DE19723794A1 - Nichtestrogene Derivate des Estradiols mit antioxidativer Aktivität - Google Patents

Nichtestrogene Derivate des Estradiols mit antioxidativer Aktivität

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Description

Die Erfindung betrifft neue nichtestrogene Derivate des Estradiols mit antioxidativer Aktivität.
Aus der Patentliteratur - DE 43 38 314 C1 - ist bekannt, daß Estradiol und seine bekannten Derivate mit phenolischem A-Ring und 17-Hydroxygruppe grundsätzlich antioxidative Aktivität besitzen.
In Abhängigkeit von der Struktur zeigen diese Substanzen eine mehr oder weniger stark ausgeprägte Bindungsaffinität zum Estrogenrezep­ tor.
Die hohe Affinität des natürlichen 17β-Estradiols (100%) sinkt bei Strukturveränderungen, wie Isomerisierungen oder Derivatisierungen, in der Regel deutlich ab.
Sie beträgt jedoch für 17α-Estradiol noch 23% und selbst für das Enan­ tiomere des natürlichen Estradiols, 8α,9β,14β-Estra-1,3,5(10)-trien- 3,17α-diol (ent-Estradiol), noch 8.6%.
Diese Größenordnung ist bei Verabreichung der Substanzen mit dem Ziel, die körpereigene antioxidative Kapazität zu erhöhen, abhängig von Dosis- und Applikationsdauer sowie dem Geschlecht, nicht immer tole­ rierbar.
Führt man entsprechend DE 43 38 316 A1 einen großen Substituenten am Kohlenstoffatom 17 ein, ist die Bindungsaffinität zwar unter Erhö­ hung der antioxidativen Aktivität, beispielsweise beim 17α-4'-Dimethyl­ amino-phenylmethyl-estra-1,3,5(10),9(11)-tetraen-3,17-diol, bis auf we­ niger als 1% senkbar, in vivo wurde jedoch selbst für den entspre­ chenden 3-Methylether, 3-Methoxy-17α-4'-Dimethylamino-phenylmethyl- estra-1,3,5(10)-trien-17ol, eine hohe Estrogenität gefunden.
Der Erfindung liegt die Aufgabe zugrunde, neue Derivate des Estradiol mit antioxidativer Aktivität zu finden, die keine estrogene Wirksamkeit besitzen.
Die Aufgabe wird erfindungsgemäß dadurch gelöst, daß nichtestrogene Derivate des Estradiol mit antioxidativer Aktivität der allgemeinen For­ meln I und II gefunden wurden.
Bevorzugte Verbindungen sind:
4-Methyl-estra-1,3,5(10)-trien-1,17α-diol
4-Methyl-estra-1,3,5(10),6-tetraen-1,17α-diol
4-Methyl-estra-1,3,5(10),6-tetraen-1,17β-diol
4-Methyl-estra-1,3,5(10),6,8-pentaen-1,17β-diol
4-Methyl-estra-1,3,5(10),6,8-pentaen-1,17α-diol
17α-4'-Hydroxy-phenylmethyl-4-methyl-estra-1,3,5(10)-trien-1,17β-diol
17α-4'-Hydroxy-phenoxymethyl-4-methyl-estra-1,3,5(10)-trien- 1,17β-diol
17α-4'-Hydroxy-thiophenoxymethyl-4-methyl-estra-1,3,5(10)-trien- 1,17β-diol
17α-4'-Dimethylamino-phenylmethyl-4-methyl-estra-1,3,5(10)-trien- 1,17β-diol
17α-3',5'-Dimethyl-4'-hydroxy-phenylmethyl-4-methyl-estra-1,3,5(10)- trien-1,17β-diol
17α-3',5'-Dimethyl-4'-hydroxy-phenylmethyl-4-methyl-estra-1,3,5(10),6- tetraen-1,17β-diol
17α-4'-Hydroxy-phenoxymethyl-4-methyl-estra-1,3,5(10),6-tetraen- 1,17β-diol.
