DE19725586A1 - Verfahren zur Ex Vivo-Immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer Antikörper - Google Patents
Verfahren zur Ex Vivo-Immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer AntikörperInfo
- Publication number
- DE19725586A1 DE19725586A1 DE19725586A DE19725586A DE19725586A1 DE 19725586 A1 DE19725586 A1 DE 19725586A1 DE 19725586 A DE19725586 A DE 19725586A DE 19725586 A DE19725586 A DE 19725586A DE 19725586 A1 DE19725586 A1 DE 19725586A1
- Authority
- DE
- Germany
- Prior art keywords
- human
- tumor
- cells
- igg3
- hinge
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Granted
Links
- 238000002649 immunization Methods 0.000 title claims abstract description 12
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 44
- 230000003053 immunization Effects 0.000 title claims description 11
- 230000008569 process Effects 0.000 title description 6
- 210000004881 tumor cell Anatomy 0.000 claims abstract description 80
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 55
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 55
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 55
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 claims abstract description 50
- 108010087819 Fc receptors Proteins 0.000 claims abstract description 25
- 102000009109 Fc receptors Human genes 0.000 claims abstract description 25
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 claims description 81
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 claims description 79
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 claims description 72
- 238000011534 incubation Methods 0.000 claims description 34
- 230000000259 anti-tumor effect Effects 0.000 claims description 32
- 125000001495 ethyl group Chemical group [H]C([H])([H])C([H])([H])* 0.000 claims description 30
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 15
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 15
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 14
- 230000007774 longterm Effects 0.000 claims description 13
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 claims description 12
- 210000004897 n-terminal region Anatomy 0.000 claims description 12
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 claims description 11
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 claims description 11
- 230000006698 induction Effects 0.000 claims description 11
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 10
- 210000005259 peripheral blood Anatomy 0.000 claims description 10
- 239000011886 peripheral blood Substances 0.000 claims description 10
- 210000005087 mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 9
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 9
- 238000011282 treatment Methods 0.000 claims description 8
- 210000001616 monocyte Anatomy 0.000 claims description 6
- MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N (3s)-4-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(1s)-1-carboxy-2-hydroxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-5-(diaminomethylideneamino)-1-oxopentan-2-yl]amino]-3-[[2-[[(2s)-2,6-diaminohexanoyl]amino]acetyl]amino]-4-oxobutanoic acid Chemical compound OC[C@@H](C(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CCCN=C(N)N)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN MZOFCQQQCNRIBI-VMXHOPILSA-N 0.000 claims description 5
- 102000009490 IgG Receptors Human genes 0.000 claims description 5
- 108010073807 IgG Receptors Proteins 0.000 claims description 5
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 claims description 5
- 102000000852 Tumor Necrosis Factor-alpha Human genes 0.000 claims description 5
- 210000002540 macrophage Anatomy 0.000 claims description 5
- 241000282412 Homo Species 0.000 claims description 4
- 101000914514 Homo sapiens T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Proteins 0.000 claims description 4
- 101000914484 Homo sapiens T-lymphocyte activation antigen CD80 Proteins 0.000 claims description 4
- 102100027213 T-cell-specific surface glycoprotein CD28 Human genes 0.000 claims description 4
- 102100027222 T-lymphocyte activation antigen CD80 Human genes 0.000 claims description 4
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 claims description 4
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 4
- 238000012546 transfer Methods 0.000 claims description 4
- 101150013553 CD40 gene Proteins 0.000 claims description 3
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 claims description 3
- 102100040245 Tumor necrosis factor receptor superfamily member 5 Human genes 0.000 claims description 3
- 210000000822 natural killer cell Anatomy 0.000 claims description 3
- 238000011321 prophylaxis Methods 0.000 claims description 3
- 230000028327 secretion Effects 0.000 claims description 3
- 230000004083 survival effect Effects 0.000 claims description 3
- 102100032912 CD44 antigen Human genes 0.000 claims description 2
- 108010084313 CD58 Antigens Proteins 0.000 claims description 2
- -1 CD86 Proteins 0.000 claims description 2
- 101000868273 Homo sapiens CD44 antigen Proteins 0.000 claims description 2
- 108010064593 Intercellular Adhesion Molecule-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102100037877 Intercellular adhesion molecule 1 Human genes 0.000 claims description 2
- 108010002352 Interleukin-1 Proteins 0.000 claims description 2
- 102000000589 Interleukin-1 Human genes 0.000 claims description 2
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 claims description 2
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 claims description 2
- 108090001007 Interleukin-8 Proteins 0.000 claims description 2
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 claims description 2
- 210000000440 neutrophil Anatomy 0.000 claims description 2
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 claims description 2
- NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N Mytomycin Chemical compound C1N2C(C(C(C)=C(N)C3=O)=O)=C3[C@@H](COC(N)=O)[C@@]2(OC)[C@@H]2[C@H]1N2 NWIBSHFKIJFRCO-WUDYKRTCSA-N 0.000 claims 2
- AQSYHEKLGWEVDF-UHFFFAOYSA-N 1-n,3-n-bis[4-(4,5-dihydro-1h-imidazol-2-yl)phenyl]benzene-1,3-dicarboxamide;hydrochloride Chemical compound Cl.C=1C=CC(C(=O)NC=2C=CC(=CC=2)C=2NCCN=2)=CC=1C(=O)NC(C=C1)=CC=C1C1=NCCN1 AQSYHEKLGWEVDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 101150038444 Ment gene Proteins 0.000 claims 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 claims 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 claims 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 claims 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 claims 1
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims 1
- 229960004857 mitomycin Drugs 0.000 claims 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 claims 1
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 20
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 17
- 230000004913 activation Effects 0.000 description 13
- 238000001994 activation Methods 0.000 description 13
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 12
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 11
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 9
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 9
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 7
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 7
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 6
- 230000000139 costimulatory effect Effects 0.000 description 6
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 6
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 6
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 6
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 6
- 230000000735 allogeneic effect Effects 0.000 description 5
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 101150084967 EPCAM gene Proteins 0.000 description 4
- 238000013459 approach Methods 0.000 description 4
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 4
- 238000009169 immunotherapy Methods 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 4
- 230000010056 antibody-dependent cellular cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000004443 dendritic cell Anatomy 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 3
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010031099 Mannose Receptor Proteins 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 206010057249 Phagocytosis Diseases 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- 230000006044 T cell activation Effects 0.000 description 2
- IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N Thymidine Chemical compound O=C1NC(=O)C(C)=CN1[C@@H]1O[C@H](CO)[C@@H](O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-XLPZGREQSA-N 0.000 description 2
- 230000030741 antigen processing and presentation Effects 0.000 description 2
- 238000002617 apheresis Methods 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 2
- 239000006285 cell suspension Substances 0.000 description 2
- 238000002512 chemotherapy Methods 0.000 description 2
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 2
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 2
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 2
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 2
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 2
- 210000004408 hybridoma Anatomy 0.000 description 2
- 210000002865 immune cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 2
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 2
- 230000001024 immunotherapeutic effect Effects 0.000 description 2
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 2
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 2
- 230000003993 interaction Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 2
- 230000008782 phagocytosis Effects 0.000 description 2
- 238000011533 pre-incubation Methods 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 102000005962 receptors Human genes 0.000 description 2
- 108020003175 receptors Proteins 0.000 description 2
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 2
- 230000000638 stimulation Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 230000001988 toxicity Effects 0.000 description 2
- 231100000419 toxicity Toxicity 0.000 description 2
- 102100024222 B-lymphocyte antigen CD19 Human genes 0.000 description 1
- DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N Beta-D-1-Arabinofuranosylthymine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1C(O)C(O)C(CO)O1 DWRXFEITVBNRMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 102000004269 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010017080 Granulocyte Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 101000980825 Homo sapiens B-lymphocyte antigen CD19 Proteins 0.000 description 1
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 1
- 102000001706 Immunoglobulin Fab Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010054477 Immunoglobulin Fab Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 1
- HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N Levamisole Chemical compound C1([C@H]2CN3CCSC3=N2)=CC=CC=C1 HLFSDGLLUJUHTE-SNVBAGLBSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 208000015914 Non-Hodgkin lymphomas Diseases 0.000 description 1
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 1
- KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N Perforine Natural products COC1=C2CCC(O)C(CCC(C)(C)O)(OC)C2=NC2=C1C=CO2 KHGNFPUMBJSZSM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000276498 Pollachius virens Species 0.000 description 1
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 1
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005867 T cell response Effects 0.000 description 1
- 230000003213 activating effect Effects 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000006907 apoptotic process Effects 0.000 description 1
- 238000010420 art technique Methods 0.000 description 1
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 1
- 235000013405 beer Nutrition 0.000 description 1
- IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N beta-L-thymidine Natural products O=C1NC(=O)C(C)=CN1C1OC(CO)C(O)C1 IQFYYKKMVGJFEH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000005540 biological transmission Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 description 1
- 210000004970 cd4 cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000004940 costimulation Effects 0.000 description 1
- 238000005138 cryopreservation Methods 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- 231100000517 death Toxicity 0.000 description 1
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 description 1
- 210000001787 dendrite Anatomy 0.000 description 1
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 210000003608 fece Anatomy 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 230000003054 hormonal effect Effects 0.000 description 1
- 208000013010 hypopharyngeal carcinoma Diseases 0.000 description 1
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 229960001614 levamisole Drugs 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 239000010871 livestock manure Substances 0.000 description 1
- 238000011068 loading method Methods 0.000 description 1
- 230000005923 long-lasting effect Effects 0.000 description 1
- 210000001165 lymph node Anatomy 0.000 description 1
- 210000003810 lymphokine-activated killer cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000036210 malignancy Effects 0.000 description 1
- 230000003211 malignant effect Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 229940126601 medicinal product Drugs 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 229930192851 perforin Natural products 0.000 description 1
- 210000004976 peripheral blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 238000001959 radiotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000007420 reactivation Effects 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000000306 recurrent effect Effects 0.000 description 1
- 238000003757 reverse transcription PCR Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002195 synergetic effect Effects 0.000 description 1
- 238000007910 systemic administration Methods 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 229940104230 thymidine Drugs 0.000 description 1
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 1
- 238000012549 training Methods 0.000 description 1
- 238000002054 transplantation Methods 0.000 description 1
- 238000011269 treatment regimen Methods 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000002747 voluntary effect Effects 0.000 description 1
- 239000002023 wood Substances 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/13—Tumour cells, irrespective of tissue of origin
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/14—Blood; Artificial blood
- A61K35/17—Lymphocytes; B-cells; T-cells; Natural killer cells; Interferon-activated or cytokine-activated lymphocytes
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K39/0005—Vertebrate antigens
- A61K39/0011—Cancer antigens
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K41/00—Medicinal preparations obtained by treating materials with wave energy or particle radiation ; Therapies using these preparations
- A61K41/10—Inactivation or decontamination of a medicinal preparation prior to administration to an animal or a person
- A61K41/17—Inactivation or decontamination of a medicinal preparation prior to administration to an animal or a person by ultraviolet [UV] or infrared [IR] light, X-rays or gamma rays
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P35/00—Antineoplastic agents
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/2803—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily
- C07K16/2809—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against the immunoglobulin superfamily against the T-cell receptor (TcR)-CD3 complex
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
- C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
- C07K16/30—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants from tumour cells
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K2319/00—Fusion polypeptide
Description
Die Erfindung betrifft ein Verfahren zur ex vivo-Immunisierung
mittels heterologer, intakter bispezifischer und/oder trispezi
fischer Antikörper sowie Verwendungen dieses Verfahrens zur
Prophylaxe und Therapie von Tumorerkrankungen, insbesondere zur
Induktion einer Tumorimmunität.
