CN1380977A - 生物传感器及其制造方法 - Google Patents

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Abstract

本发明的生物传感器在展开被检查溶液的展开层的局部,含有使所述被检查溶液中的测定对象物对应的抗体固定化的固定化试剂部(5),和保持以干燥状态在所述展开层的局部标记、可以通过所述被检查溶液的展开而溶出的抗体的标记试剂保持部(4),通过测定所述固定化试剂部分(5)上的所述标记试剂的结合量,定性或定量所述被检查溶液的中测定成分,在该生物传感器上,所述展开层、相对所述被检查溶液的浸透方向平行的侧面的一部分或整体被熔融固化,密闭着。具有这样构成的生物传感器,可以使展开层上的被检查溶液的浸透整齐,另外利用简单的制造方法可以实现低成本高精度的生物传感器及其制造方法。

Description

生物传感器及其制造方法
技术领域
本发明涉及生物传感器，特别涉及利用色谱的生物传感器及其制造方法。
背景技术
已有的生物传感器具有展开被检查溶液的展开层，在该展开层的局部含有使试剂固定化的试剂固定化部分，和被标记的试剂以干燥状态保持、可以通过被检查溶液的展开而溶出的试剂保持部分，通过测定所述试剂固定化部分上的标记试剂的结合量，定性或定量被检查溶液中的测定成分。这样的生物传感器的实例有免疫色谱传感器。
免疫色谱传感器的结构一般具有添加被检查溶液的添加层、多个展开层、终端上设有吸收层，该展开层的局部具有将被检查溶液中的测定对象物的抗体固定化的抗体固定化部。而且在该抗体固定化部的添加层侧标记，与被该抗体固定化部固定化的抗体不同的表位(抗原决定基)对应的抗体以可以通过被检查溶液溶出的干燥状态保持在标记试剂保持部。这样的色谱传感器的反应形态被称之为夹层反应，形成被固定化的抗体、被检查溶液中的测定对象物、标记抗体的夹层复合体。另外，所述被检查溶液在同一分子内具有同一的结构，例如在2聚体以上的抗原的情况，在所述标记试剂保持部上没有必要保持和所述固定化的抗体不同的表位对应的抗体，也可以做成保持和该固定化的抗体相同的表位对应的抗体。
下面对使用这样的免疫色谱传感器的测定方法进行说明。
首先在添加层添加必要量的被检查溶液，被检查溶液浸透在展开层中，开始测定。然后在所述抗体固定化部，通过和该固定化抗体结合的标记抗体，检测测定结果。作为该标记抗体一般的标记物有胶体金粒子等，通过这样利用胶体金粒子等标记抗体，在抗体固定化部上的测定对象物和抗体的结合可以通过胶体金粒子目视看到，可以通过目测得到测定结果。
另外，尽管这里说明了抗原抗体反应的夹层反应作为测定原理的情况，但是除此之外也可能将竞争反应作为测定原理。该种情况也同样可以通过确认抗体固定化部(或者测定对象物为抗体的情况为抗原固定化部)上的标记抗体的结合状态，得到测定结果。
另外，作为得到测定结果的方法这里说明了需要根据目测定性判定的情况，但是所需要的测定结果为半定量或需要精度更高的判定时，有如下方法，使用一般的反射分光光度计的密度模式分析器读取反射吸光度的方法；或者采用特开平10-274624号公报公开的光学读取装置，利用透过方式读取的方法；特开平10-274653号公报中公开的利用照相机等将测定结果以图象进行照相读取、演算处理的方法等。
这样的免疫色谱传感器近几年做成适应在医疗诊断现场上依据POC(测试点.观察.护理)的观点、迅速、简便、正确、而且价格低、容易得到的测定装置，由于测定操作简便，不仅医疗现场，而且也被广泛的应用在一般家庭中限定的测定项目的诊断等。
但是，使用免疫色谱传感器的测定，在被检查溶液渗透的过程中，必须依赖人为的操作困难、也就是展开层具有的渗透性。这里一方面具有操作简便的免疫色谱传感器的优点，另外在精度方面存在缺点。也就是展开层的平行侧面开放的免疫色谱传感器被检测溶液渗透速度不均一，这样的状况下不仅是测定对象物的展开不均一，而且标记试剂的展开也不均一，难于得到高精度的定量。另外具有这样构成的免疫色谱传感器只能具有定性或定量精度低的半定量的性能，进行测定时限于使用在低精度的测定项目中。而且由于展开层的平行侧面开放，被检查溶液的状态也受到影响，例如将血液成分等做成被检查溶液的情况，由于难于进行高精度的测量，导致被检查溶液的种类也受到限制。
为了解决该问题，特开2001-66310号公报中公开色谱定量测定装置，其中，在色谱装置的展开层的表面以及平行侧面上，紧密地包覆液体不透过性薄片，使被检查溶液的浸透状态均匀，实现更高精度的测定。
但是在所述特开2001-66310号公报中公开的色谱仪器上不只是需要组装施工方法上需要繁杂的操作，例如使用十分薄的膜作为展开层时，密闭添加被检查溶液的部分的平行侧面的操作繁杂，存在问题。
另外，作为批量生产免疫色谱传感器的展开层的施工方法，一般的是在展开层上成批形成试剂成分，最终切断分离展开层，利用该方法制作特开2001-66310号公报上公开的色谱仪器的免疫色谱传感器时，不能密闭平行侧面，为了密闭其平行侧面，必须使切断后的免疫色谱传感器一个一个分别制作，存在问题。另外，利用胶带等的液体不透过性薄片将这样的平行侧面一个一个地密闭的操作需要繁杂的操作，而且还需要得到该结构使用的材料，结果成本高，存在问题。
而且，在成批形成所述的展开层的施工方法中，以相对展开层被检查溶液的展开方向横断的形态，形成试剂成分。并且利用所述施工方法形成、平行侧面开放着的结构的免疫色谱传感器，在出现展开层不均一的被检查溶液的浸透的情况下，展开层的平行侧面部分的流速容易发生变化，结果标记试剂以及被检查溶液中的测定对象物通过所述试剂固定化部分的量完全发生变化，在该试剂固定化部分结合的标记试剂成分的量在试剂固定化部分的中央部和平行侧面部分变得不均一，使测定精度低下，存在问题。并且，产生这样的问题的原因例如有，成批形成展开层的制造施工方法等，含有切断展开层的工序的制造施工方法上的切断方法是由剪切机、剪刀、模压机、闸刀式剪切机、旋转式剪切机、截纸机等的刀具决定的。也就是利用刀具切断所述展开层时，必须接触该展开层切断，并且在展开层上由于多数情况使用无纺布、玻璃纤维、纤维素纤维、薄膜等，相对接触压产生形状变化的材料，所以在切断时形状变化会变得不均一，从而产生测定时的不均一浸透。
本发明是为了解决所述的问题点而进行的，目的在于提供可以使展开层上的被检查溶液的浸透整齐，并且制造方法简单，成本低而且精度高的生物传感器及其制造方法。
发明内容
本发明的权利要求1所述的生物传感器具有展开被检查溶液的展开层，含有在该展开层的局部被固定化的固定化试剂部分，和以被标记的干燥状态保持在所述展开层的局部、可以通过所述被检查溶液的展开而溶出的标记试剂部分，通过测定所述固定化试剂部分上的所述标记试剂的结合量，定性或定量所述被检查溶液中的测定成分。在该生物传感器上所述展开层的相对所述被检查溶液的浸透方向平行的侧面的一部分或整体被熔融固化密闭着。
