol)的二氯甲烷(10ml)溶液。-78℃下再搅拌15分钟，加入三乙胺(6.0ml，43mmol)。-78℃搅拌5分钟后温热至室温。用二氯甲烷(100ml)稀释溶液，用1N盐酸(100ml)萃取。水层用二氯甲烷萃取(50ml)。合并有机层，用饱和碳酸氢钠溶液洗涤，用无水硫酸镁干燥。真空除去溶剂，残余物在硅胶(140g)上用乙酸乙酯/庚烷(1∶3)洗脱进行层析纯化，得到1.10g 3-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲基丁醛。
400MHz-1H-NMR(CDCl3)：d＝1.39(s，6H)；1.45(s，9H)；2.85(d，2H)；4.73(br.1H)；9.80(t，1H).
(2E)-5-(叔丁氧羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸乙酯：
Figure C9619218400851
将膦酰基乙酸三乙酯(19.6ml，9.8mmol)溶解在THF(30ml)中，加入叔丁醇钾(1.10g，9.8mmol)。室温下搅拌40分钟，慢慢加入3-(叔丁氧羰基氨基)-3-甲基丁醛(1.10g，5.5mmol)的THF(6ml)溶液。室温下搅拌75分钟，用乙酸乙酯(100ml)和1N盐酸(100ml)稀释。水层用乙酸乙酯(2×50ml)萃取。合并有机层，用饱合碳酸氢钠溶液(60ml)洗涤，用无水硫酸镁干燥。真空除去溶剂，残余物在硅胶(90g)上用乙酸乙酯/庚烷(1∶4)洗脱进行柱层析纯化，得到1.27g(2E)-5-(叔丁氧羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸乙酯。
200MHz-1H-NMR(CDCl3)：δ＝1.30(s，6H)；1.30(t，3H)；1.46(s，9H)；2.62(d，2H)；4.27(q，2H)；4.42(br，1H)；5.88(d，1H)；6.94(td，1H).
(2E)-5-(叔丁氧羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸：
将(2E)-5-(叔丁氧羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸乙酯(1.233g，4.54mmol)溶解在二噁烷(20ml)中。加入固体氢氧化锂(0.120g，5.00mmol)。加入水(10ml)，室温下搅拌16小时。用水(70ml)稀释该溶液，用叔丁基甲基醚(2×100ml)萃取。水层用1N硫酸氢钠溶液(pH＝1)酸化，用叔丁基甲基醚(3×70ml)萃取。合并这些有机层，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，得到1.05g(2E)-5-(叔丁氧羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸。该粗品用于下步合成中。
400MHz-1H-NMR(DMSO d6)：δ＝1.15(s，6H)；1.35(s，9H)；2.53(d，2H)；5.75(d，1H)；6.57(br，1H)；6.75(td，1H)；12.15(s，1H).
(R)N-甲基-N-[1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酸叔丁酯
-20℃下向(R)N-甲基-N-叔丁氧羰基-3-(2-萘基)丙氨酸(3.0g，9mmol)和N-甲基吗啉(0.91g，9.0mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液中滴加氯代甲酸异丁酯(1.22g，9.0mmol)。-20℃下15分钟后，加入acetamidoxim(1.33g，18mmol)，再加入N-甲基-吗啉(0.91g，9mmol)。-20℃下30分钟后，加热反应混合物至20℃，用N，N-二甲基甲酰胺(40ml)稀释。真空蒸去溶剂，120℃下加热反应混合物16小时。将反应混合物倾入水(120ml)中，用乙酸乙酯(共180ml)萃取。收集有机相，用水(40ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空浓缩溶液，得到3.5g(R)N-甲基-N-[1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酸叔丁酯粗品，不经进一步纯化直接使用。
(R)N-甲基-N-{1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基}胺盐酸盐
Figure C9619218400871
将(R)N-甲基-N-[1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(3.3g，9.0mmol)溶解在氯化氢的饱和乙酸乙酯溶液(75ml)中。20℃下3小时后过滤混合物，得到1.52g(R)N-甲基-N-{1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]胺盐酸盐。
m.p. 198-202℃.
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.35(s，3H)；2.68(s，3H)；3.43(dd，1H)；3.80(dd，1H)；5.29(dd，1H)；7.30(d，1H)；7.45-7.90(m，7H).
HPLC：Rt＝16.3min(方法a)
      计算值：C16H17N3O1，HCl：
C，63.26；H，5.97；N，13.83％；实测值：
C，63,37；H，6.11；N，13.53％.
{(1R)-1-{N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酸叔丁酯
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(1.12g，5.85mmol)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.8g，5.85mmol)加入到(R)N-叔丁氧羰基-3-(2-萘基)丙氨酸(1.84g，5.85mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(45ml)溶液中。20℃下30分钟后，加入N，N-二甲基甲酰胺(15ml)中的(R)N-甲基-N-{1-(3-甲基-[1，2，4]恶二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基}胺盐酸盐(1.27g，4.18mmol)和三乙胺(0.42g，4.18mmol)的溶液。20℃下18小时后，将反应混合倾入水(200ml)中，用乙酸乙酯(共110ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，40ml)、饱和碳酸氢钠溶液(3×40ml)和水(3×40ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，得到2.4g{(1R)-1-{N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酸叔丁酯，不经进一步纯化用于下步反应。
(2R)-2-氨基-N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺，三氟乙酸
Figure C9619218400891
20℃下将{(1R)-1-{N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酸叔丁酯(2.4g，4.2mmol)溶解在三氟乙酸(40ml)和二氯甲烷(40ml)的混合物中。10分钟后真空浓缩反应混合物，与二氯甲烷(80ml)共蒸发。残余物在乙酸乙酯中结晶，得到1.19g(2R)-2-氨基-N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺，三氟乙酸。
mp.190-191℃
1H-NMR(DNSO-d6)δ2.33(s，3H)；2.88(s，3H)；3.00-3.15(m，2H)；3.45(dd，1H)；3.65(dd，1H)；4.71(t，1H)；7.25-7.95(m，14H)
HPLC：Rt＝24.3min(方法a)
      计算值：C29H28N4O2，CF3COOH：
C，64.35；H，5.05；N，9.68％；实测值：
C，64,30；H，5.13；N，9.44％.
[1，1-二甲基-4-((1R)-1-{N-甲基-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)丁-3-烯基]氨基甲酸叔丁酯
Figure C9619218400892
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.28g，1.48mmol)和1-羟基苯并三唑单水合物(0.23g，1.48mmol)加入到(2E)-5-(叔丁氧羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸(0.36g，1.48mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液(5ml)中。20℃下30分钟后，加入N，N-二甲基甲酰胺(7ml)中的(2R)-2-氨基-N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺，三氟乙酸(0.61g，1.06mmol)和三乙胺(0.11g，1.06mmol)的混合物。20℃下18小时后，将反应混合物倾入水(80ml)中，用乙酸乙酯(共40ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，15ml)、饱和碳酸氢钠溶液(3×15ml)和水(3×15ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，得到0.71g [1，1-二甲基-4-((1R)-1-{N-甲基[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)丁-3-烯基]氨基甲酸叔丁酯粗品，不经进一步纯化用于下步反应。
HPLC：Rt＝34.9分钟(方法a)
将[1，1-二甲基-4-((1R)-1-{N-甲基[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)丁-3-烯基]氨基甲酸叔丁酯(0.71g，1.03mmol)溶解在三氟乙酸(10ml)和二氯甲烷(10ml)的混合物中。 20℃下10分钟后真空浓缩反应混合物。在硅胶(80g)上用10％氨/乙醇混合物和二氯甲烷(9∶91)洗脱进行层析，得到0.44g标题化合物。
HPLC：Rt＝23.6min(方法a)
      计算值：C36H39N5O3，0.75H2O：
C，71.68；H，6.77；N，11.61％；实测值：
C，71.76；H，6.73；N，11.12％.
实施例12：
4-氨基-4-甲基戊-2-烯酸[(1R)-1-{N-甲基-N-[(1R)
-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基]酰胺
按方法E制备。
{1，1-二甲基-4-((1R)-1-{N-甲基-{(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基}氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基]烯丙基}氨基甲酸叔丁酯
Figure C9619218400912
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.26g，1.38mmol)和1-羟基苯并三唑单水合物(0.21g，1.38mmol)加入到N-叔丁氧羰基-4-氨基-4-甲基戊-2-烯酸(0.32g，1.38mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(5ml)溶液中。20℃下30分钟后，加入N，N-二甲基甲酰胺(6ml)中的(2R)-2-氨基-N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺，三氟乙酸(0.57g，0.99mmol)和三乙胺(0.10g，0.99mmol)的混合物。20℃下18小时后，将反应混合物倾入水(75ml)中，用乙酸乙酯(共30ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，15ml)、饱和碳酸氢钠溶液(3×15ml)和水(3×15ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，得到0.68g{1，1-二甲基-4-((1R)-1-{N-甲基-{(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基}氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基]烯丙基}氨基甲酸叔丁酯粗品，不经进一步纯化用于下步反应。
HPLC：Rt＝33.4分钟(方法a)
将{1，1-二甲基-4-((1R)-1-{N-甲基-{(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基}氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基]烯丙基}氨基甲酸叔丁酯(0.68g，1.01mmol)溶解在三氟乙酸(10ml)和二氯甲烷(10ml)的混合物中。20℃下10分钟后真空浓缩反应混合物，在硅胶(80g)上用10％氨/乙醇混合物和二氯甲烷(1∶9)洗脱进行层析，得到标题化合物0.48g。
HPLC：Rt＝23.3分(方法a)。
      计算值：C35H37N5O3，0.5H2O：
C，71.90；H，6.55；N，11.98％；实测值：
C，71.82；H，6.55；N，11.71％.
实施例13：
(2E)-4-氨基-4-甲基戊-2-烯酸N-[(1R)-1-{N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基酰胺
按方法E制备。
N-甲基-N-((1R)-1-{N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(1.34g，7.0mmol)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.95g，7.0mmol)加入到(R)N-叔丁氧羰基-3-(2-萘基)丙氨酸(2.31g，7.0mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(50ml)溶液中。20℃下30分钟后，加入N，N-二甲基甲酰胺(10ml)中的(R)-N-甲基-N-{1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基}胺盐酸盐(1.52g，5.0mmol)和三乙胺(0.51g，5.0mmol)的混合物。20℃下18小时后，将反应混合物倾入水(250ml)中，用乙酸乙酯(共130ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，15ml)、饱和碳酸氢钠溶液(3×50ml)和水(3×50ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，在硅胶(110g)上用乙酸乙酯和庚烷(1∶1)洗脱进行层析，得到2.4g N-甲基-N-((1R)-1-{N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
HPLC：Rt-36.5分(方法a)
(2R)-2-甲基氨基-N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺，三氟乙酸
Figure C9619218400941
20℃下将N-甲基-N-((1R)-1-{N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.4g，4.2mmol)溶解在三氟乙酸(40ml)和二氯甲烷(40ml)的混合物中。10分钟后真空浓缩反应混合物，与二氯甲烷(80ml)共蒸发。残余物在乙酸乙酯中结晶，得到1.9g (2R)-2-甲基氨基-N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺，三氟乙酸。
mp 184-188℃.
1H-NMR (DMSO-d6)δ1.53(s，3H)；2.34(s，3H)；2.63(s，3H)；3.05(dd，1H)；3.21(dd，1H)；3.40(dd，1H)；3.55(dd，1H)；4.60(t，1H)；6.35(dd，1H)；7.25(d，1H)；7.40-7.90(m，14H).
HPLC：Rt＝24.9min(方法a)
      计算值：C30H30N4O2，CF3COOH：
C，64.86；H，5.27；N，9.45％；实测值：
C，65,01；H，5.35；N，9.32％.
(2E)-{1，1-二甲基-3-[N-((1R)-1-{N-甲基-N-{(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基}氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基氨基甲酰基]烯丙基}氨基甲酸叔丁酯
Figure C9619218400951
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.31g，1.6mmol)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.22g，1.6mmol)加入到(2E)-4-叔丁氧羰基氨基-4-甲基戊-2-烯酸(0.37g，1.6mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液(5ml)中。20℃下30分钟后，加入N，N-二甲基甲酰胺(5ml)中的(2R)-2-甲基氨基-N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺，三氟乙酸(0.68g，1.2ml)和三乙胺(0.12g，1.2mmol)的混合物。20℃下18小时后，将反应混合物倾入水(80ml)中，用乙酸乙酯(共55ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，15ml)、饱和碳酸氢钠溶液(3×15ml)和水(3×15ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，在硅胶(80g)上用乙酸乙酯和庚烷(7∶3)洗脱进行层析，得到0.75g{(2E)-{1，1-二甲基-3-[N-((1R)-1-{N-甲基-N-{(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基}氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基氨基甲酰基]烯丙基}氨基甲酸叔丁酯。
HPLC：Rt＝33.8分钟(方法a)
将{(2E)-{1，1-二甲基-3-[N-((1R)-1-{N-甲基-{(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基}氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基氨基甲酰基]烯丙基}氨基甲酸叔丁酯(0.62g，1.9mmol)溶解在三氟乙酸(9ml)和二氯甲烷(9ml)的混合物中。20℃下10分钟后真空浓缩反应混合物，在硅胶(80g)上用10％氨/乙醇混合物和二氯甲烷(5∶95)洗脱进行层析，得到0.44g标题化合物。
HPLC：Rt＝26.4min(方法a)
      计算值：C36H39N5O，0.75H2O：
C，71.68；H，6.77；N，11.61％；实测值：
C，71.81；H，6.72；N，11.17％.
实施例14
3-氨基甲基-N-((1R)-1-{N-[(1R)-1-(((二甲基氨基甲酰基)甲氧基)甲基)-2-苯基乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基苯甲酰胺
按方法G制备。
(2R)-2-(甲基氨基)-3-苯基丙-1-醇
按类似于M.J.Mckennon和A.I.Meyers，K.Drauz和M.Schwarm《有机化学杂志》1993(58)，3568-3571的方法制备(2R)-2-(甲基氨基)-3-苯基丙-1-醇。
m.p.69-69℃(文献值：M.J.Mckenon，A.I.Meyers，K.Drauz和M.Schwarm，有机化学杂志，1993(58)，3568-3571：71-74℃；A.Karim，A.Mortreux，F.Petit，G.Buono，G.Peiffer，C.Siv，有机金属化学杂志，1986，317，93：(2S)-2-(甲基氨基)-3-苯基丙-1-醇的值68℃)。
(N-((1R)-1-羟基甲基-2-苯乙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯
将(2R)-2-(甲基氨基)-3-苯基丙-1-醇(6.00g，36.3mmol)溶解在THF(80ml)中，加入1N氢氧化钠溶液(36.3ml，36.3mmol)。室温下慢慢加入二碳酸二叔丁基酯(9.50g，43，6mmol)的THF(60ml)溶液。室温下搅拌16小时，加入水(200ml)和乙酸乙酯(200ml)。分离各相，水相用乙酸乙酯(2×100ml)洗涤。合并有机层，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，产物在硅胶(170g)上用乙酸乙酯/庚烷(1∶1)纯化，得到7.85g(N-((1R)-1-羟基甲基-2-苯乙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯。
1H-NMR (CDCl3)：δ1.32-1.40(br，9H)；2.55-2.95(m，5H)；3.65-3.67(br，2H)；4.10-4.35(br，1H)；7.05-7.35(m，5H).