Maligne Erkrankungen des Menschen, beispielsweise Brustkrebs im
fortgeschrittenen Stadium, haben trotz der Fortschritte der
Chemo- und Radiotherapie in den letzten Jahren noch immer eine
äußerst ungünstige Prognose. Eine Heilung dieser Erkrankungen
ist in der Regel nicht möglich. Es ist daher notwendig, neue
Behandlungsstrategien zu entwickeln. Große Hoffnungen werden
dabei auf immuntherapeutische Ansätze gesetzt, mittels derer
das Immunsystem des Patienten dazu gebracht werden soll, den
Tumor abzustoßen. Es ist bekannt, daß auf Tumorzellen tumoras
soziierte Antigene vorkommen und daß das Immunsystem prinzi
piell durchaus in der Lage ist, diese zu erkennen und die ma
lignen Zellen anzugreifen. Tumoren haben jedoch verschiedene
Strategien entwickelt, die es ihnen erlauben, sich der Immun
antwort zu entziehen. Dies gelingt ihnen z. B. durch ungenügende
Präsentation von tumorassoziierten Antigenen und/oder durch
unzureichende Aktivierung der in der Regel vorhandenen tumor
spezifischen T-Zellen.
Bei etwa 43.000 Neuerkrankungen/Jahr steht Brustkrebs an der
Spitze der Krebsstatistik für Frauen in Deutschland. Weniger
als ein Drittel der Frauen mit Lymphknotenbefall bei Diagnose
leben 10 Jahre ohne Rückfall.
Immuntherapeutische Ansätze beim Mamma-Karzinom beschränkten
sich bisher auf Methoden zur unspezifischen Stimulation wie die
Behandlung mit BCG oder Levamisol, sowie den Einsatz von LAK-
und NK-Zellen mit IL-2 (3, 4). Eine Lebensverlängerung konnte
mit bisher eingesetzten Formen von Immuntherapie nicht nachge
wiesen werden, die Behandlung mit BCG war sogar eher nachteilig
(3). Nachdem unspezifische Aktivierungen von Zellen auch bei
anderen Tumorarten wenig Erfolg gehabt haben, sollte nun ver
sucht werden, eine spezifische Immunreaktion in Gang zu brin
gen.
Für die Tumortherapie wurden beispielsweise T-Zell-redirigie
rende bispezifische Antikörper verwendet. Diese binden mit ei
nem Bindungsarm an einen T-Zell-Rezeptorkomplex und mit dem
zweiten Bindungsarm an ein tumorassoziiertes Antigen auf einer
Tumorzelle. Durch die daraus resultierende Aktivierung der
T-Zelle und der räumlichen Nähe der Tumorzelle wird letztere
durch Apoptose-Induktion bzw. Zytokine wie TNF-α oder Perforin
zerstört.
Die im Stand der Technik zur Tumortherapie verwendeten bispezi
fischen Antikörper wurden direkt in die Patienten infundiert.
Diese Vorgehensweise weist mehrere Nachteile auf:
- - Es sind hohe Antikörper-Dosen notwendig;
- - es können gravierende Nebenwirkungen auftreten;
- - durch den Tumorbindungsarm können die Antikörper bei in vivo-Applikation auch an Normalgewebe binden.
Es ist eine Aufgabe der vorliegenden Erfindung, ein neues Ver
fahren bereitzustellen, um maligne Erkrankungen des Menschen,
insbesondere mit dem Ziel einer Tumorimmunität, zu therapieren.
Diese Aufgabe wird erfindungsgemäß durch das im Anspruch 1 nä
her gekennzeichnete Verfahren gelöst. Bevorzugte Ausgestaltun
gen des Verfahrens ergeben sich auch aus den Unteransprüchen.
Weitere Ansprüche betreffen die Verwendung des erfindungsgemäß
bereitgestellten Verfahrens zur Prophylaxe und Therapie von
Tumorerkrankungen, insbesondere zur Erreichung einer Tumorimmu
nität, besonders bevorzugt einer Langzeit-Immunität.
Erfindungsgemäß werden heterologe intakte bispezifische und/
oder trispezifische Antikörper verwendet. Diese werden ex vivo
mit zuvor aus einem Patienten entnommenen Tumorzellen (autologe
Tumorzellen) in Kontakt gebracht. Um ein Überleben der Tumor
zellen nach Reinfusion zu verhindern, wurden die Tumorzellen
vor dem Inkontaktbringen mit den Antikörpern in an sich bekann
ter Weise behandelt, beispielsweise durch Bestrahlung. Die Tu
morzellen werden nach Bestrahlung mit den intakten heterologen
bispezifischen und/oder trispezifischen Antikörpern inkubiert.
Erfindungsgemäß sind nicht beliebige Antikörper verwendbar,
sondern diese müssen intakt sein, d. h. sie müssen einen funk
tionellen Fc-Teilbesitzen, und sie müssen heterologer Natur
sein, d. h. die Antikörper sind dann aus schweren Immunglobulin
ketten unterschiedlicher Subklassen (-Kombinationen, auch Frag
mente) und/oder Herkunft (Spezies) zusammengesetzt.
Diese intakten heterologen bispezifischen und/oder trispezifi
schen Antikörper werden so ausgewählt, daß sie weiterhin die
nachfolgenden Eigenschaften aufweisen:
α - Binden an eine T-Zelle;
β - Binden an zumindest ein Antigen auf einer Tumor zelle;
γ - Binden durch ihren Fc-Teil (bei bispezifischen Antikörpern) oder durch eine dritte Spezifität (bei trispezifischen Antikörpern) an Fc-Rezeptor positive Zellen;
δ - Aktivieren die Fc-Rezeptor positive Zelle, wo durch die Expression von Zytokinen und/oder ko stimulatorischen Antigenen initiiert oder er höht wird.
α - Binden an eine T-Zelle;
β - Binden an zumindest ein Antigen auf einer Tumor zelle;
γ - Binden durch ihren Fc-Teil (bei bispezifischen Antikörpern) oder durch eine dritte Spezifität (bei trispezifischen Antikörpern) an Fc-Rezeptor positive Zellen;
δ - Aktivieren die Fc-Rezeptor positive Zelle, wo durch die Expression von Zytokinen und/oder ko stimulatorischen Antigenen initiiert oder er höht wird.
Bei den trispezifischen Antikörpern erfolgt die Bindung an die
Fc-Rezeptor positiven Zellen bevorzugt beispielsweise über den
Fc-Rezeptor von Fc-Rezeptor positiven Zellen oder auch über
andere Antigene auf Fc-Rezeptor positiven Zellen (Antigen-prä
sentierenden Zellen), wie z. B. den Mannose-Rezeptor.
Nur durch das erfindungsgemäße Verfahren und den Einsatz der
hier beschriebenen Antikörper ist gewährleistet, daß nach Rein
fusion der Antikörper in den Patienten, aus dem die Tumorzellen
zuvor entnommen wurden, eine Tumorimmunität aufgebaut wird. Die
Reinfusion erfolgt bevorzugt in einen Patienten nach der Be
handlung des Primärtumors, bevorzugt bei Patienten in einer mi
nimal residual disease (MRD)-Situation. Bei Patienten mit wenig
verbliebenen Tumorzellen, bei denen allerdings die Gefahr eines
Rezidivs hoch sein kann, wird das erfindungsgemäß bereitge
stellte Verfahren besonders erfolgreich anwendbar sein.
Durch das erfindungsgemäße Verfahren können die aus dem Stand
der Technik bekannten und oben näher beschriebenen Nachteile
vermieden werden.
Die erfindungsgemäß verwendbaren heterologen bispezifischen
und/oder trispezifischen Antikörper sind zum Teil an sich be
kannt, zum Teil werden sie aber auch in der vorstehenden Anmel
dung zum ersten Mal beschrieben. Ein Beispiel für einen bsAk
ist der Antikörper anti-CD3 X anti-epcam, der bei epithelialen
Tumoren wie dem Mammacarcinom eingesetzt wird.
Erfindungsgemäß werden zwei Verfahrens-Varianten unterschieden:
- 1. Kurzzeitinkubation, und
- 2. Langzeitinkubation.
Bei der Kurzzeitinkubation werden die autologen Tumorzellen mit
den intakten heterologen bispezifischen und/oder trispezifi
schen Antikörpern für einen Zeitraum von 10 Minuten bis 5 Stun
den oder 10 Minuten bis 3 Stunden oder weiterhin bevorzugt für
einen Zeitraum von ca. 15 Minuten bis 2 Stunden, weiterhin be
vorzugt für einen Zeitraum von 15 Minuten bis 1 Stunde, inku
biert. Die dann mit den Antikörpern beladenen Tumorzellen wer
den dann zur Reinfusion vorbereitet.
Bei der Langzeitinkubation werden die autologen Tumorzellen
ebenfalls für einen Zeitraum von ca. 10 Minuten bis 5 Stunden,
bevorzugt für einen Zeitraum von 15 Minuten bis 2 Stunden und
weiterhin bevorzugt für einen Zeitraum von 15 Minuten bis 1
Stunde, inkubiert, so daß die autologen Tumorzellen mit den An
tikörpern beladen werden. Anschließend werden hierzu Blutzellen
des Patienten, bevorzugt mononukleäre Zellen aus dem peripheren
Blut (PBMC = peripheral blood mononucleated cells), zugegeben,
und diese Mischung wird dann über einen längeren Zeitraum, bei
spielsweise 1 bis 14 Tage lang, bevorzugt 3 bis 10 Tage und
weiterhin bevorzugt 6 bis 10 Tage, inkubiert. Alternativ hierzu
können in einer weiteren Verfahrensführung die autologen Tumor
zellen unmittelbar mit den bispezifischen und/oder trispezifi
schen Antikörpern und mit den Blutzellen des Patienten, bevor
zugt den mononukleären Zellen aus dem peripheren Blut, in Kon
takt gebracht werden. Hierdurch wird eine Vielzahl von Immun
zellen bereits ex vivo gegen den Tumor "geprimt". Anschließend
werden diese in den Patienten reinfundiert. Durch die Langzei
tinkubation wird auch eine Internalisierung der Antikörper und
ihr Abbau erreicht.
Erste in vitro-Ergebnisse zeigen, daß durch derartig vorbehan
delte Immunzellen Tumorzellen ohne weitere Zugabe von bispezi
fischen und/oder trispezifischen Antikörpern zerstört werden
können (vgl. Beispiel 1).
Sowohl bei der Kurzzeitinkubation als auch bei der Langzeitin
kubation werden T-Zellen an die Tumorzellen mittels der an den
Tumorzellen immobilisierten intakten bispezifischen und/oder
trispezifischen Antikörper redirigiert; gleichzeitig findet
eine Bindung von Fc-Rezeptor positiven Zellen an den Fc-Teil
des bispezifischen und/oder trispezifischen Antikörpers nach
Reinfusion statt. Dabei werden die Fc-Rezeptor positiven Zellen
durch Bindung an die Fc-Teile von (an der T-Zelle bzw. Tumor
zelle) immobilisierten intakten bispezifischen Antikörpern akti
viert.
Zur Verbesserung des Immunisierungserfolges können die entweder
nach dem Kurzzeit-Inkubationsverfahren oder nach dem Langzeit-
Inkubationsverfahren mit den Antikörpern behandelten Tumorzel
len nicht nur einmal an den Patienten appliziert, sondern wahl
weise auch mehrfach verabreicht werden.
Auf der Tumorzelle erfolgt eine Hochregulation von MHC 1, sowie
eine Aktivierung der intrazellulären Prozessierungsmaschinerie
(Proteasom-Komplex) aufgrund der Freisetzung von Zytokinen (wie
z. B. INF-γ und TNF-α) in unmittelbarer Nachbarschaft der Tumor
zelle. Die Zytokine werden aufgrund bispezifischer Antikörper
vermittelter Aktivierung von T-Zellen und akzessorischen Zellen
freigesetzt (siehe Abb. 1 und 3). D.h. durch den intakten bsAk
werden nicht nur Tumorzellen zerstört oder phagozytiert, son
dern indirekt auch deren Tumorimmunität erhöht.