这样使被检查溶液的浸透整齐，不仅可以进行更高精度的定量测定，而且对于平行侧面的密闭不需要新材料，可以使操作过程简易化，通过减少材料和减少制造工序数量，实现低成本化，可以提供更高精度而且成本低的生物传感器。
本发明的权利要求2所述的生物传感器具有展开被检查溶液的展开层，含有相对该展开层的所述被检查溶液的浸透方向包含平行侧面的局部被固定化的固定化试剂部分，和以被标记的干燥状态保持在所述展开层的浸透方向包含平行侧面的局部、可以通过所述被检查溶液的展开而溶出的标记试剂部分，通过测定所述固定化试剂部分上的所述标记试剂的结合量，定性或定量所述被检查溶液中的测定成分。在该生物传感器上，所述展开层使相对所述被检查溶液的浸透方向，所述标记试剂部分的平行侧面和所述固定化试剂部分的平行侧面上的试剂成分变性失活。
这样可以提供的生物传感器能够防止所述展开层的侧面部分的不均一的被检查溶液的浸透引起的所述固定化试剂部分的测定精度的低下。
本发明的权利要求3所述的生物传感器是一种在权利要求2所述的生物传感器中，所述展开层相对所述被检查溶液的浸透方向平行的侧面的一部分或者整体被熔融固化密闭着。
这样可以防止所述展开层的侧面部分的不均一的被检查溶液的浸透引起的所述固定化试剂部分的测定精度的低下，而且使所述检查溶液的浸透整齐，可以进行更高精度的定量测定，提供更高精度的生物传感器。另外可以提供在所述平行侧面密闭时不需要新的材料，可以使制造过程简易化，可以实现减少材料和减少制造工序数量带来的低成本化的生物传感器。
本发明的权利要求4所述的生物传感器是一种如下所述的装置，在权利要求1至权利要求3任何一项所述的生物传感器中，所述展开层除添加所述被检查溶液局部的表面、或者表面以及里面用液体不透过性的薄片覆盖，所述展开层以及所述液体不透过性的薄片相对所述被检查溶液的浸透方向平行的侧面的一部分或者整体被熔融固化密闭着。
这样通过密闭所述展开层的表面、里面还有所述平行侧面，防止所述被检查溶液错误的添加，可以提供高正确性测定的、正确性高的生物传感器。
本发明的权利要求5所述的生物传感器是一种如下所述的装置，在权利要求1至权利要求3任何一项所述的生物传感器中，所述展开层除添加所述被检查溶液方向相对的起点和终点局部的表面、或者表面以及里面用液体不透过性的薄片覆盖，所述展开层以及所述液体不透过性的薄片相对所述被检查溶液的浸透方向平行的侧面的一部分或者整体被熔融固化密闭着。
这样由于液体不透过性薄片覆盖所述展开层的表面、里面，遮断液体，而且利用熔融固化密闭所述平行侧面进行遮断，防止所述被检查溶液错误的添加，可以提供高正确性测定。另外，通过所述展开层的被检查溶液的展开方向对应的终端部的开放，利用水分的蒸发，或者残存在添加部的被检查溶液的水头差的关系，有着被检查溶液直至干燥为止向着下流方向持续浸透的效果，不需要用于使多余的被检查溶液吸收的吸收材料，制成更加简单的结构，可以提供低成本而且正确性高的生物传感器。
本发明的权利要求6所述的生物传感器是一种如下所述的装置，在权利要求1至权利要求3所述的任何一项中所述的生物传感器中，所述展开层由硝化纤维素构成。
这样可以提供制造操作容易的生物传感器。
本发明的权利要求7所述的生物传感器是一种如下所述的装置，在权利要求1至权利要求3所述的任何一项中所述的生物传感器中，所述展开层的平行侧面利用激光熔融固化密闭。
这样可以使所述展开层的平行侧面的必要部分更高速、更均一地熔融固化，使熔融固化的部分具有均一性，提供更加高精度的生物传感器。
本发明的权利要求8所述的生物传感器在权利要求1至权利要求3所述的任何一项中所述的生物传感器中，包括所述固定化试剂以及标记试剂的该传感器的整体处于干燥状态。
这样可以提供保存稳定性好并且移动自如的生物传感器。
本发明的权利要求9所述的生物传感器，在权利要求1至权利要求3所述的任何一项中所述的生物传感器中，所述生物传感器是一种在可以湿润的多孔性材料上形成所述固定化试剂和所述标记试剂的复合体，由此进行测定的免疫色谱法的试片。
这样作为简易方法在市场上不断推广的免疫色谱中，可以提供高精度而且正确性高的免疫色谱法。
本发明的权利要求10所述的生物传感器，在权利要求1至权利要求3所述的任何一项中所述的生物传感器中，所述生物传感器是一种在可以湿润的多孔性材料上，通过所述被检查溶液的添加操作进行测定的一步免疫色谱法试片。
这样作为简易方法在市场上不断普及的一步免疫色谱中，可以提供高精度而且正确性高的一步免疫色谱法。
本发明的权利要求11所述的生物传感器，在权利要求1至权利要求3所述的任何一项中所述的生物传感器中，所述固定化试剂和所述标记试剂在同一平面而且同一部件上形成着。
这样使用更少材料构成所述生物传感器，实现低成本化简单的结构，利用简单的结构，使测定值的波动降低，提高测定的精度，提供正确性高的生物传感器。
本发明的权利要求12所述的生物传感器的制造方法制造的生物传感器，具有展开被检查溶液的展开层，含有在该展开层的局部被固定化的固定化试剂部分，和以被标记的干燥状态保持在所述展开层的局部、可以通过所述被检查溶液的展开而溶出的标记试剂部分，通过测定所述固定化试剂部分上的所述标记试剂的结合量，定性或定量所述被检查溶液中的测定成分。在制造生物传感器的方法中，包括熔融固化密闭所述展开层的相对所述被检查溶液的浸透方向对应的平行的侧面的一部分或整体的熔融工序。
这样在所述展开层的平行侧面熔融固化密闭，使侧面密闭时，可以不需要新的材料，可以制作更低成本的生物传感器。
本发明的权利要求13所述的生物传感器的制造方法是一种在权利要求12所述的生物传感器的制造方法中，所述熔融工序通过激光照射所述展开层的所述侧面的一部分或整体进行的。
这样可以使所述展开层的侧面的物理的非接触性的熔融固化，不产生所述展开层的接触压带来的形状变化，可以制造高精度的生物传感器。
本发明的权利要求14所述的生物传感器的制造方法制造的生物传感器，具有展开被检查溶液的展开层，含有在该展开层的局部被固定化的固定化试剂部分，和以被标记的干燥状态保持在所述展开层的局部、可以通过所述被检查溶液的展开而溶出的标记试剂部分，通过测定所述固定化试剂部分上的所述标记试剂的结合量，定性或定量所述被检查溶液中的测定成分。在制造生物传感器的方法中，包括使薄片状的所述展开层相对所述被检查溶液的浸透方向平行切断，同时使该展开层的切断面熔融固化密闭的切断熔融工序。
这样通过一边切断所述薄片状的展开层，一边同时使该侧面熔融固化，密闭，不需要更高精度的或新的密闭操作，可以制作简易而且成本低的生物传感器。
本发明的权利要求15所述的生物传感器的制造方法是一种在权利要求14所述的生物传感器的制造方法中，所述切断熔融工序通过激光裁切所述薄片状的展开层进行的。