((2R)-2-((叔丁氧羰基)甲基氨基)-3-苯基丙氧基)乙酸乙酯
将(N-((1R)-1-羟基甲基-2-苯乙基)-N-甲基氨基甲酸(3.98g，15.0mmol)溶解在1，2-二氯乙烷(150ml)中。加热溶液至75-80℃。加入乙酸铑(II)(0.1g，0.4mmol)。在6小时内加入重氮基乙酸乙酯(2.4ml，22.5ml)的二氯甲烷(100ml)溶液。3小时后加入另一部分乙酸铑(II)(0.1g，0.4mmol)。加入全部重氮基乙酸乙酯后，冷却该溶液至室温。通过硅澡土过滤。真空除去溶剂，粗产品在硅胶(100g)上层析，得到1.53g((2R)-2-((叔丁氧羰基)甲基氨基)-3-苯基丙氧基)乙酸乙酯。
1H-NMR(CDCl3)：δ1.28(m，3H)；1.39和1.48(两个.s，共9H)；2.65-2.95(m，9H)；3.58(m，1H)；3.67(br，1H)；3.98-4.27(m，4H)；4.35-4.55(br，1H)；7.10-7.30(m，5H).
((2R)-2-((叔丁氧羰基)甲基氨基)-3-苯基丙氧基)乙酸
将((2R)-2-((叔丁氧羰基)甲基氨基)-3-苯基丙氧基)乙酸乙酯(0.60g，1.71mmol)溶解在二噁烷(5ml)中，加入氢氧化锂(0.05g，2.20mmol)的水(2ml)溶液。室温下搅拌溶液56小时，加入乙酸乙酯(10ml)和水(2ml)。分离各相，水相用乙酸乙酯(10ml)萃取。合并有机相，用1N氢氧化钠(20ml)萃取。合并水相，用1M硫酸氢钠溶液(pH＝2)酸化，用乙酸乙酯(2×20ml)萃取。合并这些乙酸乙酯层，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，得到0.38g((2R)-2-((叔丁氧羰基)甲基氨基)-3-苯基丙氧基)乙酸粗品，用于下步反应。
1H-NMR(DMSO d6)：δ1.15和1.27(两个s，共9H)；2.55-2.70(m，5H)；3.45-3.65(m，2H)；4.00-4.10(m，2H)；4.30-4.50(m，1H)；7.15-7.35(m，5H)；13.60(br，1H).
N，N-二甲基-2-((2R)-2-甲基氨基)-3-苯基丙氧基)乙酰胺
Figure C9619218400982
将((2R)-2-((叔丁氧羰基)甲基氨基)-3-苯基丙氧基)乙酸(0.37g，1.14mmol)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.26g，1.14mmol)溶解在N，N-二甲基甲酰胺(7ml)中。加入N-乙基-N′-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(0.26g，1.37mmol)。搅拌溶液30分钟，加入33％的二甲基胺的乙醇溶液(0.33ml，1.26mmol)。搅拌过夜，加入水(20ml)和乙酸乙酯(15ml)。有机相用1M硫酸氢钠溶液(30ml)和饱和碳酸氢钠溶液(30ml)洗涤。用硫酸镁干燥，真空除去溶剂，粗产品在硅胶(15g)上用乙酸乙酯和二氯甲烷(1∶1)洗脱进行层析纯化。将此产品溶解在二氯甲烷(3ml)中，冷却至0℃，加入三氟乙酸(1ml)。0℃下搅拌此溶液20分钟。真空除去溶剂，残余物溶解在二氯甲烷(10ml)和1N氢氧化钠(10ml)溶液中。分离各相，水相用二氯甲烷(4×10ml)萃取。合并有机层，用无水硫酸镁干燥。真空除去溶剂，得到140mg N，N-二甲基-2-((2R)-2-甲基氨基)-3-苯基丙氧基)乙酰胺粗品用于下步合成。
1H-NMR(CDCl3)：δ2.25(s，1H)；2，45(s，3H)；2.60-3.10(m，3H)；3.94(s，1H)；3.99(s，3H)；3.35-3.55(m，2H)；4.15(s，2H)；7.10-7.40(m，5H).
HPLC：Rt＝12.18min(方法b).
N-((1R)-1-{N-[(1R)-1-(((二甲基氨基甲酰基)甲氧基)甲基)-2-苯基乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲酸叔丁酯
Figure C9619218400991
将N，N-二甲基-2-((2R)-2-甲基氨基)-3-苯基丙氧基)乙酰胺(126mg，0.50mmol)，(2R)-2-((叔丁氧羰基)甲基氨基)-3-(2-萘基)丙酸(250mg，0.75mmol)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(103mg，0.76mmol)溶解在二氯甲烷(6ml)和N，N-二甲基甲酰胺(5ml)中，然后在0℃下与N-乙基-N′-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(146mg)搅拌30分钟。加入二异丙基乙基胺(87μl)，0℃下继续搅拌1小时。然后用氮气流从混合物中蒸去二氯甲烷，加入乙酸乙酯(25ml)。该混合物连续用5％碳酸氢钠水溶液(2×25ml)、5％硫酸氢钾水溶液(2×25ml)和水(25ml)洗涤，有机相用硫酸镁干燥，真空浓缩，得到265mg N-((1R)-1-{N-[(1R)-1-(((二甲基氨基甲酰基)甲氧基)甲基)-2-苯基乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲酸叔丁酯粗品。
3-氨基甲基-N-((1R)-1-{N-[(1R)-1-(((二甲基氨基甲酰基)甲氧基)甲基)-2-苯基乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基苯甲酰胺
将N-((1R)-1-{N-[(1R)-1-(((二甲基氨基甲酰基)甲氧基)甲基)-2-苯基乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲酸叔丁酯粗品(132mg，0.23mmol)的一半溶解在二氯甲烷和三氟乙酸(1∶1，2ml)的混合物中，搅拌10分钟。用氮气流浓缩混合物，生成的油重溶于1ml 1N盐酸中，用水稀释至50ml，冷冻干燥。将此冻干品溶解在二氯甲烷(5ml)中，加入二异丙基乙基胺(171μl)。向此混合物中加入3-叔丁氧羰基氨基甲基苯甲酸(503mg，2.0mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液，在临加入前该溶液与N-乙基-N′-(3-二甲氨基丙基)-碳化二亚胺盐酸盐(191.6mg，1.0mmol)搅拌15分钟转变为对称酸酐。将反应混合物浓缩成油，重溶在乙酸乙酯(25ml)中。该混合物相继用5％碳酸氢钠水溶液(50ml)、5％硫酸氢钾水溶液(50ml)和水(50ml)萃取，有机相用硫酸钠干燥，用氮气流浓缩至干。将产物溶解在二氯甲烷和三氟乙酸1∶1混合物(4ml)中。10分钟后，用氮气流浓缩混合物，形成的油重溶于5ml 70％乙腈/0.1％三氟乙酸中，用水稀释至50ml。该标题化合物粗产品在25mm×250mm填有7μC-18硅胶柱上分四次进行半制备性HPLC纯化，用0.05M硫酸铵(用4M硫酸调至pH2.5)中29％乙腈预平衡。40℃下以10ml/min的流速用0.05M硫酸铵(pH2.5，用4M硫酸调)中的29％-39％乙腈梯度洗脱47分钟，收集含肽流份，用3倍体积的水稀释，上样于一Sep-PakC18柱(Wa-ters Part，：#51910)上，该柱用0.1％三氟乙酸预平衡。用70％乙腈/0.1％三氟乙酸从Sep-Pak柱上洗脱肽，用水稀释后冷冻干燥从洗脱液中分离肽。
用分析型PP-HPLC(保留时间)和离子对吸收质谱(分子量)鉴定所得最终产物。发现分子量(MH+：592.9amu)在该方法的试验误差范围内与预期结构相符(理论值，MH+：593.4amu)。
用214nm处紫外检测和Vydac 218Tp54 4.6mm×250mm 5μC-18硅胶柱(“分离组”，Hesperia)进行RP-HPLC，用两种不同的洗脱条件在42℃下以1ml/分洗脱：
A1：用0.1M硫酸铵缓冲液(用4M硫酸调至pH2.5)中5％乙腈预平衡，用相同缓冲液中5％-60％乙腈梯度洗脱50分钟。
B1：用5％乙腈/0.1％三氟乙酸/水预平衡，用5％乙腈/0.1％三氟乙酸/水到60％的乙腈/0.1％三氟乙酸/水梯度洗涤50分钟。
洗涤条件A1和B1下的保留时间分别为：30.92分和35.15分。
实施例15
5-((1R)-1-(((2R)-2-(((2E)-4-氨基-4-甲基戊-2-烯酰基)甲基氨基)-3-(2-萘基)丙酰基)甲基氨基-2-苯乙基)-[1，3，4]噁二唑-2-羧酸酰胺
(2R)-2-((叔丁氧羰基)甲基氨基)-3-苯基丙酸乙酯
Figure C9619218401022
将(2R)-2-((叔丁氧羰基)甲基氨基)-3-苯基丙酸(4.0g，14.27mmol)溶解在二氯甲烷(5ml)和乙醇(0.95ml，16.27mmol)中。加入4-二甲氨基吡啶(0.19g，1.57mmol)。冷却至0℃，加入N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(2.98g，15.55mmol)。0℃下搅拌反应混合物2小时，室温下16小时。真空除去溶剂，残余物溶解在乙酸乙酯/水(30ml/30ml)中。有机相用碳酸氢钠饱和溶液和水洗涤，用硫酸镁干燥。粗产物在硅胶(180g)上用乙酸乙酯/庚烷1∶2进行快速层析纯化，得到1.95g (2R)-2-((叔丁氧羰基)甲基氨基)-3-苯基丙酸乙酯。
1H-NMR (CDCl3)：δ1.15-1.50(m，12H)；2.71(m，3H)；3.00(m，1H)；3.80(m，1H)；4.20(br q，2H)；4.55和4.90(两个br dd，共1H)；7.10-7.40(m，5H).
((1R)-1-肼基羰基-2-苯乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯
Figure C9619218401031
将(2R)-2((叔丁氧羰基)甲基氨基)-3-苯基丙酸乙酯(1.9g，6.16mmol)溶解在无水乙醇(15ml)中，滴加水合肼(3.0ml，61.6mmol)。室温下搅拌过夜。真空除去溶剂，残余物溶解在乙酸乙酯(40ml)中，用水(40ml)洗。有机相用硫酸镁干燥，真空除去溶剂，得到1.40g((1R)-1-肼基羰基-2-苯乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯粗品用于下步合成。
1H-NMR(CDCl3)：δ1.20-1.50(m，9H)；2.76(s，3H)；3.00(m，1H)；3.35(m，1H)；3.85(br，2H)；4.75和4.85(两个m，共1H)；7.10-7.40(m，5H)；7.45(br，1H).
1-((2R)-2-((叔丁氧羰基)甲基氨基)-3-苯基丙酰基)-2-乙氧羰基甲酰基肼
将((1R)-1-肼基羰基-2-苯乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯(1.4g，4.76mmol)溶解在二氯甲烷(40ml)中，加入三乙胺(0.8ml，5.71mmol)，冷却溶液至-15℃。滴加乙基草酰氯(0.59ml，5.24mmol)。-15℃下搅拌该溶液15分钟，温热至室温，用水(2×20ml)和5％柠檬酸(30ml)萃取，用碳酸氢钠饱和溶液洗涤。用硫酸镁干燥有机层，真空除去溶剂，粗产物在硅胶(140g)上用乙酸乙酯/二氯甲烷1∶3进行快速层析纯化，得到1.40g 1-((2R)-2-((叔丁氧羰基)甲基氨基)-3-苯基丙酰基)-2-乙氧羰基甲酰基肼。
1H-NMR (CDCl3)：δ1.30-1.50(m，12H)；2.80(br，3H)；3.05(m，1H)；3.35(m，1H)；4.37(br m，2H)；4.82和4.95(br和brt，共1H)；7.05-7.35(m，5H)；8.60，8.95，9.15，9.45(均为br，共2H).
5-((1R)-1-((叔丁氧羰基)甲基氨基)-2-苯基乙基)-[1，3，4]噁二唑-2-羧酸乙酯
将1-((2R)-2-((叔丁氧羰基)甲基氨基)-3-苯基丙酰基)-2-乙氧羰基甲酰基肼(1.4g，3.55mmol)溶解在醚(25ml)和THF(10ml)中。加入吡啶(1.44ml，17.75mmol)，冷却溶液至0℃。滴加亚硫酰氯(0.3ml，3.90mmol)，0℃下搅拌反应混合物2小时。过滤沉淀，加热真空除去溶剂，残余物溶解在甲苯(25ml)中，加热回流2小时。真空除去溶剂，粗产品在硅胶(70g)上用乙酸乙酯/二氯甲烷1∶2进行快速层析纯化，得到721mg 5-((1R)-1-((叔丁氧羰基)甲基氨基)-2-苯基乙基)-[1，3，4]噁二唑-2-羧酸乙酯。
1H-NMR(CDCl3)：δ1.35(br d，9H)；1.47(t，3H)；2.70(br，3H)；3.30(br，1H)；3.50(br，1H)；4.52(br，2H)；5.55和5.88(两个br，共1H)；7.15-7.40(m，5H).
((1R)-1-(5-氨基甲酰基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-2-苯乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯
将5-((1R)-1-((叔丁氧羰基)甲基氨基)-2-苯基乙基)-[1，3，4]噁二唑-2-羧酸乙酯(600mg，1.6mmol)溶解在THF(4ml)中，加入到回流氨中。搅拌该溶液3小时，用氮流除去氨。残余物溶解在乙酸乙酯/10％硫酸氢钠溶液(20ml/20ml)中。分离各相，有机相用饱合碳酸氢钠溶液洗涤，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，粗产品在硅胶(40g)上用乙酸乙酯/庚烷2∶1快速层析纯化，得到383mg((1R)-1-(5-氨基甲酰基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-2-苯乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯。
1H-NMR(CDCl3)：δ1.30(br，9H)；2.75(brd，3H)；3.30(dd，1H)；3.50(br，1H)；5.55和5.85(两个br，共1H)；6.27(br，1H)；7.10(br，1H)；7.20-7.40(m，5H).
5-((1R)-1-甲基氨基)-2-苯基乙基)-[1，3，4]噁二唑-2-羧酸酰胺
Figure C9619218401051
将((1R)-1-(5-氨基甲酰基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-2-苯乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯(350mg，1.01mmol)溶解在二氯甲烷(6ml)中，冷却至0℃。滴加三氟乙酸(2ml)。搅拌30分钟，真空除去溶剂。残余物溶解在二氯甲烷(6ml)中，真空除去溶剂。再将残余物溶解在二氯甲烷(6ml)中，真空除去溶剂。将残余物溶解在二氯甲烷(10ml)中，用水洗涤。水层冷冻干燥，得到247mg 5-((1R)-1-甲基氨基)-2-苯基乙基)-[1，3，4]噁二唑-2-羧酸酰胺粗品，用于下步合成中。
1H-NMR(DMSO d6)：δ2.65(s，3H)；3.35(dd，1H)；3.62(dd，1H)；5.20(dd，1H)；7.10-7.40(m，5H)；8.35(s，1H)；8.68(s，1H).