Die Aktivierung der Fc-Rezeptor positiven Zelle durch den bsAk
ist von der Subklasse bzw. der Subklassenkombination des bsAk
abhängig. Wie in in vitro-Versuchen nachgewiesen werden konnte,
sind beispielsweise bsAk der Subklassenkombination Maus-IgG2a/
Ratte-IgG2b in der Lage, an Fc-Rezeptor positive Zellen zu bin
den und diese gleichzeitig zu aktivieren, was zur Hochregula
tion bzw. Neuausbildung (Expression) von kostimulatorischen
Antigenen, wie z. B. CD40, CD80 oder CD86, auf der Zelloberflä
che dieser Zellen führt. Dagegen sind bsAk der Subklassenkom
bination Maus-IgG1/IgG2b zwar in der Lage an Fc-Rezeptor posi
tive Zellen zu binden (1), können diese aber offenbar nicht in
vergleichbarem Maße aktivieren (2).
Während der intakte bsAk die T-Zelle mit einem Bindungsarm
(z. B. an CD3 oder CD2) bindet und gleichzeitig aktiviert, kön
nen kostimulatorische Signale von der, an den Fc-Teil des bsAk
gebundenen Fc-Rezeptor positiven Zelle, an die T-Zelle übermit
telt werden. D.h. erst die Kombination von Aktivierung der
T-Zelle über einen Bindungsarm des bsAk und der gleichzeitigen
Übertragung von kostimulatorischen Signalen von der Fc-Rezeptor
positiven Zelle auf die T-Zelle, führt zu einer effizienten
T-Zellaktivierung (Abb. 1A). Tumor-spezifische T-Zellen, die an
der Tumorzelle ungenügend aktiviert wurden und anergisch sind,
können nach der erfindungsgemäßen ex vivo-Vorbehandlung eben
falls reaktiviert werden (Abb. 1B).
Ein weiterer wichtiger Aspekt bei der Induktion einer Tumorim
munität ist die mögliche Phagozytose, Prozessierung und Präsen
tation von Tumorebestandteilen durch die vom bsAk herangeführ
ten und aktivierten akzessorischen Zellen (Monozyten/Makropha
gen, dendritische Zellen und NK-"Natural Killer"-Zellen). Durch
diesen klassischen Mechanismus der Präsentation von Antigenen
können sowohl tumorspezifische CD4- wie auch CD8-positive Zel
len generiert werden. Tumorspezifische CD4-Zellen spielen dar
überhinaus eine wichtige Rolle für die Induktion einer humora
len Immunantwort im Zusammenhang mit der T-B-Zell Kooperation.
Bispezifische und trispezifische Antikörper können mit einem
Bindungsarm an den T-Zellrezeptor-Komplex der T-Zelle, mit dem
zweiten Bindungsarm an tumorassoziierte Antigene auf der Tumor
zelle binden. Sie aktivieren dabei T-Zellen, die durch Freiset
zung von Zytokinen oder Apoptose-vermittelnde Mechanismen die
Tumorzellen zerstören. Darüber hinaus besteht offenbar die Mög
lichkeit, daß T-Zellen im Rahmen der Aktivierung mit bispezifi
schen Antikörpern tumorspezifische Antigene über ihren Rezeptor
erkennen und dadurch eine dauerhafte Immunisierung eingeleitet
wird (Abb. 1B). Von besonderer Bedeutung ist dabei der intakte
Fc-Teil des bispezifischen oder trispezifischen Antikörpers,
der die Bindung an akzessorische Zellen wie z. B. Monozyten/Ma
krophagen und dendritische Zellen vermittelt und diese veran
laßt selbst zytotoxisch zu werden und/oder gleichzeitig wichti
ge kostimulatorische Signale an die T-Zelle weiterzugeben (Abb.
1). Auf diese Weise kann offensichtlich eine T-Zellantwort u. U.
auch gegen bislang unbekannte, tumorspezifische Peptide indu
ziert werden.
Durch Redirektion von u. U. anergisierten, tumorspezifischen
T-Zellen an Tumorzellen mittels bispezifischer und/oder trispezi
fischer bei gleichzeitiger Kostimulation derartiger T-Zellen
durch akzessorische Zellen welche an den Fc-Teil des bispezifi
schen oder trispezifische Antikörpers binden, könnte die Aner
gie von zytotoxischen T-Zellen (CTLs) aufgehoben werden. D.h.
eine im Patienten gegen den Tumor existierende T-Zell-Toleranz
kann mittels intakter heterologer bispezifischer und/oder tri
spezifischer Antikörper gebrochen und damit eine dauerhafte
Tumorimmunität induziert werden.
Für den letzten Punkt gibt es erste in vivo-Daten aus Mausver
suchen, die auf eine derartige dauerhafte Tumorimmunität nach
Behandlung mit einem syngenen Tumor und intakten bsAk hinwei
sen. In diesen Versuchen überlebten insgesamt 14 von 14 Tieren,
die nach einer ersten Tumorinjektion erfolgreich mit bsAk be
handelt werden konnten, eine weitere Tumorinjektion 144 Tage
nach der ersten Tumorinjektion - ohne eine erneute Gabe von
bsAk (siehe Beispiel 2).
Weitere Vorteile bei der ex vivo-Immunisierung mittels bispezi
fischer und/oder trispezifischer Antikörper sind (i) die Mini
mierung von möglichen Nebenwirkungen (ii) die kontrollierte
Bindung des Tumorbindungsarms an die Tumorzelle außerhalb des
Körpers und (iii) ein möglichst geringer Verbrauch von bispezi
fischen und trispezifischen Antikörpern. Dabei sind grundsätz
lich zwei Vorgehensweisen möglich, die unten im einzelnen er
läutert werden. Ein wichtiger Aspekt bei der Langzeitinkubation
ist, daß der eingesetzte bispezifische oder trispezifische An
tikörper innerhalb der projektierten Inkubationszeit verbraucht
und abgebaut wird. Damit würde für eine derartige Immunisierung
die langwierige Arzneimittelanmeldung entfallen.
Die Tumorzellen werden mit den Antikörpern beim Kurzeit- und
beim Langzeit-Inkubationsverfahren über einen Zeitraum von 10
Minuten bis 5 Stunden, bevorzugt bis 3 Stunden, weiterhin be
vorzugt bis 2 Stunden und noch weiter bevorzugt 15 Minuten bis
1 Stunde lang inkubiert. Die Inkubation erfolgt bevorzugt bei
einer Temperatur von 4°C bis 25°C, insbesondere bevorzugt bei
4°C bis 10°C. Die Inkubation wird bevorzugt in steriler Umge
bung in gepufferter Kochsalzlösung bei einem neutralen pH-Wert
durchgeführt. Bei der Kurzzeit-Inkubation erfolgt anschließend
unmittelbar die Reinfusion in den Patienten. Beim Langzeit-In
kubationsverfahren werden nach dieser Vorinkubation die mononu
kleären Zellen aus dem peripheren Blut zugegeben und zusammen
mit den bereits vorinkubierten Tumorzellen/Antikörpern für ei
nen weiteren Zeitraum von 1 bis 14 Tagen, bevorzugter 3 bis 10
Tagen, weiterhin bevorzugt 6 bis 10 Tagen, inkubiert. Diese
Inkubation erfolgt bevorzugt bei 37°C unter sterilen Bedingun
gen und unter GMP-Bedingungen (Good Manufacturing Production =
GMP) in einem Brutschrank. Wie weiter oben bereits beschrieben,
können bei der Langzeit-Inkubation die Blutzellen auch zusammen
mit den Tumorzellen und den Antikörpern unter geeigneten Bedin
gungen inkubiert werden.
Die obengenannten Inkubationsbedingungen sind nur beispielhaft
zu verstehen. In Abhängigkeit von den Tumorzellen und den ver
wendeten Antikörpern können auch andere Zeiträume, Temperatur
bedingungen etc., allgemein andere Inkubationsbedingungen, ge
wählt werden. Der Fachmann kann durch einfache Versuche diese
Bedingungen festlegen.
Bei der Vorinkubation werden die Tumorzellen bevorzugt in einer
Menge von 107 bis 109 Zellen, weiterhin bevorzugt in einer Menge
von ca. 108 Zellen, verwendet. Die mononukleären Zellen aus dem
peripheren Blut werden in einer Menge von ca. 108 bis 1010 Zel
len zugegeben. Selbstverständlich ist es für den Fachmann auch
möglich, andere Inkubationsbedingungen zu wählen, die durch
Laborversuche ermittelt werden können (bspw. Änderungen in der
Zellzahl und Inkubationsdauer).
Die eingesetzten autologen Tumorzellen werden, um nach Reinfu
sion ein weiteres Überleben der Tumorzellen zu verhindern,
bspw. bestrahlt. Beispielsweise werden γ-Strahlen verwendet,
die bspw. in einer Dosiestärke von 50 bis 100 Gy eingesetzt
werden.
Die erfindungsgemäß eingesetzten Antikörper sind bevorzugt zur
Reaktivierung von in Anergie befindlichen, tumorspezifischen
T-Zellen befähigt. Weiterhin sind sie zur Induktion von tumorre
aktiven Komplement-bindenden Antikörpern und damit zur Induk
tion einer humoralen Immunantwort in der Lage.
Die Bindung erfolgt bevorzugt über CD3, CD2, CD4, CD5, CD6,
CD8, CD28 und/oder CD44 an die T-Zelle. Die Fc-Rezeptor positi
ven Zellen weisen zumindest einen Fcγ-Rezeptor I, II oder III
auf.
Erfindungsgemäß einsetzbare Antikörper sind zur Bindung an Mo
nozyten, Makrophagen, dendritische Zellen, "Natural Killer"-
Zellen (NK-Zellen) und/oder aktivierte neutrophile Zellen als
Fcγ-Rezeptor 1 positive Zellen befähigt.
Die erfindungsgemäß einsetzbaren Antikörper bewirken, daß die
Expression von CD40, CD80, CD86, ICAM-1 und/oder LFA-3 als ko
stimulatorische Antigene oder/und die Sekretion von Zytokinen
durch die Fc-Rezeptor positive Zelle initiiert oder erhöht
wird. Die Zytokine sind bevorzugt IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8,
IL-12 und/oder TNF-α.
Die Bindung an die T-Zelle erfolgt bevorzugt über den T-Zell-
Rezeptor-Komplex der T-Zelle.
Die erfindungsgemäß einsetzbaren bispezifischen Antikörper sind
bevorzugt:
- - ein anti-CD3 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD4 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti- CD5 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD6 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD8 X anti- Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD2 X anti-Tu mor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD28 X anti-Tumor assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD44 X anti-Tumor-as soziiertes Antigen-Antikörper ist.
Die erfindungsgemäß einsetzbaren trispezifischen Antikörper
sind bevorzugt:
- - ein anti-CD3 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD4 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti- CD5 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD6 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD8 X anti- Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD2 x anti-Tu mor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD28 X anti-Tumor assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD44 X anti-Tumor-as soziiertes Antigen-Antikörper.
Die erfindungsgemäß einsetzbaren trispezifischen Antikörper wei
sen zumindest eine T-Zell-Bindungsarm, einen Tumorzell-Bin
dungsarm und einen an Fc-Rezeptor positive Zellen bindenden
Bindungsarm auf. Dieser zuletzt genannte Bindungsarm kann ein
anti-Fc-Rezeptor-Bindungsarm oder ein Mannose-Rezeptor-Bin
dungsarm sein.
Der bispezifische Antikörper ist bevorzugt ein heterologer in
takter Ratte/Maus bispezifischer Antikörper.