这样通过激光裁切所述薄片状的展开层的过程，使所述展开层的平行侧面熔融固化，密闭，不需要更高精度的或新的密闭操作，可以制作简易而且成本低的生物传感器。或者对所述展开层的侧面可以通过物理的非接触使其熔融固化，不产生所述展开层的接触压带来的形状变化，可以制造高精度的生物传感器。
本发明的权利要求16所述的生物传感器的制造方法制造的生物传感器，具有展开被检查溶液的展开层，包括含有该展开层的所述被检查溶液的浸透方向相对的平行侧面的局部被固定化的固定化试剂部分，和以被标记的干燥状态保持在含有所述展开层的浸透方向对应的平行侧面局部、可以通过所述被检查溶液的展开而溶出的标记试剂部分，通过测定所述固定化试剂部分上的所述标记试剂的结合量，定性或定量所述被检查溶液中的测定成分。在制造该生物传感器的方法中，包含使所述标记试剂部分以及所述固定化试剂部分在所述被检查溶液的浸透方向对应的平行的侧面上的试剂成分变性失活的变性失活工序。
这样可以使所述展开层的平行侧面的周边的试剂成分失活，可以制作防止在该展开层的侧面上产生不均一的被检查溶液的浸透带来的测定精度的降低的生物传感器。
本发明的权利要求17所述的生物传感器的制造方法是一种在权利要求16所述的生物传感器的制造方法中，所述变性失活工序通过激光照射所述侧面进行的。
这样可以对所述展开层的平行侧面通过非接触使试剂成分变性，可以制造高精度的生物传感器。
本发明的权利要求18所述的生物传感器的制造方法制造的生物传感器，具有展开被检查溶液的展开层，包括含有该展开层的所述被检查溶液的浸透方向相对的平行侧面的局部被固定化的固定化试剂部分，和以被标记的干燥状态保持在含有所述展开层的浸透方向对应的平行侧面局部、可以通过所述被检查溶液的展开而溶出的标记试剂部分，通过测定所述固定化试剂部分上的所述标记试剂的结合量，定性或定量所述被检查溶液中的测定成分。在制造该生物传感器的方法中，包括所述展开层的所述被检查溶液的浸透方向对应的平行的侧面的一部分或整体熔融固化，密闭，同时使所述标记试剂部分以及所述固定化试剂部分、所述被检查溶液的浸透方向对应的平行的侧面上的试剂成分变性失活的熔融失活工序。
这样通过使所述展开层熔融固化、密闭的同时工序，可以使该平行侧面的试剂成分变性失活，可以制造通过一次操作可以进行的，更加简单、而且高精度的生物传感器。
本发明的权利要求19所述的生物传感器的制造方法是一种在权利要求18所述的生物传感器的制造方法中，所述熔融失活工序通过激光照射所述侧面进行的。
这样对所述展开层的侧面通过物理的非接触可以使其熔融固化，不产生所述展开层的接触压带来的形状变化，可以制造高精度的生物传感器。
本发明的权利要求20所述的生物传感器的制造方法制造的生物传感器具有展开被检查溶液的展开层，包括含有该展开层的所述被检查溶液的浸透方向相对的平行侧面的局部被固定化的固定化试剂部分，和以被标记的干燥状态保持在含有所述展开层的浸透方向对应的平行侧面局部、可以通过所述被检查溶液的展开而溶出的标记试剂部分，通过测定所述固定化试剂部分上的所述标记试剂的结合量，定性或定量所述被检查溶液中的测定成分。在制造该生物传感器的方法中，包括使薄片状的所述展开层沿相对所述被检查溶液的浸透方向平行地切断，同时使该展开层的切断面熔融固化，密闭，而且使所述标记试剂部分以及所述固定化试剂部分、所述侧面上的试剂成分变性失活的切断熔融失活工序。
这样在切断所述展开层的同时，使展开层熔融固化，密闭，而且利用同时工序可以使平行侧面的试剂成分变性失活，可以制造通过一次操作可以进行切断、熔融变性失活的，更加简单、低成本而且高精度的生物传感器。
本发明的权利要求21所述的生物传感器的制造方法是一种在权利要求20所述的生物传感器的制造方法中，所述切断熔融失活工序通过激光裁切所述薄片状的展开层进行的。
这样在切断所述展开层的同时，使展开层熔融固化，密闭，而且利用同时工序可以使平行侧面的试剂成分变性失活，可以制造通过一次操作可以进行切断、熔融变性失活的，更加简单、低成本而且高精度的生物传感器。另外对所述展开层的侧面通过物理的非接触可以使其熔融固化，不产生所述展开层的接触压带来的形状变化，可以制造高精度的生物传感器。
附图简要说明
图1是显示本发明实施方案1中的生物传感器的结构的侧面图。
图2是显示本发明实施方案2中的生物传感器的结构的侧面图。
图3是显示本发明实施方案3中的生物传感器的结构的侧面图。
图4是显示本发明实施方案4中的试剂固定化部不接触展开层的平行侧面的生物传感器的切断前后的剖面的结构的图。
图5是显示本发明实施方案4中的试剂固定化部接触展开层的平行侧面的生物传感器的切断前后的剖面的结构的图。
图6是利用已有的切断工序切断的生物传感器的剖面的显微镜照片。
图7是利用本发明的实施方案4的切断工序切断的生物传感器的剖面的显微镜照片。
图8是显示本发明实施方案5中的生物传感器的结构的侧面图。
图9是显示本发明实施方案5中的生物传感器的测定状态的模式图。
图10是显示本发明实施例的2种免疫色谱法试片上hCG浓度和测定结果的关系的图。
发明的最佳实施方案
下面对本发明的实施方案进行说明。
实施方案1
本发明实施方案1中的传感器及其制造方法中，被检查溶液是以均一的速度在展开层上浸透的。
首先使用图1对本发明实施方案1中的传感器的构成进行说明。
图1是显示本发明实施方案1中的生物传感器的结构的立体图；图1(a)是显示只有展开层的该传感器构成图；图1(b)显示在展开层的上部配设液体不透过性薄片材料的构成图；图1(c)显示在展开层的上部配设液体不透过性薄片材料、在其下边配设基板的构成图。
在图1上，1显示在展开层上添加被检查溶液的添加部，利用无纺织物构成。2是展开层上的反应部，硝化纤维素构成。3显示吸收浸透在展开层上的溶液的吸水部，由玻璃纤维滤纸构成。在这些展开层上使用的材料只要是由被检查溶液可以湿润的材料就可以，可以用滤纸、无纺织物、膜、布等任意的多孔质材料构成。
另外，4是标记试剂保持部，在展开层上相对被检查溶液中的测定对象物的抗体用金胶体标记，以可由被检查溶液溶出的干燥状态保持。5是试剂固定化部，将被检查溶液中的测定对象物相对的抗体固定化，利用和标记试剂不同的表位结合，以形成被检查溶液中的测定对象物和标记试剂的复合的以干燥状态被固定化。在本实施方案1中，所述标记试剂保持部4以及试剂固定化部5在展开层上的局部形成斑点状，特别具有所述被检查溶液中添加方向相对的平行侧面上试剂不接触的构成。另外，在这里将所述标记试剂保持部4以及试剂固定化部5的形状做成斑点形状，但是不一定要是斑点形状，只要是由所述标记试剂保持部4以及试剂固定化部5相对所述展开层的平行侧面不接触的形状形成，其形状可以自由选择。另外具有所述标记试剂保持部4以及试剂固定化部5的展开层的构成是一种被称作在抗原抗体反应中的夹层式反应的结构，通过选择试剂，如果使用和被检查溶液中的测定对象物进行竞争反应的试剂，也可以将该展开层的构成做成竞争反应。另外，除抗原抗体反应以外的也一样，在欲利用特异的结合的情况，可以利用任意的试剂成分构成。另外，对于标记方法，所述的金胶体也只是一个例子而已，除此之外还有酶、蛋白质、色素、荧光色素、金属溶胶、非金属溶胶、胶乳等的着色粒子等，根据需要可以任意选择。