Es wurde nunmehr völlig überraschend gefunden, daß die Verbindungen, Regioisomere des Estradiols und ihre Derivate, die eine phenolische Hydroxygruppe am Kohlenstoffatom 1 und eine Hydroxygruppe am Kohlenstoffatom 17 besitzen, weder in vitro noch in vivo estrogen sind - aufgezeigt in Tabelle 1 und 2.
Gleichzeitig besitzen die Verbindungen eine im Vergleich zu Estradiol deutlich gesteigerte antioxidative Aktivität - demonstriert in Tabelle 3 und 4 mittels verschiedenartiger in-vitro-Tests.
Da die Substanzen ein intaktes Steroidgerüst und vergleichbare Polari­ tät zu den natürlichen Estrogenen aufweisen, ist zu erwarten, daß auch die Fähigkeiten zur Überwindung der Blut-Hirn-Schranke und zur Mem­ bran-Rezeptor-Wechselwirkung, wie sie in den natürlichen Estrogenen besteht, erhalten bleiben.
Die erfindungsgemäßen Estradiolderivate, bei denen die Estrogenität unter Verbesserung der antioxidativen Aktivität praktisch vollständig entfernt wurde, sind potentiell zum Einsatz als nichtestrogene Antioxi­ danzien, insbesondere zur Anwendung bei der postmenopausalen Frau und beim Mann geeignet.
Fehlende Estrogenität ist auch dann von Vorteil, wenn die Hemmung Estrogene generierender Enzyme Ziel einer therapeutischen Strategie ist, beispielsweise die Hemmung von Aromatase und Sulfatase.
Die Enzyme Aromatase und Sulfatase setzen Estron aus Estronsulfat frei.
Von Sulfamaten bisher bekannter phenolischer Steroide ist nach M. J. Reed et al., Steroid sulphatase inhibitor: a new endocrine therapy, Drugs Future 19 (1994), S. 673 und W. Elger et al., Sulfamates of va­ rious estrogens are prodrugs with increased systemic and reduced he­ patic estrogenicity at oral application, J. Steroid Biochem. Biol., 55 (1995), S. 395-403 eine eine starke Hemmung der Sulfatase bekannt Diese führt in vitro und in vivo zur Hemmung der Freisetzung von Estron aus Estronsulfat.
Die erfindungsgemäßen Verbindungen sind somit auch potentielle Hemmer der Aromatase und Sulfatase.
Aussagen zur Estrogenität der erfindungsgemäßen Verbindungen wer­ den nach Tabelle 1 über die Messung der Estrogen-Rezeptor-Bindung getroffen.
Als Vergleiche zu den erfindungsgemäßen Systemen dienten 17β-Estradiol, 17α-Estradiol, ent-17β-Estradiol (J 855), 3-Methoxy-17α- 4'-dimethylamino-phenylmethyl-estra-1,3,5(10)-trien-17ol (J 848) und 17α-4'-dimethylamino-phenylmethyl-estra-1,3,5(10),9(11)-tetraen-3,17- diol (J 844), ebenfalls in Tabelle 1 dargestellt und mit (x) gekennzeich­ net.
Tabelle 1 Bindung zum Estrogenrezeptor ausgewählter Verbindungen
Verbindung
relative Bindungsaffinität z. Estrogen-Rezeptor [% Bindung zum Estrogenrezeptor]
17β-Estradiol (x) 100
17α-Estradiol (x) 22,8
ent-17β-Estradiol-J 855 (x) 8,6
4-Methyl-estra-1,3,5(10)-trien-1,17β-diol-J 1178 0,004
4-Methyl-estra-1,3,5(10)-trien-1,17α-diol-J 1179 < 0,03
3-Methoxy-17α-4'-dimethylamino-phenylmethyl-estra-1,3,5(10)-trien-17ol-J848 (x) 0,7
17α-4'-dimethylamino-phenylmethyl-estra-1,3,5(10),9(11)-tetraen-3,17-diol-J 844 (x) 0,7
Aus Tabelle 1 ist die nichtestrogene Wirksamkeit in vitro der erfin­ dungsgemäßen Verbindungen im Vergleich zu den Referenzsubstanzen ersichtlich.
