CN1267447C - 离析核酸的方法 - Google Patents

离析核酸的方法 Download PDF

Info

Publication number
CN1267447C
CN1267447C CNB031066364A CN03106636A CN1267447C CN 1267447 C CN1267447 C CN 1267447C CN B031066364 A CNB031066364 A CN B031066364A CN 03106636 A CN03106636 A CN 03106636A CN 1267447 C CN1267447 C CN 1267447C
Authority
CN
China
Prior art keywords
particle
nucleic acid
sample
magnetic
fluid
Prior art date
Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
Expired - Lifetime
Application number
CNB031066364A
Other languages
English (en)
Other versions
CN1439646A (zh
Inventor
J·克莱恩
T·沃尔特
H·哈尔蒂希
C·列斯尼亚克
M·梅恩伊格
M·里德林
H·施密特
Current Assignee (The listed assignees may be inaccurate. Google has not performed a legal analysis and makes no representation or warranty as to the accuracy of the list.)
Roche Diagnostics GmbH
Original Assignee
Boehringer Mannheim GmbH
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=34426455&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=CN1267447(C) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Boehringer Mannheim GmbH filed Critical Boehringer Mannheim GmbH
Publication of CN1439646A publication Critical patent/CN1439646A/zh
Application granted granted Critical
Publication of CN1267447C publication Critical patent/CN1267447C/zh
Anticipated expiration legal-status Critical
Expired - Lifetime legal-status Critical Current

Links

Images

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
    • C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
    • C03C3/00—Glass compositions
    • C03C3/04—Glass compositions containing silica
    • C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
    • C03C3/11—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing halogen or nitrogen
    • C03C3/111—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing halogen or nitrogen containing nitrogen
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B03—SEPARATION OF SOLID MATERIALS USING LIQUIDS OR USING PNEUMATIC TABLES OR JIGS; MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
    • B03C—MAGNETIC OR ELECTROSTATIC SEPARATION OF SOLID MATERIALS FROM SOLID MATERIALS OR FLUIDS; SEPARATION BY HIGH-VOLTAGE ELECTRIC FIELDS
    • B03C1/00—Magnetic separation
    • B03C1/005—Pretreatment specially adapted for magnetic separation
    • B03C1/01—Pretreatment specially adapted for magnetic separation by addition of magnetic adjuvants
    • B—PERFORMING OPERATIONS; TRANSPORTING
    • B82—NANOTECHNOLOGY
    • B82Y—SPECIFIC USES OR APPLICATIONS OF NANOSTRUCTURES; MEASUREMENT OR ANALYSIS OF NANOSTRUCTURES; MANUFACTURE OR TREATMENT OF NANOSTRUCTURES
    • B82Y25/00—Nanomagnetism, e.g. magnetoimpedance, anisotropic magnetoresistance, giant magnetoresistance or tunneling magnetoresistance
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
    • C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
    • C03C3/00—Glass compositions
    • C03C3/04—Glass compositions containing silica
    • C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
    • C03C3/078—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing an oxide of a divalent metal, e.g. an oxide of zinc
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
    • C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
    • C03C3/00—Glass compositions
    • C03C3/04—Glass compositions containing silica
    • C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
    • C03C3/083—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing aluminium oxide or an iron compound
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
    • C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
    • C03C3/00—Glass compositions
    • C03C3/04—Glass compositions containing silica
    • C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
    • C03C3/083—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing aluminium oxide or an iron compound
    • C03C3/085—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing aluminium oxide or an iron compound containing an oxide of a divalent metal
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
    • C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
    • C03C3/00—Glass compositions
    • C03C3/04—Glass compositions containing silica
    • C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
    • C03C3/083—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing aluminium oxide or an iron compound
    • C03C3/085—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing aluminium oxide or an iron compound containing an oxide of a divalent metal
    • C03C3/087—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing aluminium oxide or an iron compound containing an oxide of a divalent metal containing calcium oxide, e.g. common sheet or container glass
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
    • C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
    • C03C3/00—Glass compositions
    • C03C3/04—Glass compositions containing silica
    • C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
    • C03C3/089—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing boron
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
    • C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
    • C03C3/00—Glass compositions
    • C03C3/04—Glass compositions containing silica
    • C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
    • C03C3/089—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing boron
    • C03C3/091—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing boron containing aluminium
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
    • C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
    • C03C3/00—Glass compositions
    • C03C3/04—Glass compositions containing silica
    • C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
    • C03C3/102—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing lead
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
    • C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
    • C03C3/00—Glass compositions
    • C03C3/04—Glass compositions containing silica
    • C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
    • C03C3/102—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing lead
    • C03C3/105—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing lead containing aluminium
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C03—GLASS; MINERAL OR SLAG WOOL
    • C03C—CHEMICAL COMPOSITION OF GLASSES, GLAZES OR VITREOUS ENAMELS; SURFACE TREATMENT OF GLASS; SURFACE TREATMENT OF FIBRES OR FILAMENTS MADE FROM GLASS, MINERALS OR SLAGS; JOINING GLASS TO GLASS OR OTHER MATERIALS
    • C03C3/00—Glass compositions
    • C03C3/04—Glass compositions containing silica
    • C03C3/076—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight
    • C03C3/102—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing lead
    • C03C3/108—Glass compositions containing silica with 40% to 90% silica, by weight containing lead containing boron
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
    • C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/10—Processes for the isolation, preparation or purification of DNA or RNA
    • C12N15/1003—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor
    • C12N15/1006—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers
    • C12N15/1013—Extracting or separating nucleic acids from biological samples, e.g. pure separation or isolation methods; Conditions, buffers or apparatuses therefor by means of a solid support carrier, e.g. particles, polymers by using magnetic beads
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6804—Nucleic acid analysis using immunogens
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6806—Preparing nucleic acids for analysis, e.g. for polymerase chain reaction [PCR] assay
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12Q—MEASURING OR TESTING PROCESSES INVOLVING ENZYMES, NUCLEIC ACIDS OR MICROORGANISMS; COMPOSITIONS OR TEST PAPERS THEREFOR; PROCESSES OF PREPARING SUCH COMPOSITIONS; CONDITION-RESPONSIVE CONTROL IN MICROBIOLOGICAL OR ENZYMOLOGICAL PROCESSES
    • C12Q1/00—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions
    • C12Q1/68—Measuring or testing processes involving enzymes, nucleic acids or microorganisms; Compositions therefor; Processes of preparing such compositions involving nucleic acids
    • C12Q1/6813—Hybridisation assays
    • C12Q1/6834—Enzymatic or biochemical coupling of nucleic acids to a solid phase
    • H—ELECTRICITY
    • H01—ELECTRIC ELEMENTS
    • H01F—MAGNETS; INDUCTANCES; TRANSFORMERS; SELECTION OF MATERIALS FOR THEIR MAGNETIC PROPERTIES
    • H01F1/00—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties
    • H01F1/0036—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties showing low dimensional magnetism, i.e. spin rearrangements due to a restriction of dimensions, e.g. showing giant magnetoresistivity
    • H01F1/0045—Zero dimensional, e.g. nanoparticles, soft nanoparticles for medical/biological use
    • H01F1/0063—Zero dimensional, e.g. nanoparticles, soft nanoparticles for medical/biological use in a non-magnetic matrix, e.g. granular solids
    • H—ELECTRICITY
    • H01—ELECTRIC ELEMENTS
    • H01F—MAGNETS; INDUCTANCES; TRANSFORMERS; SELECTION OF MATERIALS FOR THEIR MAGNETIC PROPERTIES
    • H01F1/00—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties
    • H01F1/01—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials
    • H01F1/03—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials characterised by their coercivity
    • H01F1/032—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials characterised by their coercivity of hard-magnetic materials
    • H01F1/10—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials characterised by their coercivity of hard-magnetic materials non-metallic substances, e.g. ferrites, e.g. [(Ba,Sr)O(Fe2O3)6] ferrites with hexagonal structure
    • H01F1/11—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials characterised by their coercivity of hard-magnetic materials non-metallic substances, e.g. ferrites, e.g. [(Ba,Sr)O(Fe2O3)6] ferrites with hexagonal structure in the form of particles
    • H01F1/112—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials characterised by their coercivity of hard-magnetic materials non-metallic substances, e.g. ferrites, e.g. [(Ba,Sr)O(Fe2O3)6] ferrites with hexagonal structure in the form of particles with a skin
    • H—ELECTRICITY
    • H01—ELECTRIC ELEMENTS
    • H01F—MAGNETS; INDUCTANCES; TRANSFORMERS; SELECTION OF MATERIALS FOR THEIR MAGNETIC PROPERTIES
    • H01F1/00—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties
    • H01F1/01—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials
    • H01F1/03—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials characterised by their coercivity
    • H01F1/12—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials characterised by their coercivity of soft-magnetic materials
    • H01F1/34—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials characterised by their coercivity of soft-magnetic materials non-metallic substances, e.g. ferrites
    • H01F1/36—Magnets or magnetic bodies characterised by the magnetic materials therefor; Selection of materials for their magnetic properties of inorganic materials characterised by their coercivity of soft-magnetic materials non-metallic substances, e.g. ferrites in the form of particles
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S428/00—Stock material or miscellaneous articles
    • Y10S428/90—Magnetic feature
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
    • Y10S435/814—Enzyme separation or purification
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10T—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER US CLASSIFICATION
    • Y10T428/00—Stock material or miscellaneous articles
    • Y10T428/29—Coated or structually defined flake, particle, cell, strand, strand portion, rod, filament, macroscopic fiber or mass thereof
    • Y10T428/2982—Particulate matter [e.g., sphere, flake, etc.]
    • Y10T428/2991—Coated
    • Y10T428/2993—Silicic or refractory material containing [e.g., tungsten oxide, glass, cement, etc.]
    • Y10T428/2996—Glass particles or spheres

Abstract

本发明涉及一种一种离析核酸的方法，它包括使流体中含有天然形态核酸的试样与具有玻璃表面的磁性颗粒，在核酸能直接结合到玻璃表面上去的条件下接触，该玻璃表面基本上无孔或有直径小于10nm的孔，和从流体中分离结合的核酸。

