DE2555858A1 - 3-thiosubstituierte cephalosporinverbindungen und verfahren zu ihrer herstellung - Google Patents

Description

PFENNING - MAAS - SEiLER
MEiNIG - LEMKE - SPOTT

6000 MÖNCHEN 40
SCHLEISSHEIMERSTR. 299

X-4232

Eli Lilly and Company, Indianapolis, Indiana, V.St.A.

3-Thiosubstituierte Cephalosporinverbindungen und Verfahren zu ihrer Herstellung

Die Erfindung bezieht sich auf neue 3-thiosubstituierte Cephalosporinsäuren und -ester, die wertvolle Antibiotica oder Zwischenprodukte zur Herstellung von antibiotisch wirksamen Substanzen darstellen.

Insbesondere bezieht sich die Erfindung auf Cephalosporinantibiotica, die in 3-Stellung des Cephemringsystems direkt durch ein zweiwertiges Schwefelatom substituiert sind, das seinerseits an einen 5-gliedrigen heterocyclischen Ring, eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder eine gegebenenfalls substituierte Phenylgruppe gebunden ist.

Seit der Auffindung von Cephalosporin C sowie des Umstands,
daß dessen alpha-Aminoadipoylseitenkette unter Ausbildung
des Cephalosporingerüsts abgespalten werden kann, ist eine
große Anzahl verschiedener Cephalosporinantibiotica synthetisiert und beschrieben worden. Im Rahmen dieser Synthesen sind

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viele strukturelle Abänderungen der Seitenkette in 7-Stellung durch entsprechende Acylierungen des 7-Aminocephalosporingerüsts vorgenommen worden. Eine große Anzahl anderer Abwandlungen, häufig in Kombination mit den Änderungen der Seitenkette, sind in der 3-Stellung des Cephalosporingerüsts erfolgt. So wurde beispielsweise die Acetoxygruppe des Acetoxymethylsubstituenten in 3-Stellung des Cephalosporingerüsts durch die verschiedensten Gruppen ersetzt, beispielsweise durch Pyridine und nukleophile Schwefelverbindungen.

Cephalosporinantibiotica mit einer Methylgruppe in 3-Stellung des Cephemrings, die Desacetoxycephalosporansauren, sind über die nun allgemein bekannte Penicillinsulfoxidumlagerung (US-PS 3 275 626) synthetisiert worden. Bis vor kurzem hatten alle bekannten Cephalosporinantibiotica das Strukturmerkmal einer 3-Methylgruppe, einer substituierten 3-Methylgruppe oder eines Wasserstoffatoms in der 3-Stellung des Cephemringsystems. Nun ist jedoch von R. R. Chauvette in J. Org. Chem. 38, 2994 (1973) und J. Amer. Chem.' Soc. 96, 4986 (1974) ein Verfahren zur Herstellung von 3-Exomethylencephamverbindungen und deren überführung in 3-Hydroxy-, 3-Methoxy- und 3-Halogen-3-cephemverbindungen beschrieben worden, deren Substituenten direkt an das Kohlenstoffatom in 3-Stellung des Cephemringsystems gebunden sind. Damit ist' eine neue Klasse von Cephalosporinantibiotica bekannt geworden.

Wie bereits erwähnt, sind viele Cephalosporinantibiotica bekannt, deren Acetoxygruppe der Acetoxymethylgruppe in 3-Stellung der Cephalosporansäure durch eine schwefelhaltige nukleophile Gruppe ersetzt ist. Beispiele für diese Verbindungen sind die in den US-PS 3 516 997, 3 641 021 und 3 668 203 beschriebenen. Alle diese Antibiotica weisen jedoch die herkömmliche Gesamtsubstitution der Cephalosporinantibiotica auf, wobei sich eine Methylengruppe zwischen dem Cephemring und dem Substituenten befindet. Verbindungen mit einem Schwefelatom, das direkt an die 3-Stellung des Dihydrothiazinrings gebunden ist, sind noch nicht beschrieben worden.