Mit den erfindungsgemäß einsetzbaren bispezifischen und trispe
zifischen Antikörpern werden T-Zellen aktiviert und gegen die
Tumorzellen redirigiert. Bevorzugt einsetzbare heterologe in
takte bispezifische Antikörper werden aus einer oder mehreren
der nachfolgenden Isotyp-Kombinationen ausgewählt:
Ratte-IgG2b/Maus-IgG2a,
Ratte-IgG2b/Maus-IgG2b,
Ratte-IgG2b/Maus-IgG3,
Ratte-IgG2b/Human-IgG1,
Ratte-IgG2b/Human-IgG2,
Ratte-IgG2b/Human-IgG3[orientaler Allotyp G3m(st) = Bin dung an Protein A],
Ratte-IgG2b/Human-IgG4,
Ratte-IgG2b/Ratte-IgG2c,
Maus-IgG2a/Human-IgG3[kaukasische Allotypen G3m(b+g) = keine Bindung an Protein A, im folgenden mit * gekenn zeichnet],
Maus-IgG2a/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]- Human-IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-IgG2a/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-IgG2a/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]- Human-IgG1-[Hinge]-Human-IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human- IgG4-[Hinge]-Human-IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human- IgG3*[C-terminale Region von CH2: < AS-Position 251]-Hu man-IgG3*[CH3],
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge-CH2-CH3],
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG2-[Hinge-CH2-CH3],
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG3-[Hinge-CH2-CH3, orientaler Allotyp],
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge-CH2-CH3],
Human-IgG1/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]- Human-IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3],
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3],
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG2[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3],
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG2[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3],
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG2/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG2-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG4/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG4/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3],
Maus-IgG2b/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-IgG2b/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]- Human-IgG4-[Hinge]-Human-IgG4-[CH2]-Human-IgG3*-[CH3],
HumanIgG1/Ratte[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1[Hinge]-Human- IgG4-[CH2]-HumanIgG3*[CH3],
HumanIgG1/Maus[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1[Hinge]-Human-IgG4- [CH2]-Human-IgG3*[CH3],
Human-IgG4/Human[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG4-[CH2]-HumanIgG3*-[CH3].
Ratte-IgG2b/Maus-IgG2a,
Ratte-IgG2b/Maus-IgG2b,
Ratte-IgG2b/Maus-IgG3,
Ratte-IgG2b/Human-IgG1,
Ratte-IgG2b/Human-IgG2,
Ratte-IgG2b/Human-IgG3[orientaler Allotyp G3m(st) = Bin dung an Protein A],
Ratte-IgG2b/Human-IgG4,
Ratte-IgG2b/Ratte-IgG2c,
Maus-IgG2a/Human-IgG3[kaukasische Allotypen G3m(b+g) = keine Bindung an Protein A, im folgenden mit * gekenn zeichnet],
Maus-IgG2a/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]- Human-IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-IgG2a/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-IgG2a/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]- Human-IgG1-[Hinge]-Human-IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human- IgG4-[Hinge]-Human-IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human- IgG3*[C-terminale Region von CH2: < AS-Position 251]-Hu man-IgG3*[CH3],
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge-CH2-CH3],
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG2-[Hinge-CH2-CH3],
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG3-[Hinge-CH2-CH3, orientaler Allotyp],
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge-CH2-CH3],
Human-IgG1/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]- Human-IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3],
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3],
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG2[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3],
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG2[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3],
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG2/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG2-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG4/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG4/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3],
Maus-IgG2b/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-IgG2b/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]- Human-IgG4-[Hinge]-Human-IgG4-[CH2]-Human-IgG3*-[CH3],
HumanIgG1/Ratte[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1[Hinge]-Human- IgG4-[CH2]-HumanIgG3*[CH3],
HumanIgG1/Maus[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1[Hinge]-Human-IgG4- [CH2]-Human-IgG3*[CH3],
Human-IgG4/Human[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG4-[CH2]-HumanIgG3*-[CH3].
Bei den erfindungsgemäß verwendbaren Antikörpern handelt es
sich vorzugsweise um monoklonale, chimäre, rekombinante, syn
thetische, halbsynthetische oder chemisch modifizierte intakte
Antikörper mit beispielsweise Fv-, Fab-, scFv- oder F(ab)2-
Fragmenten.
Bevorzugt werden Antikörper oder Derivate oder Fragmente vom
Menschen verwendet oder solche, die derart verändert sind, daß
sie sich für die Anwendung beim Menschen eignen (sogenannte
"humanized antibodies") (siehe z. B. Shalaby et al., J. Exp.
Med. 175 (1992), 217; Mocikat et al., Transplantation 57
(1994), 405).
Die Herstellung der verschiedenen oben genannten Antikörperty
pen und -fragmente ist dem Fachmann geläufig. Die Herstellung
monoklonaler Antikörper, die ihren Ursprung vorzugsweise in
Säugetieren, z. B. Mensch, Ratte, Maus, Kaninchen oder Ziege,
haben, kann mittels herkömmlicher Methoden erfolgen, wie sie
z. B. in Köhler und Milstein (Nature 256 (1975), 495), in Harlow
und Lane (Antibodies, A Laboratory Manual (1988), Cold Spring
Harbor) oder in Galfré (M.th. Enzymol. 73 (1981), 3) beschrie
ben sind.
Ferner ist es möglich, die beschriebenen Antikörper mittels
rekombinanter DNA-Technologie nach dem Fachmann geläufigen
Techniken herzustellen (siehe Kurucz et al., J. Immunol. 154
(1995), 4576; Hollinger et al., Proc. Natl. Acad. Sc. USA 90
(1993), 6444).
Die Herstellung von Antikörpern mit zwei verschiedenen Spezi
fitäten, den sogenannten bispezifischen Antikörpern, ist zum
einen durch Anwendung rekombinanter DNA-Technologie möglich,
aber auch durch die sogenannte Hybrid-Hybridoma-Fusionstechnik
(siehe z. B. Milstein et al., Nature 305 (1983), 537). Hierbei
werden Hybridomazellinien, die Antikörper mit jeweils einer der
gewünschten Spezifitäten produzieren, fusioniert und rekombi
nante Zellinien identifiziert und isoliert, die Antikörper mit
beiden Spezifitäten produzieren.
Das der Erfindung zugrunde liegende Problem kann sowohl durch
bispezifische als auch trispezifische Antikörper gelöst werden,
sofern sie die im Anspruch 1 gekennzeichneten Eigenschaften und
Wirkungen aufweisen. Nachfolgend wird die Herstellung von Anti
körpern mit Zwei- und Dreispezifitäten näher beschrieben. Die
Bereitstellung derartiger bispezifischer und trispezifischer
Antikörper gehört zum Stand der Technik, und auf die derartige
Herstellungstechniken beschreibende Literatur wird hier voll
inhaltlich Bezug genommen.
Die Herstellung von Antikörpern mit drei Spezifitäten, soge
nannten trispezifischen Antikörpern, durch die das der Erfin
dung zugrundeliegende Problem ebenfalls lösbar ist, kann bei
spielsweise derart erfolgen, daß an eine der schweren Ig-Ketten
eines bispezifischen Antikörpers eine dritte Antigenbindungs
stelle mit einer weiteren Spezifität, z. B. in Form eines "sing
le chain variable fragments" (scFv), angekoppelt wird. Das scFv
kann beispielsweise über einen
-S-S(G4S)nD-I-Linker
an eine der schweren Ketten gebunden sein (S = Serin, G = Gly
cin, D = Aspartat, I = Isoleucin).
Analog dazu können trispezifische F(ab)2-Konstrukte hergestellt
werden, indem die CH2-CH3-Regionen der schweren Kette einer
Spezifität eines bispezifischen Antikörpers ersetzt werden
durch ein scFv mit einer dritten Spezifität, während die CH2-
CH3-Regionen der schweren Kette der anderen Spezifität bei
spielsweise durch Einbau eines Stopcodons (am Ende der "Hinge"-
Region) in das codierende Gen, z. B. mittels homologer Rekombi
nation, entfernt werden (siehe Abb. 5).
Möglich ist auch die Herstellung trispezifischer scFv-Kon
strukte. Hierbei werden drei VH-VL-Regionen, die drei ver
schiedene Spezifitäten repräsentieren, hintereinander in Reihe
angeordnet (Abb. 6).
Erfindungsgemäß werden z. B. intakte bispezifische Antikörper
verwendet. Intakte bispezifische Antikörper sind aus zwei Anti
körper-Halbmolekülen (je eine H- und L-Immunglobulinkette), die
jeweils eine Spezifität repräsentieren, zusammengesetzt, und
besitzen darüber hinaus, wie normale Antikörper auch, einen
Fc-Teil mit den bekannten Effektorfunktionen. Sie werden bevorzugt
durch die Quadrom-Technologie hergestellt. Dieses Herstellungs
verfahren ist beispielhaft in der DE-A-44 19 399 beschrieben.
Auf diese Druckschrift, auch bzgl. einer Definition der bispe
zifischen Antikörper, wird zur vollständigen Offenbarung voll
inhaltlich Bezug genommen. Selbstverständlich sind auch andere
Herstellungsverfahren einsetzbar, solange sie zu den erfin
dungsgemäß notwendigen intakten bispezifischen Antikörpern der
obigen Definition führen.
Beispielsweise können in einem neu entwickelten Herstellungs
verfahren (6) intakte bispezifische Antikörper in ausreichender
Menge produziert werden. Die Kombination von 2 bispezifischen
Antikörpern gegen 2 unterschiedliche tumorassoziierte Antigene
(z. B. c-erb-B2, ep-cam, beispielsweise GA-733-2 = C215) auf den
Mammakarzinomzellen minimiert die Gefahr, daß Tumorzellen, die
nur ein Antigen exprimieren, unerkannt bleiben.
Es wurde auch versucht, durch Behandlung mit bispezifischen
F(ab')2-Fragmenten mit den Spezifitäten anti-c-erb-B2 x
antiCD64 eine Tumorimmunität zu erreichen. Der Hauptnachteil
von bsF(ab')2-Fragmenten liegt darin, daß aufgrund der verwen
deten Spezifitäten lediglich FcγRI+ Zellen an den Tumor rediri
giert werden. T-Zellen werden durch diesen bispezifischen Anti
körper nicht an den Tumor redirigiert. Die bsF(ab')2-Fragmente
besitzen zwar auch das Potential zur direkten Tumorzerstörung,
sind aber nicht in der Lage, selber eine Tumorimmunität zu eta
blieren. Dazu ist nur die T-Zelle mit ihrem spezifischen
T-Zellrezeptor befähigt. Die FcγRI+ Zellen können zwar indirekt
durch Präsentation von tumorspezifischen Peptiden (über MHCI
bzw. MHCII) nach z. B. Phagozytose von Tumorzellbestandteilen
tumorspezifische T-Zellen aktivieren, die Effizienz der Induk
tion einer Tumorimmunität ist hier aber nicht ganz so hoch (nur
bei 30% der Patienten).
Weitere Vorteile von intakten bsAk mit der Fähigkeit zur Redi
rektion von T-Zellen gegenüber den o.g. bsF(ab')2 Fragmenten
sind im einzelnen:
- 1. An intakte bsAk können Fc-Rezeptor positive Zellen binden und einerseits über ADCC (antibody-dependent cell-mediated cytotoxicity) direkt zur Tumorzerstörung beitragen sowie andererseits wie oben näher ausgeführt zur T-Zellaktivie rung.
- 2. Durch intakte T-Zell-redirigierende bsAk werden auch aner gisierte tumorspezifische T-Zellen an die Tumorzelle her angeführt, die erfindungsgemäß direkt am Tumor reaktiviert werden können. Dies kann durch ein bsF(ab')2-Fragment mit den Spezifitäten anti-CD64Xanti-tumorassoziiertes Antigen nicht erreicht werden.
- 3. Ein bsF(ab')2-Fragment mit den Spezifitäten anti-CD64Xan ti-tumorassoziiertes Antigen kann lediglich eine Tumorim munität in 30% der Patienten erzielen, während erfindungs gemäß in Mausversuchen mit T-Zell-redirigierenden intakten bsAk ein Schutz in 100% der Tiere erzielt werden konnte.
Die Bindung des bsAk an Fcγ-RI besitzt zwei wesentliche Vortei
le im Hinblick auf eine optimale anti-Tumorwirksamkeit:
- (1) Fcγ-RI positive Zellen besitzen die Fähigkeit mittels ADCC Tumorzellen zu eliminieren (11) und können insofern syn ergistisch zur anti-Tumorwirkung der durch den bsAk an die Tumorzelle herangeführten cytotoxischen T-Zellen beitragen (13).