((1R)-1-(((1R)-1-(5-氨基甲酰基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-2-苯乙基)甲基氨基甲酰基)-2-(2-萘基乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯
Figure C9619218401061
将5-((1R)-1-甲基氨基)-2-苯基乙基)-[1，3，4]噁二唑-2-羧酸酰胺(240mg，0.98mmol)，(R)-2-(叔丁氧羰基)甲基氨基)-3-(2-萘基)丙酸(320mg，0.98mmol)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(133mg，0.98mmol)溶解在二氯甲烷(8ml)和DMF(4ml)中。冷却至0℃，加入N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(230g，1.18mmol)。10分钟后加入三乙胺(0.35ml，2.46mmol)。0℃搅拌1小时，然后室温搅拌16小时。用乙酸乙酯(30ml)和水(20ml)稀释溶液。分离各相，水相用乙酸乙酯(20ml)萃取。合并有机层，用饱合碳酸氢钠溶液(30ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，粗产物在硅胶(50g)上用乙酸乙酯快速层析纯化，得到301mg((1R)-1-(((1R)-1-(5-氨基甲酰基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-2-苯乙基)甲基氨基甲酰基)-2-(2-萘基乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯。
1H-NMR(CDCl3)：δ0.84，0.95，1.07，1.25(均为s，共9H)；2.05，2.15，2.42，2.75，2.76，2.77，2.87，3.98(均为s，共6H)；6.90-7.90(m，12H).
5-((1R)-1-(甲基((2R)-2-甲基氨基-3-(2-萘基)丙酰基)氨基)-2-苯基乙基)-[1，3，4]噁二唑-2-羧酸酰胺：
将((1R)-1-(((1R)-1-(5-氨基甲酰基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-2-苯乙基)甲基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基)甲基氨基甲酸叔丁酯(300mg，0.55mmol)溶解在二氯甲烷(3ml)中，冷却至0℃。滴加三氟乙酸(3ml)，0℃下搅拌5分钟，真空除去溶剂。残余物溶解在乙酸乙酯(5ml)中，真空除去溶剂。残余物溶解在乙酸乙酯(5ml)中，真空除去溶剂。将残余物溶解在3M氯化氢/乙酸乙酯(5ml)中，真空除去溶剂，残余物溶解在3M氯化氢/乙酸乙酯(5ml)中，真空除去溶剂，得到238mg 5-((1R)-1-甲基((2R)-2-甲基氨基-3-(2-萘基)丙酰基)氨基)-2-苯基乙基)-[1，3，4]噁二唑-2-羧酸酰胺粗品，用于下步合成中。
1H-NMR(CDCl3)：δ2.40(s，3H)；2.55-4.40(m，9H)；7.10-7.90(m，9H).
((E)-3-(((1R)-1-(((1R)-1-(5-氨基甲酰基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-2-苯乙基)甲基氨基甲酰基)-2-(2-萘基乙基)甲基氨基甲酰基)-1，1-二甲基烯丙基)氨基甲酸叔丁酯
将(2E)-4-叔丁氧羰基氨基-4-甲基戊-2-烯酸(143mg，0.62mmol)溶解在二氯甲烷(4ml)中，加入1-羟基-7-氮杂苯并三唑(85mg，0.62mmol)，再加入N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(119mg，0.62mmol)。室温下搅拌15分钟，加入5-((1R)-1-(甲基((2R)-2-甲基氨基-3-(2-萘基)丙酰基)氨基)-2-苯基乙基)-[1，3，4]噁二唑-2-羧酸酰胺(230mg，0.52mmol)。搅拌溶液5分钟，向反应混合物中加入乙基二异丙基胺(0.11ml，0.62mmol)。室温下搅拌16小时，用乙酸乙酯(20ml)稀释，用水(20ml)萃取。分离各相，水相用乙酸乙酯(2×10ml)萃取。合并有机相，用碳酸氢钠饱和溶液洗涤，用硫酸镁干燥。粗品在硅胶(40g)上用二氯甲烷/乙酸乙酯1∶1进行快速层析，得到126mg((E)-3-(((1R)-1-(((1R)-1-(5-氨基甲酰基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-2-苯乙基)甲基氨基甲酰基)-2-(2-萘基乙基)甲基氨基甲酰基)-1，1-二甲基烯丙基)氨基甲酸叔丁酯。
1H-NMR(CDCl3)：δ1.1-1.5(m，15H)；2.6-3.7(m，12H).HPLC(方法b)：Rt＝44.95min.
PDMS：668.8([M]+)
将((E)-3-(((1R)-1-(((1R)-1-(5-氨基甲酰基-[1，3，4]噁二唑-2-基)-2-苯乙基)甲基氨基甲酰基)-2-(2-萘基乙基)甲基氨基甲酰基)-1，1-二甲基烯丙基)氨基甲酸叔丁酯(120mg，0.18mmol)溶解在二氯甲烷(3ml)中。冷却至0℃，，滴加三氟乙酸(3ml)。0℃下搅拌反应混合物5分钟。加热下真空除去溶剂，残余物溶解在二氯甲烷(5ml)中，真空除去溶剂。重复两次该步骤。残余物溶解在水(5ml)中，加入1N盐酸(1ml，1mmol)。真空除去溶剂，残余物溶于3M氯化氢/乙酸乙酯(3ml)中，真空除去溶剂。重复这一步骤。粗产物在25mm×250mm5μC18硅胶柱上用0.1M硫酸铵缓冲液(用4M硫酸调至pH2.5)中28％到38％乙腈梯度进行HPLC层析纯化，得到64mg标题化合物。
HPLC(方法b)：Rt＝30.133分
PDMS：569.6([M+H]+)
实施例16
哌啶-4-羧酸N-甲基-N-{1-(甲基-[1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基}酰胺
按方法E制备。
N-甲基-N-{(1R)-1-(N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基}氨基甲酸叔丁酯
Figure C9619218401091
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(1.34g，7.0mmol)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.95g，7.0mmol)加入到N-甲基-N-叔丁氧羰基-3-(2-萘基)丙氨酸(2.31g，7.0mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液(50ml)中。20℃下30分钟后，加入N，N-二甲基甲酰胺(10ml)中的(R)-N-甲基-N-{1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基}胺盐酸盐(1.52g，5.0mmol)和三乙胺(0.51g，5.0mmol)的混合物。20℃下18小时后，将反应混合物倾入水(250ml)中，用乙酸乙酯(共130ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，50ml)、饱和碳酸氢钠溶液(50ml)和水(3×50ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，在硅胶(110g)上用乙酸乙酯和庚烷(1∶1)洗脱进行层析，得到2.4g N-甲基-N-{(1R)-1-(N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基}氨基甲酸叔丁酯，泡沫状。
HPLC：Rt＝36.5分(方法a)
(2R)-2-甲基氨基-N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺，三氟乙酸
20℃下将N-甲基-N-{(1R)-1-(N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基}氨基甲酸叔丁酯(2.4g，4.2mmol)溶解在三氟乙酸(40ml)和二氯甲烷(40ml)的混合物中。10分钟后真空浓缩反应混合物，与庚烷(80ml)和二氯甲烷(80ml)共蒸发。残余物在乙酸乙酯中结晶，得到1.12g (2R)-2-甲基氨基-N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺，三氟乙酸。
mp 184-188℃.
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.52(s，3H)；2.32(s，3H)；2.68(s，3H)；3.03(dd，1H)；3.22(dd，1H)；3.55(dd，1H)；4.62(t，1H)；6.35(dd，1H)；7.25-7.95(m，14H).
HPLC：Rt＝24.9min(方法a)
      计算值：C30H30N4O2，CF3COOH，0.25EtOAc：
C，64.49；H，5.41；N，9.12％；实测值：
C，65.01；H，5.35；N，9.32％.
4-{N-甲基-N-{(1R)-1-(N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酰基}哌啶-1-羧酸叔丁酯
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.37g，1.91mmol)和1-羟基苯并三唑单水合物(0.26g，1.91mmol)加入到N-叔丁氧羰基-4-哌啶酸(0.44g，1.91mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(5ml)溶液中。20℃下30分钟后，加入N，N-二甲基甲酰胺(10ml)中的(2R)-2-甲基氨基-N-甲基-N-[(1 R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺，三氟乙酸(0.81g，1.37mmol)和三乙胺(0.19g，1.37mmol)的混合物。20℃下18小时后，将反应混合物倾入水(100ml)中，用乙酸乙酯(共70ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，20ml)、饱和碳酸氢钠溶液(20ml)和水(3×20ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，残余物在硅胶(80g)上用乙酸乙酯和庚烷(3∶2)洗脱进行层析，得到0.88g4-{N-甲基-N-{(1R)-1-[N-甲基-N-((1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酰基}哌啶-1-羧酸叔丁酯。
HPLC：Rt＝36.1分(方法a)
将4-{N-甲基-N-{(1R)-1-[N-甲基-N-((1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基)氯基甲酰基}哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.88g，1.28mmol)溶解在三氟乙酸(12ml)和二氯甲烷(12ml)的混合物中。20℃下10分钟后真空浓缩混合物。该化合物在硅胶(75g)上用10％氨/乙醇混合物和二氯甲烷(1∶9)洗脱进行层析，得到0.56g标题化合物的两个异构体。
HPLC：非对映异构体I：Rt＝25.24min(方法a)
      非对映异构体II：Rt＝25.26min(方法a)
      计算值：C30H39N5O3，H2O：
C，71.15；H，6.80；N，11.52％；实测值：
C，71.27；H，6.68；N，11.28％.
实施例17
哌啶-4-羧酸N-{1-(N-[甲基-N-[1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基}酰胺
Figure C9619218401121
按方法E制备。
4-((1R)-1-{N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.42g，2.2mmol)和1-羟基苯并三唑单水合物(0.34g，2.2mmol)加入N-叔丁氧羰基-4-哌啶羧酸(0.50g，2.2mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液(5ml)中。20℃下30分钟后，加入N，N-二甲基甲酰胺(10ml)中的(2R)-2-氨基-N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺，三氟乙酸(0.9g，1.54mmol)和三乙胺(0.16g，1.54mmol)的混合物。20℃下18小时后，将反应混合物倾入水(85ml)中，用乙酸乙酯(共90ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，15ml)、饱合碳酸氢钠溶液(15ml)和水(3×15ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，残余物在硅胶(110g)上用乙酸乙酯和庚烷(1∶1)洗脱进行层析，得到0.50g 4-((1R)-1-{N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.40(s，3H)；2.95(s，3H)；3.45(dd，1H)；3.60(dd，1H)；4.85(m，1H)；6.08(m，1H)；7.10(d，1H)；7.40-7.90(m，13H).
HPLC：Rt＝34.0分(方法a)
将4-((1R)-1-{N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基}氨基甲酰基哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.50g，0.74mmol)溶解在三氟乙酸(10ml)和二氯甲烷(10ml)的混合物中。20℃下10分钟后真空浓缩反应混合物，残余物在硅胶(38g)上用10％氨/乙醇混合物和二氯甲烷(3∶7)洗脱进行层析，得到0.26g标题化合物。
1H-NMR(DMSO-d6)δ3.45(dd，1H)；3.61(dd，1H)；4.7 2(m，1H)；6.10(dd，1H)；7.20(d，1H)；7.40-8.00(m，14H).
HPLC：Rt＝24.8min(方法a)
      计算值：C35H37N5O3，0.5H2O：
C，71.90；H，6.55；N，11.98％；实测值：
C，71.77；H，6.52；N，12.09％.
实施例18：
5-{1-[N-(2-(哌啶-4-羰基氨基)-3-(2-萘基)丙酰基)-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸(2-丙基)酯
(R)5-(1-甲基氨基-2-(2-萘基)乙基)-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸(2-丙基)酯
Figure C9619218401142
将(R)5-(1-甲基氨基-2-(2-萘基)乙基)-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯盐酸盐(1.64g，4.5mmol)悬浮在2-丙醇(35ml)中。加入钛酸四异丙酯(1.3g，4.5mmol)后，回流反应混合物18小时。加入盐酸(1N，30ml)，反应混合物用乙酸乙酯(150ml)萃取。有机相用碳酸氢钠饱和水溶液(50ml)和水(3×50ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩该溶液，得到1.3g(R)5-(1-甲基氨基-2-(2-萘基)乙基)-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸(2-丙基)酯，不经进一步纯化用于下步反应。
1H-NMR(DMSO-d6)δ1.31(d，6H)；2.21(d，3H)；3.3(m，2H)；4.40(t，1H)；5.72(m，1H)；7.35-7.95(m，7H).