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Gegenstand der Erfindung sind 3-thiosubstituierte Cephalosporinantibiotica der folgenden allgemeinen Formel I

:00R

In dieser Formel bedeuten:

R Wasserstoff oder eine von einer Carbonsäure abgeleitete Acylgruppe der Formel

Il

R¹-C- ,

worin R¹ für Cj-Cg-Alkyl, Cj-^-Halogenalkyl, C₁-C₃-Cyanalkyl, Phenyl, Methylphenyl, Hydroxyphenyl, Halogenphenyl, Nitrophenyl, Aminophenl und Methoxyphenyl steht,

oder eine Gruppe der Formel

in der a und a', die untereinander gleich oder voneinander verschieden sein können, Wasserstoff, niedere Alkylreste mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, niedere Alkoxyreste mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, Halogen, Hydroxylgruppen, Nitrogruppen, Aminogruppen oder Carboxygruppen, Z Sauerstoff oder Schwefel und m O oder 1 bedeuten ,

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oder eine Gruppe der Formel

P-CH
Q

P eine 2-Thienyl- oder 3-Thienylgruppe oder eine gegebenenfalls substituierte Phenylgruppe der Formel

darstellt, worin a und a¹ die oben angegebenen Bedeutungen haben, und

Q für eine Hydroxyl-, Formyloxy-, Acetoxy-, Carboxy-, SuIfο- oder Aminogruppe oder eine durch tert.-Butyloxycarbonyl, 2,2,2-Trichloräthoxycarbonyl oder die Gruppe der Formel

H
-C=C-COOCH-,

ι -J
CH₃

geschützte Aminogruppe steht,

oder eine Gruppe der Formel

R"-CH₂- ,

worin R" für eine 2-Thienyl-, 3-Thienyl-, 2-Furyl-, 2-Oxazyl-, 2-Thiazyl- oder 1-Tetrazylgruppe steht;

Wasserstoff, Benzyl, 4-Methoxybenzyl, 4-Nitrobenzyl, Diphenylmethyl, 2,2,2-Trichloräthyl oder tert.-Butyl;

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Phenyl oder substituiertes Phenyl der Formel

a¹
worin a und a¹ die oben angegebenen Bedeutungen haben,

oder einen heterocyclischen Substituenten der Formel

oder

worin R^ für einen Alkylrest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen steht;

und die pharmazeutisch annehmbaren nichttoxischen Salze der Verbindungen, in deren Formel R- Wasserstoff bedeutet.

Gegenstand der Erfindung ist ferner ein Verfahren zur Herstellung der 3-thiosubstituierten Cephalosporinverbindungen der Formel I, das dadurch gekennzeichnet ist, daß eine Cehalosporinverbindung der Formel II

H
I
R-H-t ? t II

COOR

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■- 6 - -

worin R die oben angegebene Bedeutung hat, R₁ eine esterbildende Carbonsäureschutzgruppe bedeutet und A Chlor, Brom oder eine Gruppe der Formel -O-SOp-W darstellt, worin W für ein Alkyl mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, eine Phenyl-, Halogenphenyl-, C.-C^-Alkylphenyl- oder Nitrophenylgruppe steht, mit einer Thiolverbindung der Formel HSR₂, worin R₂ die oben angegebene Bedeutung hat, umsetzt und gegebenenfalls die esterbildende Carbonsäureschutzgruppe unter Bildung der entsprechenden Verbindung, in deren Formel R.. Wasserstoff bedeutet, entfernt.