Description

离析核酸的方法
本发明涉及具有玻璃表面的磁性颗粒，以及使用玻璃颗粒在离液序列高的盐存在条件下纯化生物物质，特别是核酸的方法。本发明还涉及离析这些生物物质的方法以及浓缩生物物质并将其从高浓度盐溶液转移到低浓度盐溶液的方法。
许多生物物质，特别是核酸，要从其自然环境中将它们离析出来存在着特殊的困难。一方面，它们常以非常低的浓度存在，另一方面，它们经常与许多其它固体和溶解物质一起存在，使它们难以被离析或测量。
因为这个原因，近年来提出了许多方法和材料用于把核酸从其自然环境中离析出来。例如在Proc.Natl.Acad.USA 76，615-691(1979)中提出了把琼脂糖凝胶中的核酸在碘化钠存在下结合到磨碎的火石玻璃上的方法。
在高氯酸钠存在条件下，在玻璃粉上纯化DNA质粒以去除细菌的方法。在Anal.Biochem.121，382-387(1982)上有介绍。
在DE-A 37 34 442中介绍了用醋酸通过噬菌体颗粒沉淀把单旋M13噬菌体的DNA离析到玻璃纤维过滤器上并用高氯酸裂解这些噬菌体颗粒。结合到玻璃纤维过滤器上的核酸经洗涤后用含薄荷醇缓冲液洗脱到三甲醇氨基甲烷/乙二胺四乙酸缓冲液中。
从λ噬菌体中纯化DNA的类似方法在Anal.Biochem.175，196-201(1988)有介绍。
按过去已知的方法，核酸必须在离液序列高的盐溶液中有选择地结合到玻璃表面并且把核酸与污染物如琼脂糖，蛋白质或细胞碎片分离。按照过去的方法，为把玻璃颗粒与污染物分离，如是颗粒则通过离心分离，如是液体则通过玻璃纤维过滤器滤出。但是这是一个卡关的步骤，它限制了这些方法用于处理大量样品。
通过加入盐和乙醇产生沉淀后，用磁性颗粒来固定核酸的方法在Anal.Biochem.201，166-169(1992)和PCT GB 91/00212有介绍。在这个方法中核酸随磁性颗粒被凝集。通过加磁场并进行一次洗涤把凝集物和原始溶剂分离。经一次洗涤后，核酸被溶于三甲醇氨基甲烷缓冲液中。但是此法有缺点，其中沉淀作用对核酸不是选择的。而是许多固体和溶解物质也被凝集出来。结果，这种方法不能用来去除可能存在的特定酶反应的大量抑制剂。
一种有磁性颗粒埋置其中的多孔玻璃在US-A-4,233,169中有介绍。
磁性多孔玻璃在市场上可以买到，它在多孔的特种玻璃基体中包容磁性颗粒，并带有含链酶抗生物素的包复层。这种产品可以用来离析生物物质，例如蛋白质或核酸，如果在络合物制备时对其作些修饰，则可以共价结合到生物素上。
本发明的任务是提供更好的材料来固定生物物质以及一种简单的方法来离析生物物质，特别是核酸，它也适用于常规诊断过程。
本发明主要涉及具有基本上无孔或孔径小于10nm的玻璃外表面的磁性颗粒。本发明还涉及具有玻璃表面的铁磁颗粒，一种离析生物物质特别是核酸的方法，以及一种制备磁性玻璃颗粒的方法。
按照专家的说法，颗粒是直径小的固体材料。这里谈到的颗粒也常称为色素。按照本发明，平均颗粒尺寸小于100μm的颗粒特别适用。更为适用的是平均颗粒尺寸10-60μm的颗粒。颗粒尺寸的分布最好较均匀。特别是不含尺寸＜10μm或＞60μm的颗粒。
会受磁体吸引的材料被认为是磁性的，例如铁磁或超顺磁材料。此外，被叫做软磁的那些材料也被认为是磁性的，如铁素体。按照本发明特别优选的是铁磁材料，特别是它们还没有被预磁化过。在这里预磁化意指与磁体接触，从而增加了剩磁。特别优选的是铁磁材料，如磁铁矿(Fe3O4)或Fe2O3。
颗粒的外表面意指邻接的表面，从表面向颗粒外面的环境画垂线，它不穿会过颗粒自己。
孔就是颗粒外表面的凹进处。该表面一直深达颗粒的这个位置，即在凹进处表面向颗粒相邻环境画的垂线至少穿过该颗粒一次。此外，孔深达颗粒内的深度大于孔的半径。
按照本发明的玻璃就是一种包含硅的非晶形材料。玻璃可以包含其它材料如下：
B2O3                (0-30％)
Al2O3               (0-20％)
CaO                    (0-20％)
BaO                  (0-10％)
K2O                 (0-20％)
Na2O                (0-20％)
MgO                  (0-18％)
Pb2O3              (0-15％)
玻璃还可以包含较小百分数(0-5％)的许多其它氧化物如Mn2O3，TiO2，As2O3，Fe2O3，CuO，CoO等。由硼硅酸盐玻璃，火石玻璃或二氧化硅组成的表面被证实特别有效。根据核酸的收率，特别优选的是硼硅酸盐玻璃，其氧化硼含量超过25％。SiO2/B2O3成分为70/30的玻璃是特别优选的。按照本发明特别优选的是用溶胶凝胶法成型然后干燥和压缩的玻璃。这种方法的基本原理是已知的，并有有所报道，例如C.J.Brinker，G.W.Scherer“溶胶凝胶科学-溶胶凝胶工艺的物理化学”，AcadamicPress Inc.1990，溶胶凝胶光学，工艺和应用，Lisa C.Klein，Ed.，Kluwer Academic Publishers 1994，p.450 ff.，和DE-A-1941191，DE-A-3719339，DE-A-4117041和DE-A-4217432.但是到目前为止，磁性颗粒的原理尚未有报道。但是这种方法可以用来创造一种磁性颗粒，当用它们来离析生物物质特别是核酸时所具有的令人惊奇的特性是没有预计到的。在凝胶溶胶法中，构成骨架的成分，如SiO2，B2O3，Al2O3，TiO2，ZrO2，GeO2的醇盐与其它组分如在酒精溶液中的氧化物和盐化合，然后被水解。下面的方程描写了制备硼铝硅酸钠玻璃的方法：
加入水以使起始的组分开始水解。因为碱性离子对硅酸酯的水解速度有催化作用，所以反应进行得相当快。一旦凝胶形成，就可以利用热处理过程进行干燥并密实以形成玻璃。
溶胶：色素的比例对本发明的磁性色素的收率有相当大的影响。比例受如下的原因限制，色素的份额必须小到所产生的浆状物仍能被泵送和喷雾。如果色素的份额太小，则粉末部分如非磁性材料变得太大并造成干扰。从色素的收率来讲，发现10-25克色素∶100毫升溶胶的比例是适用的。
为造备粉末，浆液最好通过管嘴喷雾，气溶胶在下降过程中就被干燥了。管嘴最好要加热以加速浆液的干燥。根据管嘴的尺寸，管嘴温度优选地为120-200℃。通过选用足够的蒸发速度但又避免过热可以找到折中方案。
为了收率的最佳化，密实温度应尽可能高。但是如果过高的话，颗粒会粘在一起并形成结块，它必须被筛掉。在过高的温度下对颗粒作进一步处理会造成丧失磁性。因此过高的温度应该不于考虑。
基本无孔的表面意指孔(如上所速)所占面积小于5％的表面，优选地小于2％，特别优选地小于1％。如果有孔存在，其直径最好小于10nm，特别优选地为小于1nm。
按照本发明特别优选的颗粒是含有带TiO2包层的云母核的颗粒，磁性颗粒固定在其上面。在这种设计中，形成的复合材料由玻璃层包围。核和磁性颗粒两者都是晶状无孔的。云母表面的未被磁性颗粒占据的空间由玻璃层包复，它要比磁性颗粒顶部要厚，结果基本上是一种无孔的玻璃表面。
磁性颗粒无孔性仅在外表面而不在颗粒内部。因此在颗粒内部可以有孔，只要表面基本上被无孔玻璃或带有直径小于10nm的玻璃包围。
令人惊奇地，本发明提供的磁性颗粒特别适用于把生物物质从试样中离析。特别是当长链核酸固定在上面时，它们不被破坏，或仅仅最少量地被破坏。此外，核的材料是天然的，因此不引起生态学的问题。此外，按照本发明的颗粒既便宜又容易制备。
本发明还涉及具有玻璃表面的铁磁颗粒。超顺磁颗粒早先已有报道。已经证实用玻璃表面包复的铁磁颗粒对离析生物物质表现出相当大的优越性。如果铁磁颗粒未与磁场接触，则重力是造成它们沉淀出来的唯一的力。摇晃溶液可使它们既快又容易地再悬浮起来。不利用磁场的沉淀过程最好进行得比生物物质在颗粒表面的固定要慢。对核酸来讲更是这样。利用磁场铁磁颗粒可以很容易地在试样流体中一个特定的位置收集起来。然后把流体与颗粒分离，因此也就是与固定其上的生物物质分离。
本发明提供的铁磁颗粒的玻璃表面可以是无孔或者有孔的。由于上面对本发明提供的磁性颗粒所述的原因，铁磁颗粒的外表面也是基本上无孔或者有直径小于10nm的孔。本发明提供的铁磁颗粒的尺寸在10-60μm，特别优选为20-50μm。特别优选的颗粒是其表面孔(如果有)的直径小于10nm，特别优选的为1nm。本发明铁磁颗粒的一个例子是上面所描写的由云母和磁性颗粒构成的复合材料，外面包着一层玻璃。
本发明还涉及离析生物物质的方法，此方法是通过：
-使流体中所包含生物物质的样品与本发明的磁性颗粒或本发明的铁磁颗粒接触，其条件为生物物质结合到颗粒表面上去，和
-从流体中分离出生物物质。
生物物质意指带有特定基础或分子基础的物质。它们特别包括，细胞如病毒或细菌，以及离析的人类和动物的细胞如白细胞，和免疫活性低或高的分子化学化合物如半抗原，抗原，抗体和核酸。核酸如脱氧核糖核酸或核糖核酸是特别优选的。
本发明的试样包括医学试样如血，血清，漱口水，尿液，脑液，痰液，大便，活组织样品和骨髓样品。试样也可能是用于环境分析，食品分析或分子生物学研究，例如来自细菌培育，噬菌体溶菌液和扩增过程的产物如PCR。
本发明的颗粒有一个内核，外面包了一层玻璃表面。核可以是复合材料，或者是一个简单的铁核。核可以由结晶体，陶瓷或类似玻璃的结构构成，其中埋入了氧化铁。
所描述的方法可以用来离析天然或者修饰的生物物质。天然生物物质就是一种其结构与天然存在的生物物质相比没有不可逆的改变的物质。但是这并不意味试样的其它成分不可以被修饰。举例来说，如果细胞被离析，包围细胞的介质可以修饰，但不是细胞本身。如果核酸被离析，它们应该按它们天然的形式即非变性地切割或修饰，不要把它们通过和活性基团结合进行切割或修饰。因此，天然生物物质的概念特别是不包括生物素化的核酸。天然生物物质的例子有噬菌体脱氧核糖核酸或血液细胞核酸。
修饰的生物物质包括自然界不存在的物质，例如通过接上活性的，可探测的或有固定能力的基团修饰的核酸。这种例子有生物素化的核酸。
某些情况下，按照本发明试样可以不经予处理而用于本发明的离析过程中。但是，在许多情况下试样应使用适当的方法裂解，释放包含在试样中的生物物质。专家知道裂解试样的方法，它可以是化学的，酶的或物理的。也可以是这些方法的组合。例如，可以用超声，高压，利用剪切力，用碱，洗涤剂或离液序列高的盐溶液，或者利用蛋白酶或脂肪酶。
关于用裂解得到核酸的方法，特别要引用Sambrook et al.：MolecularCloning，A Laboratory Manual，2nd Addition，Cold Spring HarbourLaboratory Press，Cold Spring Harbour，NY and Ausubel et al.：CurrentProtocols in Molecular Biology 1987，J.Viley and Sons，NY。