6表示液体不透过性薄片材料，例如由透明PET带构成。该液体不透过性薄片材料6是一种密封包覆除添加部1之外的展开层的构成，通过使该液体不透过性薄片材料6包覆在展开层所述的部分，遮断保护向被检查溶液的添加部1之外的点状附着，同时可以防止来自外部的污染，如对展开层无意地接触被检查溶液，被检查者用手等直接接触展开层等。该液体不透过性薄片材料6优选使用透明的材料，特别是包覆试剂固定化部5的部分，由于是确认测定结果的部分，所以至少优选维持可以透过的状态。另外在不需要传感器具有高精度的结果，或者将形成的展开层最终放入中空箱中的情况，也可以不需要所述液体不透过性薄片材料6。
7表示保持展开层的基板，例如白色PET薄膜构成基板7具有增强展开层的作用，同时在使用血液、唾液、尿等具有感染危险的溶液作为被检查溶液中的情况，具有将其遮断的作用。而且所述基板7湿润展开层，具有光透过性的情况，也可以具有遮断光的效果。另外，这里规定将基板7配设在展开层的下部，也可以取代基板7利用液体不透过性薄片材料6包覆展开层的里面。这种情况在使用血液、唾液、尿等具有感染危险的溶液作为被检查溶液中的情况，具有将其遮断的作用。而且，由于可以减少传感器的材料数，所以可以更加降低成本。
8表示熔融固化部，是利用CO2激光使所述展开层的平行侧面熔融，通过其冷却使其固化而形成。在本实施方案1中由于所述标记试剂保持部4以及试剂固定化部5不接触所述展开层的平行侧面，所以即使使其侧面熔融，所述标记试剂保持部4以及试剂固定化部5也不受影响。因而，可以将所述标记试剂保持部4以及试剂固定化部5的试剂量放至最小限，试剂价格高的情况以及只有微量的情况下更有效。另外，本实施方案1中，熔融方法使用CO2激光，除此之外，也可以使用受激准分子激光、氩激光、YAG激光、氦氖激光、红宝石激光等。另外，除激光之外，也可以使用加热金属等使其接触，使所述展开层的平行侧面熔融，而且也可以根据所述展开层的材料通过有机溶剂等使其溶融。另外，所述的熔融方法是一个例子，只要能够使所述展开层的平行侧面融合，使用任何方法都可以。
下面，使用图1对具有以上构成的本实施方案1的生物传感器的测定方法进行说明。本实施方案1中例举的生物传感器是一步免疫色谱的试片，使用时的基本的测定操作是只要添加被检查溶液的操作，其测定就可以开始。这里的免疫色谱法是一种测定体系，表示使用可以湿润的多孔质材料，使其形成固定化试剂和标记试剂的复合体，由此进行测定的免疫测定法，利用抗原抗体反应的测定体系，相对在通常免疫测定法中B/F分离等必要的洗净操作，被检查溶液浸透色谱法担体，通过该过程实现B/F分离。另外在这样的免疫色谱法中，通常的所有的试剂处于干燥状态，作为标记该试剂的标记物一般地使用金胶体、胶乳，也可以使用磁性粒子、酶、金属胶体等。另外标记物为酶的场合等，作为使用者的测定操作包括添加酶底物以及反应终止试剂的操作。
具有上述的生物传感器的测定首先是通过在添加部1适量添加被检查溶液开始。将被检查溶液添加到添加部1，被检查溶液浸透到展开层。展开层利用熔融固化部8密闭其侧面，所以侧面的被检查溶液的浸透速度没有加快，以均一的速度浸透下去。并且当被检查溶液到达标记试剂保持部4，保持在该标记试剂保持部4上的标记试剂便开始溶出。其后，被检查用溶液开始浸透，被检查溶液达到试剂固定化部分5，其后被检查溶液被吸水部3所吸收。
并且，其测定结果可以通过确认经过某一定时间之后的试剂固定化部分5上的标记试剂的结合状态得到。本实施方案1中，所述标记试剂保持部4以及试剂固定化部5不接触所述展开层的平行侧面，而且将其平行侧面熔融密闭，所以在试剂固定化部分5上被检查溶液进行均一的浸透，通过该试剂固定化部5的标记试剂以及被检查溶液中的测定对象物均一地浸透试剂固定化部分5的各面，消除局部的结合量的差，可以得到精度高的均一的测定的结果。
另外测定所述试剂固定化部分5上的标记试剂的结合状态的方法可以通过目测进行必要的定性判断，在需要进行精度更高的测定的情况，使用光学手段，测定该标记试剂的结合量，由此可以得到定量的结果。另外，本实施方案1中，由于可以将所述试剂固定化部分5的形状做成被验者容易确认的形状，所以作为测定该试剂固定化部分5上的标记试剂的结合状态的方法，可以说适合目测判定。
如上所述，利用本实施方案1得到的生物传感器及其制造方法，在展开层上的局部上和该平行侧面不接触的将所述标记试剂保持部4以及试剂固定化部5形成斑点状等，做成相对该展开层上的被检查溶液浸透的方向，将所述平行侧面的一部分或者整体熔融固化，密闭，因此可以使展开层上的被检查溶液的浸透整齐，可以进行更高精度的定量测定。另外由于使展开层本身熔融固化，所以不需要密闭平行侧面的新的材料，可以使制造过程简单化，通过减少材料和减少制造施工数量实现低成本化。
另外作为展开层的原理使用蛋白质等结合比较容易的硝化纤维素，由此可以容易地制造生物传感器。
另外，通过利用激光熔融固化展开层的平行侧面，密闭，可以使平行侧面的必要的部分更加高速而且均一地熔融固化，而且也可以使熔融固化的部分保持均一性。也可以使展开层的侧面在非接触状态物理地熔融固化，可以不产生展开层的接触压带来的形状变化，结果可以进行高精度的测定。
另外，本实施方案1中，举例说明了利用抗原抗体的生物传感器，除了抗原抗体反应以外只要是特异性结合反应体系，就可以同样地实施。对于测定操作，也不限于利用添加被检查溶液的添加操作进行测定的一步操作，例如在添加被检查溶液之外，由于标记物为酶，需要添加反应终止试剂等，有时需要稀释检测物等，在该测定操作中尽管需要多个操作，也同样可以实施。
实施方案2
本发明实施方案2中的传感器及其制造方法是使相对所述展开层上的被检查溶液浸透的方向平行侧面，所述标记试剂保持部4以及试剂固定化部5的试剂成分变性失活。
首先使用图2对本发明实施方案2中的传感器的构成进行说明。
图2是显示本发明实施方案2中的使展开层的平行侧面的试剂成分变性失活的状态的生物传感器的立体图；图2(a)显示只有展开层的该传感器构成图；图2(b)显示在展开层的上部配设有液体不透过性薄片材料的构成图；图2(c)显示在展开层的上部配设有液体不透过性薄片材料、在其下部配设有基板的构成图。
在图2上，本实施方案2的生物传感器和实施方案1同样是一步免疫色谱法的试片，在展开层上形成标记试剂保持部4以及试剂固定化部5。但是，本实施方案中以带状形成所述标记试剂保持部4以及试剂固定化部5，具有试剂接触所述展开层上的被检查溶液的添加方向对应的平行侧面的结构。并且9显示试剂失活部，是通过CO2激光使展开层的标记试剂保持部4的侧面部分和试剂固定化部5的侧面部分失活而得的。另外在使展开层的侧面的试剂成分失活的时候，优选使其侧面部分周边均一地进行失活的方法，例如通过使加热的金属面接触侧面使其失活的方法，以及涂敷以及喷雾酸、碱等使蛋白质变性的溶液的方法等。另外在图2中，对于和图1相同的部分使用相同的符号，省略说明。