In der vorstehenden Definition der erfindungsgemäßen Verbindungen bezieht sich die Bezeichnung "C.-C,-Alkyl" auf gerad- und verzweigtkettige Alkylkohlenwasserstoffgruppen, wie Methyl, Äthyl, n-Propyl, Isopropyl, η-Butyl, sek.-Butyl, n-Amyl, Isoamyl und n-Hexyl; "C.-C-.-Cyanalkyl" auf Gruppen wie Cyanmethyl, 2-Cyanäthyl, 3-Cyanpropyl und 2-Cyanpropyl; "C.-c.,-Halogenalkyl" auf Gruppe wie Chlormethyl, Brommethyl, 2-Chloräthyl und 3-Brompropyl; "Cj-C.-Alkyl" auf die gerad- oder verzweigtkettigen niederen Alkylkohlenwasserstoffgruppen, wie Methyl, Äthyl, n-Propyl, Isopropyl, η-Butyl und tert.-Butyl; "C₁-C₄-AIkOXy" auf Gruppe wie Methoxy, Äthoxy, Isopropoxy und n-Butoxy. Die Bezeichnung "Halogen" bezieht sich auf Fluor, Chlor, Brom und Jod, und die Bezeichnung "Halogenphenyl" bezieht sich auf chlor- und bromsubstituierte Phenylgruppen, wie 4-Chlorphenyl, 4-Bromphenyl und 2,4-Dichlorphenyl.

Beispiele für die oben definierten Gruppen der Formel

in der m 0 ist, sind Phenylacetyl, 4-Methylphenylacetyl, 3-Äthylphenylacetyl, 4-1sopropylpheny!acetyl, 2-Methylpheny!acetyl,

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4-Chlorphenylacetyl, 4-Nitrophenylacetyl, 4-Bromphenylacetyl, 2,4-Dichlorphenylacetyl, 3-Bromphenylacetyl, 4-Jodpheny!acetyl, 2-Fluorphenylacetyl/ 3,4-Dihydroxyphenylacetyl, 4-Hydroxyphenylacetyl, 3-Hydroxyphenylacetyl, 2,6-Dimethoxyphenylacetyl, 3-Carboxyphenylacetyl, 4-Aminophenylacetyl, 3-Äthoxyphenylacetyl, 4-Methoxyphenylacetyl, 3,4-Dimethoxyphenylacetyl, 4.-tert.-Butoxyphenylacetyl, 2-Carboxyphenylacetyl, 3-Chlor-4-methylphenylacetyl und 3-Nitrophenylacetyl. Wenn in der oben angegebenen Formel m die Zahl 1 ist und Z Sauerstoff bedeutet, dann sind folgende Gruppen beispielhaft: Phenoxyacetyl, 4-Hydroxyphenoxyacetyl, 3-Hydroxyphenoxyacetyl, 4-Chlorphenoxyacetyl, 3-Bromphenoxyacetyl, 3-Äthylphenoxyacetyl, 4-Methylphenoxyacetyl, 3-Hydroxy-3-methylphenoxyacetyl, 4-Aminophenoxyacetyl, 3-Nitrophenoxyacetyl, 2-Carboxyphenoxyacetyl, 2-Chlorphenoxyacetyl, 4-tert.-Butylphenoxyacetyl, 4-Methoxyphenoxyacetyl, 3,4-Dimethoxyphenoxyacetyl, 2-Aminophenoxyacetyl, 4-Isopropoxyphenoxyacetyl und 4-Nitrophenoxyacetyl. Wenn in der vorstehenden Formel m die Zahl 1 bedeutet und Z für -S- steht, dann sind folgende Gruppen beispielhaft: Phenylmercaptoacetyl, 4-Chlorphenylmercaptoacetyl, 3-Hydroxyphenylmercaptoacetyl, 3,4-Dimethylphenylmercaptoacetyl, 4-Aminophenylmercaptoacetyl, 3,4—Dichlorphenylmercaptoacetyl, 3-Bromphenylmercaptoacetyl/ 4-Fluorphenylmercaptoacetyl, 2,6-Difluorphenylmercaptoacetyl, 4-Nitrophenylmercaptoacetyl und 3-Fluorphenylmercaptoacetyl.