除了要被离析的生物物质外，试样也可能包含流体中的其它成分如细胞残基，蛋白质，盐和其它不被离析的物质。优选地包含天然形式生物物质的试样，在靶生物质可结合到颗粒表面上的条件下与颗粒接触。这个条件依赖于有关的生物物质的类型，但这基本上是已知的。它们也依赖于生物物质结合到表面上去的方法。举例来说，如果是免疫相互作用结合，则必须选择适宜于免疫络合物形成的条件。如果使用修饰的核酸，结合可以通过体现修饰的核酸基团，即生物素与链酶抗生物素包复表面来进行。但是，特别是对于核酸，优选的是核酸与玻璃直接结合，因为除了其它原因之外，核酸不必要经过修饰，甚至天然核酸也可以被结合。天然核酸与玻璃颗粒结合的方法类似于早先报道过的方法。最好在离液序列高的盐中进行，其浓度在2-8mol/l，优选地4-6mol/l。离液序列高的盐可以是碘化钠，高氯酸钠，硫氰酸胍，异硫氰酸胍或氢氯化胍。其它化合物也是可能的。
为使试样和颗粒接触，将试样和颗粒混合并培育一段足够的时间使结合发生。专家通常熟悉用非磁性颗粒处理的方法所需的培育时间。通过在不同时间点测定固定到表面的生物物质的数量可以使这一步最佳化。对核酸来讲，培育时间在10秒到30分之间是合适的。
根据磁性颗粒的尺寸和类型，颗粒可以在培育阶段从流体中分离出来，也可以让悬浮体保持较长时间不动。如果颗粒很小和超顺磁的，则悬浮体保持较长时间不变。如果颗粒尺寸大，在培育阶段颗粒会慢慢从流体中分离出来。这种性质的结块特别在涉及铁磁颗粒时会形成。当铁磁颗粒没有予磁化，这是优选的，可以保证只有轻度分离。
固定作用最好不要借助降低被固定物质的溶解度而产生沉淀的方法来进行。相反，固定要基于生物特异的相互作用(俘获分子)或吸附。这就大大地防止非特异性的污染。
培育以后，把生物物质从流体中分离。一般使用磁场把结合在磁性颗粒上的物质分离。例如，磁性颗粒可以被吸引到进行培育的器壁。然后，含有未被结合到磁性颗粒上的试样成分的流体可以被去除。所用的去除方法取决于培育容器的类型。合适的方法包括通过移液管或抽吸器去除流体。
如果需要，可以用洗涤液净化磁性颗粒一次或多次。所用的洗涤液不会造成生物物质离开颗粒表面，而是尽可能彻底地洗掉不希望的污染物。洗涤步骤最好在洗涤液与颗粒培育时进行。这时颗粒最好又悬浮起来，即通过摇晃或施加磁场，此磁场与第一磁场不一样。被污染的洗涤液最好就和上面描写的试样一样在结合生物物质的那一步被分离。
在最后一步洗涤之后，磁性颗粒可以在真空中被初步干燥，或让流体蒸发。也可以用丙酮进行予处理。
如果需要，以这种方式净化的生物物质可以与磁性颗粒分离。这一步也取决于生物物质结合到磁性颗粒上的方式。如果生物物质是天然核酸，并且磁性颗粒是玻璃包复的颗粒，按照本发明核酸可以用低盐含量的洗脱缓冲液从颗粒上移去。这种性质的缓冲液可从DE 3724442和分析生物化学175，196-201(1988)中了解。低盐含量的洗脱缓冲液即特别是含量小于0.2mol/l的缓冲液。在一个特别优选的实施方案中，洗脱缓冲液含有三甲醇氨基甲烷。在另一个特殊的实施方案中，洗脱缓冲液是无离子水。
在另一个实施方案中，所描述的净化和离析过程在细胞(如病毒颗粒或原核或真核细胞)从体液或细胞组织免疫磁化分离以后进行。在这一步中，如在摇晃的同时样品与颗粒进行培育，抗体挨着细胞上的抗原被固定在颗粒上。这些颗粒可以是按照本发明的颗粒或者是市场上可买到的颗粒。(如Miltenyi Biotec GmbH，Bergisch Gladbach，Germany的MACS微粒)。在加上磁场后，用盐溶液进行一次或多次洗涤。获得结合有所希望的细胞的颗粒。然后，结合的细胞在盐缓冲液中再悬浮。在一个优选的实施方案中，这种盐缓冲液是一种离液序列高的盐溶液，以致包含在细胞中的核酸被从细胞中释放出来。
一种特别优越的把核酸从含细胞试样中离析出来的方法是把上述的细胞离析和上述的核酸-优选地以它们天然的形式-的离析，在本发明的磁性颗粒上结合起来。这个实施方案的优越性是潜在的简单性(单试管方法)，高灵敏度(在医药微生物学和肿瘤学上特别重要)，和易自动化。
使用本发明的方法离析的生物物质，需要时可以进一步被利用。例如，它们可以被用来作为许多酶反应的基质。当涉及核酸时，它们可以被用来确定序列结构，放射性或非放射性标记，它们包含的一个或多个序列结构的扩增，转录，与标记的示踪核酸杂化，转译或连接。本发明方法的优点是生物物质与流体非常容易分离。早先的方法中，使用离心分离来把玻璃颗粒与污染物分离，或者，当生物物质是结合到玻璃纤维过滤器上时，流体通过过滤器被去除。这是卡关的一步，它使处理大量试样很困难。
使用本发明的颗粒，生物物质可以更有效地与污染物分离。特别是按照本发明可在很大程度上去除某些酶反应的抑制剂。生物物质的收率相当高。没有观察到长链核酸的断裂。本发明的颗粒最好是能被较快磁化的颗粒。
图1表示核酸从包含细胞的试样中的离析。
图2表示按照本发明离析的核酸在琼脂糖凝胶中的分离。
图3描述在按照本发明离析后反应产物的分离和利用PCR的扩增。
图4给出显示例4结果的凝胶。
图1表示核酸从包含细胞的试样中的离析。包含细胞的试样(试片)经予处理成试样专有的形式，以致欲探测核酸的细胞就以合适的形式存在。例如，当使用已去除体液的试样时，需要添加试剂，如液化粘稠的试样如唾液。将结合到固相上，最好是微珠上的能探测和结合细胞的抗体加入到含有这种被处理试样的容器中。例如，细胞表面的抗原被证明是抗体适宜的配体。抗体的特性依赖于所作分析的特性。如果固相是容器壁，细胞就直接结合到壁上。如果固相由微珠所组成，则使用适当的分离方法，将其与流体分离。举例来说，可以利用过滤来进行。如果使用磁性微珠，在容器外壁加磁场就可以把它们分离。分离的细胞用液体洗涤以与包围细胞的介质一起把污染物(它们会干扰测量)去除。优选的条件是细胞既不从固相上分离也不被破坏。然后细胞被破坏，即裂解。例如，这可以通过用离液序列高的盐处理细胞来进行。其它的可能性包括加入蛋白酶和洗涤剂。
优选的实施方案中，本发明的颗粒被加到裂解混合物中。经适当的时间裂解后-这可通过吸附于表面的核酸来最佳化-颗粒与包含其它不需探测的细胞成分的流体分离。最好利用在容器壁上放一块磁体所产生的磁场来进行。
为了去除还可能存在的任何污染物，最好用一种不引起被探测的核酸从玻璃表面分离的流体进行洗涤。然后加入一种含有可将核酸从玻璃表面分离的试剂的洗脱缓冲液，以把核酸从玻璃表面分离。这种条件就是低盐条件。根据核酸进一步使用的打算，可以与颗粒分离并作进一步处理。分离步骤最好是通过加磁场以达颗粒相互分离。
下面的实例将更详细解释本发明。
实例1
本发明磁性颗粒的制备
使用六种溶胶。溶胶的制备如下：
溶胶1(SiO2∶B2O3＝7∶3)：
合成在250ml圆形烧瓶中进行，同时不停地搅动。
86.6ml四乙基正硅酸盐
+7ml无水非变性乙醇
+14.1ml 0.15M HCl
产生一种两相混合物。在室温情况下一直搅动到成为单相。一滴一滴加入
+37.8ml硼酸三甲酯
然后溶胶在50℃下放置2小时。加入
+14.1ml 0.15M HCl
溶胶2(SiO2∶B2O3＝4∶1)：
合成在250ml圆形烧瓶中进行，同时不停地搅动。
100.5ml四乙基正硅酸盐
+7ml无水非变性乙醇
+16.3ml 0.15M HCl
产生一种两相混合物。在室温情况下一直搅动到成为单相。一滴一滴加入
+25.6ml硼酸三甲酯
然后溶胶在50℃下放置2小时。加入
+16.3ml 0.15M HCl
溶胶3(SiO2∶B2O3＝85∶15)：
合成在250ml圆形烧瓶中进行，同时不停地搅动。
107.8ml四乙基正硅酸盐
+7ml无水非变性乙醇
+17.5ml 0.15M HCl
产生一种两相混合物。在室温情况下一直搅动到成为单相。一滴一滴加入
+19.4ml硼酸三甲酯
然后溶胶在50℃下放置2小时。加入
+17.5ml 0.15M HCl
溶胶4(SiO2∶B2O3＝4∶1；2Mol％P2O5)：
合成在250ml圆形烧瓶中进行，同时不停地搅动。
100.5ml四乙基正硅酸盐
+7ml无水非变性乙醇
+16.3ml 0.15M HCl
产生一种两相混合物。在室温情况下一直搅动到成为单相。一滴一滴加入
+25.6ml硼酸三甲酯
然后溶胶在50℃下放置2小时。加入
+16.3ml 0.15M HCl
+1.63g P2O5
溶胶5(SiO2∶B2O3＝4∶1，Mol％Al2O3)：
合成在250ml圆形烧瓶中进行，同时不停地搅动。
100.5ml四乙基正硅酸盐
+7ml无水非变性乙醇
+16.3ml 0.15M HCl
产生一种两相混合物。在室温情况下一直搅动到成为单相。一滴一滴加入
+25.6ml硼酸三甲酯
然后溶胶在50℃下放置2小时。加入
+16.3ml 0.15M HCl
+3.06g Al2O3
溶胶6(SiO2∶B2O3＝4∶1，Mol％ZrO2)：
合成在250ml圆形烧瓶中进行，同时不停地搅动。
100.5ml四乙基正硅酸盐
+7ml无水非变性乙醇
+16.3ml 0.15M HCl
产生一种两相混合物。在室温情况下一直搅动到成为单相。一滴一滴加入
+25.6ml硼酸三甲酯
+5.15ml锆(IV)-丙基酸，70％(重量)1-丙醇溶液
然后溶胶在50℃下放置2小时。加入
+16.3ml 0.15M HCl
再在50℃下放置2小时后，每150ml溶胶加入22.5g lriodin 600(黑云母)并搅动。然后用喷雾干燥器(B①chi 190，Mini Spray Dryer)进行包复。喷雾干燥器管嘴温度为134℃。
然后喷雾干燥过程得到的粉末要在氮的气氛(90l/h)下进行温度处理。温度以1k/min的速率增加，粉末在密实化温度中保持2小时。用溶胶1包复的情况，温度为750℃，用溶胶2包复为860℃。对所有其它包复过程温度为800℃。烧结处理以后，炉子就关掉，使粉末处于室温。使用50μm的筛子把结块筛掉。
实例2
GMP1，GMP2，GMP3和GMP4的制备
GMP1，GMP2，GMP3和GMP4是从溶胶1(实例1)按实例1描述的过程在如下条件下制备的不同批色素：
  参数   GMP1   GMP2   GMP3   GMP4
  溶胶的老化(h)(30℃)   36   36   36   36
  溶胶中色素百分数(g/100ml)   5   15   8   20
  管嘴气流(％)   100   100   100   100
  空气压力(bar)   6   6   6   3
  管嘴温度(℃)   135   120   130   143
  密实化温度(℃)   534   534   534   615
  紧接的氧处理时间(1小时)   (300℃)   (300℃)   (300℃)   (400℃)
  色素收率   低   高   中   高
  脱氧核糖核酸收率   低   高   高   高
实例3
使用磁性玻璃颗粒对人的全血PCR试样予处理
核酸离析
玻璃磁性颗粒3份(GMP2-4)，每份10mg放入微量试管。精确的试样重量在表1上给出。进行三次重复测定。
用移液管把40μl蛋白酶K(20mg/ml，由低压冻干制成)放入200μl解冻的全血中并立即混合。下一步加入200μl结合缓冲液(6M胍-HCl，10mM三甲醇氨基甲烷-HCl，10mM尿素，30％Triton X-100，pH4.4)并混合，然后在70℃下培育10分钟。加入200μl异丙醇，然后制剂在vortex混合器中混合10秒。试样在室温放置20分钟，然后再一次混合10秒钟。磁分离这一步在Boehringer Mannheim(ID#1 641 794)的磁性颗粒分离器中进行至少30秒。按下面描述取出上清液并进行分析。