下面利用图2说明具有这样构成的本实施方案2的生物传感器的测定方法。
首先是通过在添加部1适量添加被检查溶液开始所述生物传感器的测定。一旦被检查溶液添加到添加部1，被检查溶液就浸透到展开层。当被检查溶液浸透到标记试剂保持部4，标记试剂便开始溶出。但是由于标记试剂保持部4上，展开层侧面的标记试剂失活，所以该标记试剂不溶出或者失去其特异的性质。这里所述的特异的性质是指例如抗原抗体反应这样的特异性的结合反应或者在标记试剂保持部4上的标记试剂中使用酶等的场合等的特异性的反应。
其后，展开层的被检查溶液开始浸透，被检查溶液达到试剂固定化部5，其后被检查溶液被吸水部3所吸收。即使在该试剂固定化部5上，由于展开层侧面的试剂变性失活，试剂固定化部5的侧面部分上也不发生反应。
这样的所述展开层上的被检查溶液的浸透由于不使用机械性的操作，所以根据展开层的性质进行。并且该展开层的侧面处于展开层中的细孔被寸断的状态，其形状依据和中央部分的不同，展开层的两侧面和中央部产生浸透速度的变化。因而在本实施方案2中，如上所述使展开层侧面的试剂变性失活，在展开层的侧面部不发生反应，可以除去所述被检查溶液的浸透不均一的部分的试剂固定化部5的侧面上的标记试剂的结合。另外这里的细孔叫做展开层中的多孔，所谓的展开层的中央部表示侧面以外的部分。
并且，利用所述的生物传感器的测定结果可以通过确认经过某一定时间之后的试剂固定化部分5上，标记试剂的结合状态得到。测定所述的试剂固定化部5的标记试剂的结合状态的方法，可以通过目测进行必要的定性判断，在需要进行精度高的测定的情况，使用光学手段，测定该标记试剂的结合量，由此可以得到定量的结果。
如上所述，根据本实施方案2得到的生物传感器及其制造方法，在展开层上以带状形成所述标记试剂保持部4以及试剂固定化部5，由于使该展开层上的标记试剂保持部4的平行侧面和试剂固定化部5的平行侧面变性失活，所以在展开层的侧面部上不发生反应，可以防止不均一的被检查溶液的浸透产生的测定精度的低下。
另外所述展开层的试剂失活部9由于通过激光照射通过非接触使其试剂成分变性失活，所以在变性失活工序上可以不产生接触压产生的所述展开层的形状变化，可以防止所述展开层的形状变化产生的浸透的不均一，结果可以制作高精度的生物传感器。
实施方案3
本发明实施方案3中的传感器及其制造方法是使被检查溶液以均一的速度浸透展开层，使所述展开层的被检查溶液的浸透方向相对的平行侧面熔融固化、密闭，和所述展开层上以带状形成的标记试剂保持部4以及试剂固定化部5、所述平行侧面部分的试剂成分变性失活同时进行。
首先使用图3对本发明实施方案3中的传感器的构成进行说明。
图3是显示本发明实施方案3中的将展开层的平行侧面熔融固化而密闭，而且使试剂成分变性失活的生物传感器的结构的立体图；图3(a)显示只有展开层的该传感器构成图；图3(b)显示在展开层的上部配设有液体不透过性薄片材料的构成图；图3(c)显示在展开层的上部配设有液体不透过性薄片材料、在其下部配设有基板的构成图。
在图3上，本实施方案3的生物传感器是和实施方案2同样带状形成标记试剂保持部4以及试剂固定化部5的，利用CO2激光等照射相对该展开层上的被检查溶液添加方向平行的侧面整体，熔融固化该平行侧面，密闭(熔融固化部8)，同时使该平行侧面的试剂成分变性失活(试剂失活部9)。另外在图3中，对于和图2相同的部分使用相同的符号，省略说明。
下面利用图3说明具有这样构成的本实施方案3的生物传感器的测定方法。
首先是通过在添加部1适量添加被检查溶液开始所述生物传感器的测定。一旦被检查溶液添加到添加部1，被检查溶液就浸透到展开层。所述展开层由于利用熔融固化部8密闭其侧面，所以该侧面的浸透速度不快，可以以均一的速度浸透。并且当所述被检查溶液浸透到标记试剂保持部4，标记试剂便开始溶出。但是由于标记试剂保持部4上，展开层侧面的标记试剂失活，所以该标记试剂不溶出或者失去其特异的性质。这里所述的特异的性质是指例如抗原抗体反应这样的特异性的结合反应或者在标记试剂保持部4上的标记试剂中使用酶等的场合等的特异性的反应。
其后，展开层的被检查溶液开始浸透，被检查溶液达到试剂固定化部5，其后被检查溶液被吸水部3所吸收。即使在该试剂固定化部5上，由于展开层侧面的试剂变性失活，试剂固定化部5的侧面部分上也不发生反应。
这样的生物传感器上的测定结果可以通过确认经过某一定时间之后的试剂固定化部分5上的标记试剂的结合状态得到。本实施方案3中，所述展开层的平行侧面熔融密闭，所以在所述试剂固定化部5上，被检查溶液进行均一地浸透，通过该试剂固定化部5的标记试剂以及被检查溶液中的测定对象物均一地浸透试剂固定化部5各面，消除部分的结合量的差，可以得到精度高的均一的测定结果。而且在本实施方案3中，由于所述展开层的标记试剂保持部4以及试剂固定化部5的平行侧面变性失活，可以利用该试剂固定化部5的侧面不产生标记试剂结合，消除由该展开层的平行侧面和中央部的浸透速度的变化带来的试剂固定化部5上的被检查溶液的浸透的不均一，可以得到精度更高的测定结果。另外这里所述的展开层的中央部表示侧面以外的部分。另外测定所述的试剂固定化部5的标记试剂的结合状态的方法，可以通过目测进行必要的定性判断，在需要进行精度高的测定的情况，使用光学手段，测定该标记试剂的结合量，由此可以得到定量的结果。
如上所述，本实施方案3得到的生物传感器及其制造方法，在展开层上以带状形成所述标记试剂保持部4以及试剂固定化部5，由于使相对所述展开层上的被检查溶液的浸透方向，平行侧面的一部分或整体熔融固化而密闭，和该平行侧面的所述标记试剂保持部4以及试剂固定化部5上的试剂成分变性失活同时进行，所以使被检查溶液向所述展开层的浸透整齐，而且消除向所述试剂固定化部5的平行侧面的浸透带来的精度恶化，可以进行更高精度的定量测定。另外由于使展开层本身熔融固化，所以不需要用于密闭平行侧面的新的材料，可以简化制造过程，通过减少材料和减少制造施工数量实现低成本化。
另外，通过利用和蛋白质溶液结合的硝化纤维素作为展开层的原料，可以容易地制造生物传感器。
这样通过激光熔融固化展开层的平行侧面，密闭，可以使平行侧面的必要的部分更高速地并且均一的熔融固化，可以保持熔融固化部分的均一性。另外可以使展开层的侧面以非接触状态物理地熔融固化，不产生所述展开层的接触压带来的形状变化，结果可以制造高精度的生物传感器。
实施方案4
本发明实施方案4中的传感器及其制造方法是在制造生物传感器时使用一个工序切断、密闭该切断面。
下面使用图4以及图5对本发明实施方案4中的生物传感器的制造工序进行说明。