Weitere Aussagen zur Estrogenität werden anhand von Ergebnissen in vivo entsprechend dem Allen-Doisy-Test - demonstriert in Tabelle 2 - getroffen.
Tabelle 2 zeigt die Resultate der Estrogenitätsprüfung in vivo an ova­ rektomierten Ratten.
Estrogene führen bei ovarektomierten Nagern zu charakteristischen Veränderungen am Vaginalepithel. Es kommt zu einer starken Prolife­ ration und Verhornung der oberen Zellagen. Diese Veränderungen sind im Zellbild von Vaginalabstrichen erkennbar.
Das Auftreten kernloser Hornschollen ist Ausdruck einer estrogenspe­ zifischen Wirkung (Allen-Doisy Test).
Als Vergleiche zu den erfindungsgemäßen Systemen dienten 17β-Estradiol, 17α-Estradiol, ent-17β-Estradiol (J 855) und 3-Methoxy- 17α-4'-dimethylamino-phenylmethyl-estra-1,3,5(10)-trien-17ol (J 848), ebenfalls in Tabelle 2 dargestellt und mit (x) gekennzeichnet.
Es ist aus Tabelle 2 ersichtlich, daß die erfindungsgemäßen Verbin­ dungen im Vergleich zu den Referenzsubstanzen selbst bei hohen Do­ sierungen keine estrogene Wirksamkeit entfalten.
Die antioxidative Aktivität der erfindungsgemäßen Verbindungen wird mittels Aussagen zur Eisen(II)sulfat-katalysierten Lipidperoxidations­ hemmung in synaptosomalen Membranfraktionen (Ratte) - dargestellt in Tabelle 3 - demonstriert.
Mit der Aussage zu den IC50-Hemmwerten wird die lipidperoxida­ tionshemmende Wirkung der jeweiligen Verbindung charakterisiert. IC50 gibt die Menge der zuzugebenden Substanz an, um eine 50%ige Hemmung der Lipidperoxidation zu erzielen (Tabelle 3).
Als Vergleiche zu den erfindungsgemäßen Verbindungen dienten 17β-Estradiol, 17α-Estradiol und α-Tocopherol (Vitamin E), Butyro­ hydroxytoluen (BHT) als Standard, ebenfalls in Tabelle 3 dargestellt und mit (x) gekennzeichnet.
Tabelle 3 Eisen(II)sulfat-katalysierte Lipidperoxidationshemmung ausgewählter Verbindungen
Verbindung
Lipidperoxidationshemmung [IC50 : µMol/l]
17β-Estradiol (x) 12,40
17α-Estradiol (x) 8,9
α-Tocopherol (Vitamin E) (x) 117,0
4-Methyl-estra-1,3,5(10)-trien-1,17β-diol-J 1178 1,7
4-Methyl-estra-1,3,5(10)-trien-1,17α-diol-J 1179 1,94
Butyrohydroxytoluen (BHT) (x) 0,95
Tabelle 3 verdeutlicht, daß natürliche Estrogene wirksame Inhibitoren der Bildung Thiobarbitursäure-reaktiver Substanzen (TBARS) in Pro­ zessen der mit Fenton's Reagenz induzierten Lipidperoxidation sind. Demnach tragen bereits die antioxidativ wirkenden natürlichen Estro­ gene 17β-Estradiol und 17α-Estradiol die Fähigkeit, die Lipidperoxidati­ on in synaptosomalen Membran/Lipidfraktionen zu unterdrücken und in deren Konsequenz die Balance verschiedener Redoxprozesse aufrecht­ zuerhalten.
Es wurde gefunden, daß die Isomeren 4-Methyl-estra-1,3,5(10)-trien- 1,17β-diol (J 1178) und 4-Methyl-estra-1,3,5(10)-trien-1,17α-diol (J 1179) diese Wirkung in erheblich stärkerem Maß zeigen.