Hat R¹ in Formel I die Bedeutung einer Gruppe der Formel

P-CH- ,

Q
dann sind beispielhafte Acy!gruppen, R¹-C=O, die Mandeloylgruppe

I '

der Formel

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>—CH-C-/ I

OH

der O-Formy!derivate der Formel

).·—CH-C-

/ I

die alpha-Carboxyphenylacety!gruppe der folgenden Formel

Wo

OH

die alpha-Sulfophenylacetylgruppe der Formel

a¹ ·

,0——-—φ

>—CH-C-

SO H

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sowie die 2-Thienyl- und 3-Thienyl-acylgruppen, wenn in der obigen Formel die Phenylgruppe durch einen 2-Thienyl- oder 3-Thienylring ersetzt ist, die D-Phenylglycylgruppe der Formel

X V

~* NH

und die 2- und 3-Thienylglycylgruppe der Formel

0 Il

i und I JJ

NH
ζ

Beispiele für die vorstehend genannten Acylgruppen sind 4-Methylmandeloyl, 4-Hydroxymandeloyl, 3-Hydroxymandeloyl, 4-Aminomandeloyl, 3-Brommandeloyl, 4-Chlormandeloyl, 3-Methyl-4-fluormandeloyl, 2-Fluormandeloyl, 4-Fluormandeloyl, 4-Methoxymandeloyl, 3,4-Dimethyl-O-formylmandeloyl, 4-Chlor-O-formylmandeloyl, 3-Amino-O-formylmandeloyl/ 3-Brom-O-formylmandeloyl, 3,4-Dimethoxy-O-formylraandeloyl, O-Äcetylmandeloyl, O-Acetyl-4-hydroxymandeloyl, alpha-Carboxy-4-methylphenylacetyl, alpha-Carboxy-3,4-dichlorphenylacetyl, alpha-Carboxy-4-hydroxyphenylacetyl, alpha-Carboxy-2-methoxyphenylacetyl, alpha-Carboxy-4-isopropoxyphenyl- . acetyl, alpha-Carboxy-3-hydroxyphenylacetyl, alpha-Carboxy-4-aminophenylacetyl, alpha-Sulfo-4-methylphenylacetyl,

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alpha-Sulfο-3,4-dichlorphenylacetyl, alpha-Sulfo-4-chlorphenylacetyl, alpha-Sulfo-4-hydroxyphenylacetyl, alpha-Sulfo-3-methoxyphenylacetyl, alpha-Carboxy-2-thienylacetyl, alpha-Carboxy-3-thienylacety1, alpha-Hydroxy-2-thienylacetyl, alpha-Hydroxy-3-thienylacetyl, alpha-Sulfo-2-thienylacetyl, alpha-Formyloxy-2-thieny!acetyl, alpha-Acetoxy-2-thienylacetyl, alpha-Amino-2-thienylacetyl, alpha-Amino-3-thienylacetyl, alpha-Amino-2-furylacetyl, D-alpha-Aminophenylacetyl (D-Phenylglycin), D-alpha-Amino-4-hydroxyphenylacetyl, D-alpha-Amino-3-hydroxyphenylacetyl, D-alpha-AInino-3-chlor-4-hydroxyphenylacetyl und D-alpha-Amino-4-chlorphenylacetyl.

Wenn in der oben angegebenen Formel R¹ eine Gruppe der Formel R"-CHp- ist, dann sind Beispiele für die Acylgruppen der Formel I folgende Gruppen: 2-Thieny!acetyl, 3-Thienylacetyl, 2-Furylacetyl, Oxazyl-2-acetyl, Thiazyl-2-acetyl und die Tetrazyl-1-acety!gruppe der Formel

0 Il

Beispielhafte Gruppen für den 3-Thiosubstituenten -S-R- sind, wenn R₂ ein Cj-C.-Alkylrest ist, Gruppen wie Methylthio, Äthylthio, Isopropylthio, n-Butylthio und sek.-Butylthio; und wenn R„ ein Phenyl- oder substituierter Phenylrest ist, Gruppen wie Phenylthio, 4-Methylphenylthio, 4-Isopropylphenylthio, 4-tert.-Butylphenylthio, 3,4-DimethyIphenylthio, 4-Äthoxyphenylthio, 3-Methoxyphenylthio, 2-Methoxyphenylthio, 3- oder 4-Nitrophenylthio; halogensubstituierte Phenylthiogruppen, wie 2-Chlorphenylthio, 4-Chlorphenylthio, 3,4-Dichlorphenylthio, 3-Bromphenylthio; 4-Fluorphenylthio, 3-Fluorphenylthio; Hydroxyphenylthiogruppen, wie 4-Hydroxyphenylthio, 3,5-Dichlor-4-hydroxyphenylthio, 3-Chlor-4-hydroxyphenylthio, 4-Methyl-3-hydroxyphenylthio; aminosubstituierte Phenylthiogruppen, wie