HPLC：Rt＝20.5min(方法a)
5-{(1R)-1-[N-((2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(2-萘基)丙酰基)-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸(2-丙基)酯
Figure C9619218401151
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(2.15g，6.8mmol)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(0.93g，6.8mmol)加入到(R)N-叔丁氧羰基-3-(2-萘基)丙氨酸(2.15g，6.8mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(50ml)溶液中。20℃下30分钟后，加入N，N-二甲基甲酰胺(15ml)中的(R)5-(1-甲基氨基-2-(2-萘基)乙基)-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸(2-丙基)酯(1.65g，4.9mmol)溶液。20℃下18小时后，将反应混合物倾入水(500ml)中，用乙酸乙酯(共450ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，75ml)、饱和碳酸氢钠溶液(75ml)和水(3×75ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，残余物在硅胶(160g)上用乙酸乙酯和庚烷(1∶2)洗脱进行层析，得到2.4g 5-{(1R)-1-[N-((2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(2-萘基)丙酰基)-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸(2-丙基)酯。
HPLC：Rt＝36.5分(方法a)
5-{(1R)-1-[N-((2R)-2-氨基-3-(2-萘基)丙酰基)-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸(2-丙基)酯，三氟乙酸
将5-{(1R)-1-[N-((2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(2-萘基)丙酰基)-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸(2-丙基)酯(2.1g，3.3mmol)悬浮在三氟乙酸和二氯甲烷的饱合混合物(1∶1，60ml)中。20℃下10分钟后，真空浓缩反应混合物，得到2.2g 5-{(1R)-1-[N-(2R)-2-氨基-3-(2-萘基)丙酰基)-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸(2-丙基)酯，三氟乙酸盐，不经进一步纯化用于下步合成。
4-((1R)-1-{N-[(1R)-1-(3-(2-丙氧基)羰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
Figure C9619218401171
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(1.22g，6.35mmol)和1-羟基苯并三唑单水合物(0.97g，6.35mmol)加入到N-叔丁氧羰基氨基-4-哌啶竣酸(1.46g，6.35mmol)的N，N-二甲基甲酰胺(20ml)溶液中。20℃下30分钟后，加入N，N-二甲基甲酰胺(20ml)中的5-{(1R)-1-[N-((2R)-2-氨基-3-(2-萘基)丙酰基)-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸(2-丙基)酯(2.95g，4.53mmol)和三乙胺(0.47g，4.53mmol)的溶液。20℃下18小时后，将反应混合物倾入水(240ml)中，用乙酸乙酯(共240ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，35ml)、饱和碳酸氢钠溶液(35ml)和水(3×35ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，在硅胶(110g)上用乙酸乙酯和庚烷(1∶1)洗脱进动快速层析，得到2.6g 4-((1R)-1-{N-[(1R)-1-(3-(2-丙氧基)羰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
1H-NMR(DMSOd6)δ
HPLC：Rt＝35.9分(方法a)
将4-((1R)-1-{N-[(1R)-1-(3-(2-丙氧基)羰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(1.0g，1.34mmol)溶解在三氟乙酸和二氯甲烷的混合物(1∶1，25ml)中。20℃下10分钟后真空浓缩反应混合物。残余物在硅胶(75g)上用二氯甲烷和10％氨/乙醇的混合物(9∶1)洗涤进行快速层析纯化，得到0.77g标题化合物。
1H-NMR(DMSO d6)δ
实施例19：
5-{1-[N-(2-哌啶-4-羰基氨基)-3-(2-萘基)丙酰基)-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸，三氟乙酸
按方法E制备。
4-(1-{[1-(3-羧基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将4-((1R)-1-{[(1R)-1-(3-乙氧羰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.79g，1.06mmol)溶解在二噁烷(5.5ml)中，加入水(3ml)和固体氢氧化锂(0.03g)。20℃下18小时后，用水(15ml)稀释反应混合物，用叔丁基甲基醚(2×10ml)萃取。水层用1N磷酸氢钠水溶液(2.5ml)酸化，用叔丁基甲基醚(3×40ml)萃取。合并有机相，用硫酸镁干燥，真空浓缩。残余物在硅胶(60g)上用二氯甲烷和10％氨/乙醇混合物(4∶1)洗脱进行层析，得到0.41g 4-(1-{[1-(3-羧基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
1H-NMR(DMSO-d6)δ
将4-(1-{[1-(3-羧基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.41g，0.58mmol)溶解在三氟乙酸和二氯甲烷的混合物(1∶1，12ml)中。20℃下10分钟后，真空浓缩反应混合物，得到0.4g标题化合物粗产物。
PDMS：(理论值：MH+＝606.7；实测值：MH+＝605.9)
实施例20：
哌啶-4-羧酸(1-{N-[1-(3-甲基氨基羰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基)酰胺
Figure C9619218401191
按方法E制备。
4-(1-{N-[1-(3-甲基氨基羰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将4-((1R)-1-{[(1R)-1-(3-丙氧羰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.80g，1.07mmol)溶解在33％甲基胺/乙醇中，在一密闭反应器中90℃下搅拌18小时。真空浓缩反应混合物，残余物在硅胶(60g)上用乙酸乙酯和庚烷(7∶3)洗脱进行层析，得到0.15g 4-(1-{N-[1-(3-甲基氨基甲酰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
HPLC：Rt＝31.5分(方法a)
将4-(1-{N-[1-(3-甲基氨基羰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.15g，0.21mmol)溶解在三氟乙酸和二氯甲烷的混合物(1∶1，4ml)中。20℃下5分钟后真空浓缩反应混合物。在硅胶(40g)上用二氯甲烷和10％氨/乙醇的混合物(9∶1)洗脱，进行快速层析纯化，得到0.08g标题化合物。
HPLC：Rt＝20.9分钟(方法a)。
实施例21：
(2E)-5-氨基-甲基己-2-烯酸{1-[N-(1-(3-苄基氨基羰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯基乙基)-N-甲基氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基}酰胺
Figure C9619218401211
(R)5-(1-甲基氨基-2-苯基乙基]-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸苄酰胺
将(R)5-(1-甲基氨基-2-苯基乙基)-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯(3.3g，9.0mmol)溶解在乙醇(30ml)中，加入苄胺(3ml)，20℃下搅拌反应混合物18小时。真空浓缩反应混合物，残余物在乙醇中结晶，得到2.07g (R)5-(1-甲基氨基-2-苯基乙基]-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸苄酰胺。
m.p.128-128.5℃
1H-NMR (DMSO-d6)δ2.22(s，3H)；3.08(dd，1H)；3.18(dd，1H)；4.26(t，1H)；4.45(d，2H)；7.10-7.45(m，1H)；9.50(t，1H).
HPLC：Rt＝17.3min(方法a)
      计算值：C19H20N4O2，0.25EtOH：
C，67.32；H，6.23；N，16.10％；实测值：
C，67.35；H，6.03；N，16.25％.
{(1R)-1-{N-甲基-N-[(1R)-1-(3-苄基氨基甲酰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯基乙基]氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基}氨基甲酸叔丁酯
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(1.64g，8.57mmol)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(1.17g，8.57mmmol)加入到(R)-N-叔丁氧羰基-3-(2-萘基)丙氨酸(2.70g，8.57mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液(40ml)中。20℃下20分钟后，加入N，N-二甲基甲酰胺(40ml)中的(R)5-(1-甲基氨基-2-苯基乙基]-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸苄酰胺(2.06g，6.12mmol)溶液，20℃下18小时后，将反应混合物倾入水(250ml)中，用乙酸乙酯(共200ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，50ml)、饱和碳酸氢钠溶液(3×50ml)和水(3×50ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，在硅胶(150g)上用乙酸乙酯和庚烷(1∶1)洗脱进行层析，得到3.9g {(1R)-1-{N-甲基-N-[(1R)-1-(3-苄基氨基甲酰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯基乙基]氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基}氨基甲酸叔丁酯。
2-氨基-N-甲基-N-[1-(3-苄基氨基甲酰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯基乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺，三氟乙酸
将{(1R)-1-{N-甲基-N-[(1R)-1-(3-苄基氨基甲酰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯基乙基]氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基}氨基甲酸叔丁酯(3.9g，6.15mmol)溶解在三氟乙酸(40ml)和二氯甲烷(40ml)的混合物中。20℃下10分钟后真空浓缩反应混合物，与庚烷然后与二氯甲烷共蒸发，得到4g 2-氨基-N-甲基-N-[1-(3-苄基氨基甲酰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯基乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺，三氟乙酸盐粗品的两种异构体，不经进一步纯化用于下步反应。
1H-NMR(DMSO-d6)δ2.88(s)；3.21(s)；3.32(m)；3.55(m)；4.52(m)；5.95(m)；6.21(m).
HPLC：异构体I：Rt＝24.2min(方法a)
      异构体II：Rt＝25.4min(方法a)
[(2E)-1，1-二甲基-4-(1-{N-甲基-N-[1-(3-苄基氨基羰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯基乙基]氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)丁-3-烯基]氨基甲酸叔丁酯
将N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.40g，2.1mmol)和1-羟基苯并三唑单水合物(0.32g，2.1mmol)加入到(2E)-5-(叔丁氧羰基氨基)-5-甲基己-2-烯酸(0.51g，2.1mmol)的N，N-二甲基甲酰胺溶液(5ml)中。20℃下30分钟后，加入N，N-二甲基甲酰胺(12ml)中的2-氨基-N-甲基-N-[1-(3-苄基氨基甲酰基-[1，2，4]恶二唑-5-基)-2-苯基乙基]-3-(2-萘基)丙酰胺，三氟乙酸(1.0g，1.5mmol)和三乙胺(0.15g，1.5mmol)的混合物。20℃下18小时后，将反应混合物倾入水(100ml)中，用乙酸乙酯(共65ml)萃取几次。合并有机相，用柠檬酸(10％，20ml)、饱合碳酸氢钠溶液(20ml)和水(3×20ml)洗涤。用硫酸镁干燥后，真空浓缩溶液，残余物在硅胶(85g)上用乙酸乙酯和庚烷(1∶1)洗脱进行快速层析，得到0.77g[(2E)-1，1-二甲基-4-(1-{N-甲基-N-[1-(3-苄基氨基羰基-[1，2，4]恶二唑-5-基)-2-苯基乙基]氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)丁-3-烯基]氨基甲酸叔丁酯的两种异构体。
HPLC：异构体I：Rt＝34.1分(方法a)
      异构体II：Rt＝34.4分(方法a)
将[(2E)-1，1-二甲基-4-(1-{N-甲基-N-[1-(3-苄基氨基羰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯基乙基]氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)丁-3-烯基]氨基甲酸叔丁酯(0.77g，1.0mmol)溶解在三氟乙酸(2ml)和二氯甲烷(2ml)的混合物中。20℃下10分钟后用二氯甲烷(25ml)稀释反应混合物，用碳酸氢钠饱和水溶液中和。用硫酸镁干燥有机相，真空浓缩，得到标题化合物的两种异构体0.7g。
HPLC：异构体I：Rt＝24.5分(方法a)
      异构体II：Rt＝25.3分(方法a)
实施例22：
(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-{(1R)-1-[N-(1R)-1-苄基-2，5-二羟基戊基)-N-甲基氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基}-N-甲基酰胺
Figure C9619218401241
按方法J制备。
N-((1R)-1-甲酰基-2-苯乙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯
Figure C9619218401251
草酰氯(4.24ml，48.61mmol)溶解在二氯甲烷(30ml)中。冷却至-63℃，滴加DMSO(4.6ml，64.81mmol)的二氯甲烷(20ml)溶液。搅拌5分钟，在30分钟内滴加N-((1R)-1-(羟基甲基)-2-苯乙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯(8.6g，32.41mmol)的二氯甲烷(200ml)溶液。-63℃下搅拌反应混合物20分钟。25分钟内加入三乙胺(18.07ml，129.62mmol)的二氯甲烷(40ml)溶液。溶液温热至-35℃，立即再冷却至-63℃。在此温度下搅拌1小时，加入乙酸(8.15ml，142.58mmol)。让反应混合物温热至10℃，用水(2×200ml)和碳酸氢钠饱和溶液(150ml)洗涤。用硫酸镁干燥有机相，真空除去溶剂，得到7.536g N-((1R)-1-甲酰基-2-苯乙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯。
1H-NMR(CDCl3)：δ＝1.40和1.44(两个s，共9H)；2.52和2.58(两个s，共3H)；2.90和3.00(两个dd，共1H)；3.81(dd，1H)；4.00和4.20(两个dd，共1H)；7.10-7.35(m，5H).
N-((1R)-1-苄基-2-羟基戊-4-烯基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯
将N-((1R)-1-甲酰基-2-苯乙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯(6.0g，20.0mmol)溶于醚(150ml)中，冷却至-78℃，滴加烯丙基溴化镁(1.0M醚溶液22ml，22mmol)。加完后让溶液温热至室温。加入到10％氯化铵水溶液(200ml)中。分离各相，水相用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。合并有机层，用饱和碳酸氢钠溶液(100ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，粗品在硅胶(260g)上用乙酸乙酯/庚烷1∶1进行快速层析纯化，得到4.00g N-((1R)-1-苄基-2-羟基戊-4-烯基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯。
1H-NMR(CDCl3)：δ＝1.10-1.50(m，9H)；1.90-3.40(m，8H)；3.50-4.10(m，2H)；5.00-5.30(m，2H)；5.90(m，1H)；7.10-7.40(m，5H).
((1R)-1-苄基-2，5-二羟基戊基)甲基氨基甲酸叔丁酯
Figure C9619218401261
将N-((1R)-1-苄基-2-羟基戊-4-烯基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯(3.95g，11.60mmol)溶解在THF(90ml)中，加入到9-硼杂双环[3，3，1]壬烷(46.64ml的0.5M THF溶液，23.32mmol)的THF(90ml)溶液中。加热回流该溶液16小时。冷却混合物至室温，滴加乙醇(22ml)。慢慢加入6N氢氧化钠水溶液(6.6ml，39.44mmol)，然后加过氧化氢(35％的水溶液)。加热回流反应混合物1小时，冷却至室温。加入到1N氢氧化钠溶液(200ml)中，分离各相。水相用乙酸乙酯(3×50ml)萃取。合并有机层，用37％硫酸氢钠溶液(150ml)洗涤。用硫酸镁干燥。再用37％硫酸氢钠溶液(200ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂。将残余物溶解在乙酸乙酯(200ml)中，用37％硫酸氢钠(200ml)洗涤，用硫酸镁干燥。粗产品在硅胶(180g)上用乙酸乙酯层析，再在硅胶(100g)上用二氯甲烷/甲醇/25％氨水100∶10∶1层析，得到586mg((1R)-1-苄基-2，5-二羟基戊基)甲基氨基甲酸叔丁酯。
MS(EI)：365(20％；[M+1]+)
1H-NMR(CDCl3)：δ＝1.22和1.40(两个s，共9H)；1.60-1.90(m，5H)；2.50，2.60，和2.73(均为s，共3H)；2.80-4.00(m，7H)；7.10-7.35(m，5H).
(5R)-4-羟基-5-(甲基氨基)-6-苯基己基乙酸酯
Figure C9619218401271
将((1R)-1-苄基-2，5-二羟基戊基)甲基氨基甲酸叔丁酯(560mg，1.52mmol)溶解在乙酸乙酯(10ml)中，加入3M氯化氢/乙酸乙酯(2.0ml，6.08mmol)。室温下搅拌该溶液1小时。用乙酸乙酯(10ml)稀释，用1N氢氧化钠溶液(30ml)萃取。水相用乙酸乙酯(3×10ml)萃取，合并有机相，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，残余物溶于二氯甲烷(5ml)中。冷却溶液至0℃，加入三氟乙酸(5ml)。室温下搅拌溶液5分钟，真空除去溶剂。残余物溶于乙酸乙酯(10ml)，用1N氢氧化钠(10ml)萃取。水相用乙酸乙酯(2×5ml)萃取。合并有机相，用硫酸镁干燥，真空除去溶剂。粗产品在硅胶(40g)上用二氯甲烷/甲醇/25％氨水100∶10∶1快速层析纯化，得到136mg(5R)-4-羟基-5-(甲基氨基)-6-苯基己基乙酸脂。
1H-NMR(CDCl3)：δ＝1.50-2.05(m，4H)；2.07(s，3H)；2.30(s，3H)；2.55(dd，1H)；2.65(td，1H)；2.82(dd，1H)；3.75(td，1H)；4.15(m，2H)；7.15-7.35(m，5H).