图4是具有本实施方案4的斑点状的试剂固定化部的生物传感器的切断工序前后的A-A’剖面图，图4(a)显示切断前的状态，图4(b)显示切断后的状态。另外，图5是具有本实施方案4的带状的试剂固定化部的生物传感器的切断工序前后的A-A’剖面图，图5(a)显示切断前的状态，图5(b)显示切断后的状态。另外图4以及图5表示图1(c)以及图3(c)的A-A’剖面图，图1以及图3相同的部分使用相同的符号，省略说明。
图4(a)中生物传感器展开层和液体不透过性薄片材料6和基板7形成为片状。这里所述的片状是指图4(a)所示的生物传感器多个连接的切断前的状态。并且在本实施方案4中，使用CO2激光切断图4(a)的薄片状的生物传感器，由1片薄片状生物传感器制造图4(b)所示的多个生物传感器。另外利用本实施方案4的生物传感器的制造工序，切断薄片状生物传感器的同时，该侧面如图4(b)所示熔融固化，形成熔融固化部8，使用1个工序，可以切断而且密闭该切断面。
另外在图5(a)中也同样，生物传感器以薄片状形成，使用CO2激光切断图5(a)的薄片状的生物传感器，由1片薄片状生物传感器制造图5(b)所示的多个生物传感器。另外在图5中，所述标记试剂保持部4以及试剂固定化部5以带状形成，所以利用1个工序切断，而且密闭该切断面，同时所述标记试剂保持部4以及试剂固定化部5的侧面的试剂成分变性失活，可以利用1个切断工序，在所述生物传感器上形成熔融固化部8和试剂失活部9。
利用图6以及图7比较本实施方案4的制造工序得到的生物传感器的剖面状态和已往的制造工序得到的生物传感器的剖面状态。图6显示用已有的切断方法切断生物传感器的场合，相对被检查溶液浸透方向平行侧面的显微镜照片，图7显示用本实施方案4的切断方法切断的场合，相对被检查溶液浸透方向平行侧面的显微镜照片。
使用CO2激光切断，同时熔融固化其断面，通过本实施方案4的制造工序制造得到的生物传感器侧面如图7所示，生物传感器的侧面被熔融固化，密闭。另一方面，利用刀具切断，利用已有的制造工序制造的生物传感器的侧面如图6所示由于刀具的接触，展开层的侧面受伤，形状发生变化。
另外对比所述的图6和图7，相对图6的展开层的侧面的变形，可以确认图7的展开层的侧面保持多孔质的状态，是熔融固化的密闭状态。
如上所述，利用本实施方案4得到的生物传感器以及其制造方法，由于利用激光切断薄片状的生物传感器，同时熔融固化其切断面，密闭，所以在生物传感器制造工序中，不需要通过切断工序和另外的工序进行密闭操作，可以提供简单低成本而且高精度的生物传感器。
实施方案5
本发明实施方案5中的传感器及其制造方法具有高精度、高正确性的精度，同时可以实现低成本化、制造工序简单，将展开层设定为单一部件材料，而且去除吸水部等，除去了展开层的始点以及终点的液体不透过性薄片。
首先使用图8对本发明实施方案5中的生物传感器的构成进行说明。
图8是显示本实施方案5的利用熔融固化密闭的生物传感器的立体图，图8(a)显示在展开层上部配设液体不透过性薄片材料，图8(b)显示在展开层的上部配设液体不透过性薄片材料，在下部配设基板。
图8中，1表示在展开层上添加被检查溶液的添加部，和反应部2是同一部件。2是展开层上的反应部，由硝化纤维素构成。10显示所述展开层上、没有液体不透过性薄片覆盖的终端开放部。这些在展开层使用的材料只要是可以利用被检查溶液湿润的材料就可以，可以使用滤纸、无纺布、膜、布等任意的多孔质材料构成。
生物传感器的低成本化，以及制造工序的简单化为目的的情况，展开层优选用一个部件构成，而且即使是被检查溶液为微量(100μL)、或者极微量(10μL以下)的情况，由于需要所述被检查溶液在展开层展开，所以展开层优选厚度比较薄的材料。因而作为展开层的材料优选使用硝化纤维素等的膜。
另外4是标记试剂保持部，在展开层上的局部被检查溶液中的测定对象物对应的抗体利用金胶体标记，另外以干燥状态保持着以使被检查溶液可以溶出。5是试剂固定化部，使被检查溶液终端中的测定对象物对应的抗体固定化，利用和标记试剂不同的表位结合，以干燥状态被固定化，用于形成被检查溶液中的测定对象物和标记试剂的复合体。所述的展开层的构图被称之为抗原抗体反应中的夹层反应。通过选择试剂如果使用和被检查溶液中的测定对象物进行竞争反应的试剂，也可以进行竞争反应。另外，对于抗原抗体反应以外的也一样，在欲利用特异性的结合的情况，可以利用任意的试剂成分构成。另外，对于标记方法，所述的金胶体也只是一个例子而已，除此之外还有酶、蛋白质、色素、荧光色素、金属溶胶、非金属溶胶、胶乳等的着色粒子等，根据需要可以任意选择。
生物传感器的高精度化、低成本化以及其制造工序简单化为目的的场合，所述两试剂成分被保持或固定化在同一部件上，添加部1、反应部2、吸水部3不是分别的部件，是一个部件，而且所述试剂成分优选配设在同一平面上不同的部分。
6表示液体不透过性薄片材料，例如由透明PET带构成。该液体不透过性薄片材料6是一种密封包覆除添加部1和展开层的终端开放部10的展开层的构成，通过使该液体不透过性薄片材料6包覆在展开层所述的部分，遮断保护向被检查溶液的添加部1以及终端开放部10之外的点状附着，同时可以防止来自外部的污染，如对展开层无意地接触被检查溶液，被检查者用手等直接接触展开层等。该液体不透过性薄片材料6优选使用透明的材料，特别是包覆试剂固定化部5的部分由于是确认测定结果的部分，所以优选至少维持可以透过的状态。而且通过使浸透展开层的被检查溶液保持浸透均一性，可以得到高精度的测定结果，为此优选液体不透过性薄片材料6相对展开层密封包覆着。
7表示保持展开层的基板，例如由白色PET薄膜构成。基板7具有增强展开层的作用，同时在使用血液、唾液、尿等具有感染危险的溶液作为被检查溶液中的情况，具有将其遮断的作用。而且所述基板7在湿润展开层，具有光透过性的情况，也可以具有遮断光的效果。
8表示熔融固化部，是利用CO2激光使所述展开层的平行侧面熔融，通过其冷却使其固化形成。这里熔融方法使用CO2激光，除此之外，也可以使用受激准分子激光、氩激光、YAG激光、氦氖激光、红宝石激光等。另外，除激光之外，也可以使用加热金属等使其接触，使所述展开层的平行侧面熔融，而且也可以利用所述展开层的材料通过有机溶剂等使其溶融。另外，所述的融合方法是一个例子，只要能够使所述展开层的平行侧面融合，使用任何方法都可以。
下面，使用图9是显示本实施方案5的生物传感器的测定方法的模式图。
生物传感器的测定首先是通过在添加部1适量添加被检查溶液11开始(图9(a))。一旦被检查溶液11添加到添加部1，被检查溶液11就浸透展开层(图9(b))。所述展开层由于利用熔融固化部8密闭其侧面，所以侧面的被检查溶液11的浸透速度没有加快，以均一的速度浸透展开层。并且当被检查溶液11到达标记试剂保持部4，保持在该标记试剂保持部4上的标记试剂便开始溶出。其后，被检查用溶液11开始浸透，被检查溶液11达到试剂固定化部5，其后到达终端开放部10(第9(c)图)。到达终端开放部10的被检查溶液11通过蒸发被干燥，再通过水头差的关系浸出到和添加部1上的被检查溶液11相同的高度(图9(d))。