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3- oder 4-Aminophenylthio; und carboxysubstituierte Phenylthiogruppen, wie 4-Carboxyphenylthio, 3-Carboxyphenylthio,
die auch in Form ihrer Alkalisalze vorliegen können.

Bedeutet·R₂ einen heterocyclischen Ring, dann sind Beispiele
für den 3-Thiosubstituenten -S-R₂ die in 5-Stellung durch einen niederen Alkylrest substituierten Oxa- oder Thiadiazol-2-ylthiogruppen_f wie Methyl-1,3,4-oxadiazol-2-ylthio, 5-Methyl-1,3 ^-thiadiazol^-ylthio, 5-Äthyl-1,3,4-thiadiazol-2-ylthio, 5-Isopropyl-1,3,4-thiadiazol-2-ylthio und 5-n-Propyl-1,3,4-oxadiazol-2-ylthio; sowie die substituierten Tetrazolgruppen, wie 1-Methyl-1H-tetrazol-5-ylthio, 1-Äthyl-iH-tetrazol-5-ylthio und 1-Isopropyl-1H-tetrazol-5-ylthio.

Zu einer bevorzugten Gruppe von Verbindungen der Formel I gehören diejenigen, die als Rest R" 2-Thienyl, 3-Thienyl, 2-Furyl oder 1-Tetrazyl und als Rest R₂ einen Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder einen heterocyclischen Ring der Formel

enthalten.

Einzelne Beispiele für solche Verbindungen sind:

7-(2-Thienylacetamido)-S-methylthio-S-cephem^-carbonsäure,

7-(2-Thienylacetamido)-3-(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-ylthio) 3-cephem-4-carbonsäure,

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7-(2-Thienylacetamido)-3-(i-methyl-IH-tetrazol-5-ylthio)-3-cephem-4-carbonsäure,

7-(2-Fury!acetamido)-3-(1-methyl-iH-tetrazol-5-ylthio)-3-cephem-4-carbonsäure,

7-(1-Tetrazylacetamido)-3-(5-methyl-1,3^-oxadiazol-Z-ylthio) 3-cephem-4-carbonsäure,

und ihre pharmazeutisch wirksamen nichttoxischen Salze.

Eine weitere bevorzugte Gruppe von Verbindungen der Formel I sind solche, die als Rest P eine Phenyl- oder substituierte Phenylgruppe, wie in Verbindung mit Formel I definiert, als Rest Q eine Hydroxy- oder Aminogruppe und als Rest R~ eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder eine heterocyclische Gruppe der Formel

oder

r-1 „ r—«

.—B Ji-R

J D

V * ' V ^a \

-1

enthalten.

Eine besonders bevorzugte Gruppe von Verbindungen sind diejenigen, die als R_ die 1-Methyl-iH-tetrazol-5-ylthiogruppe und als Rest Q Amino oder Hydroxy enthalten, nämlich die 7-(D-Phenylglycylamido)-3-(1-methyl-1H-tetrazol-5-ylthio)-3-cephem-4-carbonsäure, ihre Zwitterionenform, ihre pharmazeutisch annehmbaren Carbonsäurensalze und die mit der basischen alpha-Aminogruppe gebildeten Säureadditionssalze sowie die 7-(D-Mandelamido)-3-(1-methyl-1H-tetrazol-5-ylthio)-3-cephem-4-carbonsäure und ihre pharmazeutisch annehmbaren Salze.