HPLC(方法B)：17.87分(85％)
(5R)-5-({(2R)-2-[((2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酰基)甲基氨基]-3-(2-萘基)丙酰基}甲基氨基-4-羟基-6-苯基己基乙酸酯
Figure C9619218401272
0℃下将(5R)-4-羟基-5-(甲基氨基)-6-苯基己基乙酸酯(126mg，0.475mmol)，(2R)-2-(叔丁氧羰基甲基氨基)-3-(2-萘基)丙酸(313mg，0.95mmol)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(65mg，0.475mmol)溶解在二氯甲烷/二甲基甲酰胺2∶1(9ml)中。加入N-乙基-N’-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(91mg，0.475mmol)，0℃下搅拌混合物然后室温下搅拌48小时。用氮气流从混合物中蒸发二氯甲烷，加入乙酸乙酯。形成的溶液相继用5％碳酸氢钠水溶液(50ml)、水(50ml)、5％硫酸氢钾水溶液(50ml)和水(50ml)萃取。有机相用硫酸钠干燥，用旋转蒸发仪真空浓缩至干。将此干物质溶解在二氯甲烷(2ml)和三氟乙酸(2ml)中，反应10分钟，然后用氮气流浓缩成油状，将此油溶解在70％乙腈(1ml)中。加入1N盐酸(3ml)和水(47ml)，立即冻结该混合物并冷冻干燥。将此冻干品溶于二氯甲烷/二甲基甲酰胺2∶1(9ml)中，加入(2E)-5-叔丁氧羰基氨基-5-甲基己-2-烯酸(231mg，0.95mmol)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(129mg，0.95mmol)。将混合物冷却至0℃，加入N-乙基-N′-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(91mg)和二异丙基乙基胺(81μl，0.475mmol)，0℃搅拌混合物1小时，然后室温下18小时。用氮气流从混合物中蒸发二氯甲烷，加入乙酸乙酯。形成的溶液相继用5％碳酸氢钠水溶液(50ml)、水(50ml)、5％硫酸氢钾水溶液(50ml)和水(50ml)萃取。有机相用硫酸钠干燥，用旋转蒸发仪真空浓缩至干。将此干物质溶解在二氯甲烷(2ml)和三氟乙酸(2ml)中，反应10分钟，然后用氮气流浓缩成油状，将此油溶解在70％乙腈(5ml)和水(45ml)中。
将(5R)-5-({(2R)-2-[((2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酰基)甲基氨基]-3-(2-萘基)丙酰基}甲基氨基-4-羟基-6-苯基己基乙酸酯粗品的15ml溶液冷却至0℃，搅拌下滴加1M氢氧化钠(15ml)。0℃下搅拌10分钟后，加入乙酸(2ml)和水(50ml)。在25mm×250mm 7μC-18硅胶柱上进行半制备性HPLC，从溶液中分离产物，柱子用0.05M硫酸铵(用4M硫酸调至pH2.5)中28％乙腈预平衡。40℃下以10ml/min的流速用0.05M硫酸铵(pH2.5，用4M硫酸调)中的28％-38％乙腈梯度洗脱47分钟，收集含肽流份，用3倍体积的水稀释，上样于一Sep-PakC18柱(Waters part.#：51910)上，该柱用0.1％三氟乙酸预平衡。用70％乙腈/0.1％三氟乙酸从Sep-Pak柱上洗脱肽，用水稀释后冷冻干燥从洗脱液中分离肽。
用分析型RP-HPLC(保留时间)和离子对吸收质谱(分子量)鉴定所得最终产物。用Bio-lon 20飞行时间质谱仪进行质谱测定。结果与预期结构相符(测得M+H+＝560.2理论值，MH+＝560.8)。
用214nm处紫外检测和Vydac 218TP54 4.6mm×250mm 5μC-18硅胶柱(“分离组”，Hesperia)进行RP-HPLC，用两种不同的洗脱条件在42℃下以1ml/分洗脱：
A1：用0.1M硫酸铵缓冲液(用4M硫酸调至pH2.5)中5％乙腈预平衡，用相同缓冲液中5％-60％乙腈梯度洗脱50分钟。
B1：用5％乙腈/0.1％三氟乙酸/水预平衡，用5％乙腈/0.1％三氟乙酸/水到60％的乙腈/0.1％三氟乙酸/水梯度洗脱50分钟。
洗脱条件A1和B1下的保留时间分别为：30.08分和31.78分。
实施例23：
3-氨基甲基-N-((1R)-1-{N-[(1R)-1-(2-羟基乙氧基甲基)-2-苯基乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基苯甲酰基
Figure C9619218401291
按方法K制备。
N-((1R)-1-(2-羟基乙氧基甲基)-2-苯基乙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯
将((2R)-2-(叔丁氧羰基甲基氨基)-3-苯基丙氧基)乙酸乙酯(0.50g，1.42mmol)溶于THF(4ml)，滴加硼氢化锂(1.56ml，2.0M THF溶液，3.13mmol)。加入乙醇(8ml)，室温下搅拌反应混合物16小时。用10％柠檬酸酸化该溶液至pH＝4。真空除去溶剂，残余物溶于水(50ml)。用二氯甲烷(3×40ml)萃取溶液，合并有机相，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，粗产品在硅胶(30g)上用二氯甲烷/乙酸乙酯1∶1洗脱进行快速层析纯化，得到0.29g N-((1R)-1-(2-羟基乙氧基甲基)-2-苯基乙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯。
1H-NMR(CDCl3)：δ＝1.32和1.41(两个s，共9H)；2.50-2.85(m，5H)；3.40-3.80(m，6H)；4.40和4.60(两个br，共1H)；7.10-7.35(m，5H).
2-((2R)-2-甲基氨基-3-苯基丙氧基)乙醇
将N-((1R)-1-(2-羟基乙氧基甲基)-2-苯基乙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯(0.29g，0.90mmol)溶于二氯甲烷(3ml)，加入三氟乙酸(1ml)。0℃下搅拌15分钟，真空除去溶剂。残余物溶解在二氯甲烷(10ml)，用1N氢氧化钠(10ml)萃取。用硫酸镁干燥有机相。真空除去溶剂，得到0.11g 2-((2R)-2-甲基氨基-3-苯基丙氧基)乙醇粗品，用于下步合成中。
HPLC(方法b)：9.10分。
1H-NMR(CDCl3)：δ＝2.48(s，3H)；2.75 (dd，1H)；2.80-3.00(m，2H)；3.40(dd，1H)；3.45-3.65(m，3H)；3.65-3.80(m，2H)；7.15-7.35(m，5H).
将2-((2R)-2-甲基氨基-3-苯基丙氧基)乙醇(91mg，0.435mmol)、(2R)-2-(叔丁氧羰基甲基氨基)-3-(2-萘基)丙酸(215mg，0.653mmol)和1-羟基-7-氮杂苯并三唑(HOAT)(89mg，0.653mmol)溶解在二氯甲烷(10ml)和N，N-二甲基甲酰胺(5ml)中。冷却至0℃后，加入N-(3-二甲氨基丙基)-N′-乙基碳化二亚胺盐酸盐(125mg，0.653mmol)，0℃下搅拌30分钟后，加入二异丙基乙基胺(75μl，0.435mmol)。室温下搅拌后，用氮气流除去二氯甲烷，加入乙酸乙酯(25ml)。用5％碳酸氢钠(2×25ml)、5％硫酸氢钾和水(25ml)洗涤该混合物。用硫酸镁干燥有机相，真空浓缩得到干燥残余物N-((1R)-1-N-((1R)-1-(2-羟基乙氧基甲基)-2-苯基乙基)-N-甲基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯(240mg)。将此N-((1R)-1-N-((1R)-1-(2-羟基乙氧基甲基)-2-苯基乙基)-N-甲基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基氨基甲酸叔丁酯的一半(120mg，0.230mmol)溶解在二氯甲烷(1ml)和三氟乙酸(1ml)中，反应10分钟，然后用氮气流浓缩成油状，将此油溶于70％乙腈(1ml)中。加入1N盐酸(1ml)和水(50ml)，立即冻结该混合物并冷冻干燥。
将此冻干品溶于二氯甲烷(5ml)，加入3-(叔丁氧羰基氨基甲基)苯甲酸(503mg，2.0mmol)和N-乙基-N′-(3-二甲氨基丙基)碳化二亚胺盐酸盐(192mg，1mmol)的二氯甲烷(5ml)溶液，加入前该溶液已在0℃下反应了15分钟。最后，加入二异丙基乙基胺(171μl，1.0mmol)，室温下搅拌72小时。用氮气流从混合物中蒸去二氯甲烷，加入乙酸乙酯(25ml)。形成的溶液相继用5％碳酸氢钠水溶液(2×25ml)，水(25ml)，5％硫酸氢钾水溶液(25ml)和水(25ml)萃取。有机相用硫酸钠干燥，在旋转蒸发仪上真空浓缩至干。将此干物质溶于二氯甲烷(2ml)和三氟乙酸(2ml)，反应10分钟后，用氮气流浓缩成油。将此油溶于70％乙腈(5ml)和水(400ml)中。
用条件A1进行的分析型HPLC显示两个主峰：28.82分和35.67分，及一个小峰：29.98分。用Bio-lon20飞行时间质谱仪(Bio-lon Nordic AB，Uppsela，瑞典)进行离子对吸收质谱，结果显示该小成分是目标产物。质谱结果与预期结构相符(实测M+H＝553.0，理论M+H＝554.7)。其他两个产物来自合成过程中未保护羟基的酰化。
在填有7μC-18硅胶的25mm×250mm柱上分4次进行半制备性HPLC，分离这三个化合物，柱子用0.05M硫酸铵(用4M硫酸调至pH2.5)中37％乙腈预平衡40℃下以10ml/min的流速用0.05M硫酸铵(pH2.5，用4M硫酸调)中的37％-44％乙腈梯度洗脱47分钟，收集各化合物流份，用3倍体积的水稀释，上样于一Sep-PakC-18柱上(Waters part#51910)上，该柱用1％三氟乙酸预平衡。用70％乙腈/0.1％三氟乙酸从Sep-Pak柱上洗脱产物，用水稀释后冷冻干燥从洗脱液中分离产物。
将相应于两主峰的化合物皂化除去不必要的酰化，以提高目标化合物的收率。将这些化合物溶于0.066N氢氧化钠1.5ml中，15分钟后用1N盐酸中和。然后用与上述相似的方法经半制备HPLC分离目标化合物。
用分析型RP-HPLC(保留时间)鉴定所得最终产物。用214nm处紫外检测和Vydac 218TP544.6mm×250mm 5μC-18硅胶柱(“分离组”，Hesperia)进行RP-HPLC分析，用两种不同的洗脱条件在42℃下以1ml/分洗脱：
A1：用0.1M硫酸铵缓冲液(用4M硫酸调至pH2.5)中5％乙腈预平衡，用相同缓冲液中5％-60％乙腈梯度洗脱50分钟。
B1：用5％乙腈/0.1％三氟乙酸/水预平衡，用5％乙腈/0.1％三氟乙酸/水到60％的乙腈/0.1％三氟乙酸/水梯度洗脱50分钟。
洗脱条件A1和B1下的保留时间分别为：29.87分和34.28分。
实施例24：
哌啶-4-羧酸((1R，2E)-4-羟基甲基-5-(2-萘基)-1-((2-萘基)甲基)戊-2-烯基)酰胺
((1R)-4-叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-1-((2-萘基)甲基)-5-(2-萘基)戊-2-烯基)氨基甲酸叔丁酯
Figure C9619218401332
按实施例9制备该化合物。用((1R)-1-苯磺酰基甲基-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(3.71g，8.74mmol)和2-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-3-(2-萘基)丙醛(4.3g，13.11mmol)作为起始物。在硅胶(5×25cm)上用乙醚/庚烷1∶3洗脱进行层析，得到2.20g((1R)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-1-((2-萘基)甲基)-5-(2-萘基)戊-2-烯基)氨基甲酸叔丁酯异构体混合物。
1H-NMR(CDCl3)(选择的峰)δ0.0-0.05(四个s，6H)，0.85-0.95(四个s，9H)，1.30-1.40(三个s，9H)，5.2-5.5(m，2H)(3E，5R)-5-氨基-6-(2-萘基)-2-((2-萘基)甲基)己-3-烯-1-醇
Figure C9619218401341
将((1R)-4-(叔丁基二甲基甲硅烷氧基甲基)-1-((2-萘基)甲基)-5-(2-萘基)戊-2-烯基)氨基甲酸叔丁酯(2.20g，3.60mmol)溶于乙腈(100ml)和氟化氢水溶液(48％，4.5ml)的混合物中。搅拌3小时后，加入乙酸乙酯(200ml)和碳酸钠水溶液(10％，200ml)的混合物。分离各相，有机相用硫酸镁干燥，真空蒸发。残余物在硅胶(4×38cm)上用乙酸乙酯(85％)、乙醇(14％)和浓氨水(1％)的混合物进行层析。这样分离了两个紧邻的斑点。先洗脱的点在HPLC上为单峰，而后洗脱的点含有几个异构体。第一成分为E-型，220mg(3E，5R)-5-氨基-6-(2-萘基)-2-((2-萘基)甲基)己-3-烯-1-醇用于下步反应。
1H-NMR(CDCl3)δ1.45(s(br)，3H)；2.55-2.92(m，5H)；3.35-3.68(m，3H)；5.37(dd，ABX系统的一部分.，J1＝15Hz，J2＝7Hz，1H)，5.52(dd，ABX系统的一部分，J1＝15Hz，J2＝5Hz，1H)，7.15-7.84(m，14H).(N-叔丁氧羰基-哌啶-4-羧酸((1R，2E)(4-羟基甲基)-5-(2-萘基)-1-(2-萘基)甲基)戊-2-烯基)酰胺
将N-叔丁氧羰基哌啶-4-羧酸(378mg，0.991mmol)和EDAC(198mg，1.038mmol)溶于二氯甲烷(15ml)，搅拌15分钟。加入(3E，5R)-5-氨基-6-(2-萘基)-2-((2-萘基)甲基)己-3-烯-1-醇(180mg，0.472mmol)，搅拌混合物6小时。用硫酸氢钠(10％，10ml)和碳酸氢钠(饱和，15ml)洗涤有机相，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，残余物在硅胶(30×2.5cm)上用乙酸乙酯/庚烷1∶1洗脱进行层析，得到220mg N-叔丁氧羰基-哌啶-4-羧酸((1R，2E)-4-(羟基甲基)-5-(2-萘基)-1-((2-萘基)甲基)戊-2-烯基)酰胺。
1H-NMR(CDCl3)：δ：1.35-1.55(m，(sat1.45)；15H)；1.93-2.01(m，1H)；2.55-2.68(m，4H)；2.70-2.90(m，2H)；3.01(dd，1H)；3.38(dd，1H)；3.55(d(br)，1H)；4.67(p，1H)；5.18(d，1H)；5.31(dd，1H)，5.37(dd，1H)，7.15-7.79(m，14H).
将(N-叔丁氧羰基-哌啶-4-羧酸((1R，2E)-4-(羟基甲基)-5-(2-萘基)-1-((2-萘基)甲基)戊-2-烯基)酰胺(220mg，0.371mmol)溶于二氯甲烷(5ml)和三氟乙酸(5ml)中，搅拌90分钟。真空除去挥发性物质，加入二氯甲烷(20ml)并真空除去，重复3次，得到170mg标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)(选择的峰)δ4.60(1H)；5.43(m，2H)；7.00-7.77(14H)，8.7和9.05(s(br)，2H).
ESMS：(M+H)+：493.2
HPLC(A1)：Rt＝36.15min.