这样使本生物传感器不需要吸收多余的被检查溶液11所用的新的材料，可以使被检查溶液1在展开层上沿着一定的方向，从添加部1方向向终端开放部10方向浸透。另外本实施方案5中，添加部1以及终端开放部10表示被露出开发状态下的情况，根据需要在被检查溶液11为污染物质的情况，为了不使被检查溶液11附着在使用者的手上，也可以用保护材料构成添加部1以及终端开放部10，或者将具有所述构成的展开层投入到中空箱中。
并且，测定结果可以通过确认经过某一定时间之后的试剂固定化部分5上的标记试剂的结合状态得到。在本发明中，如上所述将试剂固定化部5上的展开层的平行侧面熔融密闭，所以展开层上的被检查溶液11进行均一的浸透，因而通过该试剂固定化部5的标记试剂以及被检查溶液中的测定对象物均一地浸透试剂固定化部分5的各面，消除试剂固定化部5的中央部和侧面部上的标记试剂的结合量的差，从而可以得到精度高的均一的测定的结果。
测定所述试剂固定化部5上的标记试剂的方法也可以通过目测进行必要的定性判断。在需要进行精度高的测定的情况，通过使用光学手段，测定试剂固定化部5上的标记试剂的结合量，可以得到定量的结果。
另外，本实施方案5中，举例说明在所述展开层上以带状形成标记试剂保持部4以及试剂固定化部分5的情况，对于所述展开层上以斑点状形成标记试剂保持部4以及试剂固定化部分5的情况也一样。
如上所述，利用本实施方案5得到的生物传感器及其制造方法，对被检查溶液11浸透的方向，熔融展开层的平行侧面的一部分或者整体部分熔融固化，密闭，因此可以使展开层上的被检查溶液的浸透整齐，进行更高精度的定量测定。同时，通过利用液体不透过性薄片6使除去所述展开层的始端部分以及终端部分的部分密封包覆，可以不需要添加被检查溶液的部分的部件、甚至是吸收被检查溶液水的吸水部的部件。
另外由于使展开层本身熔融固化，所以不需要密闭平行侧面所用的新材料，可以使制造过程简单化，在保持传感器性能的同时，通过减少材料和减少制造施工数量实现低成本化。
另外作为展开层的原料使用蛋白质等结合比较容易的硝化纤维素，而且所述试剂成分在展开层和同一平面上形成，由此可以容易地制造生物传感器。
另外，通过利用激光熔融固化展开层的平行侧面，密闭，可以使平行侧面必要的部分更加高速而且均一地熔融固化，而且也可以使熔融固化的部分保持均一性。另外也可以通过激光使其熔融，使展开层以非接触状态物理地熔融固化，可以不产生展开层的接触压带来的形状变化，结果可以进行高精度的测定。
实施例
下面通过实施例对本发明进行更具体的说明，只要不超过其宗旨，本发明不限于所述的这些实施例。
本实施例中，对在硝化纤维素膜中含有抗HCG-β抗体固定化线段、以及抗hCG-α抗体和金属胶体的复合体的宽带的免疫色谱法展开层进行如下制造，在所述免疫色谱法展开层的上部配设液体不透过性薄片，在其下部配设基板。然后，为了形成各个传感器，制成由CO2激光切断的免疫色谱试片和由刀具(截纸机)切断的免疫色谱试片，使用各个免疫色谱试片测定尿中的hCG，比较其测定值的离散度。
A.免疫色谱法展开层的配制
首先准备用磷酸缓冲溶液稀释的、调整好浓度的抗hCG-β抗体溶液，使用溶液流出装置将该抗体溶液涂敷在硝化纤维素膜上。这样可以在硝化纤维素膜上得到检测用的抗体固定化线。将该硝化纤维素膜干燥后，浸渍在含有1％的脱脂乳的Tris-HCl缓冲溶液中，缓慢地振摇30分钟。30分钟之后，将膜转移到Tris-HCl缓冲溶液槽中，缓慢振摇10分钟，之后在另外的Tris-HCl缓冲溶液槽中再缓慢振动10分钟，洗净膜。进行2次如上的洗净操作之后，从洗净液中取出膜，在室温干燥。
利用0.01％氯金酸、在回流中的100℃的溶液中加入柠檬酸溶液配制金胶体。金胶体再连续回流30分钟之后冷却，利用0.2M的碳酸钾溶液调配到pH9。该金胶体溶液中加入hCG-α抗体，进行数分钟的搅拌，之后再添加10％BSA(牛血清白蛋白)溶液pH9使其最终为1％量，进行搅拌，配成抗体金胶体复合物(标记抗体)溶液。分离标记抗体，将其悬浊于洗净缓冲液(1％BSA磷酸缓冲液)中，之后进行离心分离，单独洗净分离标记抗体。用洗净缓冲溶液悬浊该标记抗体，用0.8μm的过滤器进行过滤，之后配成最初的金胶体溶液量的10分之一，在4℃储藏。
将如上所述制成的标记抗体溶液放置在溶液流出装置上，涂敷在与抗hCG-β抗体固定化干燥膜上的抗体固定化位置相分离的位置上，之后使膜干燥。这样在固定化膜上可以得到标记抗体保持部位。
这样可以完成免疫色谱法展开层。
B.免疫色谱试片的制作
在厚度为0.5mm的白色PET组成的基板上粘贴如上所述制成的疫色谱展开层，再在上部、从标记抗体保持部分到终端部分，开放终端部存在的使吸水部层合的部分，张贴由厚度100μm的透明PET组成的液体不透过性薄片。然后制造以2.5mm的宽度，由CO2激光切断，使展开层的侧面熔融固化密闭的免疫色谱试片，和由刀具(截纸机)切断的免疫色谱试片。再在各个终端部粘贴玻璃纤维滤纸作为吸水部。这样可以制造2种免疫色谱试片。另外，在本实施例中，虽然粘贴玻璃纤维滤纸作为吸水部。但是不一定需要吸水部，对于添加所述被检查溶液的始端和终端除外的所述免疫色谱展开层，密封液体不透过性薄片使其包覆，这样也可以使所述展开层的终端部保持和吸水部同样的效果。总之，通过开放展开层的终端部分，容易使被检查溶液蒸发，而且通过水头差的关系，到达所述展开层的终端的被检查溶液的液面利用和始端的液面形成同样的高度。
C.被检查溶液的配制
通过在人尿中添加已知浓度的hCG溶液，配制成各种已知浓度的hCG溶液。
D.尿中hCG的测定方法
在如上所述制成的2种免疫色谱法试片上的试样添加部上，添加20μl以上的含有Hcg的尿，向吸水部方向进行展开处理，使其进行抗原抗体反应，进行固定化部上的显色反应。这里使用反射型分光光度计(CS9300；岛津制作所制)测定在件中添加试样5分钟之后的显色状况，计算处理显色度。
图10是显示本发明的实施例的所述2种免疫色谱法试片上的hCG浓度和测定结果之间关系的图，图10(a)显示利用CO2激光裁断的免疫色谱法试片的测定结果，图10(b)显示利用刀具(截纸机)裁断的免疫色谱法试片的测定结果。
首先在免疫色谱试片上添加含有hCG浓度各为100、1000、10000U/l的hCG的尿，进行展开处理。然后，利用使用反射型分光光度计测定520nm的波长的吸光度，带入预先做成的显示hCG浓度和吸光度的关系的检测线，得到换算值。
结果，图10(a)上显示使用CO2激光切断的试片的CV值(变异系数)为3～10％，图10(b)上显示刀具(截纸机)切断的试片的CV值(变异系数)为20～35％，具有大的离散度。由以上可以确认在使用CO2激光切断的试片的测定中，具有高精度的定量精度。