- (2) Fcγ-RI positive Zellen (wie z. B. Monozyten/Makrophagen/ Dendriten) sind in der Lage, wichtige kostimulatorische Signale, ähnlich wie bei der Antigen-Präsentation, der T-Zelle zu liefern und damit eine Anergisierung der T-Zelle zu verhindern. Wie in Abb. 1 gezeigt können weiter hin, als erwünschtes Nebenprodukt, aufgrund der durch in takten bsAk vermittelten Interaktion von T-Zelle mit ak zessorischer Zelle und Tumorzelle sogar T-Zellen, deren T-Zellrezeptor tumorspezifische Peptide (über MHC Antigene auf der Tumorzelle präsentiert) erkennt, stimuliert wer den. Die für eine korrekte Aktivierung der T-Zelle notwen digen Kostimuli würden in dieser Konstellation von der akzessorischen Zelle (z. B. Monocyt) geliefert werden. In sofern sollte der erfindungsgemäße Antikörper neben der direkten T-Zellrezeptor-unabhängigen, durch bsAk vermit telten Tumorzerstörung (Abb. 1A) ebenfalls tumorspezifische T-Zellen aktivieren und generieren (Abb. 1B), die nach Ab bau der bsAk weiterhin im Patienten patrouillieren. D.h. mittels intakter bsAk kann ähnlich wie bei gentherapeuti schen Ansätzen (z. B. durch Einbau von kostimulatorischen Antigenen wie B-7 in die Tumorzelle) die Tumortoleranz im Patienten durchbrochen werden.
Günstig in diesem Zusammenhang ist weiterhin, daß die Expres
sion von Fcγ-RI nach G-CSF-Behandlung auf den entsprechenden
Zellen hochreguliert wird.
Die Erfindung wurde vorstehend und wird nachstehend insbesonde
re anhand von bispezifischen Antikörpern beschrieben. An die
Stelle der bispezifischen Antikörper sind selbstverständlich
aber auch trispezifische Antikörper einsetzbar, solange sie die
gestellten Bedingungen erfüllen.
Die Erfindung wurde und wird anhand der beiliegenden Abbildun
gen näher beschrieben. Die Abbildungen zeigen:
Abb. 1 Die Rolle akzessorischer Zellen bei der Tumor-Immun
therapie mittels bispezifischer Antikörper,
Abb. 2 Zerstörung von Tumorzellen nach Gabe von bispezifi
schen Antikörpern, nachgewiesen im Durchflußzytometer,
Abb. 3 Induktion von Zytokinen durch intakte bispezifische
Antikörper nur nicht aber durch parentale Antikörper,
Abb. 4 Wirksamkeit des erfindungsgemäßen Verfahrens in vivo,
Abb. 5 Trispezifische F(ab)2-Antikörper,
Abb. 6 Trispezifischer scFv-Antikörper.
- 1. Herstellung einer Einzelzellsuspension (107-109 Zellen) aus autologem Tumormaterial (oder allogenen Tumrozellen des selben Tumortyps) mit anschließender γ-Bestrahlung (50-100 Gy).
- 2. Zugabe von bsAk (5-50 µg) und 45 minütige Inkubation bei 4°C. Anschließend Auswaschen von ungebundenem Antikörper.
- 3. Reinfusion des Zellgemisches (i.v.).
- 1. Herstellung einer Einzelzellsuspension (107-109 Zellen) aus autologem Tumormaterial (oder allogenen Tumorzellen des selben Tumortyps) mit anschließender γ-Bestrahlung (50-100 Gy).
- 2. Zugabe von bsAk (5-50 µg), 45 min. inkubieren.
- 3. Zugabe von PBMC (108-1010), (alternativ: 1×109 Zellen aus T-Zellapherese).
- 4. nach 5 bis 7 Tagen Kontrolle der T-Zell-Reaktivität durch Transfer von Aliquots auf z. B. allogene Brustkrebszelli nien (MCF-7, MX-1).
- 5. Reinfusion (i.v.) der kultivierten PBMC am Tag 4 bis 14 in den Patienten (bei T-Zellapherese Kryokonservierung).
Abkürzungen: PBMC, peripheral blood mononucleated cells = mono
nukleäre Zellen aus dem peripheren Blut; i.v., intravenös.
Ein ähnlicher aber auf den Zusatz von Zytokinen angewiesener
und mit konventionellen bsAk (keine Aktivierung von akzessori
schen Zellen durch bsAk der Subklassenkombination Ratte IgG2B X
Ratte IgG1) durchgeführter Ansatz zeigte die prinzipielle Wirk
samkeit einer derartigen ex vivo-Immunisierung im Tiermodell
(5).
Im Gegensatz dazu liegt der Vorteil des hier offengelegten Ver
fahrens in der "Selbstversorgung" mit den für die Hochregula
tion von z. B. MHC 1 auf der Tumorzelle benötigten Zytokinen
(wie INF-γ oder TNF-α) durch die gleichzeitige Aktivierung von
T-Zellen und akzessorischen Zellen (Monozyten/Makrophagen,
Abbildung) an der Tumorzelle. Dies wird durch die eingangs erwähnte
besondere Subklassenkombination des hier verwendeten intakten
bsAk erreicht. Bei der Kurzzeitinkubation finden diese Vorgänge
im Patienten statt. Weitere Vorteile bei der Kurzzeitinkubation
sind (i) Umgehung der sonst notwendigen Kultivierung der Zell
suspension mit serumhaltigen Medium. (ii) Damit entfällt auch
die kostenintensive Kultivierung unter GMP-Richtlinien. (iii)
Ein weiterer wichtiger Aspekt ist die Vermeidung bzw. Reduzie
rung von möglichen Nebenwirkungen durch den bsAk aufgrund der
wesentlich geringeren Menge an appliziertem Antikörper.
Vorteil bei der Langzeitinkubation ist, daß der bsAk sich in
vitro nach einiger Zeit selber verbraucht (und somit auch diese
Methode nicht als Medikament, sondern als "medical device" eta
bliert werden kann).
H-LAc78 ist eine Zellinie, die aus einem Hypopharynkarzinom
etabliert wurde und epcam in hohem Maße exprimiert (eigene
FACS-Daten). Unter Verwendung von H-Lac78 und peripheren, mono
nukleären Zellen (PBMC) aus freiwilligen Spendern konnte die
Generierung allogener zytotoxischer T-Lymphozyten nachweisen.
Hierzu wurden konstante Mengen H-Lac78 (2×104) mit unter
schiedlichen Mengen PBMCs in Gegenwart (10 ng) oder Abwesenheit
eines bsAk (anti-epcam X anti-CD3) inkubiert. Nach einem Zeit
raum von sieben Tagen wurden die PBMCs abgenommen und im Durch
flußzytometer analysiert. Gleichzeitig wurden die Zahl der
H-Lac78 Tumorzellen bestimmt. Die Aktivierung der T-Zellen läßt
sich mikroskopisch an der Clusterbildung beobachten, die Proli
feration kann anhand des Einbaus von radioaktiven Thymidin be
stätigt werden. Der Nachweis verbliebener Tumorzellen wird mi
kroskopisch sowie über den epithelialen Marker epcam geführt,
der auf Zellen des peripheren Blutes nicht exprimiert wird. Wie
in Abb. 2 gezeigt, wurden die H-Lac78-Zellen bei Anwesenheit
des bsAk vollständig lysiert, d. h. im Durchflußzytometer waren
nach sieben Tagen keine epcam positiven Zellen mehr nachweis
bar. Diese Daten wurden durch den mikroskopischen Eindruck be
stätigt. Ohne bsAk war dagegen ein vollständiger Rasen von
H-Lac78-Zellen in den Wells zu sehen und im FACS waren epcam po
sitive Zellen nachweisbar.
In einem anschließenden Transferexperiment wurden die mit bzw.
ohne bsAk inkubierten PBMCs auf neue H-Lac78-Zellen ohne erneu
te Zugabe von bsAk überführt. Auch hier wurden die Tumorzellen
lysiert, und zwar ausschließlich von den zuvor durch den bsAk
aktivierten PBMC. Die Lyse von H-Lac78 vollzog sich vollständig
binnen 24 Stunden bis zu einem Verhältnis von 2 PBMC zu 1
H-Lac78-Zellen. Dieses Resultat bedeutet die Generierung allospe
zifischer CTLs ohne die externe Zugabe von Interleukin-2
(IL-2). Da IL-2 für die Aktivierung von T-Lymphozyten essentiell
ist, sprechen die hier gemachten Daten dafür, daß durch die
bsAk vermittelte Aktivierung IL-2 von den T-Zellen selbst pro
duziert wird. Die Induktion der IL-2 mRNA bei Zugabe des bsAk
konnte anschließend durch RT-PCR bestätigt werden, wobei der
bsAk den parentalen Ausgangsantikörpern deutlich überlegen war
(Abb. 3). Diese Beobachtung ist insofern von Bedeutung, als IL-2
zwar als antitumoral wirksames Zytokin beschrieben wurde,
eine systemische Gabe in entsprechender Konzentration wegen
seiner Toxizität jedoch nur bedingt möglich ist. Die Gefahr der
Toxizität ist hingegen bei der lokalen Produktion von IL-2, wie
sie beispielsweise durch intakte bsAk induziert wird, nicht
gegeben. Da für die effektive Induktion von IL-2 (und IL-12)
eine Stimulation von T-Zellen über den T-Zell-Rezeptor und CD28
notwendig ist, läßt auch dies auf die Bedeutung der Fc-Rezeptor
positiven Zellen (welche die Liganden für CD28: CD80 und CD86
bereitstellen) bei der Aktivierung der T-Zellen mittels intak
ter bsAk schließen.
Zur Prüfung der Frage ob bispezifische Antikörper eine langan
dauernde Tumorimmunität induzieren können, wurden C57BL/6 Mäu
sen zunächst 5×103 syngene B16 Tumorzellen injiziert. Zwei
Tage später wurde eine Gruppe von Mäusen (Anzahl 18) mit intak
tem, mittels Quadrom-Teonnologie (6) hergestelltem, bsAk behan
delt, welcher eine Zielstruktur (ep-cam/C215 = tumorassoziier
tes Antigen) auf der Tumorzelle sowie CD3 auf T-Zellen erkennt.
Eine zweite Gruppe (Anzahl 6) erhielt lediglich eine äquimolare
Menge von Fab-Fragmenten der beiden im bsAk enthaltenen Spezi
fitäten. Während alle Tiere der Fab-Kontrollgruppe innerhalb
von 56 Tagen verstarben oder eingeschläfert werden mußten,
überlebten 14 von 18 mit bsAk behandelten Tiere. 144 Tage nach
der ersten Injektion von Tumorzellen wurde den überlebenden 14
Tieren erneut eine Dosis von 750 B16 Tumorzellen, diesmal ohne
Gabe von bsAk, injiziert. Zur Kontrolle wurde 5 unbehandelten
Tieren dieselbe Tumorzellzahl verabreicht. Während das letzte
Tier der unbehandelten Kontrollgruppe 66 Tage nach Tumorinjek
tion eingeschläfert werden mußte, überlebten alle mit bsAk be
handelten Tiere (Überwachungszeitraum: 120 Tage nach zweiter
Tumorzell-Injektion). Siehe auch Abb. 4A und B: Überle
benskurven der beiden aufeinanderfolgenden, oben beschriebenen,
Experimente.
1. Haagen et al., Interaction of human moncyte Fcγ receptors
with rat IgG2b, J. Immunolog., 1995, 154: 1852-1860
2. Gast G.C., Haagen I.-A., van Houten A.A., Klein S., Duits A.J., de Weger R.A., Vroom T.M., Clark M.R., J. Phillips, van Dijk A.J.G., de Lau W.B.M., Bast B.J.E.G. CD8 T-cell activation after intravenous administration of CE3 X CD19 bispecific antibody in patients with non-Hodgkin lymphoma. Cancer Immunol. Immunother. 40: 390, 1995
3. Tenny, C., Jacobs, S., Stoller, R., Earle, M., and Kirk wood, J. Adoptive cellualr immunotherapy with high-dose chemotherapy and autologous bone marrow rescue (ABMR) for recurrent breast cancer (meeting abstract). Proc.Annu.Meet.Am.Soc.Clin.Oncol; 11: A88, 1992 ISSN: 0736-7589. CO: PMAODO - 7589 CO, 1993.