实施例25
哌啶-4-羧酸((1R)-2-(2-萘基)-1-((1R)-2-(2-萘基)-1-(1-苯乙基-1H-四唑-5-基)乙基氨基甲酰基)乙基)酰胺
Figure C9619218401351
((1R)-2-(2-萘基)-1-(苯乙基氨基甲酰基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
将D-叔丁氧羰基-(2-萘基)丙氨酸(5.0g，15.85mmol)溶于无水二氯甲烷(80ml)，加入HOBT(2.14g，15.85mmol)和EDAC(3.34；17.43mmol)，搅拌15分钟。加入苯乙胺(2.0ml，15.85mmol)，室温下搅拌24小时。加入二氯甲烷(200ml)，有机层用水(100ml)和碳酸氢钠(饱和，100ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，残余物在硅胶(3.5×40cm)上用二氯甲烷/乙酸乙酯(6∶1)洗脱进行层析，得到4.95g((1R)-2-(2-萘基)-1-(苯乙基氨基甲酰基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。
H-NMR(CDCl3)：δ：1.39(s，9H)；2，52(m，1H)；2.64(m，1H)；3.15(dd，1H)；3.23(dd，1H)；3.36(m；1H)；3.45(m，1H)；4.31(dd，1H)；5.08(s(br)；1H)；5.62(s(br)；1H)；6.85-7.82(12芳氢.)((1R)-2-(2-萘基)-1-(1-苯乙基-1H-四唑-5-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
将((1R)-2-(2-萘基)-1-(1-苯乙基氨基甲酰基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(2.20g，5.26mmol)溶于无水THF(50ml)中。加入三苯膦(2.76g，10.52mmol)、偶氮二羧酸二乙酯(1.66g，10.52mmol)和三甲基甲硅烷基叠氮化物(1.22g，10.52mmol)。室温下搅拌反应混合物过夜。硝酸铈铵(23.06g；21.04mmol)溶于水(400ml)，滴加到反应混合物中。加入THF(120ml)，用二氯甲烷(3×300ml)萃取反应混合物。用硫酸镁干燥有机层，真空除去溶剂。残余物在硅胶(5×40cm)上用乙酸乙酯/庚烷(1∶1)作为洗脱剂进行层析，得到0.30g((1R)-2-(2-萘基)-1-(1-苯乙基-1H-四唑-5-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。
H-NMR(CDCl3)δ1.32(s，9H)；2.72(m，1H)；2.98(m，1H)；3.13(dd；1H)；3.41(dd，1H)；4.42(t，2H)；4.99(dd；1H)；5.12(d，1H)；6.82-7.80(12芳香.H)
(1R)-2-(2-萘基)-1-(1-苯乙基-1H-四唑-5-基)乙基胺
将((1R)-2-(2-萘基)-1-(1-苯乙基-1H-四唑-5-基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.30g，0.68mmol)溶于二氯甲烷(20ml)，加入三氟乙酸(2ml)。室温下搅拌该混合物3小时。真空除去溶剂，残余物溶于二氯甲烷(50ml)，用碳酸氢钠(10％，30ml)洗涤。用硫酸镁干燥有机相，真空蒸发溶剂。残余物在硅胶(2.5×15cm)上用乙酸乙酯作为洗脱剂进行层析，得到170mg(1R)-2-(2-萘基)-1-(1-苯乙基-1H-四唑-5-基)乙基胺。
H-NMR(CDCl3)δ1.75(s(br)；2H)；3.00(m 2H)；3.09(d，2H)；3.92(t，1H)；4.25(m，2H)；6.85-7.85(12芳香.H).
((1R)-2-(2-萘基)-1-((1R)-2-(2-萘基)-1-(1-苯乙基-1H-四唑-5-基)乙基氨基甲酰基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
Figure C9619218401381
D-叔丁氧羰基-(2-萘基)丙氨酸(0.129g，0.408mmol)溶于二氯甲烷(10ml)，加入HOBT(55mg，0.408mmol)和EDAC(86mg；0.449mmol)，室温搅拌该混合物15分钟。加入(1R)-2-(2-萘基)-1-(1-苯乙基-1H-四唑-5-基)乙基胺(141mg，0.408mmol)，搅拌混合物过夜。加入二氯甲烷(25ml)，有机相用碳酸氢钠(10％，25ml)、硫酸氢钠(10％；25ml)和水(25ml)洗涤。用硫酸镁干燥有机相，真空除去溶剂，得到237mg((1R)-2-(2-萘基)-1-((1R)-2-(2-萘基)-1-(1-苯乙基-1H-四唑-5-基)乙基氨基甲酰基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
H-NMR(CDCl3)δ1.30(s，9H)；2.75(m，1H)；2.95(m，4H)；3.33(dd，1H)；4.15(m，2H)；4.30(m，1H)；4.65(d(br)，1H)；5.18(dd，1H)；6.60-7.85(19芳香.H).
(2R)-2-氨基-3-(2-萘基)-N-((1R)-2-(2-萘基)-1-(1-苯乙基-1H-四唑-5-基)乙基)丙酰胺
Figure C9619218401382
将((1R)-2-(2-萘基)-1-((1R)-2-(2-萘基)-1-(1-苯乙基-1H-四唑-5-基)乙基氨基甲酰基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(215mg，0.34mmol)溶于二氯甲烷(4ml)和三氟乙酸(2ml)的混合物中，室温下搅拌30分钟。真空除去溶剂，残余物溶于乙酸乙酯和碳酸氢钠水溶液(10％，10ml)中。分离各相，用硫酸镁干燥有机相，真空除去溶剂。残余物在硅胶(3×20cm)上用乙酸乙酯洗脱进行层析，得到152mg(2R)-2-氨基-3-(2-萘基)-N-((1R)-2-(2-萘基)-1-(1-苯乙基-1 H-四唑-5-基)乙基)丙酰胺
H-NMR(CDCl3)δ2.16(dd，1H)；2.80-3.15(m，4H)；3.35-3.55(m，2H)；4.48(dd，2H)；5.19(dd，1H)；6.90-8.02(21H)
4-((1R)-2-(2-萘基)-1-((1R)-2-(2-萘基)-1-(1-苯乙基-1H-四唑-5-基)乙基氨甲酰基)乙基)氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
Figure C9619218401391
N-叔丁氧羰基哌啶-4-羧酸(68mg，0.296mmol)溶于二氯甲烷(7ml)，加入HOBT(40mg，0.296mmol)和EDAC(62mg；0.326mmol)，室温下搅拌混合物15分钟。加入(2R)-2-氨基-3-(2-萘基)-N-((1R)-2-(2-萘基)-1-(1-苯乙基-1H-四唑-5-基)乙基)丙酰胺(152mg；0.296mmol)，继续搅拌过夜。加入二氯甲烷，有机相用碳酸氢钠水溶液(25ml)、硫酸氢钠水溶液(10％，25ml)和水(25ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，得到170mg 4-((1R)-2-(2-萘基)-1-((1R)-2-(2-萘基)-1-(1-苯乙基-1H-四唑-5-基)乙基基氨甲酰基)乙基)氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
H-NMR(CDCl3)δ1.25-1.52(m和s，13H)；1.79(m，1H)；2.58(m，2H)；2.75(m，1H)；2.86(dd，1H)；2.96(dd，1H)；3.05(d，2H)；3.27(dd，1H)；3.98(m，2H)；4.15(m，2H)；4.57(dd，1H)；5.04(dd，1H)；5.72(d(br)；1H)；6.53(d(br)；1H)；6.71-7.80(19芳香.H)
将4-((1R)-2-(2-萘基)-1-((1R)-2-(2-萘基)-1-(1-苯乙基-1H-四唑-5-基)乙基氨基甲酰基)乙基氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(164mg，0.218mmol)溶于二氯甲烷(6ml)和三氟乙酸(3ml)中，室温下搅拌20分钟。真空除去溶剂，加入二氯甲烷(10ml)，有机相用碳酸氢钠水溶液(10％，10ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，残余物溶于乙酸乙酯(5ml)中，加入氯化氢/乙酸乙酯(3M，2ml)。真空除去溶剂，残余物溶于甲醇(5ml)并蒸发，用二氯甲烷重复3次，得到110mg标题化合物盐酸盐。
H-NMR(CDCl3)(选择的峰)δ2.50(m，2H)；2.73(m，1H)；2.89-3.09(m，7H)；3.31(dd，1H)；4.21(m，2H)；4.68(dd，1H)；5.10(dd，1H)；6.70-7.75(19芳香.H)
HPLC：Rt＝38.07min(A1)
实施例26：
哌啶-4-羧酸N-甲基-N-((1R)-2-(2-萘基)-1-((1R)-2-(2-萘基)-1-硫代氨基甲酰基乙基氨基甲酰基)乙基)酰胺
(2R)-2-(N-叔丁氧羰基-N-甲基氨基)-3-(2-萘基)丙酸甲酯
Figure C9619218401411
将(2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(2-萘基)丙酸(10.0g，32.79mmol)溶于无水DMF(100ml)中。加入碘甲烷(12.25ml，196.72mmol)和氧化银(26.6g，114.75mmol)。室温下搅拌反应混合物12小时，过滤，向滤液中加入二氯甲烷(400ml)。有机相用氰化钾水溶液(5％；2×100ml)和水(3×150ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，得到10.9g(2R)-2-(N-叔丁氧羰基-N-甲基氨基)-3-(2-萘基)丙酸甲酯。
H-NMR(CDCl3)δ(旋光异构体混合物)1.30，1.35(两个s，9H)；2.71，2.74(两个s，3H)；3.45，3.19(两个m，2H)；3.72，3.74(两个s，3H)；4.65，5.06(两个dd，1H)；7.30-7.80(7芳香.H)
(2R)-2-(N-叔丁氧羰基-N-甲基氨基)-3-(2-萘基)丙酸
Figure C9619218401412
将(2R)-2-(N-叔丁氧羰基-N-甲基氨基)-3-(2-萘基)丙酸甲酯(15.0g，43.73mmol)溶于二噁烷(150ml)中，在冰浴上冷却。加入水(115ml)和氢氧化锂(1.15g，48.10mmol)。室温下搅拌反应混合物4小时，加入乙酸乙酯(300ml)和水(200ml)。加入硫酸氢钠直至酸性(pH＝2.5)。有机相用水(200ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，得到13.5g(2R)-2-(N-叔丁氧羰基-N-甲基氨基)-3-(2-萘基)丙酸。
H-NMR(CDCl3)δ(旋光异构体混合物)1.30，1.47(两个s，9H)；2.66，2.78(两个s，3H)；3.21，3.38(两个dd，1H)；3.48，3.51(两个d，1H)；4.75，4.83(两个dd，1H)；7.31-7.82(7芳香.H).((1R)-2-(2-萘基)-1-硫代氨基甲酰基乙基)氨基甲酸叔丁酯
将(2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(2-萘基)丙酸酰胺(1.058g，3.36mmol)和2，4-二(4-甲氧基苯基)-1，3-二硫杂-2，4-二磷杂丁环-2，4-二硫化物(Lawesson’s试剂)(0.71g，1.76mmol)溶于二恶烷(6ml)。60℃下加热反应混合物30分钟，室温下搅拌12小时。真空除去溶剂，向残余物中加入水/碳酸氢钠混合物(1∶1，15ml)，室温下搅拌30分钟。过滤该混合物，固体用水(2×5ml)洗涤，在硅胶(2×15cm)上用乙酸乙酯/庚烷(2∶1)层析，得到0.914g((1R)-2-(2-萘基)-1-硫代氨基甲酰基乙基)氨基甲酸叔丁酯。
H-NMR(CDCl3)δ1.44(s，9H)；3.28(m，2H)；4.74(dd，1H)；4.94(d(br)，1H)；7.35-7.79(7芳香.H).
(2R)-2-氨基-3-(2-萘基)硫代丙酰胺
将((1R)-2-(2-萘基)-1-硫代氨基甲酰基乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.45g，1.36mmol)溶于二氯甲烷(1.5ml)和三氟乙酸(1.5ml)中。室温下搅拌反应混合物40分钟。真空除去溶剂，残余物溶于二氯甲烷中。加入碳酸氢钠水溶液直至碱性，水相用二氯甲烷(3×15ml)萃取。合并有机相，用硫酸镁干燥，真空除去溶剂，得到0.311g(2R)-2-氨基-3-(2-萘基)硫代丙酰胺。
1H-NMR(CDCl3)δ2.36(dd，1H)；3.79(dd，1H)；4.19(dd，1H)；7.40-7.85(7芳香.H).
N-甲基-N-((1R)-2-(2-萘基)-1-((1R)-2-(2-萘基)-1-硫代氨基甲酰基乙基氨基甲酰基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
将(2R)-2-氨基-3-(2-萘基)硫代丙酰胺(0.290g，1.2mmol)、(2R)-2-(N-叔丁氧羰基-N-甲基氨基)-3-(2-萘基)丙酸(0.436g，1.3mmol)、HOBT(0.176g，1.3mmol)和EDAC(0.267g，1.4mmol)溶于二氯甲烷(20ml)，室温下搅拌12小时。加入二氯甲烷(40ml)，有机相用硫酸氢钠水溶液(10％，40ml)、碳酸氢钠水溶液(饱和，40ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，得到0.53g
N-甲基-N-((1R)-2-(2-萘基)-1-((1R)-2-(2-萘基)-1-硫代氨基甲酰基乙基氨基甲酰基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。
H-NMR(CDCl3)δ(旋光异构体混合物，选择的峰)1.28(s，9H)；2.45，2.51(两个s，3H)；4.90(m，1H)；5.12，5.20(两个m，1H).(2R)-2-甲基氨基-3-(2-萘基)-N-((1R)-2-(2-萘基)-1-硫代氨基甲酰基乙基)丙酰胺
Figure C9619218401441
将N-甲基-N-((1R)-2-(2-萘基)-1-((1R)-2-(2-萘基)-1-硫代氨基甲酰基乙基氨基甲酰基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.25g，0.462mmol)溶于二氯甲烷(1.5ml)中，加入三氟乙酸(1.5ml)。室温下搅拌反应混合物1小时。真空除去溶剂，残余物溶于二氯甲烷(5ml)中，用碳酸氢钠水溶液(5ml)洗涤。用硫酸镁干燥有机相，真空除去溶剂，得到0.201g(2R)-2-甲基氨基-3-(2-萘基)-N-((1R)-2-(2-萘基)-1-硫代氨基甲酰基乙基)丙酰胺。
H-NMR(CDCl3)δ2.16(s，3H)；2.46(dd，1H)；3.07(dd，1H)；3.20-3.41(m，4H)；5.09(dd，1H)；7.12-8.13(m，16H)
4-(N-甲基-N-((1R)-2-(2-萘基)-1-((1R)-2-(2-萘基)-1-硫代氨基甲酰基乙基氨基甲酰基)乙基)氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
Figure C9619218401451
将N-叔丁氧羰基哌啶-4-羧酸(97mg，0.424mmol)溶于二氯甲烷(2ml)，加入HOAT(58mg，0.424mmol)和EDAC(85mg，0.444mmol)。室温下搅拌反应混合物15分钟。加入溶于2ml二氯甲烷的(2R)-2-甲基氨基-3-(2-萘基)-N-((1R)-2-(2-萘基)-1-硫代氨基甲酰基乙基)丙酰胺(17mg，0.386mmol)。加入二异丙基乙基胺(0.073ml，0424mmol)，室温下搅拌反应混合物12小时。加入叔丁基甲基醚(25ml)，反应混合物用水(25ml)、碳酸氢钠水溶液(15ml)、硫酸氢钠水溶液(10％；15ml)、水(15ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，残余物在硅胶(3.5×30cm)上层析乙酸乙酯/庚烷(1∶1)到乙酸乙酯/庚烷(2∶1)的梯度洗脱，得到0.190g
4-(N-甲基-N-((1R)-2-(2-萘基)-1-((1R)-2-(2-萘基)-1-硫代氨基甲酰基乙基氨基甲酰基)乙基)氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
H-NMR(CDCl3)δ(旋光异构体混合物，选择的峰)：1.40，1.42(两个s，9H)；2.49，2.70(两个s，3H)；3.10(dd，1H)；3.48(dd，1H)；5.00，5.09(两个dd，1H)
将4-(N-甲基-N-((1R)-2-(2-萘基)-1-((1R)-2-(2-萘基)-1-硫代氨基甲酰基乙基氨基甲酰基)乙基)氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.190g，0.291mmol)溶于二氯甲烷(5ml)。加入三氟乙酸(5ml)，室温下搅拌反应混合物15分钟。真空除去溶剂，残余物溶于二氯甲烷中再蒸发(2×5ml)。残余物在硅胶(2×30cm)上层析，用25％氨水/乙醇/二氯甲烷(1∶9∶90)洗脱，得到57mg标题化合物。
ESMS：(M+H)+：553.2
HPLC(A1)：Rt＝29.4分钟。
实施例27：
哌啶-4-羧酸((1R)-1-((1R)-1-(4-氨基甲酰基-5-苯基-1，3-噻唑-2-基)-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基)酰胺
Figure C9619218401461
2-氨基-3-氧代-3-苯基丙酸甲酯
Figure C9619218401462
将无水四氢呋喃(250ml)冷却至-78℃，加入溶于无水THF(100ml)中的叔丁醇钾(6.37g，56.72mmol)。加入(二苯亚甲基氨基)乙酸  甲酯(14.35g，56.72mmol)，-78℃下搅拌反应混合物30分钟。滴加苯甲酰氯(6.59g，56.72mmol)，-78℃下搅拌30分钟。滴加盐酸(1.0M，175ml)，加热反应混合物至室温，真空除去2/3的溶剂。加入水(700ml)，反应混合物用乙醚(400ml)洗涤。真空蒸发水相，残余物溶于甲醇并蒸发(2×150ml)。加入甲醇(80ml)，过滤混合物，真空蒸发滤液。残余物在四氢呋喃/乙醚中重结晶，得到8.86g  2-氨基-3-氧代-3-苯基丙酸甲酯盐酸盐。
H-NMR(DMSO)δ3.66(s，3H)；6.25(s，1H)；7.57-8.17(5芳香.H)；9.20(s(br)；3H).