磁性颗粒用500μl洗涤缓冲液(20mM NaCl，10mM三甲醇氨基甲烷-HCl，pH7.5(25℃)，80％乙醇)混合10秒钟进行洗涤，在室温中放置1分钟，然后混合10秒钟。然后用磁性颗粒分离器把它们吸引到容器壁。弃去上清液。重复洗涤过程直到清洗液没有颜色为止(总共四次)。然后核酸经洗脱三次，每次用预热到70℃的200μl洗脱缓冲液(10mM三甲醇氨基甲烷-HCl，pH8.5)，然后混合10秒钟，在室温放置10分钟，再混合10分钟。
上清液的制备
对在第一次结合到磁性玻璃颗粒上以后得到的上清液中的核酸含量进行如下研究：上清液放入滤管(Boehringer Mannheim ID#1744003，如在高纯PCR产品净化包内提供的)，并在微量台式离心机以8000rpm离心分离1小时。弃去流出的物质，过滤管用500μl洗涤缓冲液洗涤两次(如上述进行离心分离)。过滤管经离心分离近干，然后用2×200μl预热到70℃的洗脱缓冲液进行洗脱，并再次离心。
结果
  上清液1∶8     第1次洗脱液1∶8
  260nm   280nm   收率   260/280     260nm   280nm   收率    260/280
 GMP/2 12mg10mg9mg  123   0,0210,0450,036   0,0130,0350,027   1,7μg3,7μg2,9μg   1,61,31,3     0,1710,1370,153   0,1640,1380,164   13,7μg11,0μg12,2μg    1,01,00,9
 GMP/3 10mg10mg10mg  123   0,0500,0330,042   0,0420,0220,030   4,0μg2,6μg3,4μg   1,21,51,4     0,2450,3970,278   0,2460,3980,282   19,6μg31,8μg22,2μg    0,91,00,9
 GMP/4 10mg11mg10mg  123   0,0650,0710,066   0,0560,1420,051   0,7μg2,4μg1,7μg   1,20,51,3     0,1350,1400,130   0,1420,1420,130   11,0μg11,2μg10,4μg    1,01,01,0
  第2次洗脱液1∶8     第3次洗脱液1∶4
  260nm   280nm   收率   260/280     260nm   280nm   收率    260/280   ∑洗脱液
 GMP/2  123  0,0990,0780,103   0,1010,0760,112   7,9μg6,2μg8,2μg   1,01,00,9     0,0570,041丢失   0,0620,049   2,3μg1,6μg    0,90,8   23,9μg18,8μg
GMP/3 123 0,1470,2560,147 0,1470,2520,143 11,8μg20,5μg11,8μg 1,01,01,0 0,0840,0420,073 0,0980,0430,093 3,4μg1,7μg2,9μg 0,91,00,8 34,8μg54,0μg36,9μg
 GMP/4  123  0,1060,1110,135   0,1080,1140,141   8,5μg8,9μg10,8μg   1,01,01,0     0,0830,0540,077   0,0980,0630,095   3,3μg2,2μg3,1μg    0,80,90,8   22,8μg22,3μg24,3μg
表1：使用磁性玻璃颗粒和200μl血的核酸收率
洗脱液和试样上清液的分析
在50μl洗脱液中和用过滤管制备的上清液中分别加入10μl试样缓冲液。
45μl的制剂在0.8％的琼脂糖凝胶中用120V的电泳分离90分钟。
不同稀释度的洗脱液和制备的上清液用Uvikon 710(Kontron)光谱仪在260和280nm处进行光谱测定。
对两等份5μl的洗脱液使用ExpandTM Long Template PCR(BoehringerMannheim ID#1681834)用人类tPA基因(预计产物长度15kb)的特定引物进行了重复测定。
  混合物1   每批   混合物2   每批
  dNTP，每批100mM引物1，200ng/ml引物2，225ng/ml两次蒸馏H2O   1μl1μl1μl17μl   ExpandTM缓冲液，10XExpandTM聚合酶两次蒸馏，H2O   5μl0.75μl19.25μl
  20μl   25μl
将混合物1与5μl洗脱液放入一个薄壁PCR管中，然后加入混合物2。该制剂进行初步混合后用一层30μl的矿物油覆盖。该制剂用一台PerkinElmer thermal cycler 9600按如下设定参数进行扩增：
2分            92℃
10秒           92℃
30秒           65℃             10循环
12分           68℃
10秒           92℃
30秒           65℃             20循环
12分+          68℃
每循环20秒
7分                68℃
然后               7℃
将10μl试样缓冲液加到含50μl制剂的PCR管中，45μl的混合物在0.8％的琼脂糖凝胶中进行120v的电泳分离90分钟。
第1次洗脱液颜色还轻微带黄并且被细的磁性颗粒轻微污染。
在琼脂糖凝胶(图2)中洗脱物的分析表明收率的重复性很好。磁性颗粒GMP2-4表明没有显著的不同。洗脱液1(上)和洗脱液2(下)几乎含有相同浓度的核酸(用凝胶来估计)。洗脱液3中的核酸浓度低。上清液也含低浓度的核酸。
除个别外，ExpqndTM PCR对所有的试样都得到非常好的特定的扩增产物(表2)。当使用磁性玻璃微粒时，核酸从人血试样中离析，然后在PCR步骤中产生特定的扩增。
    15kb ExpandTMPCR       人类tPA基因
      第1次洗脱液       第2次洗脱液
GMP/2     123 ++     不适用++   ++   ++不适用
GMP/3     123     +(+)-     ++(+)   +++   +++
GMP/4     123     +++     +++   ++   +(+)*不适用
K，BM Contril DNA
表2：ExpandTMPCR的结果
*第3次洗脱液
图3表示在PCR扩增后含反应产物的凝胶。MWM III是克分子量标记(洗脱液1，上；洗脱液2，下)。
实例4
把DNA长度标准结合到磁性玻璃颗粒上
1.磁性玻璃颗粒的准备
将12mg GMP4玻璃磁性颗粒放入微量试管。
2.裂解和结合
900μl裂解缓冲液(4.6M GuSCN，45mM三甲醇氨基甲烷，20mM EDTA，pH7.3)和100μl DNA试样，其中加入Boehringer Mannheimm(Cat.No.528552)的DNA长度标准III作为标样，并在1.5ml的微量试管中与12mg磁性玻璃颗粒混合2-10秒直到得到一个均匀的悬浮液为止。该溶液在室温培育20分钟，并每5分钟混合一次。在磁性颗粒分离器中至少进行15秒磁分离。用移液管去掉上清液。
3.洗涤和干燥
用移动磁场的方法洗涤磁性玻璃颗粒，用洗涤缓冲液(5.2M GuSCN，50mM三甲醇氨基甲烷，pH6.5)洗涤两次，用70％预冷的乙醇洗两次，再用丙酮洗一次，用移液管加入800μl溶液，混合2秒钟，在室温中放置1分钟，加上磁场，然后通过移液管去掉上清液。
去除丙酮，颗粒在敞口的加热装置内于56℃下干燥10分钟。
4.DNA洗脱
DNA用4×50μl洗脱缓冲液(10mM三甲醇氨基甲烷-HCl，1mM EDTA，pH8.0)在56℃下不停地摇晃地培育10分钟来进行洗脱。然后含有DNA的上清液用移液管移到新的微量试管中。
5.洗脱液分析
五分之一体积的洗脱液与试样缓冲液混合，在1％的琼脂糖凝胶中在90V下进行DNA分离。为了测定收率，把DNA长度标准III的一系列稀释液加到同一种包含有试样预计数量DNA的凝胶中。
用扫描法对琼脂糖凝胶的Polaroid照片进行定量评定。以标准稀释系列用作定标。
使用磁性玻璃颗粒的DNA的收率在表1中给出。
标    标准   标准准    中     亮度编    DNA    (测号    数量   量)[ng]   [相对单位]   试  色素/微  试样亮  凝胶  试样  收率样  珠       度(测   中    中    [％]编  类型     量)[相  DNA   DNA号           对单位] 计算  计算总量  总量
1     200    652     175    563     150    514     125    445     100    376     75     257     50     178     25     99     10     4   1   GMP4     45      139   695   69,52   GMP4     39      120   600   60,0
表1：使用磁性玻璃颗粒时DNA长度标准III的收率用作定量评定基础的琼脂糖凝胶在图4中给出。它是1％溴化乙锭-染色的琼脂糖凝胶。第1列到第10列相当于DNA长度标准III的一稀释系列液。它们是1：1g DNA，2：200ng DNA，3：175ng DNA，4：150ng DNA，5：125ng DNA，6：100 DNA，7：75ng DNA，8：50ng DNA，9：25ngDNA，10：10ng DNA。
第11和第12列相应于从磁性玻璃颗粒洗脱得到的DNA，并加入200ngDNA长度标准。
                           序列表
(1)总信息
(i)申请人：
(A)名字：Boehringer Mannheim GmbH
(B)街道：Sandhoferstr.116
(C)城市：Mannheim
(D)国家：DE
(E)邮政编码：68298
(F)：0621 759 4348
(G)：0621 759 4457
(ii)发明名称：磁性色素
(iii)序列数：2
(iv)计算机可读形式：
(A)数据载体：软盘
(B)计算机：IBM PC兼容
(C)操作系统：PC-DOS/MS-DOS
(D)软件：Patentln Release #1.0，Version #1.30(EPA)
(2)序列识别号#1的信息：
(i)序列识别：
(A)长度：34碱基对
(B)类型：核苷酸
(C)螺旋体类型：单
(D)结构：线性
(ii)分子类型：其它核酸
(A)描述：/desc＝“oligodeoxyribonucleotide”
(iii)假设：无
(iv)序列描述：序列识别号：1：
ACTGTGCTTC TTGACCCATG GCAGAAGCGC CTTC  34
(2)序列识别号#2的信息：
(i)序列识别：
(A)长度：34碱基对
(B)类型：核苷酸
(C)螺旋体类型：单
(D)结构：线性
(ii)分子类型：其它核酸
(A)描述：/desc＝“oligodeoxyribonucleotide”
(iii)假设：无
(iv)序列描述：序列识别号：2：
CCTTCACTGT CTGCCTAACT CCTTCGTGTG TTCC  34