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Die Herstellung der Cephalosporinantibiotica der Formel I erfolgt durch Umsetzung eines 3-Halogen-3-cephemesters oder eines 3-Alkylsulfonyloxy-3-cephemesters oder eines 3-Phenyl- oder -substituierten-Phenylsulfonyloxy-3-cephemesters mit einem niedrigen Alkylmercaptan, einem Thiophenol oder substituierten Thiophenol oder einem 5-Niederalkyl-1,3,4-oxa- oder -thiadiazol-2-thiol oder einem 1-Niederalkyl-iH-tetrazol-5~thiol. Das folgende verallgemeinerte Reaktionsschema veranschaulicht die Herstellung der Verbindungen der Formel I.

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oder

H-S-R

■v

ϊ"1 I

.· N. Λ

OOR

Freisetzung der Säure

;00H

In dem vorstehenden Reaktionsschema haben R und R₂ die in Verbindung mit der Formel I angegebenen Bedeutungen und bedeutet R₁ eine esterbildende Carbonsäureschutzgruppe, X Chlor oder Brom und W eine Alkylgruppe mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, Phenyl, Halogenphenyl, C.-C₃-Alkylphenyl oder Nitrophenyl.

Zur Herstellung der erfindungsgemäßen 3-thiosubstituierten 3-Cephemverbindungen wird ein T-Acylamido-S-halogen- (oder -sulfonyloxy-)3-cephem-4-carbonsäureester in einem inerten Lösungsmittel mit einer wenigstens äquimolaren Menge der Thiolverbindung H-S-R₂, einem niederen Alkylitiercaptan, Thiophenol oder substituierten Thiophenol, einem in 5-Stellung durch einen niederen Alkylrest substituierten 1,3,4-Oxa- oder Thiadiazol-2-thiol oder einem in 1-Stellung durch einen niederen Alkylrest substituierten 1H-Tetrazol-5-thiol in Gegenwart einer Base, wie,Natriumhydrid oder Natriumbisulfit umgesetzt. Erfolgt die Umsetzung mit Hilfe einer Base wie Natriumhydrid, dann wird sie bei einer Temperatur zwischen etwa -60 und -25 C durchgeführt. Bei Verwendung einer schwächeren Base kann die Reaktion bei etwa 0 bis 30 ⁰C durchgeführt werden.

Die Wahl der verwendeten Lösungsmittel richtet sich nach der Art der Base und des für die Synthese eingeschlagenen Reaktionsweges. Für die Reaktion unter Verwendung von Natriumhydrid bei den niedrigeren Temperaturen sind Dimethylformamid (DMF) und Dimethylacetamid (DMAc) gut geeignete Lösungsmittel. Auch Dimethylsulfoxid kann eingesetzt werden und ist bei Verwendung von Natriumbisulfit ein bevorzugtes Reaktionslösungsmittel.

Die Umsetzung wird unter wasserfreien Bedingungen durchgeführt. Das verwendete Lösungsmittel, beispielsweise Dimethylsulfoxid (DMSO), wird am besten mit Hilfe eines Molekularsiebs getrocknet, ehe es in die Reakton eingeführt wird.

bQ9b/!b/'IUI'J

- ie -

Die Verbindungen der Formel I, für die R₂ eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder eine gegebenenfalls substituierte Phenylgruppe bedeutet, werden vorzugsweise in dem niedrigeren Temperaturbereich unter Verwendung von Natriumhydrid als Base hergestellt. Die Herstellung der Verbindungen, in deren Formel R₂ einen Thiadiazol-, Oxadiazol- oder Tetrazolrest bedeutet, werden vorzugsweise bei oder etwa bei Zimmertemperatur unter Verwendung von Natriumbisulfit hergestellt.