2-((2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(2-萘基)丙酰基氨基)-3-氧代-3-苯基丙酸甲酯
将(2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(2-萘基)丙酸(5.49g，17.42mmol)溶于无水四氢呋喃(200ml)中，加入N-甲基吗啉(1.92ml，17.42mmol)。冷却反应混合物至-20℃，搅拌15分钟。将氯代甲酸异丁酯(2.27ml，17.42mmol)溶于无水四氢呋喃(3ml)，-20℃下滴加到反应混合物中。加入N-甲基吗啉(1.92ml，17.42mmol)和2-氨基-3-氧代-3-苯基丙酸甲酯(4.0g，17.42mmol)，-20℃下搅拌混合物30分钟。加热反应混合物至室温，真空除去溶剂。残余物溶于二氯甲烷(200ml)，用水(200ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，残余物在硅胶(5×45cm)上层析，用庚烷/乙酸乙酯/二氯甲烷(2∶1∶1)洗脱，得到6.19g  2-((2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(2-萘基)丙酰基氨基)-3-氧代-3-苯基丙酸甲酯非对映异构体混合物。
H-NMR (CDCl3)δ1.48(s，9H)；3.28(m，2H)；3.59，3.67(两个s，3H)；4.58(s(br)，1H)；5.00，5.03(两个m，1H)；6.13，6.17(两个d，1H)；7.28-8.12(m，13H).
2-((1R)-1-叔丁氧羰基氨基-2-(2-萘基)乙基)-5-苯基-1，3-噻唑-4-羧酸甲酯
Figure C9619218401481
将2-((2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(2-萘基)丙酰基氨基)-3-氧代-3-苯基丙酸甲酯(2.2g，4.069mmol)和2，4-二(4-甲氧苯基)-1，3-二硫杂-2，4-二磷杂丁环-2，4-二硫化物(Lawesson’s试剂)(4.1g，10.17mmol)在50ml THF中回流6小时。真空除去溶剂，残余物在硅胶(4×40cm)上层析，用乙酸乙酯/庚烷(1∶1)洗脱，残余物在乙酸乙酯/庚烷(1∶1；50ml)中重结晶，得到1.45g 2-((1R)-1-叔丁氧羰基氨基-2-(2-萘基)乙基)-5-苯基-1，3-噻唑-4-羧酸甲酯。
H-NMR(CDCl3)δ1.39(s，9H)；3.48(dd(br)；1H)；3.55(dd，1H)；3.85(s，3H)；5.26(s(br)，1H)；5.38(m，1H)；7.24-7.81(12芳香H).
2-((1R)-1-叔丁氧羰基氨基-2-(2-萘基)乙基)-5-苯基-
1.3噻唑-4-羧酸
将2-((1R)-1-(叔丁氧羰基氨基)-2-(2-萘基)乙基)-5-苯基-1，3-噻唑-4-羧酸甲酯(0.35g，0.716mmol)溶于乙醇(99％，40ml)，加入氢氧化锂(0.122g，4.654mmol)。室温下搅拌反应混合物12小时。真空除去溶剂，残余物溶于水(50ml)和乙醚(50ml)。用硫酸氢钠(10％)酸化该溶液，用硫酸镁干燥有机相。真空除去溶剂，得到0.185g 2-((1R)-1-(叔丁氧羰基氨基)-2-(2-萘基)乙基)-5-苯基-1，3-噻唑-4-羧酸
H-NMR(DMSO)δ1.24(s，9H)；3.20(dd，1H)；3.55(dd，1H)；5.11(m，1H)；7.48-7.93(12芳香.H)
2-((1R)-1-(叔丁氧羰基氨基)-2-(2-萘基)乙基)-5-苯基-1，3-噻唑-4-羧酸酰胺
将2-((1R)-1-(叔丁氧羰基氨基)-2-(2-萘基)乙基)-5-苯基-1，3-噻唑-4-羧酸(0.17g，0.362mmol)溶于二氯甲烷(8ml)中。加入1-羟基苯并三唑(0.049g，0.362mmol)和N-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.083g，0.434mmol)。室温下搅拌反应混合物15分钟。加入碳酸氢铵(0.057g，0.724mmol)，室温下搅拌反应混合物12小时。加入二氯甲烷(20ml)，反应混合物用碳酸氢钠(10％，10ml)、硫酸氢钠(5％，2×10ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，残余物在硅胶(2×15cm)上层析，用乙酸乙酯/庚烷(1∶1)洗脱，得到0.155g 2-((1R)-1-(叔丁氧羰基氨基)-2-(2-萘基)乙基)-5-苯基-1，3-噻唑-4-羧酸酰胺
1H-NMR(CDCl3)δ1.38(s，9H)；3.39-3.52(m，2H)；5.17(d(br)，1H)；5.35(m，1H)；5.52(s(br)；1H)；7.15(s(br)；7.22-7.82(12芳香.H).
2-((1R)-1-氨基-2-(2-萘基)乙基)-5-苯基-1，3-噻唑-4-羧酸酰胺
Figure C9619218401501
将2-((1R)-1-叔丁氧羰基氨基-2-(2-萘基)乙基)-5-苯基-1，3-噻唑-4-羧酸酰胺(0.155g，0.327mmol)溶于二氯甲烷(4ml)，加入三氟乙酸(4ml)。室温下搅拌反应混合物1小时，真空除去溶剂。将残余物溶于二氯甲烷并蒸发(2×2ml)。残余物溶于乙醚中，加入盐酸(1N，3ml)和甲醇(10ml)。真空除去溶剂，得到0.106g 2-((1R)-1-氨基-2-(2-萘基)乙基)-5-苯基-1，3-噻唑-4-羧酸酰胺
1H-NMR(CDCl3)(选择的峰)δ3.45-3.60(m，2H)；5.28(m，1H).((1R)-1-((1R)-1-(4-氨基甲酰基-5-苯基-1，3-噻唑-2-基)-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酸叔丁酯
将(2R)-2-叔丁氧羰基氨基-3-(2-萘基)丙酸(0.107g，0.341mmol)溶于二氯甲烷/二甲基甲酰胺(5∶1，20ml)中。加入1-羟基苯并三唑(0.046g，0.341mmol)和N-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.071g，0.369mmol)。室温下搅拌反应混合物15分钟，加入2-((1R)-1-氨基-2-(2-萘基)乙基)-5-苯基-1，3-噻唑-4-羧酸酰胺(0.106g，0.284mmol)。室温下搅拌反应混合物12小时，用水(20ml)、硫酸氢钠(10％，20ml)、碳酸氢钠(饱和，20ml)、水(20ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，残余物在硅胶(2×15cm)上层析，乙酸乙酯/庚烷(2∶1)洗脱，得到0.22g((1R)-1-((1R)-1-(4-氨基甲酰基-5-苯基-1，3-噻唑-2-基)-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酸叔丁酯。
1H-NMR(CDCl3)(选择的峰)δ1.32(s，9H)；3.13-3.41(m，4H)；4.42(dd，1H)；5.56(dd，1H).
2-((1R)-1-((2R)-2-氨基-3-(2-萘基)丙酰基氨基)-2-(2-萘基)乙基)-5-苯基-1，3-噻唑-4-羧酸酰胺
将((1R)-1-((1R)-1-(4-氨基甲酰基-5-苯基-1，3-噻唑-2-基)-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酸叔丁酯(0.22g，0.328mmol)溶于二氯甲烷(2.5ml)，加入三氟乙酸(2.5ml)。室温下搅拌反应混合物1小时，真空除去溶剂。将残余物溶解在二氯甲烷中并蒸发(2×5ml)。残余物溶于二氯甲烷(10ml)，用碳酸氢钠(饱和，10ml)，水(10ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，得到0.155g 2-((1R)-1-((2R)-2-氨基-3-(2-萘基)丙酰基氨基)-2-(2-萘基)乙基)-5-苯基-1，3-噻唑-4-羧酸酰胺
H-NMR (CDCl3)δ2.55(dd，1H)；3.22(dd，1H)；3.40(dd，1H)；3.52(dd，1H)；3.69(dd，1H)；5.53(s(br)，1H)；5.67(dd，1H)；7.13-8.12(m，22H).
4-(((1R)-1-((1R)-1-(4-氨基甲酰基-5-苯基-1，3-噻唑-2-基)-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯
将N-叔丁氧羰基哌啶-4-羧酸(0.140g，0.612mmol)溶于二氯甲烷(5ml)，加入N-(3-二甲氨基丙基)-N’-乙基碳化二亚胺盐酸盐(0.058g，0.306mmol)。室温下搅拌反应混合物15分钟。将2-((1R)-1-((2R)-2-(氨基-3-(2-萘基)丙酰基氨基)-2-(2-萘基)乙基)-5-苯基-1，3-噻唑-4-羧酸酰胺(0.155g，0.278mmol)溶于二氯甲烷(10ml)中，并加入到反应混合物中。室温下搅拌8小时，用水(20ml)、碳酸氢钠(饱和，20ml)洗涤，用硫酸镁干燥。真空除去溶剂，残余物在硅胶(2.5×30cm)上层析，用乙酸乙酯洗脱，得到0.171g 4-(((1R)-1-((1R)-1-(4-氨基甲酰基-5-苯基-1，3-噻唑-2-基)-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯。
1H-NMR(CDCl3)(选择的峰)δ1.44(s，9H)；2.81(t，1H)；3.12(m，2H)；3.42(dd，1H)；3.85-4.02(m，4H)；4.88(dd，1H)；5.52(dd，1H)；
将4-(((1R)-1-((1R)-1-(4-氨基甲酰基-5-苯基-1，3-噻唑-2-基)-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酰基)哌啶-1-羧酸叔丁酯(0.171g，0.219mmol)溶于二氯甲烷/三氟乙酸(1∶1，10ml)中，室温下搅拌20分钟。真空除去溶剂，残余物溶于二氯甲烷并真空蒸发计三次(3×5ml)，得到0.175g标题化合物。
1H-NMR(CDCl3)(选择的峰)δ3.37(m，2H)；3.44(dd；1H)；4.80(m，1H)；5.55(dd，1H).
ESMS：(M+H)+：682.4
HPLC：(方法B)：Rt＝35.08min.