Claims (26)

1.一种离析核酸的方法，它包括
将流体中含有天然形态核酸的试样，在天然形态核酸能直接结合到一种含硅的非晶形材料表面上去的条件下，在离液序列高的盐存在下，与所述具有含硅的非晶形材料表面的磁性颗粒接触，和
从流体中分离结合的核酸。
2.权利要求1的方法，其特征在于颗粒具有小于100μm的平均颗粒尺寸。
3.权利要求2的方法，其特征在于磁性材料为磁铁矿Fe3O4或Fe2O3。
4.权利要求1-3之任一项的方法，其特征在于所述表面含有选自以下的其它材料：
B2O3                     0-30％
Al2O3                    0-20％
CaO                         0-20％
BaO                         0-10％
K2O                        0-20％
Na2O                       0-20％
MgO                         0-18％
Pb2O3                    0-15％。
5.权利要求1-3之任一项的方法，其特征在于含硅的非晶形材料是玻璃。
6.权利要求5的方法，其特征在于颗粒包含外包玻璃表面的磁性材料内核。
7.权利要求6的方法，其特征在于被分析的试样是一种医学试样、用于环境分析、食品分析或分子生物学研究的试样。
8.权利要求7的方法，其特征在于所述试样选自血、血清、漱口水、尿液、脑液、痰液、大便、活组织样品和骨髓样品。
9.权利要求8的方法，其特征在于所述试样选自细菌培育、噬菌体溶菌液和扩增过程的产物。
10.权利要求9的方法，其特征在于DNA是离析的。
11.权利要求9的方法，其特征在于RNA是离析的。
12.权利要求11的方法，其特征在于试样不经预处理而被使用。
13.权利要求12的方法，其特征在于试样使用适当的方法溶解，释放包含在试样中的生物物质。
14.权利要求13的方法，其特征在于离液序列高的盐的浓度为2-8mol/l。
15.权利要求13的方法，其特征在于离液序列高的盐的浓度为4-6mol/l。
16.权利要求15的方法，其特征在于离液序列高的盐选自碘化钠、高氯酸钠、硫氰酸胍、异硫氰酸胍或氢氯化胍。
17.权利要求16的方法，其特征在于所述试样与颗粒一起培育，培育时间在10秒到30分之间。
18.权利要求17的方法，其特征在于把结合的核酸从流体中分离是通过使用磁场把结合在磁性颗粒上的核酸分离。
19.权利要求18的方法，其特征在于用洗涤液洗涤磁性颗粒一次或多次。
20.权利要求19的方法，其特征在于洗涤步骤包括培育带有颗粒的洗涤液，其中颗粒是悬浮的。
21.权利要求20的方法，其特征在于所述悬浮是通过施加与第一磁场不一样的磁场来实现的。
22.权利要求19-21之任一项的方法，其特征在于在最后一步洗涤之后进行干燥步骤。
23.权利要求22的方法，其特征在于从流体中分离结合的核酸后使用一种洗提缓冲液使净化的核酸与磁性颗粒分离。
24.权利要求23的方法，其特征在于所述洗提缓冲液的盐含量小于0.2mol/l。
25.权利要求24的方法，其特征在于该方法是以单试管法进行的。
26.权利要求25的方法，其特征在于该方法是以自动化的方式进行的。
CNB031066364A 1995-06-08 2003-02-27 离析核酸的方法 Expired - Lifetime CN1267447C (zh)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
DE19520398A DE19520398B4 (de) 1995-06-08 1995-06-08 Magnetisches Pigment
DE19537985A DE19537985A1 (de) 1995-06-08 1995-10-12 Magnetisches Pigment
DE19520398.4 1995-10-12
DE19537985.3 1995-10-12
CA002440504A CA2440504C (en) 1995-06-08 1996-06-06 Magnetic pigment

Related Parent Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN96195985A Division CN1106401C (zh) 1995-06-08 1996-06-06 磁性色素

Related Child Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CNA200610093596XA Division CN1891833A (zh) 1995-06-08 1999-06-06 对核酸进行酶反应的方法及离析核酸的组合物

Publications (2)

Publication Number Publication Date
CN1439646A CN1439646A (zh) 2003-09-03
CN1267447C true CN1267447C (zh) 2006-08-02

Family

ID=34426455

Family Applications (4)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2006101016360A Expired - Lifetime CN1974781B (zh) 1995-06-08 1996-06-06 对核酸进行酶反应的方法及离析核酸的组合物
CN96195985A Expired - Lifetime CN1106401C (zh) 1995-06-08 1996-06-06 磁性色素
CNA200610093596XA Pending CN1891833A (zh) 1995-06-08 1999-06-06 对核酸进行酶反应的方法及离析核酸的组合物
CNB031066364A Expired - Lifetime CN1267447C (zh) 1995-06-08 2003-02-27 离析核酸的方法

Family Applications Before (3)

Application Number Title Priority Date Filing Date
CN2006101016360A Expired - Lifetime CN1974781B (zh) 1995-06-08 1996-06-06 对核酸进行酶反应的方法及离析核酸的组合物
CN96195985A Expired - Lifetime CN1106401C (zh) 1995-06-08 1996-06-06 磁性色素
CNA200610093596XA Pending CN1891833A (zh) 1995-06-08 1999-06-06 对核酸进行酶反应的方法及离析核酸的组合物

Country Status (14)

Country Link
US (3) US6255477B1 (zh)
EP (4) EP1281714B1 (zh)
JP (2) JP3950478B2 (zh)
CN (4) CN1974781B (zh)
AT (3) ATE368109T1 (zh)
AU (1) AU707115B2 (zh)
CA (4) CA2605671C (zh)
DE (5) DE19520398B4 (zh)
DK (3) DK0837871T3 (zh)
ES (3) ES2290803T3 (zh)
HK (2) HK1051048A1 (zh)
NO (2) NO325384B1 (zh)
NZ (1) NZ311648A (zh)
WO (1) WO1996041811A1 (zh)