Weiterhin wird die antioxidative Aktivität der erfindungsgemäßen Ver­ bindungen mittels Aussagen zur Hemmung der Fe(II)-Autooxidation und Stimulierung der Fe(III)-Reduktion - dargestellt in Tabelle 4 - auf­ gezeigt.
Als Vergleiche zu den erfindungsgemäßen Verbindungen dienten 17β-Estradiol, 17α-Estradiol und Catecholestrogene, ebenfalls in Tabel­ le 4 dargestellt und mit (x) gekennzeichnet.
Hemmung der Fe(II)-Autooxidation und Stimulierung der Fe(III)-Reduk­ tion ausgewählter Verbindungen
Hemmung der Fe(II)-Autooxidation und Stimulierung der Fe(III)-Reduk­ tion ausgewählter Verbindungen
Tabelle 4 veranschaulicht, daß die "klassischen" Estrogene 17β-Estradiol und 17α-Estradiol die getesteten Fe(II)-Autooxidations­ prozesse nicht bzw. unwesentlich beeinflussen.
Im Vergleich dazu besitzen Verbindungen, wie die nichtöstrogenen Iso­ meren 4-Methyl-estra-1,3,5(10)-trien-1,17β-diol - J 1178 und 4-Methyl­ estra-1,3,5(10)-trien-1,17β-diol - J 1179 die Fähigkeit, Fe(II)-Autooxid­ ationsprozesse zu hemmen.
Weiterhin ist ersichtlich, daß auch eine Stimulation der Fe(III)-Reduk­ tion zu Fe(II) stattfindet und mit den Fe(II)-Autooxidationsergebnissen korrelieren.
Die vergleichsweise getesteten Catecholestrogene mit einer Hemmwir­ kung von ca. 60% zeigen auf, daß die Verbindungen 4-Methyl-estra- 1,3,5(10)-trien-1,17β-diol - J 1178 und 4-Methyl-estra-1,3,5(10)-trien- 1,17β-diol - J 1179 gut antioxidativ wirksam sind.
Die gegenüber den natürlichen Estrogenen 17β-Estradiol und 17α-Estradiol wesentlich höhere antioxidative Aktivität der erfindungs­ gemäßen Verbindungen wurde desweiteren an folgenden Modellen be­ stätigt:
  • - Hemmung der Aufnahme oxidativ-modifizierten LDL-Cholesterols in Makrophagen,
  • - Hemmung der Bildung von Superoxidanionradikalen.
Biologische Untersuchungsmethoden zur estrogenen und antioxi­ dativen Aktivität der erfindungsgemäßen Verbindungen Allen-Doisy-Test Zielstellung
Subkutane Prüfung auf estrogene Aktivität.
Prinzip
Estrogene führen bei ovarektomierten Nagern zu charakteristischen Veränderungen am Vaginalepithel. Es kommt zu einer starken Prolife­ ration und Verhornung der oberen Zellagen. Diese Veränderungen sind im Zellbild von Vaginalabstrichen erkennbar.
Das Auftreten kernloser Hornschollen ist Ausdruck einer estrogenspe­ zifischen Wirkung - Allen-Doisy Test - nach Dorfman R. J., (Hrsg.), Methods in hormone research, S. 72ff, Academic Press New York 1969.
Tiere
Weibliche Wistarratten (Stamm: Shoe : WIST∼Mol : WIST, n = 48) werden im Gewicht von 180-200 g angeliefert, randomisiert auf Ver­ suchsgruppen (n = 3-5 Tiere/Gruppe) aufgeteilt, über ca. 1 Woche an Haltungsbedingungen adaptiert und anschließend in Ursotaminnarkose ovarektomiert. Haltung:
In Makrolonkäfigen Typ M IV in kontrolliert belichteten Räumen (12 Stunden Licht/12 Stunden Dunkelheit).
Fütterung:
Standardhaltungsdiät für Ratten und Mäuse; Trinkwas­ ser ad libitum.