产业上利用的可能性
本发明涉及的生物传感器以及其制造方法可以提高分析对象物液体试样和标记试剂的反应结果的精度，另外这样的高精度生物传感器在制造工序上简单化，而且成本低，非常有用。

Claims (21)

1.一种生物传感器，其中具有展开被检查溶液的展开层，含有在该展开层的局部被固定化的固定化试剂部分，和以被标记的干燥状态保持在所述展开层的局部、可以通过所述被检查溶液的展开而溶出的标记试剂部分，通过测定所述固定化试剂部分上的所述标记试剂的结合量，定性或定量所述被检查溶液中的测定成分，其特征为，所述展开层、相对所述被检查溶液的浸透方向平行的侧面的一部分或整体被熔融固化密闭着。
2.一种生物传感器，其中具有展开被检查溶液的展开层，含有相对该展开层的所述被检查溶液的浸透方向包含平行侧面的局部被固定化的固定化试剂部分，和以被标记的干燥状态保持在所述展开层的浸透方向包含平行侧面的局部、可以通过所述被检查溶液的展开而溶出的标记试剂部分，通过测定所述固定化试剂部分上的所述标记试剂的结合量，定性或定量所述被检查溶液中的测定成分，其特征为，所述展开层使相对所述被检查溶液的浸透方向，所述标记试剂部分的平行侧面和所述固定化试剂部分的平行侧面上的试剂成分变性失活。
3.如权利要求2所述的生物传感器，其中所述展开层、相对所述被检查溶液的浸透方向平行的侧面的一部分或者整体被熔融固化密闭着。
4.如权利要求1至权利要求3任何一项所述的生物传感器，其中所述展开层除添加所述被检查溶液局部的表面、或者表面以及里面用液体不透过性的薄片覆盖，
所述展开层以及所述液体不透过性的薄片、相对所述被检查溶液的浸透方向平行的侧面的一部分或者整体被熔融固化密闭着。
5.如权利要求1至权利要求3任何一项所述的生物传感器，其中所述展开层、除添加所述被检查溶液方向相对的起端和终端局部的表面、或者表面以及里面用液体不透过性的薄片覆盖，
所述展开层以及所述液体不透过性的薄片、相对所述被检查溶液的浸透方向平行的侧面的一部分或者整体被熔融固化密闭着。
6.如权利要求1至权利要求3任何一项所述的生物传感器，其中所述展开层由硝化纤维素构成。
7.如权利要求1至权利要求3任何一项所述的生物传感器，其中所述展开层的平行侧面利用激光熔融固化密闭着。
8.如权利要求1至权利要求3任何一项所述的生物传感器，其中包括所述固定化试剂以及标记试剂的该传感器的整体处于干燥状态。
9.如权利要求1至权利要求3任何一项所述的生物传感器，其中所述的生物传感器是一种通过在可以湿润的多孔性材料上形成所述固定化试剂和所述标记试剂的复合体，进行测定的免疫色谱法的试片。
10.如权利要求1至权利要求3任何一项所述的生物传感器，其中所述生物传感器是一种在可以湿润的多孔性材料上，通过所述被检查溶液的添加操作进行测定的一步免疫色谱法试片。
11.如权利要求1至权利要求3任何一项所述的生物传感器，其中所述固定化试剂和所述标记试剂在同一平面而且同一部件上形成着。
12.一种生物传感器的制造方法，其中生物传感器具有展开被检查溶液的展开层，含有在该展开层的局部被固定化的固定化试剂部分，和以被标记的干燥状态保持在所述展开层的局部、可以通过所述被检查溶液的展开而溶出的标记试剂部分，通过测定所述固定化试剂部分上的所述标记试剂的结合量，定性或定量所述被检查溶液中的测定成分，其特征为包括熔融固化所述展开层、相对所述被检查溶液的浸透方向对应的平行的侧面的一部分或整体使之密闭的熔融工序。
13.如权利要求12所述的生物传感器的制造方法，其中，所述熔融工序通过激光照射所述展开层的所述侧面的一部分或整体进行。
14.一种生物传感器的制造方法，其中生物传感器具有展开被检查溶液的展开层，含有在该展开层的局部被固定化的固定化试剂部分，和以被标记的干燥状态保持在所述展开层的局部、可以通过所述被检查溶液的展开而溶出的标记试剂部分，通过测定所述固定化试剂部分上的所述标记试剂的结合量，定性或定量所述被检查溶液中的测定成分，其特征为包括使薄片状的所述展开层，相对所述被检查溶液的浸透方向平行切断，同时使该展开层的切断面熔融固化、密闭的切断熔融工序。
15.如权利要求14所述的生物传感器的制造方法，其中，所述切断熔融工序通过激光裁切所述薄片状的展开层进行。
16.一种生物传感器的制造方法，其中生物传感器具有展开被检查溶液的展开层，包括含有该展开层的所述被检查溶液的浸透方向相对的平行侧面的局部被固定化的固定化试剂部分，和以被标记的干燥状态保持在含有所述展开层的浸透方向对应的平行侧面局部、可以通过所述被检查溶液的展开而溶出的标记试剂部分，通过测定所述固定化试剂部分上的所述标记试剂的结合量，定性或定量所述被检查溶液中的测定成分，其特征为包含使所述标记试剂部分以及所述固定化试剂部分在所述被检查溶液的浸透方向对应的平行的侧面上的试剂成分变性失活的变性失活工序。
17.如权利要求16所述的生物传感器的制造方法，其中所述变性失活工序通过激光照射所述侧面进行。
18.一种生物传感器的制造方法，其中生物传感器具有展开被检查溶液的展开层，包括含有该展开层的所述被检查溶液的浸透方向相对的平行侧面的局部被固定化的固定化试剂部分，和以被标记的干燥状态保持在含有所述展开层的浸透方向对应的平行侧面局部、可以通过所述被检查溶液的展开而溶出的标记试剂部分，通过测定所述固定化试剂部分上的所述标记试剂的结合量，定性或定量所述被检查溶液中的测定成分，其特征为包括所述展开层、所述被检查溶液的浸透方向对应的平行的侧面的一部分或整体熔融固化，密闭，同时使所述标记试剂部分以及所述固定化试剂部分、所述被检查溶液的浸透方向对应的平行的侧面上的试剂成分变性失活的熔融失活工序。
19.如权利要求18所述的生物传感器的制造方法，其中所述熔融失活工序通过激光照射所述侧面进行。
20.一种生物传感器的制造方法，其中生物传感器具有展开被检查溶液的展开层，包括含有该展开层的所述被检查溶液的浸透方向相对的平行侧面的局部被固定化的固定化试剂部分，和以被标记的干燥状态保持在含有所述展开层的浸透方向对应的平行侧面局部、可以通过所述被检查溶液的展开而溶出的标记试剂部分，通过测定所述固定化试剂部分上的所述标记试剂的结合量，定性或定量所述被检查溶液中的测定成分，其特征为包括使薄片状的所述展开层沿相对所述被检查溶液的浸透方向平行地切断，同时使该展开层的切断面熔融固化而密闭，而且使所述标记试剂部分以及所述固定化试剂部分、所述侧面上的试剂成分变性失活的切断熔融失活工序。
21.如权利要求20所述的生物传感器的制造方法，其中，所述切断熔融失活工序通过激光裁切所述薄片状的展开层进行。
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