Families Citing this family (146)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB9425138D0 (en) * 1994-12-12 1995-02-08 Dynal As Isolation of nucleic acid
DE19520398B4 (de) * 1995-06-08 2009-04-16 Roche Diagnostics Gmbh Magnetisches Pigment
DE19854973B4 (de) * 1998-11-30 2010-02-04 Institut Für Neue Materialien Gem. Gmbh Verfahren zur Reinigung von Nukleinsäuren
KR100463475B1 (ko) 1995-06-08 2005-06-22 로셰 디아그노스틱스 게엠베하 자기성피그먼트
JP2965131B2 (ja) * 1995-07-07 1999-10-18 東洋紡績株式会社 核酸結合用磁性担体およびそれを用いる核酸単離方法
CN1229415C (zh) 1995-07-28 2005-11-30 陶氏环球技术公司 2,7－芳基－9－取代的芴和9－取代的芴的低聚物和聚合物
DE19622885A1 (de) 1996-06-07 1997-12-11 Boehringer Mannheim Gmbh Reagenzzubereitung enthaltend magnetische Partikel in Form einer Tablette
US6027945A (en) 1997-01-21 2000-02-22 Promega Corporation Methods of isolating biological target materials using silica magnetic particles
US20050287583A1 (en) * 1997-01-21 2005-12-29 Promega Corporation Methods and kits for isolating biological target materials using silica magnetic particles
GB9709728D0 (en) 1997-05-13 1997-07-02 Dynal As Single step method
DE19743518A1 (de) * 1997-10-01 1999-04-15 Roche Diagnostics Gmbh Automatisierbare universell anwendbare Probenvorbereitungsmethode
DE59912604D1 (de) * 1998-02-04 2005-11-03 Merck Patent Gmbh Verfahren zur isolierung und aufreinigung von nucleinsäuren
US7078224B1 (en) 1999-05-14 2006-07-18 Promega Corporation Cell concentration and lysate clearance using paramagnetic particles
US6194562B1 (en) 1998-04-22 2001-02-27 Promega Corporation Endotoxin reduction in nucleic acid purification
US5973138A (en) * 1998-10-30 1999-10-26 Becton Dickinson And Company Method for purification and manipulation of nucleic acids using paramagnetic particles
DE19851156C1 (de) 1998-11-06 2000-04-27 Merck Patent Gmbh Verfahren zur Isolierung von Plasmid-DNA
PT1144620E (pt) * 1998-11-30 2004-01-30 Roche Diagnostics Gmbh Perticulas magneticas para a purificacao de acidos nucleicos
US6270970B1 (en) 1999-05-14 2001-08-07 Promega Corporation Mixed-bed solid phase and its use in the isolation of nucleic acids
US6310199B1 (en) 1999-05-14 2001-10-30 Promega Corporation pH dependent ion exchange matrix and method of use in the isolation of nucleic acids
DE19937607A1 (de) * 1999-08-09 2001-02-15 Bilatec Ges Zur Entwicklung Bi Reagenzienkit zur Isolierung von Nukleinsäuren
WO2001011364A1 (fr) * 1999-08-09 2001-02-15 Precision System Science Co., Ltd. Procede d'etiquetage automatique faisant appel a un distributeur automatique, procede de separation automatique d'une substance cible, procede permettant de determiner la sequence de base et systeme de distribution automatique
ES2256068T3 (es) * 1999-11-17 2006-07-16 Roche Diagnostics Gmbh Particulas de cristal magneticas, metodo para su preparacion y usos de las mismas.
US6936414B2 (en) 1999-12-22 2005-08-30 Abbott Laboratories Nucleic acid isolation method and kit
DE10006662A1 (de) 2000-02-15 2001-08-23 Antigen Produktions Gmbh Gefäß zur Nukleinsäureanalytik
DE10013995A1 (de) * 2000-03-22 2001-09-27 Chemagen Biopolymer Technologi Magnetische, silanisierte Trägermaterialien auf Basis von Polyvinylalkohol
AU2001263800B2 (en) * 2000-03-24 2006-03-09 Qiagen Gmbh Porous ferro- or ferrimagnetic glass particles for isolating molecules
DE10035953A1 (de) * 2000-07-21 2002-01-31 Fraunhofer Ges Forschung Sphärische, magnetische Silica-Partikel mit einstellbarer Teilchen- und Porengröße sowie einstellbarem Magnetgehalt für die Aufreinigung von Nukleinsäuren und anderen Biomolekülen
US20050266494A1 (en) * 2000-09-06 2005-12-01 Hodge Timothy A System and method for computer network ordering of biological testing
US20050272085A1 (en) * 2000-09-06 2005-12-08 Hodge Timothy A Methods for forensic and congenic screening
EP1978110B1 (en) * 2000-09-06 2010-05-26 Transnetyx, Inc. Computer-based method and system for screening genomic DNA
US20050239125A1 (en) * 2000-09-06 2005-10-27 Hodge Timothy A Methods for genotype screening
US7494817B2 (en) * 2000-09-06 2009-02-24 Transnet Yx, Inc. Methods for genotype screening using magnetic particles
ATE537264T1 (de) * 2000-10-03 2011-12-15 Mirari Biosciences Inc Verfahren und zusammensetzungen für die gerichtete mikrowellenchemiie
US20040209303A1 (en) 2000-10-03 2004-10-21 Martin Mark T. Methods and compositions for directed microwave chemistry
US7348182B2 (en) * 2000-10-03 2008-03-25 Mirari Biosciences, Inc. Directed microwave chemistry
DE10129815A1 (de) * 2001-06-24 2003-01-09 Profos Ag Verfahren zur Aufreinigung von Bakterienzellen und Zellbestandteilen
US6921283B2 (en) * 2001-08-27 2005-07-26 Trompeter Electronics, Inc. BNC connector having visual indication
JP4148900B2 (ja) 2002-01-08 2008-09-10 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 増幅反応におけるシリカ物質の使用
AU2003202026A1 (en) * 2002-01-16 2003-09-02 Dynal Biotech Asa Method for isolating nucleic acids and protein from a single sample
US20040126902A1 (en) * 2002-06-27 2004-07-01 Toyo Boseki Kabushiki Kaisha Magnetic carrier for biological substance, production method thereof and isolation method of biological substance using same
GB0215185D0 (en) 2002-07-01 2002-08-07 Genovision As Binding a target substance
AU2003236461B2 (en) 2002-08-29 2009-05-28 Epigenomics Ag Improved method for bisulfite treatment
US7560231B2 (en) 2002-12-20 2009-07-14 Roche Molecular Systems, Inc. Mannitol and glucitol derivatives
JP4073323B2 (ja) * 2003-01-23 2008-04-09 日立ソフトウエアエンジニアリング株式会社 機能性ビーズ、その読み取り方法および読み取り装置
US7413855B2 (en) 2003-01-29 2008-08-19 Roche Molecular Systems, Inc. Method for bisulfite treatment
JP2004000922A (ja) * 2003-03-26 2004-01-08 Toyobo Co Ltd 核酸またはタンパク質抽出用シリカ粒子組成物
CA2463719A1 (en) 2003-04-05 2004-10-05 F. Hoffmann-La Roche Ag Nucleotide analogs with six membered rings
US8651113B2 (en) * 2003-06-18 2014-02-18 Swr&D Inc. Magnetically responsive nanoparticle therapeutic constructs and methods of making and using
DE10355409A1 (de) 2003-11-25 2005-06-30 Magnamedics Gmbh Sphärische, magnetische Silicagel-Träger mit vergrößerter Oberfläche für die Aufreinigung von Nukleinsäuren
JP4435174B2 (ja) 2003-12-02 2010-03-17 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲー 重亜硫酸塩処理の改良された方法
EP2251441B1 (en) 2004-02-10 2013-05-08 F. Hoffmann-La Roche AG Detection of parvovirus B19
US20050287515A1 (en) * 2004-06-24 2005-12-29 Reinhold Deppisch Removal of bacterial DNA from therapeutic fluid formulations
US9267167B2 (en) * 2004-06-28 2016-02-23 Becton, Dickinson And Company Dissolvable films and methods including the same
JP4476050B2 (ja) * 2004-06-30 2010-06-09 株式会社ニデック 視野計
EP1632578A1 (en) 2004-09-03 2006-03-08 Roche Diagnostics GmbH DNA decontamination method
EP1642648A1 (de) 2004-09-30 2006-04-05 Roche Diagnostics GmbH Vorrichtung und Verfahren zum Einstellen einer Temperatur einer Flüssigkeit
US20060234251A1 (en) * 2005-04-19 2006-10-19 Lumigen, Inc. Methods of enhancing isolation of RNA from biological samples
KR101157174B1 (ko) * 2005-11-24 2012-06-20 삼성전자주식회사 세포 또는 바이러스의 신속한 파괴 방법 및 장치
US8030034B2 (en) 2005-12-09 2011-10-04 Promega Corporation Nucleic acid purification with a binding matrix
KR100850430B1 (ko) * 2006-12-11 2008-08-05 (주)바이오니아 입자상 물질을 사용하는 핵산 분리 방법 및 핵산 분리용조성물
EP1932913B1 (en) 2006-12-11 2013-01-16 Roche Diagnostics GmbH Nucleic acid isolation using polidocanol and derivatives
CA2614069C (en) 2006-12-11 2016-05-03 F. Hoffmann-La Roche Ag Nucleic acid isolation using polidocanol and derivatives
AU2007336297B2 (en) * 2006-12-18 2013-09-05 Colorobbia Italia S.P.A. Magnetic nanoparticles for the application in hyperthermia, preparation thereof and use in constructs having a pharmacological application
US8535888B2 (en) 2006-12-29 2013-09-17 Mayo Foundation For Medical Education And Research Compositions and methods for detecting methicillin-resistant S. aureus
DE102007035250A1 (de) * 2007-07-27 2009-01-29 Qiagen Gmbh Verfahren zum Abtrennen von nicht-proteinhaltigen Biomolekülen, insbesondere Nukleinsäuren aus proteinhaltigen Proben
EP2067867A1 (en) 2007-12-03 2009-06-10 Siemens Aktiengesellschaft Process for concentrating nucleic acid molecules
EP2108699B1 (en) 2008-04-08 2014-06-25 F.Hoffmann-La Roche Ag Analytical processing and detection device
EP2138234A1 (en) 2008-06-24 2009-12-30 F. Hoffmann-Roche AG Flexible disposable tip interface
EP2186570A1 (en) 2008-11-12 2010-05-19 F.Hoffmann-La Roche Ag Method and device for separating a component bound to magnetic particles
US8404347B2 (en) * 2009-01-26 2013-03-26 Hong Kong Polytechnic University Method of synthesis of amphiphilic magnetic composite particles
US8911663B2 (en) * 2009-03-05 2014-12-16 Quebec Metal Powders, Ltd. Insulated iron-base powder for soft magnetic applications
EP2244268B1 (en) 2009-04-23 2016-04-13 Turbobeads GmbH Process for manufacturing chemically stable magnetic carriers
US8039613B2 (en) 2009-08-28 2011-10-18 Promega Corporation Methods of purifying a nucleic acid and formulation and kit for use in performing such methods
US8222397B2 (en) 2009-08-28 2012-07-17 Promega Corporation Methods of optimal purification of nucleic acids and kit for use in performing such methods
WO2011026030A1 (en) * 2009-08-31 2011-03-03 Mbio Diagnostics Corporation Integrated sample preparation and analyte detection
TWI407994B (zh) * 2009-10-22 2013-09-11 Ind Tech Res Inst 分離核酸的方法、試劑及套組
JP2013515956A (ja) * 2009-12-23 2013-05-09 コーニンクレッカ フィリップス エレクトロニクス エヌ ヴィ 検体測定装置及び方法
US8420801B2 (en) * 2010-01-08 2013-04-16 Roche Molecular Systems, Inc. Recovery of nucleic acids from magnetic glass particles
JP2010123984A (ja) * 2010-01-12 2010-06-03 Bando Chem Ind Ltd 磁性粒子及び磁性粒子分散液
EP2345719A1 (en) 2010-01-18 2011-07-20 Qiagen GmbH Method for isolating small RNA
CN102363624B (zh) 2010-06-18 2016-03-30 香港理工大学 使用两亲核-壳型纳米吸附剂对内毒素的去除
ES2569220T3 (es) 2010-06-22 2016-05-09 F. Hoffmann-La Roche Ag Envase de suspensión para partículas de unión para el aislamiento de material biológico
EP2407540A1 (en) 2010-07-15 2012-01-18 Qiagen GmbH Method for purifying a target nucleic acid
CN103657754B (zh) 2010-07-23 2016-01-06 贝克曼考尔特公司 吸液管
JP6169489B2 (ja) * 2010-07-29 2017-07-26 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 一般的な試料調製
DE102010034083A1 (de) * 2010-08-12 2012-02-16 Süd-Chemie AG Magnetische Glaspartikel zum Einsatz in Biogasanlagen, Fermentations- und Separationsprozessen
EP2535712A1 (en) 2011-06-15 2012-12-19 F. Hoffmann-La Roche AG Analytical system for the preparation of biological material
GB201113698D0 (en) * 2011-08-09 2011-09-21 Wirtz Ralf M Matrix and method for purifying and/or isolating nucleic acids
EP2742152B1 (en) 2011-08-12 2017-04-12 Qiagen GmbH Method for isolating nucleic acids
BR112014011048A2 (pt) 2011-11-07 2017-05-02 Beckman Coulter Inc braço robótico
EP2776844B1 (en) 2011-11-07 2020-09-30 Beckman Coulter, Inc. Specimen container detection
CN104105969B (zh) 2011-11-07 2016-10-12 贝克曼考尔特公司 离心机系统和工作流程
CN103975245A (zh) 2011-11-07 2014-08-06 贝克曼考尔特公司 用于试样输送系统的磁阻尼
EP2776848B1 (en) 2011-11-07 2019-12-25 Beckman Coulter, Inc. System and method for transporting sample containers
BR112014011035A2 (pt) 2011-11-07 2017-06-13 Beckman Coulter, Inc. sistema de aliquotagem e fluxo de trabalho
EP2776152B1 (en) * 2011-11-09 2018-03-28 The Regents of The University of California Superparamagnetic colloids with enhanced charge stability for high quality magnetically tunable photonic structures
TWI525184B (zh) 2011-12-16 2016-03-11 拜歐菲樂Ｉｐ有限責任公司 低溫注射組成物，用於低溫調節導管中流量之系統及方法
EP2607904B1 (en) 2011-12-21 2020-01-15 Roche Diagnostics GmbH Method for disposing of a liquid within an automated analytical system, tip rack assembly and analytical system
EP2634254A1 (en) 2012-02-29 2013-09-04 QIAGEN GmbH Method for isolating nucleic acids from a food sample
ES2567091T3 (es) 2012-04-05 2016-04-19 F. Hoffmann-La Roche Ag Compuestos de amina para la preparación selectiva de muestras biológicas
CN108588279A (zh) 2012-04-18 2018-09-28 霍夫曼-拉罗奇有限公司 Hev测定
DE102012210155A1 (de) * 2012-06-15 2013-12-19 Siemens Aktiengesellschaft Verfahren zur Extraktion spezifischer Blutbestandteile und Kit zur Durchführung dieses Verfahrens
EP2888354B1 (en) 2012-08-21 2020-04-01 Qiagen GmbH Virus particle stabilisation and method for isolating viral nucleic acids
WO2014029791A1 (en) 2012-08-21 2014-02-27 Qiagen Gmbh Method for isolating nucleic acids from a formaldehyde releaser stabilized sample
AU2013310861B2 (en) 2012-09-03 2019-02-14 Qiagen Gmbh Method for isolating RNA including small RNA with high yield
US20140322706A1 (en) 2012-10-24 2014-10-30 Jon Faiz Kayyem Integrated multipelx target analysis
JP1628115S (zh) 2012-10-24 2019-04-01
EP2931661B1 (en) 2012-12-11 2017-11-08 Qiagen GmbH Preparation of silica particles
US10745686B2 (en) 2013-02-08 2020-08-18 Qiagen Gmbh Method for separating DNA by size
US9803230B2 (en) 2013-03-15 2017-10-31 Abbott Molecular Inc. One-step procedure for the purification of nucleic acids
EP3520895A1 (en) 2013-03-15 2019-08-07 Genmark Diagnostics Inc. Fluid container with cantilevered lance
US9409148B2 (en) 2013-08-08 2016-08-09 Uchicago Argonne, Llc Compositions and methods for direct capture of organic materials from process streams
CA2924079A1 (en) 2013-09-13 2015-03-19 Biofilm Ip, Llc Magneto-cryogenic valves, systems and methods for modulating flow in a conduit
US9498778B2 (en) 2014-11-11 2016-11-22 Genmark Diagnostics, Inc. Instrument for processing cartridge for performing assays in a closed sample preparation and reaction system
USD881409S1 (en) 2013-10-24 2020-04-14 Genmark Diagnostics, Inc. Biochip cartridge
US9663780B2 (en) 2014-10-15 2017-05-30 Alpaqua Engineering, LLC Solid-core ring-magnet
US10005080B2 (en) 2014-11-11 2018-06-26 Genmark Diagnostics, Inc. Instrument and cartridge for performing assays in a closed sample preparation and reaction system employing electrowetting fluid manipulation
US9598722B2 (en) 2014-11-11 2017-03-21 Genmark Diagnostics, Inc. Cartridge for performing assays in a closed sample preparation and reaction system
EP3059312A1 (en) 2015-02-20 2016-08-24 QIAGEN GmbH Nucleic acid extraction method
CA2984506A1 (en) 2015-05-01 2016-11-10 BioLegend, Inc. Stable nanomagnetic particle dispersions
EP3303582A1 (en) 2015-06-01 2018-04-11 Qiagen GmbH Electrophoresis assisted method and device for purifying a charged target molecule from a sample
US10711265B2 (en) 2015-06-01 2020-07-14 Qiagen Gmbh Electrophoresis assisted method for purifying a target nucleic acid using a delayed elution approach
EP3303630B1 (en) 2015-06-05 2022-01-05 Qiagen GmbH Method for separating dna by size
US10174308B2 (en) 2016-01-05 2019-01-08 Roche Molecular Systems, Inc. Successive capture of nucleic acid by magnetic glass particles
WO2017190117A1 (en) 2016-04-30 2017-11-02 BioLegend, Inc. Compositions and methods for performing magnetibuoyant separations
CN109072234B (zh) 2016-05-13 2022-11-29 豪夫迈·罗氏有限公司 基于蛋白质的样品采集基质和装置
CN106268649A (zh) * 2016-08-11 2017-01-04 北京蛋白质组研究中心 一种磁性纳米材料及其在磷酸肽富集中的应用
EP3510153B1 (en) 2016-09-12 2023-06-07 Roche Diagnostics GmbH Methods and compositions for purifying double stranded nucleic acids
CN106984280A (zh) * 2017-03-16 2017-07-28 东华大学 一种用细菌纤维素球制备磁性金属吸附材料的方法
CN111148834A (zh) 2017-09-27 2020-05-12 凯杰有限公司 以高收率分离rna的方法
EP3470141A1 (en) 2017-10-11 2019-04-17 F. Hoffmann-La Roche AG Method for processing a biological sample with magnetic particles
CN111757934A (zh) 2017-12-21 2020-10-09 豪夫迈·罗氏有限公司 通过单向双重探针引物延伸的靶标富集
CN107955810A (zh) * 2017-12-25 2018-04-24 宁波卡尔新材料科技有限公司 一种新型动物肝脏核酸提取试剂盒及提取方法
EP3520893B1 (en) 2018-02-02 2020-07-22 F. Hoffmann-La Roche AG System for the thermally controlled processing of a biological sample
WO2019149958A1 (en) 2018-02-05 2019-08-08 F. Hoffmann-La Roche Ag Generation of single-stranded circular dna templates for single molecule
JP2021514651A (ja) 2018-03-02 2021-06-17 エフ．ホフマン−ラ ロシュ アーゲーＦ． Ｈｏｆｆｍａｎｎ−Ｌａ Ｒｏｃｈｅ Ａｋｔｉｅｎｇｅｓｅｌｌｓｃｈａｆｔ 単一分子配列決定のための一本鎖環状ｄｎａ鋳型の作成
EP3824484A1 (en) * 2018-07-19 2021-05-26 Beckman Coulter Inc. Magnetic particles
US11242519B2 (en) 2018-08-23 2022-02-08 Alpaqua Engineering, LLC Discontinuous wall hollow core magnet
CN109337309B (zh) * 2018-08-30 2021-01-29 英芮诚生化科技（上海）有限公司 储水多孔二氧化硅磁性颗粒及其制备工艺与应用
US20220033806A1 (en) 2018-09-21 2022-02-03 Roche Sequencing Solutions, Inc. System and Method for Modular and Combinatorial Nucleic Acid Sample Preparation for Sequencing
US11591591B2 (en) 2019-08-21 2023-02-28 New England Biolabs, Inc. Isolation of high molecular weight DNA using beads
US20220372566A1 (en) 2019-09-20 2022-11-24 Roche Sequencing Solutions, Inc. Immune repertoire profiling by primer extension target enrichment
CN112176029B (zh) 2020-06-12 2021-05-14 中山大学达安基因股份有限公司 一种拭子核酸样本释放剂及其应用
JP2023533271A (ja) 2020-07-08 2023-08-02 エフ． ホフマン－ラ ロシュ アーゲー 次世代シーケンシングライブラリーの標的捕捉中の、ポイズンプライマーを使用した非標的ライブラリー分子の標的化された枯渇
US20220177950A1 (en) 2020-12-03 2022-06-09 Roche Sequencing Solutions, Inc. Whole transcriptome analysis in single cells
WO2024013241A1 (en) 2022-07-14 2024-01-18 F. Hoffmann-La Roche Ag Variant allele enrichment by unidirectional dual probe primer extension