4. Early Breast Cancer Trialists' Collaborative Group, Systemic treatment of early breast cancer by hormonal, cytotoxic, or immune therapy - 133 randomised trials in volving 31 000 recurrences and 24 000 deaths among 75 000 women. Part II Lancet 339: 71-85, 1992
5.Guo et al., Effective tumor vaccines generated by in vitro modification ot tumor cells with cytokines and bispecific monoclonal antibodies. Nature Medicine 3: 451, 1997
6. Lindhofer et al., Preferential species-restricted heavy light chain pairing in rat-mouse quadromas: Implications for a single step purification of bispecific antibodies, J. Immunology 1995, 155: 219
2. Gast G.C., Haagen I.-A., van Houten A.A., Klein S., Duits A.J., de Weger R.A., Vroom T.M., Clark M.R., J. Phillips, van Dijk A.J.G., de Lau W.B.M., Bast B.J.E.G. CD8 T-cell activation after intravenous administration of CE3 X CD19 bispecific antibody in patients with non-Hodgkin lymphoma. Cancer Immunol. Immunother. 40: 390, 1995
3. Tenny, C., Jacobs, S., Stoller, R., Earle, M., and Kirk wood, J. Adoptive cellualr immunotherapy with high-dose chemotherapy and autologous bone marrow rescue (ABMR) for recurrent breast cancer (meeting abstract). Proc.Annu.Meet.Am.Soc.Clin.Oncol; 11: A88, 1992 ISSN: 0736-7589. CO: PMAODO - 7589 CO, 1993.
4. Early Breast Cancer Trialists' Collaborative Group, Systemic treatment of early breast cancer by hormonal, cytotoxic, or immune therapy - 133 randomised trials in volving 31 000 recurrences and 24 000 deaths among 75 000 women. Part II Lancet 339: 71-85, 1992
5.Guo et al., Effective tumor vaccines generated by in vitro modification ot tumor cells with cytokines and bispecific monoclonal antibodies. Nature Medicine 3: 451, 1997
6. Lindhofer et al., Preferential species-restricted heavy light chain pairing in rat-mouse quadromas: Implications for a single step purification of bispecific antibodies, J. Immunology 1995, 155: 219
Claims (24)
1. Verfahren zur ex Vivo-Immunisierung von Mensch und Tier
mit den nachfolgenden Schritten:
- a) Isolierung autologer Tumorzellen;
- b) Behandeln der Tumorzellen, um ihr Überleben nach Reinfusion zu verhindern;
- c) Inkubation der so behandelten Tumorzellen mit intak ten heterologen bispezifischen und/oder trispezifi schen Antikörpern, die die nachfolgenden Eigenschaf ten aufweisen:
- α - Binden an eine T-Zelle;
β - Binden an zumindest ein Antigen auf einer Tumor zelle;
γ - Binden durch ihren Fc-Teil (bei bispezifischen Antikörpern) oder durch eine dritte Spezifität (bei trispezifischen Antikörpern) an Fc-Rezeptor positive Zellen;
δ - Aktivieren die Fc-Rezeptor positive Zelle, wo durch die Expression von Zytokinen und/oder ko stimulatorischen Antigenen initiiert oder erhöht wird. - d) Überführen der aus c) erhaltenen, Tumorzellen enthal tenden Lösung in eine zur Reinfusion geeignete Vor richtung.
2. Verfahren nach Anspruch 1,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Antikörper so ausgewählt werden, daß sie zur Bindung
Fc-Rezeptor positive Zellen befähigt sind, die einen
Fcγ-Rezeptor I, II oder III aufweisen.
3. Verfahren nach Anspruch 2,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Antikörper zur Bindung an Monozyten, Makrophagen, den
dritische Zellen, "Natural Killer"-Zellen (NK-Zellen) und
/oder aktivierte neutrophile Zellen als Fcγ-Rezeptor I
positive Zellen befähigt sind.
4. Verfahren nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Antikörper zur Induktion von tumorreaktiven Komple
ment-bindenden Antikörpern und damit zur Induktion einer
humoralen Immunantwort befähigt sind.
5. Verfahren nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Antikörper so ausgewählt werden, daß sie über CD2,
CD3, CD4, CD5, CD6, CD8, CD28 und/oder CD44 an die T-Zel
len binden.
6. Verfahren nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Antikörper so ausgewählt werden, daß nach ihrer Bin
dung an die Fc-Rezeptor positiven Zellen die Expression
von CD40, CD80, CD86, ICAM-1 und/oder LFA-3 als kostimula
torische Antigene und/oder die Sekretion von Zytokinen
durch die Fc-Rezeptor positive Zelle initiiert oder erhöht
wird.
7. Antikörper nach Anspruch 6,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Antikörper so ausgewählt werden, daß die Sekretion von
IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-12 als Zytokine und/oder
von TNF-α erhöht wird.
8. Verfahren nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche,
dadurch gekennzeichnet, daß
der bispezifische Antikörper so ausgewählt wird, daß er
ein anti-CD3 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder
anti-CD4 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-
CD5 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD6 X
anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD8 X anti-
Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD2 X anti-Tu
mor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD28 X anti-Tumor
assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD44 X anti-Tumor-as
soziiertes Antigen-Antikörper ist.
9. Verfahren nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche,
dadurch gekennzeichnet, daß
der bispezifische Antikörper aus einer oder mehreren der
nachfolgenden Isotykombinationen ausgewählt wird:
Ratte-IgG2b/Maus-IgG2a,
Ratte-IgG2b/Maus-IgG2b,
Ratte-IgG2b/Maus-IgG3,
Ratte-IgG2b/Human-IgG1,
Ratte-IgG2b/Human-IgG2,
Ratte-IgG2b/Human-IgG3[orientaler Allotyp G3m(st) = Bin dung an Protein A],
Ratte-IgG2b/Human-IgG4,
Ratte-IgG2b/Ratte-IgG2c,
Maus-IgG2a/Human-IgG3[kaukasische Allotypen G3m(b+g), keine Bindung an Protein A, im folgenden mit * gekenn zeichnet],
Maus-IgG2a/Maus[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]- Human-IgG3*[CH2-CH3],
Maus-IgG2a/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-IgG2a/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgGl[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]- Human-IgG1-[Hinge]-Human-IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human- IgG4-[Hinge]-Human-IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human- IgG3*[C-terminale Region von CH2: < AS-Position 251]-Hu man-IgG3*[CH3],
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1[Hinge-CH2-CH3],
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG2-[Hinge-CH2-CH3],
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG3-[Hinge-CH2-CH3, orientaler Allotyp],
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge-CH2-CH3],
Human-IgG1/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]- Human-IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3],
Human-IgG1/Maus[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human,IgG3*[CH3],
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG2[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3],
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG2[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3],
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG2/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG2-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG4/Human[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG4/Human-[VH-CHI,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3],
Maus-IgG2b/Ratte[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-IgG2b/Human[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]- Human-IgG4-[Hinge]-Human-IgG4-[CH2]-Human-IgG3*[CH3],
HumanIgG1/Ratte[VH-CHl,VL-CL]-Human-IgG1[Hinge]-Human- IgG4-[CH2]-HumanIgG-3*[CH3],
HumanIgG1/Maus[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1[Hinge]-Human-IgG4- [CH2]-Human-IgG3*[CH3],
Human-IgG4/Human[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG4-[CH2]-HumanIgG3*-[CH3].
Ratte-IgG2b/Maus-IgG2a,
Ratte-IgG2b/Maus-IgG2b,
Ratte-IgG2b/Maus-IgG3,
Ratte-IgG2b/Human-IgG1,
Ratte-IgG2b/Human-IgG2,
Ratte-IgG2b/Human-IgG3[orientaler Allotyp G3m(st) = Bin dung an Protein A],
Ratte-IgG2b/Human-IgG4,
Ratte-IgG2b/Ratte-IgG2c,
Maus-IgG2a/Human-IgG3[kaukasische Allotypen G3m(b+g), keine Bindung an Protein A, im folgenden mit * gekenn zeichnet],
Maus-IgG2a/Maus[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]- Human-IgG3*[CH2-CH3],
Maus-IgG2a/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-IgG2a/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgGl[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]- Human-IgG1-[Hinge]-Human-IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human- IgG4-[Hinge]-Human-IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human- IgG3*[C-terminale Region von CH2: < AS-Position 251]-Hu man-IgG3*[CH3],
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1[Hinge-CH2-CH3],
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG2-[Hinge-CH2-CH3],
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG3-[Hinge-CH2-CH3, orientaler Allotyp],
Ratte-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge-CH2-CH3],
Human-IgG1/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]- Human-IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3],
Human-IgG1/Maus[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human,IgG3*[CH3],
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG2[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3],
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG2[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3],
Human-IgG1/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG1/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG2/Human-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG2-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG4/Human[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Human-IgG4/Human-[VH-CHI,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG4[N-terminale Region von CH2]-Human-IgG3*[C-terminale Region von CH2 : < AS-Position 251]-Human-IgG3*[CH3],
Maus-IgG2b/Ratte[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-IgG2b/Human[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-IgG2b/Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1-[Hinge]-Human- IgG3*-[CH2-CH3],
Maus-[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4/Ratte-[VH-CH1,VL-CL]- Human-IgG4-[Hinge]-Human-IgG4-[CH2]-Human-IgG3*[CH3],
HumanIgG1/Ratte[VH-CHl,VL-CL]-Human-IgG1[Hinge]-Human- IgG4-[CH2]-HumanIgG-3*[CH3],
HumanIgG1/Maus[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG1[Hinge]-Human-IgG4- [CH2]-Human-IgG3*[CH3],
Human-IgG4/Human[VH-CH1,VL-CL]-Human-IgG4-[Hinge]-Human- IgG4-[CH2]-HumanIgG3*-[CH3].
10. Verfahren nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche,
dadurch gekennzeichnet, daß
der bispezifische Antikörper aus einem heterologen Rat
te/Maus bispezifischen Antikörper ausgewählt wird.
11. Verfahren nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
spruche,
dadurch gekennzeichnet, daß
der trispezifische Antikörper einen T-Zell-Bindungsarm,
einen Tumorzell-Bindungsarm und eine dritte Spezifität zur
Bindung an Fc-Rezeptor positive Zellen besitzt.
12. Verfahren nach Anspruch 11,
dadurch gekennzeichnet, daß
der trispezifische Antikörper so ausgewählt wird, daß er
ein anti-CD3 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder
anti-CD4 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-
CD5 X anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD6 X
anti-Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD8 X anti-
Tumor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD2 X anti-Tu
mor-assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD28 X anti-Tumor
assoziiertes Antigen- und/oder anti-CD44 X anti-Tumor-as
soziiertes Antigen-Antikörper ist.
13. Verfahren nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche,
dadurch gekennzeichnet, daß
im Schritt c) nach Inkubation der Tumorzellen mit intakten
heterologen bispezifischen und/oder trispezifischen Anti
körpern die mit den Antikörpern beladenen Tumorzellen zur
Reinfusion vorbereitet werden (Kurzzeitinkubation).
14. Verfahren nach einem oder mehreren der Ansprüche 1 bis 12,
dadurch gekennzeichnet, daß
im Schritt c) die Inkubation der Tumorzellen mit den Anti
körpern zusammen mit mononukleären Zellen aus dem periphe
ren Blut (PBMC = peripheral blood mononucleated cells)
erfolgt oder nach Inkubation der Tumorzellen mit den Anti
körpern die mononukleären Zellen zugegeben werden und die
Inkubation fortgesetzt wird (Langzeitinkubation).