Formulierung und Applikation der Testsubstanzen
Die Prüfsubstanzen zur subkutanen und oralen Applikation in Benzyl­ benzoat/Ricinusöl (1+4)) bzw. in Myrj (85 mg Myrj in 100 ml 0,9% w/v NaCl-Lösung) werden formuliert.
Das Applikationsvolumen beträgt 0,2 ml/Tier.
  • - Nach der Eiwaage wird die jeweilige Substanz in Benzylbenzoat durch Behandlung im Ultraschallbad (30 Minuten bei ca. 60°C Was­ sertemperatur) gelöst und anschließend die entsprechende Menge Ricinusöl zugegeben.
  • - Nach der Eiwaage wird in Myrj suspendiert (unter Zugabe einer geringen Menge Zirkoniumkügelchen) durch Behandlung im Ultra­ schallbad (30 Minuten bei ca. 60°C Wassertemperatur).
Versuchsdurchführung
Ratten mit einem Gewicht von ca. 200 g werden in Ursotaminnarkose ovarektomiert, ca. 2 Wochen danach erfolgt die Untersuchung der Tiere auf das Vorliegen eines Kastratenvaginalzellbildes (Dioestrus). Danach wird einmalig subkutan appliziert (d1), Applikationsvolumen 0,2 ml/Tier. 24, 48, 54 und 72 Stunden nach der einmaligen Substanzapplikation sind Vaginalabstriche abzunehmen und hinsichtlich Oestrusstadien (Dioestrus = 1; Prooestrus = 2; Oestrus = 3; Metoestrus = 4) mikrosko­ pisch auszuwerten.
Die Untersuchung entsprechend dem standardisierten ALLEN-DOISY Test ist nach 4 Tagen beendet. Die Tiere werden in Aethernarkose durch Dislokation der Halswirbelsäule getötet, der Uterus präpariert und die Feuchtgewichte (Uterus ohne Sekret) ermittelt. Weiterhin erfolgt die Präparation und Gewichtsermittlung der Nebennieren.
Auswertung
Die Ergebnisse der kolpotropen Prüfung - das Auftreten oestrischer Vaginalzellbilder als Reagenten pro Dosisgruppe sowie die uterotrope Aktivität (Uterusgewichte) werden erfaßt. Die Mittelwerte der Uterus­ gewichte der Versuchsgruppen sind mit dem Mittelwert der Vehikel­ gruppe zu vergleichen und gegebenenfalls auf signifikanten Unter­ schied mit dem t-Test nach STUDENT zu prüfen. Die Feuchtgewichte der Nebennieren aller Gruppen werden ermittelt.
Eisen(II)sulfat-katalysierte Lipidperoxidationshemmung in synapto­ somalen Membranfraktionen (Ratte) Material und Methodik
Die Testung der Substanzen auf die Lipidperoxidations-Hemmwirkung nach Braughler JM. et al., The 21-Aminosteroids: Potent inhibitors of lipid peroxidation for the treatment of central nervous system trauma and ischemia, Drugs Future 14 (1989), S. 141-152 und nach Buege A. et al., Microsomal lipid peroxidation, Methods Enzymol 52 (1978), S. 302-310, mittels des Malondialdehyd/Thiobarbitursäure-Assays, wie nach­ folgend, durchgeführt:
Materialien
17β-Estradiol (Jenapharm GmbH), 17α-Estradiol (Sigma Chemicals), α-Tocopherol (Sigma Chemicals), Thiobarbitursäure (TBA; Fluka), Ei­ sen(II)sulfat (Serva).
Alle anderen Biochemikalien sind von höchster analytischer Reinheit.