Family Cites Families (100)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US2913419A (en) * 1956-04-18 1959-11-17 Du Pont Chemical process and composition
US2885366A (en) * 1956-06-28 1959-05-05 Du Pont Product comprising a skin of dense, hydrated amorphous silica bound upon a core of another solid material and process of making same
DE2313331C2 (de) * 1973-03-17 1986-11-13 Merck Patent Gmbh, 6100 Darmstadt Eisenoxidhaltige Glimmerschuppenpigmente
US3945862A (en) * 1973-06-26 1976-03-23 Merck & Co., Inc. Coated ferrous substrates comprising an amorphous magnesia-silica complex
DE2625106C2 (de) * 1976-06-04 1982-03-11 Bayer Ag, 5090 Leverkusen Eisenoxidschwarz-Pigmente mit verbesserter Oxidationsbeständigkeit und Verfahren zu ihrer Herstellung
US4124735A (en) * 1976-12-02 1978-11-07 Xerox Corporation Magnetic glass carrier materials
US4124385A (en) * 1976-12-02 1978-11-07 Xerox Corporation Magnetic glass carrier materials
US4126437A (en) * 1976-12-02 1978-11-21 Xerox Corporation Magnetic glass carrier materials
DE2810995C2 (de) * 1977-03-15 1985-02-14 Hitachi, Ltd., Tokio/Tokyo Magnetisches Adsorbens und Verfahren zu seiner Herstellung
US4223169A (en) * 1978-02-03 1980-09-16 Ferro Corporation Process for polybrominating bisphenoxyalkanes
US4233169A (en) * 1979-04-13 1980-11-11 Corning Glass Works Porous magnetic glass structure
US4395271A (en) * 1979-04-13 1983-07-26 Corning Glass Works Method for making porous magnetic glass and crystal-containing structures
US4297337A (en) † 1979-04-13 1981-10-27 Corning Glass Works Solid-phase immunoassays using magnetic glass
JPS5676510A (en) * 1979-11-28 1981-06-24 Tdk Corp Manufacture of magnetic recording material
JPS56105337A (en) * 1980-01-28 1981-08-21 Tdk Corp Magnetic recording medium and its production
US4280918A (en) * 1980-03-10 1981-07-28 International Business Machines Corporation Magnetic particle dispersions
US4360441A (en) * 1981-06-25 1982-11-23 Corning Glass Works Glass-encapsulated magnetic materials and methods for making them
US4448884A (en) * 1982-03-03 1984-05-15 Kms Fusion, Inc. Glass-surface microcarrier for growth of cell cultures
DE3211309A1 (de) * 1982-03-26 1983-09-29 Metin Dipl.-Ing. 6100 Darmstadt Colpan Chromatographisches verfahren zur isolierung von makromolekuelen
US4695392A (en) * 1983-05-12 1987-09-22 Advanced Magnetics Inc. Magnetic particles for use in separations
US4695393A (en) * 1983-05-12 1987-09-22 Advanced Magnetics Inc. Magnetic particles for use in separations
US4628037A (en) * 1983-05-12 1986-12-09 Advanced Magnetics, Inc. Binding assays employing magnetic particles
US4698302A (en) * 1983-05-12 1987-10-06 Advanced Magnetics, Inc. Enzymatic reactions using magnetic particles
US4672040A (en) * 1983-05-12 1987-06-09 Advanced Magnetics, Inc. Magnetic particles for use in separations
US4554088A (en) * 1983-05-12 1985-11-19 Advanced Magnetics Inc. Magnetic particles for use in separations
GB8401636D0 (en) * 1984-01-21 1984-02-22 British Petroleum Co Plc Coating process
US5236623A (en) * 1984-07-11 1993-08-17 Rhone-Poulenc Chimie Process for the production of a silica colloid
US4824712A (en) * 1984-07-16 1989-04-25 Ppg Industries, Inc. Treatment of glass to reduce venting during thermal treatment and a glass article made thereby
DE3603061A1 (de) * 1985-03-01 1986-09-04 Bbc Brown Boveri Ag, Baden, Aargau Verfahren zur herstellung eines weichmagnetischen verbundwerkstoffes mit geringen wirbelstromverlusten auf der basis eines weichmagnetischen, metallischen werkstoffs und danach hergestellter verbundwerkstoff
US4683202A (en) * 1985-03-28 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying nucleic acid sequences
US4683195A (en) * 1986-01-30 1987-07-28 Cetus Corporation Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences
US5512332A (en) * 1985-10-04 1996-04-30 Immunivest Corporation Process of making resuspendable coated magnetic particles
US5597531A (en) * 1985-10-04 1997-01-28 Immunivest Corporation Resuspendable coated magnetic particles and stable magnetic particle suspensions
US5076950A (en) * 1985-12-20 1991-12-31 Syntex (U.S.A.) Inc. Magnetic composition for particle separation
US5206568A (en) * 1986-03-26 1993-04-27 Beckman Instruments, Inc. Coordinated control of stepper motors
US4751211A (en) * 1986-08-07 1988-06-14 Aluminum Company Of America Composite adsorbent for removing acids from organophosphate functional fluids
JPS63109105A (ja) * 1986-10-25 1988-05-13 Chisso Corp 強磁性金属微粒子の製造方法
DE3639949A1 (de) * 1986-11-22 1988-06-09 Diagen Inst Molekularbio Verfahren zur trennung von langkettigen nukleinsaeuren
US4767670A (en) * 1987-01-21 1988-08-30 E. I. Du Pont De Nemours And Company Chromatographic supports for separation of oligonucleotides
NO162946C (no) * 1987-08-21 1990-03-14 Otto Soerensen Anordning for magnetisk separasjon av celler.
WO1988006633A1 (en) * 1987-03-02 1988-09-07 Arnold Lyle John Jr Polycationic supports for nucleic acid purification, separation and hybridization
DE3724442A1 (de) * 1987-07-23 1989-02-02 Europ Lab Molekularbiolog Verfahren und vorrichtung zur reinigung von m-13-phagen-dna
ATE117829T1 (de) * 1988-05-24 1995-02-15 Anagen Uk Ltd Magnetisch anziehbare teilchen und herstellungsverfahren.
US5312485A (en) * 1988-08-05 1994-05-17 J. M. Huber Corporation Precipitated encapsulated paper pigments and methods
US5075430A (en) * 1988-12-12 1991-12-24 Bio-Rad Laboratories, Inc. Process for the purification of DNA on diatomaceous earth
NL8900725A (nl) * 1989-03-23 1990-10-16 Az Univ Amsterdam Werkwijze en combinatie van middelen voor het isoleren van nucleinezuur.
US5234809A (en) * 1989-03-23 1993-08-10 Akzo N.V. Process for isolating nucleic acid
US5352645A (en) * 1989-04-14 1994-10-04 E. I. Du Pont De Nemours And Company Silica microspheres, method of improving attrition resistance and use
US5055194A (en) * 1989-07-28 1991-10-08 University Of Pennsylvania Support for high performance liquid chromatography in a magnetically stabilized fluidized bed
US5698271A (en) * 1989-08-22 1997-12-16 Immunivest Corporation Methods for the manufacture of magnetically responsive particles
US5279936A (en) * 1989-12-22 1994-01-18 Syntex (U.S.A.) Inc. Method of separation employing magnetic particles and second medium
GB9003253D0 (en) * 1990-02-13 1990-04-11 Amersham Int Plc Precipitating polymers
US5523231A (en) * 1990-02-13 1996-06-04 Amersham International Plc Method to isolate macromolecules using magnetically attractable beads which do not specifically bind the macromolecules
US5236783A (en) * 1990-02-21 1993-08-17 Toda Kogyo Corp. Superparamagnetic fine particles of iron oxide and magnetic recording media containing said particles
US5316699A (en) * 1990-03-28 1994-05-31 The United States Of America As Repesented By The Secretary Of Commerce Process for the controlled preparation of a composite of ultrafine magnetic particles homogeneously dispersed in a dielectric matrix
WO1991016675A1 (en) * 1990-04-06 1991-10-31 Applied Biosystems, Inc. Automated molecular biology laboratory
US5693502A (en) * 1990-06-11 1997-12-02 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid ligand inhibitors to DNA polymerases
US5763173A (en) * 1990-06-11 1998-06-09 Nexstar Pharmaceuticals, Inc. Nucleic acid ligand inhibitors to DNA polymerases
US5210015A (en) * 1990-08-06 1993-05-11 Hoffman-La Roche Inc. Homogeneous assay system using the nuclease activity of a nucleic acid polymerase
US5217804A (en) * 1990-11-06 1993-06-08 Eastman Kodak Company Magnetic particles
US5155018A (en) * 1991-07-10 1992-10-13 Hahnemann University Process and kit for isolating and purifying RNA from biological sources
US5395498A (en) * 1991-11-06 1995-03-07 Gombinsky; Moshe Method for separating biological macromolecules and means therfor
US5610274A (en) * 1991-11-20 1997-03-11 Cpg, Inc. Production and use of magnetic porous inorganic materials
US5734020A (en) * 1991-11-20 1998-03-31 Cpg, Inc. Production and use of magnetic porous inorganic materials
US5346994A (en) * 1992-01-28 1994-09-13 Piotr Chomczynski Shelf-stable product and process for isolating RNA, DNA and proteins
EP0555798B1 (en) * 1992-02-13 1999-05-06 Becton, Dickinson and Company Hydrated celite and purification of DNA
EP0566790B1 (en) * 1992-04-23 1996-08-07 Toda Kogyo Corp. Magnetic powder and magnetic toner
TW221381B (zh) * 1992-04-28 1994-03-01 Du Pont
IT1256064B (it) * 1992-07-28 1995-11-27 Donegani Guido Ist Metodo per la preparazione di geli porosi contenenti boro
CA2107524C (en) * 1992-10-06 1999-01-19 Hiromitsu Misawa Iron oxide particles and process for producing the same
US5578238A (en) * 1992-10-30 1996-11-26 Lord Corporation Magnetorheological materials utilizing surface-modified particles
CA2102264C (en) * 1992-11-13 2000-08-01 Daniel Lee Woodard Boron silicates, aluminum silicates, phosphosilicates and purification of dna
DE4307262A1 (de) * 1993-03-02 1994-09-08 Christian Bergemann Magnetisches polymeres Siliciumdioxid
US5648170A (en) * 1993-04-27 1997-07-15 Toda Kogyo Corporation Coated granular magnetite particles and process for producing the same
WO1995004140A1 (en) * 1993-07-28 1995-02-09 Akzo Nobel N.V. Process for isolating nucleic acid from gram positive microorganisms
DE69433425T2 (de) * 1993-08-30 2004-10-07 Promega Corp Zusammensetzungen und verfahren zur reinigung von nukleinsäuren
US5438127A (en) * 1993-09-27 1995-08-01 Becton Dickinson And Company DNA purification by solid phase extraction using a PCl3 modified glass fiber membrane
US5503816A (en) * 1993-09-27 1996-04-02 Becton Dickinson And Company Silicate compounds for DNA purification
US5599627A (en) * 1993-10-08 1997-02-04 Toda Kogyo Corporation Magnetic particles comprising magnetite core and process for producing the same
US5990301A (en) * 1994-02-07 1999-11-23 Qiagen Gmbh Process for the separation and purification of nucleic acids from biological sources
JP3847779B2 (ja) * 1994-02-07 2006-11-22 クイアジェン・ゲゼルシャフト・ミット・ベシュレンクテル・ハフツング 遺伝子治療のためのエンドトキシンを含まないかエンドトキシンを減少させた核酸及び／またはオリゴヌクレオチドの製造方法
GB9411572D0 (en) * 1994-06-09 1994-08-03 Amersham Int Plc Magnetic bead precipitation method
ATE191086T1 (de) * 1994-07-27 2000-04-15 Pilgrimm Herbert Superparamagnetische teilchen, verfahren zur herstellung und deren verwendung
US5582988A (en) * 1994-09-15 1996-12-10 Johnson & Johnson Clinical Diagnostics, Inc. Methods for capture and selective release of nucleic acids using weakly basic polymer and amplification of same
US5705628A (en) * 1994-09-20 1998-01-06 Whitehead Institute For Biomedical Research DNA purification and isolation using magnetic particles
US5660984A (en) * 1994-12-09 1997-08-26 Davis; Thomas E. DNA isolating apparatus comprising a non-porous DNA binding, anion exchange resin and methods of use thereof
FR2732116B1 (fr) * 1995-03-21 1997-05-09 Bio Merieux Procede et dispositif pour la determination qualitative et/ou quantitative d'un analyte, notamment d'une bacterie, dans un echantillon, par voie magnetique
US5683875A (en) * 1995-05-04 1997-11-04 Hewlett-Packard Company Method for detecting a target nucleic acid analyte in a sample
IN188702B (zh) * 1995-06-01 2002-10-26 Degussa
DE19520398B4 (de) * 1995-06-08 2009-04-16 Roche Diagnostics Gmbh Magnetisches Pigment
DE19520964A1 (de) * 1995-06-08 1996-12-12 Inst Neue Mat Gemein Gmbh Beschichtete anorganische Pigmente, Verfahren zu deren Herstellung und deren Verwendung
JP2965131B2 (ja) * 1995-07-07 1999-10-18 東洋紡績株式会社 核酸結合用磁性担体およびそれを用いる核酸単離方法
US5783686A (en) * 1995-09-15 1998-07-21 Beckman Instruments, Inc. Method for purifying nucleic acids from heterogenous mixtures
US5904848A (en) * 1996-02-21 1999-05-18 Cpg, Inc. Controlled pore glass-synthetic resin membrane
US5972721A (en) * 1996-03-14 1999-10-26 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Air Force Immunomagnetic assay system for clinical diagnosis and other purposes
DE19622885A1 (de) * 1996-06-07 1997-12-11 Boehringer Mannheim Gmbh Reagenzzubereitung enthaltend magnetische Partikel in Form einer Tablette
HU225261B1 (en) * 1997-01-21 2006-08-28 Grace W R & Co Silica adsorbent on magnetic substrate
US6027945A (en) * 1997-01-21 2000-02-22 Promega Corporation Methods of isolating biological target materials using silica magnetic particles
US5990479A (en) * 1997-11-25 1999-11-23 Regents Of The University Of California Organo Luminescent semiconductor nanocrystal probes for biological applications and process for making and using such probes
US6368366B1 (en) * 1999-07-07 2002-04-09 The Lubrizol Corporation Process and apparatus for making aqueous hydrocarbon fuel compositions, and aqueous hydrocarbon fuel composition