15. Verfahren nach Anspruch 13 oder 14,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Tumorzellen mit den Antikörpern für einen Zeitraum von
10 Minuten bis 5 Stunden inkubiert werden.
16. Verfahren nach Anspruch 15,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Inkubation der Tumorzellen mit den Antikörpern für
einen Zeitraum von 15 bis 120 Minuten, bevorzugt 15 bis 60
Minuten, erfolgt.
17. Verfahren nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
spruche 14 bis 16,
dadurch gekennzeichnet, daß die mononukleären Zellen aus
dem peripheren Blut zusammen mit den Tumorzellen und den
Antikörpern für einen Zeitraum von 1 bis 14 Tagen, bevor
zugt 3 bis 10 Tagen und weiterhin bevorzugt 6 bis 10 Tagen
inkubiert werden.
18. Verfahren nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche,
dadurch gekennzeichnet, daß
die mononukleären Zellen aus dem peripheren Blut in einer
Menge von ca. 108 bis 1010 Zellen zugegeben werden.
19. Verfahren nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Tumorzellen in einer Menge von 107 bis 109 Zellen, be
vorzugt ca. 108 Zellen, zugegeben werden.
20. Verfahren nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche,
dadurch gekennzeichnet, daß
die bispezifischen und/oder trispezifischen Antikörper in
einer Menge von 2 bis 100 µg, bevorzugter 5 bis 70 µg,
insbesondere bevorzugt 5 bis 50 µg zugegeben werden.
21. Verfahren nach einem oder mehreren der vorhergehenden An
sprüche,
dadurch gekennzeichnet, daß
die Behandlung der Tumorzellen im Schritt b durch Bestrah
lung, bevorzugt durch γ-Bestrahlung, weiterhin bevorzugt
in einer Dosisstärke von 50 bis 100 Gy, oder durch chemi
sche Substanzen, bevorzugt Mitomycin C, erfolgt.
22. Verwendung eines Verfahrens nach einem oder mehreren der
vorhergehenden Ansprüche zur Prophylaxe und Behandlung von
Tumorerkrankungen.
23. Verwendung nach Anspruch 21 zur Induktion einer Tumorimmu
nität.
24. Verwendung eines Verfahrens nach einem oder mehreren der
vorhergehenden Ansprüche zur Herstellung von mit heterolo
gen bispezifischen und/oder trispezifischen Antikörpern
behandelten autologen Tumorzellen zur Reinfusion in den
Patienten oder das Tier, aus dem die autologen Tumorzellen
entnommen wurden.
Priority Applications (10)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19725586A DE19725586C2 (de) | 1997-06-17 | 1997-06-17 | Verfahren zur Herstellung von Zellpräparaten zur Immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer Antikörper |
| US09/094,921 US7018632B2 (en) | 1997-06-17 | 1998-06-15 | Method for ex vivo immunization using heterologous intact bispecific and/or trispecific antibodies |
| DE59800285T DE59800285D1 (de) | 1997-06-17 | 1998-06-16 | Verfahren zur ex vivo-Immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer Antikörper |
| DK98110972T DK0885614T3 (da) | 1997-06-17 | 1998-06-16 | Fremgangsmåde til ex vivo-immunisering ved hjælp af heterologe intakte divalente og/eller trivalente antistoffer |
| AT98110972T ATE196607T1 (de) | 1997-06-17 | 1998-06-16 | Verfahren zur ex vivo-immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer antikörper |
| EP98110972A EP0885614B1 (de) | 1997-06-17 | 1998-06-16 | Verfahren zur ex vivo-Immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer Antikörper |
| JP17038998A JP4145995B2 (ja) | 1997-06-17 | 1998-06-17 | 異種完全二重特異性及び／または三重特異性抗体を用いたｅｘ ｖｉｖｏ免疫化の方法 |
| HK99102534A HK1017270A1 (en) | 1997-06-17 | 1999-06-11 | Method of ex vivo immunizing using heterologous intact bispecific and/or trispecific antibodies |
| US11/186,136 US8012470B2 (en) | 1997-06-17 | 2005-07-20 | Method for ex vivo immunization using heterologous intact bispecific and/or trispecific antibodies |
| JP2008064726A JP2008189678A (ja) | 1997-06-17 | 2008-03-13 | 異種完全二重特異性及び／または三重特異性抗体を用いたｅｘｖｉｖｏ免疫化の方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| DE19725586A DE19725586C2 (de) | 1997-06-17 | 1997-06-17 | Verfahren zur Herstellung von Zellpräparaten zur Immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer Antikörper |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DE19725586A1 true DE19725586A1 (de) | 1998-12-24 |
| DE19725586C2 DE19725586C2 (de) | 1999-06-24 |
Family
ID=7832736
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE19725586A Expired - Fee Related DE19725586C2 (de) | 1997-06-17 | 1997-06-17 | Verfahren zur Herstellung von Zellpräparaten zur Immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer Antikörper |
| DE59800285T Expired - Lifetime DE59800285D1 (de) | 1997-06-17 | 1998-06-16 | Verfahren zur ex vivo-Immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer Antikörper |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DE59800285T Expired - Lifetime DE59800285D1 (de) | 1997-06-17 | 1998-06-16 | Verfahren zur ex vivo-Immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer Antikörper |
Country Status (7)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US7018632B2 (de) |
| EP (1) | EP0885614B1 (de) |
| JP (2) | JP4145995B2 (de) |
| AT (1) | ATE196607T1 (de) |
| DE (2) | DE19725586C2 (de) |
| DK (1) | DK0885614T3 (de) |
| HK (1) | HK1017270A1 (de) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2241576A1 (de) | 2009-04-17 | 2010-10-20 | Trion Pharma Gmbh | Verwendung trifunktionaler bispezifischer Antikörper zur Behandlung von mit CD133+-/EpCAM+-Krebsstammzellen assoziierten Tumoren |
Families Citing this family (57)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6805869B2 (en) | 1996-06-12 | 2004-10-19 | Shanghai Cp Guojian Pharmaceutical Co., Ltd. | Cellular vaccines and immunotherapeutics and methods for their preparation |
| DE19725586C2 (de) * | 1997-06-17 | 1999-06-24 | Gsf Forschungszentrum Umwelt | Verfahren zur Herstellung von Zellpräparaten zur Immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer Antikörper |
| ES2212638T3 (es) * | 1998-09-25 | 2004-07-16 | Lindhofer, Horst, Dr. | Utilizacion de celulas tumorales en tiempo escalonado en combinacion con anticuerpos intactos para la inmunizacion. |
| DE10043437A1 (de) * | 2000-09-04 | 2002-03-28 | Horst Lindhofer | Verwendung von trifunktionellen bispezifischen und trispezifischen Antikörpern zur Behandlung von malignem Aszites |
| CN1294148C (zh) * | 2001-04-11 | 2007-01-10 | 中国科学院遗传与发育生物学研究所 | 环状单链三特异抗体 |
| US8372409B2 (en) * | 2003-04-09 | 2013-02-12 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Dendritic cell binding proteins and uses thereof |
| AU2003271174A1 (en) | 2003-10-10 | 2005-04-27 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Double specific antibodies substituting for functional protein |
| AU2003271186A1 (en) * | 2003-10-14 | 2005-04-27 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Double specific antibodies substituting for functional protein |
| SI1673398T1 (sl) * | 2003-10-16 | 2011-05-31 | Micromet Ag | Multispecifiäśne deimunizirajoäśe cd3 povezovalne molekule |
| US8066989B2 (en) * | 2004-11-30 | 2011-11-29 | Trion Pharma Gmbh | Method of treating tumor growth and metastasis by using trifunctional antibodies to reduce the risk for GvHD in allogeneic antitumor cell therapy |
| ATE525400T1 (de) * | 2004-12-01 | 2011-10-15 | Trion Pharma Gmbh | Verwendung trifunktionaler antikörper zur risikoreduzierung von gvhd in einer allogenetischen anti-tumor zelltherapie |
| ES2592271T3 (es) | 2005-03-31 | 2016-11-29 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Métodos de producción de polipéptidos mediante la regulación de la asociación de los polipéptidos |
| EP1876236B9 (de) * | 2005-04-08 | 2015-02-25 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Antikörper als funktioneller ersatz für blutgerinnungsfaktor viii |
| ES2417065T3 (es) | 2005-04-26 | 2013-08-05 | Trion Pharma Gmbh | Combinación de anticuerpos con glucocorticoides para el tratamiento del cáncer |
| RU2008129080A (ru) * | 2005-12-16 | 2010-01-27 | Микромет Аг (De) | Средства и способы лечения опухолевых заболеваний |
| EP1820513A1 (de) | 2006-02-15 | 2007-08-22 | Trion Pharma Gmbh | Zerstörung von Tumorzellen, welche tumor-assoziierte Zielantigene mit niedrigem bis mittlerem Niveau exprimieren, mittels trifunktionaler bispezifischer Antikörper |
| WO2007114325A1 (ja) | 2006-03-31 | 2007-10-11 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | 二重特異性抗体を精製するための抗体改変方法 |
| EP4001409A1 (de) | 2006-03-31 | 2022-05-25 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Verfahren zur kontrolle der blutkinetik eines antikörpers |
| US8178101B2 (en) * | 2007-05-21 | 2012-05-15 | Alderbio Holdings Inc. | Use of anti-IL-6 antibodies having specific binding properties to treat cachexia |
| US8062864B2 (en) | 2007-05-21 | 2011-11-22 | Alderbio Holdings Llc | Nucleic acids encoding antibodies to IL-6, and recombinant production of anti-IL-6 antibodies |
| US9701747B2 (en) | 2007-05-21 | 2017-07-11 | Alderbio Holdings Llc | Method of improving patient survivability and quality of life by anti-IL-6 antibody administration |
| US8404235B2 (en) * | 2007-05-21 | 2013-03-26 | Alderbio Holdings Llc | Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP |
| US20090238825A1 (en) * | 2007-05-21 | 2009-09-24 | Kovacevich Brian R | Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies |
| US7935340B2 (en) | 2007-05-21 | 2011-05-03 | Alderbio Holdings Llc | Antibodies to IL-6 and use thereof |
| US7906117B2 (en) | 2007-05-21 | 2011-03-15 | Alderbio Holdings Llc | Antagonists of IL-6 to prevent or treat cachexia, weakness, fatigue, and/or fever |
| US8252286B2 (en) | 2007-05-21 | 2012-08-28 | Alderbio Holdings Llc | Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis |
| NZ601583A (en) * | 2007-05-21 | 2013-08-30 | Bristol Myers Squibb Co | Novel rabbit antibody humanization methods and humanized rabbit antibodies |
| EP2033657A1 (de) * | 2007-09-04 | 2009-03-11 | Trion Pharma Gmbh | Intraoperative trifunktionale Antikörper-Applikation zur Prophylaxe intraperitonealer Tumorzelldissemination |
| CN101874042B9 (zh) | 2007-09-26 | 2019-01-01 | 中外制药株式会社 | 利用cdr的氨基酸取代来改变抗体等电点的方法 |
| US8323649B2 (en) * | 2008-11-25 | 2012-12-04 | Alderbio Holdings Llc | Antibodies to IL-6 and use thereof |
| US9212223B2 (en) | 2008-11-25 | 2015-12-15 | Alderbio Holdings Llc | Antagonists of IL-6 to prevent or treat thrombosis |