Reaktionsansatz
1 ml biologische Probe (enthält 0,1 mg Plasmamembranen), incl. Fen­ ton's Reagenz und Drug. Die 1 ml Gesamtvolumen teilen sich auf in: 0,01 ml synaptosomale Membranfraktion; 0,1 ml Eisen(Il)-sulfat (2 mM); 0,1 ml Wasserstoffperoxid (2 mM); bis zu 0,5 ml Testsubstanzlösung und einer anteiligen Menge an 0,9%iger NaCl-Lösung (nicht PBS) zum Auffüllen auf 1 ml Gesamtvolumen. Der Reaktionsansatz mit und ohne Testsubstanz enthält in jedem Fall 10% Ethanol (total) als Vehikel.
Prozedere
Der Reaktionsansatz wird 30 min bei 37°C inkubiert, anschließend mit 2 ml Reagenz A abgestoppt und 10 min bei konstanten 80°C inkubiert. Nach dem Abkühlen in einem Eisbad (10 min) wird die Probe in einer Kühlzentrifuge zentrifugiert (1.000×g; 4°C). Der Überstand wird (bis zu 2 Std. stabil) bei 535 nm gegen den Blindwert gemessen, der bis auf die Membranfraktion alle Reagenzien enthält.
Als Vergleichswert dient der Ansatz, der neben der Membranfraktion Fenton's Reagenz und 10% des Vehikels Ethanol enthält.
Zusammensetzung des Reagenz A:
15% (w/v) Trichloressigsäure (15 g); 0,375% (w/v) Thiobarbitursäure (375 mg); 0,25 N HCl (2,11 ml konz. HCl) in 100 ml wäßriger Lösung.
Die Testsubstanzen werden vorzugsweise in 95%igem Ethanol in Form 20 millimolarer Stammlösungen (Haltbarkeit bei minus 20°C, stabil über den Zeitraum von 3 Monaten) angesetzt und unmittelbar vor Versuchs­ beginn entsprechend verdünnt. Geprüft wird im Dosierungsbereich 0,1 bis 150 µM.
In allen Versuchsansätzen wird eine entsprechende Standardsubstanz mitgeführt.
Bewertungsparameter
  • - Dosis-Wirkungsanalyse der Test- und Standardsubstanzen.
  • - Ermittlung der Lipidperoxidationshemmwerte mit mindestens fünf Substanzkonzentrationen im Hemmbereich 30 bis 70%, bezogen auf die Testwerte mit Vehikel (vorzugsweise Ethanol) und ohne Substanzeffekt.
  • - Die Bewertung der Substanzen wird in IC50-Werten (mikromolare Testkonzentrationen bei 50% Hemmung der Eisen(II)- katalysierten Lipidperoxidation) ausgewiesen.
Hemmung der Fe(II)-Autooxidation und Stimulierung der Fe(IIl)- Reduktion 1. Fe(II)-Oxidations-Assay Material und Methodik
Die Testung der Substanzen auf die Fe(II)-Autooxidation-Hemmwirkung erfolgt nach Ruiz-Larrea B. et al., Antioxidant effects of estradiol and 2-hydroxyestradiol on iron-induced lipid peroxidation of rat liver micro­ somes. Steroids 39 (1994), S. 383-388 und Ruiz-Larrea B. et al., Ef­ fects of estrogens on the redox chemistry of iron: A possible mecha­ nism of the antioxidant action of estrogens, Steroids 60 (1995), S. 780-783.
Alle Autooxidations-Experimente der Fe(II)-Ionen wurden in wäßrigen Lösungen ausgeführt, die synaptosomal Membrane/Lipidfraktionen ent­ halten. 1.0 ml biologische Probe, enthaltend 50 µM Fe(II)sulfat, 45 mM Tris-HCl-Puffer (pH 7.4) und 0.08 mg des synaptosomalen Proteins wurde mit den in Ethanol (10% v/v) gelösten Testsubstanzen für 10 min in einem Wasserbad bei 37°C inkubiert, anschließend durch Zuga­ be von 50 µL einer 0,32 M 1,10-Phenanthrolin-Lösung gestoppt und die Extinktion des Fe(II)-Phenanthroline-Komplexes bei 510 nm gemessen.