Also Published As

Publication number Publication date
DK1577389T3 (da) 2007-11-26
US6255477B1 (en) 2001-07-03
AU707115B2 (en) 1999-07-01
ATE239031T1 (de) 2003-05-15
CA2440504C (en) 2009-02-03
CN1106401C (zh) 2003-04-23
DE59610405D1 (de) 2003-06-05
CA2223821C (en) 2008-02-05
ES2290803T3 (es) 2008-02-16
EP1577389A2 (de) 2005-09-21
ATE368109T1 (de) 2007-08-15
US20030135038A1 (en) 2003-07-17
CN1439646A (zh) 2003-09-03
JP3950478B2 (ja) 2007-08-01
ES2247236T3 (es) 2006-03-01
DE19520398B4 (de) 2009-04-16
CA2440504A1 (en) 2005-02-25
CA2607563A1 (en) 1996-12-27
CN1974781B (zh) 2013-05-22
CA2605671A1 (en) 1996-12-27
CN1891833A (zh) 2007-01-10
EP0837871A1 (de) 1998-04-29
CA2605671C (en) 2013-07-30
US6870047B2 (en) 2005-03-22
CA2223821A1 (en) 1996-12-27
WO1996041811A1 (de) 1996-12-27
HK1051048A1 (en) 2003-07-18
EP1577389A3 (de) 2005-11-23
CN1974781A (zh) 2007-06-06
NO330520B1 (no) 2011-05-09
NO975772L (no) 1998-02-06
DE19520398A1 (de) 1996-12-12
US20020137920A1 (en) 2002-09-26
DE59611440D1 (de) 2007-09-06
NO325384B1 (no) 2008-04-14
DK1281714T3 (da) 2005-12-19
JP4456046B2 (ja) 2010-04-28
NZ311648A (en) 1999-08-30
CN1192217A (zh) 1998-09-02
NO975772D0 (no) 1997-12-08
EP1577389B1 (de) 2007-07-25
EP0837871B1 (de) 2003-05-02
HK1075065A1 (en) 2005-12-02
ES2197947T3 (es) 2004-01-16
EP1577389B2 (de) 2017-08-16
DE19537985A1 (de) 1997-04-17
EP1602724A1 (de) 2005-12-07
DE59611258D1 (de) 2005-09-15
AU6300796A (en) 1997-01-09
EP1281714A1 (de) 2003-02-05
NO20072301L (no) 1997-12-08
EP1281714B1 (de) 2005-08-10
DK0837871T3 (da) 2003-08-25
ATE301665T1 (de) 2005-08-15
JPH11509364A (ja) 1999-08-17
JP2006075160A (ja) 2006-03-23

Similar Documents

Publication Publication Date Title
CN1267447C (zh) 离析核酸的方法
US7371830B2 (en) Method for separating biological material from a fluid using magnetic particles
CN1310938C (zh) 在核酸固相上的吸附
CN1277922C (zh) 从任意复杂起始材料中分离核酸的制剂和方法以及接下来的染色体组基因分析
JP5354894B2 (ja) ポリドカノールおよび誘導体を用いた核酸単離
CN87107800A (zh) 捕获靶子及本底的方法及亲和性测定的装置
JP2014221061A (ja) 管内で対象成分を操作するための操作管
CN101076603A (zh) 从生物和细胞材料分离核酸的方法
CN1370230A (zh) Dna的同时分离和定量
CN1303201C (zh) 从体积较大的样品中制备要分析的样品
EP1932913A1 (en) Nucleic acid isolation using polidocanol and derivatives
CN110607297B (zh) 一种磁珠法提取核酸的裂解液及使用该裂解液提取核酸的方法
US20150219637A1 (en) Analytical processing and detection device
CN1203188C (zh) 一种生物芯片的纳米放大检测方法
JP3621673B2 (ja) バチルス株からのプロテアーゼを用いた非タンパク質成分の分析方法

Legal Events

Date Code Title Description
C06 Publication
PB01 Publication
C10 Entry into substantive examination
SE01 Entry into force of request for substantive examination
C14 Grant of patent or utility model
GR01 Patent grant
CX01 Expiry of patent term

Granted publication date: 20060802

EXPY Termination of patent right or utility model