| US9452227B2 (en) * | 2008-11-25 | 2016-09-27 | Alderbio Holdings Llc | Methods of treating or diagnosing conditions associated with elevated IL-6 using anti-IL-6 antibodies or fragments |
| US8337847B2 (en) | 2008-11-25 | 2012-12-25 | Alderbio Holdings Llc | Methods of treating anemia using anti-IL-6 antibodies |
| US8420089B2 (en) | 2008-11-25 | 2013-04-16 | Alderbio Holdings Llc | Antagonists of IL-6 to raise albumin and/or lower CRP |
| US8992920B2 (en) | 2008-11-25 | 2015-03-31 | Alderbio Holdings Llc | Anti-IL-6 antibodies for the treatment of arthritis |
| CN102471378B (zh) | 2009-06-26 | 2014-04-02 | 瑞泽恩制药公司 | 容易地分离的具有天然免疫球蛋白形式的双特异性抗体 |
| WO2011066369A2 (en) | 2009-11-24 | 2011-06-03 | Alder Biopharmaceuticals, Inc. | Antagonists of il-6 to raise albumin and/or lower crp |
| US9775921B2 (en) | 2009-11-24 | 2017-10-03 | Alderbio Holdings Llc | Subcutaneously administrable composition containing anti-IL-6 antibody |
| JP2012025694A (ja) * | 2010-07-23 | 2012-02-09 | Asahi Kasei Kuraray Medical Co Ltd | 癌治療剤 |
| PT2644698T (pt) | 2010-11-17 | 2018-01-31 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Molécula multiespecífica de ligação ao antigénio com uma função alternativa à função do fator viii de coagulação do sangue |
| WO2012071554A2 (en) | 2010-11-23 | 2012-05-31 | Alder Biopharmaceuticals, Inc. | Anti-il-6 antibodies for the treatment of oral mucositis |
| ES2703780T3 (es) | 2011-05-17 | 2019-03-12 | Trion Res Gmbh | Preparación de una vacuna que contiene anticuerpos trifuncionales con propiedades potenciadoras de la inmunogenicidad del antígeno |
| EP2524699A1 (de) | 2011-05-17 | 2012-11-21 | Trion Research GmbH | Impfstoffzubereitung mit trifunktionalen Antikörpern mit Antigenimmunogenität verbessernden Eigenschaften |
| EP2754458B1 (de) * | 2011-07-12 | 2017-02-01 | Sorin Group Italia S.r.l. | Doppelkammer-blutreservoir |
| US10077312B2 (en) * | 2013-05-10 | 2018-09-18 | Numab Therapeutics AG | CD3 and IL-23 receptor binding bispecific constructs and their use in the treatment of various diseases |
| SG11201602261VA (en) | 2013-09-27 | 2016-04-28 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Method for producing polypeptide heteromultimer |
| SG10201913680PA (en) | 2014-05-29 | 2020-03-30 | Macrogenics Inc | Tri-specific binding molecules that specifically bind to multiple cancer antigens and methods of use thereof |
| AR101262A1 (es) | 2014-07-26 | 2016-12-07 | Regeneron Pharma | Plataforma de purificación para anticuerpos biespecíficos |
| MA40764A (fr) | 2014-09-26 | 2017-08-01 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Agent thérapeutique induisant une cytotoxicité |
| TWI701435B (zh) | 2014-09-26 | 2020-08-11 | 日商中外製藥股份有限公司 | 測定ｆｖｉｉｉ的反應性之方法 |
| TWI700300B (zh) | 2014-09-26 | 2020-08-01 | 日商中外製藥股份有限公司 | 中和具有第ｖｉｉｉ凝血因子（ｆｖｉｉｉ）機能替代活性的物質之抗體 |
| WO2016159213A1 (ja) | 2015-04-01 | 2016-10-06 | 中外製薬株式会社 | ポリペプチド異種多量体の製造方法 |
| CA3004288A1 (en) | 2015-12-28 | 2017-07-06 | Nobuyuki Tanaka | Method for promoting efficiency of purification of fc region-containing polypeptide |
| MA46200A (fr) | 2016-09-06 | 2019-07-17 | Chugai Pharmaceutical Co Ltd | Procédés d'utilisation d'un anticorps bispécifique qui reconnaît le facteur de coagulation ix et/ou le facteur de coagulation ix activé et le facteur de coagulation x et/ou le facteur de coagulation x activé |
| EP3690050A4 (de) | 2017-09-29 | 2021-06-16 | Chugai Seiyaku Kabushiki Kaisha | Multispezifisches antigenbindendes molekül mit blutgerinnungsfaktor viii (fviii)-cofaktorfunktionssubstituierender aktivität und pharmazeutische formulierung mit diesem molekül als wirkstoff |
| KR20200088440A (ko) * | 2017-11-21 | 2020-07-22 | 노파르티스 아게 | 종양-연관 항원에 대한 삼중특이성 결합 분자 및 이의 용도 |
| EP3569617A1 (de) * | 2018-05-18 | 2019-11-20 | Trion Research GmbH | Pharmazeutisches präparat zur verwendung in der behandlung von epstein-barr-virus-positiven patienten mit krankheiten im zusammenhang mit dem reaktivierungsphänomen |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19649223A1 (de) * | 1996-09-03 | 1998-03-05 | Gsf Forschungszentrum Umwelt | Zerstörung von kontaminierenden Tumorzellen in Stammzelltransplantaten mit bispezifischen Antikörpern |
Family Cites Families (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4828991A (en) * | 1984-01-31 | 1989-05-09 | Akzo N.V. | Tumor specific monoclonal antibodies |
| US6071517A (en) * | 1986-07-07 | 2000-06-06 | Medarex, Inc. | Bispecific heteroantibodies with dual effector functions |
| US4844893A (en) * | 1986-10-07 | 1989-07-04 | Scripps Clinic And Research Foundation | EX vivo effector cell activation for target cell killing |
| DE4407538C1 (de) * | 1994-03-07 | 1995-02-23 | Deutsches Krebsforsch | Bindungsreagens für Zell-Oberflächenprotein und Effektorzelle |
| US6410690B1 (en) * | 1995-06-07 | 2002-06-25 | Medarex, Inc. | Therapeutic compounds comprised of anti-Fc receptor antibodies |
| EP0826695B1 (de) | 1996-09-03 | 2001-12-12 | GSF-Forschungszentrum für Umwelt und Gesundheit GmbH | Zerstörung von kontaminierenden Tumorzellen in Stammzelltransplantaten mit bispezifischen Antikörpern |
| DE19725586C2 (de) * | 1997-06-17 | 1999-06-24 | Gsf Forschungszentrum Umwelt | Verfahren zur Herstellung von Zellpräparaten zur Immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer Antikörper |
-
1997
- 1997-06-17 DE DE19725586A patent/DE19725586C2/de not_active Expired - Fee Related
-
1998
- 1998-06-15 US US09/094,921 patent/US7018632B2/en not_active Expired - Fee Related
- 1998-06-16 AT AT98110972T patent/ATE196607T1/de active
- 1998-06-16 DE DE59800285T patent/DE59800285D1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-16 EP EP98110972A patent/EP0885614B1/de not_active Expired - Lifetime
- 1998-06-16 DK DK98110972T patent/DK0885614T3/da active
- 1998-06-17 JP JP17038998A patent/JP4145995B2/ja not_active Expired - Fee Related
-
1999
- 1999-06-11 HK HK99102534A patent/HK1017270A1/xx not_active IP Right Cessation
-
2005
- 2005-07-20 US US11/186,136 patent/US8012470B2/en not_active Expired - Fee Related
-
2008
- 2008-03-13 JP JP2008064726A patent/JP2008189678A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DE19649223A1 (de) * | 1996-09-03 | 1998-03-05 | Gsf Forschungszentrum Umwelt | Zerstörung von kontaminierenden Tumorzellen in Stammzelltransplantaten mit bispezifischen Antikörpern |
Non-Patent Citations (5)
| Title |
|---|
| DE GAST, G.C. et.al.: Cancer Immunol. Immunother. 40, 1995, 390-6 * |
| KROESEN, B.J. et.al.: Br. J.Cancer 70, 1994, S. 652-61 * |
| QIAN, J.-H. et.al.: J. Immunology 146, 1991, 3250-6 * |
| RENNER, C. et.al.: Cancer Immunol. Immunother. 44, 1997, 70-6 * |
| WEINER, L.M. et.al.: Cancer Research 55, 1995, 4586-93 * |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP2241576A1 (de) | 2009-04-17 | 2010-10-20 | Trion Pharma Gmbh | Verwendung trifunktionaler bispezifischer Antikörper zur Behandlung von mit CD133+-/EpCAM+-Krebsstammzellen assoziierten Tumoren |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0885614B1 (de) | 2000-09-27 |
| DE59800285D1 (de) | 2000-11-02 |
| HK1017270A1 (en) | 1999-11-19 |
| ATE196607T1 (de) | 2000-10-15 |
| US7018632B2 (en) | 2006-03-28 |
| JP2008189678A (ja) | 2008-08-21 |
| EP0885614A2 (de) | 1998-12-23 |
| US8012470B2 (en) | 2011-09-06 |
| EP0885614A3 (de) | 1999-01-13 |
| DE19725586C2 (de) | 1999-06-24 |
| US20050255110A1 (en) | 2005-11-17 |
| US20020009430A1 (en) | 2002-01-24 |
| JP4145995B2 (ja) | 2008-09-03 |
| JPH1171288A (ja) | 1999-03-16 |
| DK0885614T3 (da) | 2000-12-04 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DE19725586C2 (de) | Verfahren zur Herstellung von Zellpräparaten zur Immunisierung mittels heterologer intakter bispezifischer und/oder trispezifischer Antikörper | |
| EP0826696B1 (de) | Verwendung bi-und trispezifischer Antikörper zur Induktion einer Tumorimmunität | |
| EP1115427B1 (de) | Verwendung von tumorzellen zeitversetzt in kombination mit intakten antikörpern zur immunisierung | |
| EP1315520B1 (de) | Verwendung von trifunktionellen bispezifischen und trispezifischen antikörpern zur behandlung von malignem aszites | |
| EP2192921B1 (de) | Intraoperative trifunktionale antikörper-applikation zur prophylaxe intraperitonealer tumorzelldissemination | |
| EP1444268B1 (de) | Bispezifisches anti-cd28 antikörper-molekül | |
| DE60313859T2 (de) | Induktion der anti-tumor-ctl-immunität durch in-vivo-aktivierung von 4-1bb und/oder cd40 | |
| EP1303540B1 (de) | Multispezifisches reagenz zur selektiven stimulierung von zelloberflächenrezeptoren | |
| WO2000018806A1 (de) | Bispezifische und trispezifische antikörper, die spezifisch mit induzierbaren oberflächenantigenen als operationelle zielstrukturen reagieren | |
| DE10352900A1 (de) | Verwendung einer an CD28 bindenden Wirksubstanz zur Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung von B-CLL | |
| EP0845998B1 (de) | Arzneimittel zur immuntherapie, enthaltend antikörper, die spezifisch das mhcii-antigen eines zu behandelnden patienten erkennen | |
| EP1600164A2 (de) | Verwendung einer an CD28 bindenden Wirksubstanz zur Herstellung einer Pharmazeutischen Zusammensetzung mit dosisabhängiger Wirkung | |
| DE10050935A1 (de) | Verwendung CD28 spezifischer monoklonaler Antikörper zur Stimulation von Blutzellen, welche kein CD28 tragen | |
| DE602004003689T2 (de) | Krebserkrankungen modifizierende antikörper | |
| DE19859115A1 (de) | Verwendung von Tumorzellen zeitversetzt in Kombination mit intakten Antikörpern zur Immunisierung | |
| DE19710497C2 (de) | Verwendung Bi- und trispezifische Antikörper zur Induktion einer Tumorimmunität | |
| EP0825256B1 (de) | Hybridzelle und deren Verwendung zur Herstellung eines Arzneimittels zur Induktion einer Tumorimmunität | |
| EP0978559B1 (de) | Induktion einer Tumorimmunität durch Redirektion von Tumorzellen gegen Antigen-präsentierende Zellen |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| OP8 | Request for examination as to paragraph 44 patent law | ||
| D2 | Grant after examination | ||
| 8364 | No opposition during term of opposition | ||
| 8327 | Change in the person/name/address of the patent owner |
Owner name: GSF - FORSCHUNGSZENTRUM FUER UMWELT UND GESUNDHEIT |
|
| 8339 | Ceased/non-payment of the annual fee |