按实施例21的相同方法，用甲基胺代替苄基胺，可制备下述化合物：
(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸{1-[N-(1-(3-甲基氨基甲酰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基)-N-甲基氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基}酰胺
按实施例21的相同方法，用二甲基胺代替苄基胺，可制备下述化合物：
(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸{1-[N-(1-(3-二甲基氨基甲酰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基)-N-甲基氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基}酰胺
Figure C9619218401541
按实施例K的方法，类似于实施例23但用(2E)-5-叔丁氧羰基氨基-5-甲基己-2-酸代替3-叔丁氧羰基氨基甲基苯甲酸，可制备下述化合物：
(2E)-5-氨基-5-甲基-N-((1R)-1-(N-((1R)-1-(2-羟基乙氧基甲基)-2-苯乙基)-N-甲基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基己-2-烯酸酰胺
Figure C9619218401542
类似于实施例23，但用甲基溴化镁代替硼氢化锂、用(2E)-5-叔丁氧羰基氨基-5-甲基己-2-酸代替3-叔丁氧羰基氨基甲基苯甲酸，可制备下述化合物：
(2E)-5-氨基-5-甲基-N-((1R)-1-(N-((1R)-1-(2-羟基-2-羟基丙氧基甲基)-2-苯乙基)-N-甲基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基己-2-烯酸
Figure C9619218401551

Claims (18)

1.通式I化合物或其药用盐，
其中
n为0或1；
m为1；
p为1；
A为
Figure C961921840002C2
其中R1为氢或甲基，
W为＝O；
B为
Figure C961921840002C3
其中R2为氢或甲基，
W′为＝O；
D为
或
其中R5、R6、R7和R8独立地为氢或甲基；
M为-CH＝CH-，或
Figure C961921840003C1
o为0；
q和s为1；
r为0；
t为0或1；
且r+s+t为1或2；
E为氢，
或
Figure C961921840003C3
其中
R11是苯乙基；
R12是氢，-COOR15，-CONR16R17或甲基；
R14是苯基或-CONR16R17；
R15是氢，甲基，乙基或异丙基；
R16和R17独立地是氢或任选由苯基取代的C1-6烷基；
K为氢；
L为-CONR9R10或任选被羟基取代的C1-6烷基；
R9和R10是甲基；
F为
或
Figure C961921840003C5
其中R23为氢或甲基，
W″为＝S；
G为
Figure C961921840004C1
或
Figure C961921840004C2
J为
Figure C961921840004C3
该通式I化合物包括其分离的、纯的或部分纯化形式的任何光学异构体或其外消旋混合物。
2.权利要求1的化合物或其药用盐，其中D为
Figure C961921840004C4
其中R5，R6，R7，R8，M，r，s，t，q，o如权利要求1中的定义。
3.根据权利要求1的式I化合物或其药用盐，其中E为
或
其中R11，R12和R14如权利要求1中的定义。
4.根据权利要求1的式I化合物或其药用盐，包括其分离的、纯的或部分纯化形式的任何光学异构体或其外消旋混合物，其中所述化合物选自：哌啶-4-羧酸(1-{[1-(3-氨基甲酰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基)酰胺，
5-{(1R)-1-[(2R)-2-(哌啶-4-羰基氨基)-3-(2-萘基)丙酰基-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯，
5-{1-[2-(3-氨基甲基苯甲酰基氨基)-3-(2-萘基)丙酰基-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯，
5-{(1R)-1-[(2R)-2-(3-氨基甲基苯甲酰氨基)-3-(2-萘基)丙酰基氨基]-2-苯乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸乙酯，或其三氟乙酸盐，
哌啶-4-羧酸N-[(1R)-1-{(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基]酰胺，3-氨基甲基-N-[(1R)-1-{(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基]苯甲酰胺，
4-氨基-4-甲基戊-2-烯酸[(1R)-1-{(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基]酰胺，
(3R)哌啶-3-羧酸[(1R)-1-((1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基)酰胺，
(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸{(1R)-1-[N-甲基-N-((1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)-乙基)氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基}酰胺，
(2E)-4-氨基-4-甲基戊-2-烯酸N-[(1R)-1-{N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)-乙基]氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基]]-N-甲基酰胺，
4-氨基-4-甲基戊-2-烯酸[(1R)-1-{N-甲基-N-[(1R)-1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基)氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基}酰胺，
3-氨基甲基-N-((1R)-1-{N-((1R)-1-(((二甲基氨基甲酰基)甲氧基)甲基)-2-苯基乙基)-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基}-N-甲基苯甲酰胺，
5-((1R)-1-(((2R)-2-(((2E)-4-氨基-4-甲基戊-2-烯酰基)甲基氨基)-3-(2-萘基)丙酰基)甲基氨基)-2-苯基乙基)-[1，3，4]噁二唑-2-羧酸酰胺，
哌啶-4-羧酸N-甲基-N-{1-(甲基-[1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)-乙基)}酰胺，
哌啶-4-羧酸N-{1-(N-甲基-N-[1-(3-甲基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基])氨基甲酰基}-2-(2-萘基)-乙基}}酰胺，
5-{1-[N-(2-(哌啶-4-羰基氨基)-3-(2-萘基)丙酰基)-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸2-丙基酯，
5-{1-[N-(2-(哌啶-4-羰基氨基)-3-(2-萘基)丙酰基)-N-甲基氨基]-2-(2-萘基)乙基}-[1，2，4]噁二唑-3-羧酸，三氟乙酸盐，
哌啶-4-羧酸(1-{N-[1-(3-甲基氨基甲酰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-(2-萘基)乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基}酰胺，
(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸{1-[N-(1-(3-苄基氨基甲酰基-[1，2，4]噁二唑-5-基)-2-苯乙基)-N-甲基氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基}酰胺，
(2E)-5-氨基-5-甲基己-2-烯酸N-{(1R)-1-[((1R)-1-苄基-2，5-二羟基戊基)-N-甲基氨基甲酰基]-2-(2-萘基)乙基}-N-甲基酰胺，
3-氨基甲基-N-((1R)-1-{N-[(1R)-1-(2-羟基乙氧基甲基)-2-苯乙基]-N-甲基氨基甲酰基}-2-(2-萘基)乙基)-N-甲基苯甲酰胺，
哌啶-4-羧酸((1R)-2-(2-萘基)-1-((1R)-2-(2-萘基)-1-(1-苯乙基-1H-四唑-5-基)乙基氨基甲酰基)乙基)酰胺，
哌啶-4-羧酸N-甲基-N-((1R)-2-(2-萘基)-1-((1R)-2-(2-萘基)-1-硫代氨基甲酰基乙基氨基甲酰基)乙基)酰胺，
哌啶-4-羧酸((1R)-1-((1R)-1-(4-氨基甲酰基-5-苯基-1，3-噻唑-2-基)-2-(2-萘基)乙基氨基甲酰基)-2-(2-萘基)乙基)酰胺，
和其药用盐。
5.根据权利要求1的化合物或其药用盐，具有如下通式，
Figure C961921840007C1
其中D、J、R1、G和R12如权利要求1中所定义；所述化合物包括其分离的、纯的或部分纯化形式的任何光学异构体或其外消旋混合物。
6.根据权利要求5的化合物或其药用盐，其中
D为
Figure C961921840007C2
其中R5，R6，R7，R8，M，r，s，t，q，o如权利要求1中的定义。
7.根据权利要求1的化合物或其药用盐，具有如下通式：
其中D、R2、J、R1、G、R9、R10和p如权利要求1中所定义；所述化合物包括其分离的、纯的或部分纯化形式的任何光学异构体或其外消旋混合物。
8.根据权利要求7的化合物或其药用盐，其中
D为
Figure C961921840008C2
其中R5，R6，R7，R8，M，r，s，t，q，o如权利要求1中的定义。
9.根据权利要求1的化合物或其药用盐，具有如下通式：
其中D、R2、J、R1、G和p如权利要求1中所定义；所述化合物包括其分离的、纯的或部分纯化形式的任何光学异构体或其外消旋混合物。
10.根据权利要求9的化合物或其药用盐，其中
D为
Figure C961921840008C4
其中R5，R6，R7，R8，M，r，s，t，q，o如权利要求1中的定义。
11.根据权利要求1的化合物或其药用盐，具有如下通式：
Figure C961921840009C1
其中D、R2、J、R1、G和p如权利要求1中所定义；所述化合物包括其分离的、纯的或部分纯化形式的任何光学异构体或其外消旋混合物。
12.根据权利要求11的化合物，其中
D为
其中R5，R6，R7，R8，M，r，s，t，q，o如权利要求1中的定义。
13.根据权利要求1的化合物或其药用盐，具有如下通式：
Figure C961921840009C3
其中D、R2、J、R1、G和p如权利要求1中所定义；所述化合物包括其分离的、纯的或部分纯化形式的任何光学异构体或其外消旋混合物。
14.根据权利要求13的化合物，其中
D为
Figure C961921840009C4
其中R5，R6，R7，R8，M，r，s，t，q，o如权利要求1中的定义。
15.含有作为活性成分的权利要求1-14任一项的化合物或其药用盐及药用载体或稀释剂的药物组合物。
16.根据权利要求15的药物组合物，为单位剂量形式，其中含有10-200mg所述化合物或其药用盐。
17.权利要求1-14中任一项的化合物或其药用盐在制备用于刺激脑垂体释放生长激素的药物中的用途。
18.权利要求1-14中任一项的化合物或其药用盐在制备用于给予动物以提高其生长速度和程度、提高其奶和毛产量或治疗需要提高血浆生长激素水平的疾病的药物中的用途。
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Families Citing this family (52)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5798337A (en) * 1994-11-16 1998-08-25 Genentech, Inc. Low molecular weight peptidomimetic growth hormone secretagogues
US20020111461A1 (en) 1999-05-21 2002-08-15 Todd C. Somers Low molecular weight peptidomimetic growth hormone secretagogues
ID18218A (id) 1995-01-27 1998-03-19 Novo Nordisk As Senyawa dengan sifat-sifat pelepas hormon pertumbuhan
ES2323159T3 (es) * 1995-12-22 2009-07-07 Novo Nordisk A/S Compuestos con propiedades de liberacion de la hormona del crecimiento.
TW432073B (en) * 1995-12-28 2001-05-01 Pfizer Pyrazolopyridine compounds
US6451970B1 (en) 1996-02-21 2002-09-17 Novo Nordisk A/S Peptide derivatives
EP0923539B1 (en) 1996-07-22 2002-06-05 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
US6127341A (en) * 1997-06-20 2000-10-03 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
AU7906998A (en) 1997-06-20 1999-01-04 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
BR9906975A (pt) 1998-01-16 2000-10-17 Novo Nordisk As Composto, uso do mesmo, composição farmacêutica, e, processo para estimular a liberação do hormÈnio do crescimento pela pituitária de um mamìfero
US6506782B1 (en) 1998-02-27 2003-01-14 Athena Neurosciences, Inc. Heterocyclic compounds, pharmaceutical compositions comprising same, and methods for inhibiting β-amyloid peptide release and/or its synthesis by use of such compounds
US6919315B1 (en) 1998-06-30 2005-07-19 Novo Nordisk A/S Compounds with growth hormone releasing properties
US6380184B1 (en) 1998-10-28 2002-04-30 Bristol-Myers Squibb Co. Benzoazepines and analogs thereof useful as growth hormone secretagogues
WO2000025768A1 (en) * 1998-10-29 2000-05-11 Trega Biosciences, Inc. Oxadiazole, thiadiazole and triazole derivatives and combinatorial libraries thereof
CA2362290A1 (en) 1999-02-18 2000-08-24 Kaken Pharmaceutical Co., Ltd. Novel amide derivatives as growth hormone secretagogues
US6518292B1 (en) 1999-03-12 2003-02-11 Bristol-Myers Squibb Co. Heterocyclic aromatic compounds usefuls as growth hormone secretagogues
US6525203B1 (en) 1999-03-12 2003-02-25 Bristol-Myers Squibb Company Heterocyclic aromatic compounds useful as growth hormone secretagogues
US6992081B2 (en) 2000-03-23 2006-01-31 Elan Pharmaceuticals, Inc. Compounds to treat Alzheimer's disease
ATE343562T1 (de) 2000-03-23 2006-11-15 Elan Pharm Inc Verbindungen und verfahren zur behandlung der alzheimerschen krankheit
ES2252230T3 (es) 2000-05-11 2006-05-16 Bristol-Myers Squibb Company Analogos de tetrahidroisoquinolina utiles como secretores de la hormona del crecimiento.
ATE446758T1 (de) 2000-05-31 2009-11-15 Pfizer Prod Inc Verwendung von wachstumshormonsekretagoga zur förderung der beweglichkeit des verdauungstrakts
EP1666452A2 (en) 2000-06-30 2006-06-07 Elan Pharmaceuticals, Inc. Compounds to treat Alzheimer's disease
US6846813B2 (en) * 2000-06-30 2005-01-25 Pharmacia & Upjohn Company Compounds to treat alzheimer's disease
CN1217920C (zh) 2000-06-30 2005-09-07 艾兰制药公司 治疗早老性痴呆的化合物
PE20020276A1 (es) 2000-06-30 2002-04-06 Elan Pharm Inc COMPUESTOS DE AMINA SUSTITUIDA COMO INHIBIDORES DE ß-SECRETASA PARA EL TRATAMIENTO DE ALZHEIMER
US20030096864A1 (en) * 2000-06-30 2003-05-22 Fang Lawrence Y. Compounds to treat alzheimer's disease
MXPA04000140A (es) * 2001-06-27 2004-06-03 Elan Pharm Inc Derivados de beta-hidroxiamina utiles en el tratamiento de enfermedad de alzheimer.
US20070213407A1 (en) * 2001-06-29 2007-09-13 Elan Pharmaceuticals And Pharmacia & Upjohn Company Llc Compounds to treat Alzheimer's disease
AU2002357692A1 (en) 2001-11-09 2003-05-26 Bristol-Myers Squibb Company Tetrahydroisoquinoline analogs as modulators of chemokine receptor activity
CA2477604A1 (en) 2002-03-13 2003-09-25 Signum Biosciences, Inc. Modulation of protein methylation and phosphoprotein phosphate
MY139563A (en) 2002-09-04 2009-10-30 Bristol Myers Squibb Co Heterocyclic aromatic compounds useful as growth hormone secretagogues
US7476653B2 (en) 2003-06-18 2009-01-13 Tranzyme Pharma, Inc. Macrocyclic modulators of the ghrelin receptor
WO2005027913A1 (en) * 2003-09-19 2005-03-31 Pfizer Products Inc. Pharmaceutical compositions and methods comprising combinations of 2-alkylidene-19-nor-vitamin d derivatives and a growth hormone secretagogue
AU2012202459B2 (en) * 2004-03-15 2014-06-12 Janssen Pharmaceutica, N.V. Novel compounds as opioid receptor modulators
AU2013205089B2 (en) * 2004-03-15 2013-12-19 Janssen Pharmaceutica, N.V. Novel compounds as opioid receptor modulators
SI1725537T1 (sl) * 2004-03-15 2011-11-30 Janssen Pharmaceutica Nv Nove spojine kot modulatorji opioidnih receptorjev
WO2005112903A2 (en) * 2004-05-14 2005-12-01 Novo Nordisk A/S Use of ghrelin antagonists for improving cognition and memory
AU2005277389A1 (en) 2004-08-18 2006-03-02 Elixir Pharmaceuticals, Inc. Growth-hormone secretagogues
US8221804B2 (en) * 2005-02-03 2012-07-17 Signum Biosciences, Inc. Compositions and methods for enhancing cognitive function
US7923041B2 (en) 2005-02-03 2011-04-12 Signum Biosciences, Inc. Compositions and methods for enhancing cognitive function
CA2601674A1 (en) * 2005-03-14 2006-09-21 Janssen Pharmaceutica N.V. Process for the preparation of opioid modulators
CU23558A1 (es) 2006-02-28 2010-07-20 Ct Ingenieria Genetica Biotech Compuestos análogos a los secretagogos peptidicos de la hormona de crecimiento
EP2118080B1 (en) 2007-02-09 2016-08-31 Ocera Therapeutics, Inc. Macrocyclic ghrelin receptor modulators and methods of using the same
WO2009132051A1 (en) 2008-04-21 2009-10-29 Signum Biosciences, Inc. Compounds, compositions and methods for making the same
WO2013190520A2 (en) 2012-06-22 2013-12-27 The General Hospital Corporation Gh-releasing agents in the treatment of vascular stenosis and associated conditions
US20140315795A1 (en) 2012-10-26 2014-10-23 Nlife Therapeutics, S.L. Compositions and Methods for Selective Delivery of Oligonucleotide Molecules to Cell Types
US9675587B2 (en) 2013-03-14 2017-06-13 Allergan Holdings Unlimited Company Opioid receptor modulator dosage formulations
US9119832B2 (en) 2014-02-05 2015-09-01 The Regents Of The University Of California Methods of treating mild brain injury
WO2015138882A1 (en) 2014-03-14 2015-09-17 Aerpio Therapeutics, Inc. Hptp-beta inhibitors
WO2017075535A1 (en) 2015-10-28 2017-05-04 Oxeia Biopharmaceuticals, Inc. Methods of treating neurodegenerative conditions
WO2018047139A1 (en) * 2016-09-12 2018-03-15 Aurigene Discovery Technologies Limited Compounds as modulators of tigit signalling pathway
CN114901278A (zh) 2019-10-29 2022-08-12 视点制药公司 Tie-2的小分子激活剂

Family Cites Families (6)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
SK281963B6 (sk) * 1993-12-23 2001-09-11 Novo Nordisk A/S Zlúčeniny ovplyvňujúce uvoľňovanie rastového hormónu, farmaceutické prostriedky s ich obsahom a ich použitie
US5618792A (en) * 1994-11-21 1997-04-08 Cortech, Inc. Substituted heterocyclic compounds useful as inhibitors of (serine proteases) human neutrophil elastase
ID18218A (id) 1995-01-27 1998-03-19 Novo Nordisk As Senyawa dengan sifat-sifat pelepas hormon pertumbuhan
US5559128A (en) * 1995-04-18 1996-09-24 Merck & Co., Inc. 3-substituted piperidines promote release of growth hormone
ES2323159T3 (es) 1995-12-22 2009-07-07 Novo Nordisk A/S Compuestos con propiedades de liberacion de la hormona del crecimiento.
US5804578A (en) * 1996-04-03 1998-09-08 Merck & Co., Inc. Piperidines, pyrrolidines and hexahydro-1H-azepines promote release of growth hormone

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