Materialien
17β-Estradiol (Jenapharm GmbH), 17α-Estradiol (Sigma Chemicals), 2- Hydroxy-17β-estradiol und 4-Hydroxy-17β-estradiol (Sigma Chemicals), Thiobarbitursäure (TBA; Fluka), Eisen(II)sulfat (Serva).
Alle anderen Biochemikalien sind von höchster analytischer Reinheit.
Die Testsubstanzen werden vorzugsweise in 95%igem Ethanol in Form 20 millimolarer Stammlösungen angesetzt und unmittelbar vor Ver­ suchsbeginn entsprechend verdünnt. Geprüft wird im Dosierungsbereich 0,1 bis 150 µM.
In allen Versuchsansätzen wird eine entsprechende Standardsubstanz mitgeführt.
Bewertungsparameter
  • - Dosis-Wirkungsanalyse der Test- und Standardsubstanzen.
2. Fe(III)-Reduktions-Assay
Die Testung der Substanzen auf die Stimulierung der Fe(III)-Reduktion erfolgte nach Ruiz-Larrea B. et al., Antioxidant effects of estradiol and 2-hydroxyestradiol on iron-induced lipid peroxidation of rat liver micro­ somes. Steroids 39 (1994), S. 383-388 und Ruiz-Larrea B. et al., Ef­ fects of estrogens on the redox chemistry of iron: A possible mecha­ nism of the antioxidant action of estrogens, Steroids 60 (1995), S. 780-783.
Die biologische Probe enthält folgende Komponenten: 25 µM Fe(III)chlorid in 150 mM Tris-HCl (pH 7.4), 15 mM 1,10-Phenanthroline und die zu testende Prüfsubstanz, gelöst im Vehikel Ethanol. Die Bil­ dung des Fe(II)-Phenanthrolin-Komplexes wird spektrophotometrisch bei 510 nm registriert.
Hemmung der Aufnahme oxidativ-modifizierten LDL-Cholesterols in Makrophagen
Die Messung der Aufnahme von oxidativ-modifiziertem LDL in murinen Makrophagen und Blutmakrophagen menschlichen Ursprungs wurde mittels der Zellkulturmethode nach Fisher M. et al, A 21-aminosteroid inhibits oxidation of human low density lipoprotein by human monocytes and copper, Atherosclerosis 90 (1991), S. 197-202 bzw. nach Leake D.S. und Rankin, S.M., The oxidative modification of Low-Density Lipo­ proteins by macrophages, Biochem J. 270 (1990), S. 741-748 ermittelt.
Hemmung der Bildung von Superoxidanionradikalen
Die Messung der Xanthinoxidase-hemmenden Wirkung bei Verwendung von Linolensäure als Bildner für Superoxidanionradikale wird nach Lai­ hia J.K. et al., Lucigenin and linoleate enhanced chemiluminescent as­ say for superoxide dismutase activity, Free Rad. Biol. Med. 14 (1993) S. 457-461 mittels einer Lucigenin/Luminol-verstärkten Xanthin/Xanthinoxidase-abhängigen Chemilumineszenzreaktion ermit­ telt.

Claims (2)

1. Nichtestrogene Derivate des Estradiols mit antioxidativer Aktivität der allgemeinen Formel I, die ein bis zwei Doppelbindungen enthalten kann, wobei die Hydroxygruppen der Estradiolderivate als Ether, Ester oder Sulfamate vorliegen können, ausgenommen 4-Methyl-estra- 1,3,5(10)-trien-1,17β-diol.
2. Nichtestrogene Derivate des 17β-Estradiols mit antioxidativer Aktivität der allgemeinen Formel II,
die ein bis zwei Doppelbindungen enthalten kann, mit einem 17α-Substituenten Z,
der eine Phenylgruppe Ph enthält,
die mit 1 bis 2 Hydroxygruppen und 0 bis 2 Methylgruppen oder mit einer Dimethylaminophenylgruppe und 0 bis 2 Methylgruppen funktionalisiert ist,
wobei die Hydroxygruppen der 17β-Estradiolderivate als Ether, Ester oder Sulfamate vorliegen können.
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