Bei der Durchführung der umsetzung in dem höheren Temperaturbereich, d. h. bei etwa 0 bis 30 ⁰C, erfolgt eine gewisse Isomerisierung der Doppelbindung in dem Cephemringsystem. Durch Verwendung einer schwachen Base, wie Natriumbisulfit, wird die Isomerisierung weitgehend zurückgedrängt. Das Produkt,

2 3

eine Mischung der 3-thiosubstituierten Delta - und Delta Cephemverbindungen kann abgetrennt werden; es ist jedoch

2 3

zweckmäßiger, das Delta -Isomere in das gewünschte Delta Isomere überzuführen. Dies wird durch die bekannte Methode

2
erreicht, bei welcher das Delta -Cephem mit einer Persäure, zum Beispiel m-Chlorperbenzoesäure, zum SuIfoxid oxydiert

2 wird. Während der Bildung des Sulfoxids wandert die Delta -

3 3

Doppelbindung in die Delta -Stellung. Das Delta -Sulfoxid wird dann durch das bekannte Verfahren der Verwendung von Phosphortrichlorid in einem inerten Lösungsmittel reduziert, wodurch die gewünschten Delta -Cephemester erhalten werden.

Im Anschluß an die oben beschriebene Herstellung der 3-Thio-3-cephemester wird die Estergruppe durch Verseifung oder dergleichen entfernt, wodurch die atibiotisch wirksame Verbindung als die freie Säure erhalten wird.

Bei einer beispielhaften Ausführungsform des zur Herstellung der Verbindungen der Formel I angewandten Verfahrens wird der

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p-Nitrobenzylester der 7-/2-(2-Thienyl)-acetamido/-3-p-toluolsulfonyloxy-3-cephem-4-carbonsäure in Dimethylformamid gelöst und in einem Aceton-Trockeneis-Bad auf etwa -40 C gekühlt. Zu der gekühlten Lösung gibt man eine äquimolare Menge Methylmercaptan in Dimethylformamid, das Natriumhydrid enthält. Das kalte Reaktionsgemisch wird etwa 1 bis 2 Stunden gerührt und dann mit Eisessig angesäuert. Nach Erwärmen auf Zimmertemperatur wird das Reaktionsgemisch eingedampft und der Rückstand mit einem organischen Lösungsmittel, wie Äthylacetat, extrahiert. Der Extrakt wird mit Wasser, Salzlösung und verdünnter Salzsäure gewaschen. Der gewaschene Extrakt wird getrocknet und eingedampft, und das so erhaltene Produkt kann durch Umkristallisieren aus einem geeigneten Lösungsmittel oder durch Chromatographie, zum Beispiel durch präparative Dünnschichtchromatographie, oder, wenn es sich um größere Mengen der Verbindung handelt, durch Säulenchromatographie an Kieselsäuregel weiter gereinigt werden. Die p-Nitrobenzylestergruppe wird zur Erzielung des Antibioticums in Form der freien Säure durch katalytische Hydrierung entfernt. Hierzu wird der Ester in einem inerten Lösungsmittel, zum Beispiel Tetrahydrofuran, Dioxan oder einem niederen Alkohol, wie Metanol oder Äthanol oder Gemischen daraus, gelöst und mit einer katalytischen Menge 5-prozentiger Palladiumkohle versetzt. Das Gemisch wird dann bei Zimmertemperatur bei etwa 3,5 kg/cm (50 psi) zu dem Produkt, der 7-/2-(2-Thienyl)-acetamidoy-S-methylthio-3-cephem-4-carbonsäure hydriert.

Bei einer anderen beispielhaften Ausführungsform der Herstellung der oben beschriebenen Verbindung wird das p-Nitrobenzyl-7-/2-(2-thienyl) -acetamidc^/-3-chlor-3-cephem-4-carboxylat in trockenem Dimethylsulfoxid gelöst und mit einer äquimolaren Menge 1-Methyl-1H-tetrazol-4-thibl versetzt. Die Lösung wird bei Zimmertemperatur mit einem 4-molaren Überschuß Natriumbisulfit in vier gleichen Anteilen in Abständen von jeweils einer Stunde versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 5 Stunden

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bei Zimmertemperatur gerührt und danach in eine Mischung aus Wasser und einem mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmittel/ wie Äthylacetat, gegossen. Die das Reaktionsprodukt enthaltende organische Schicht wird abgetrennt, gewaschen und getrocknet. Der getrocknete Extrakt wird eingedampft, und der amorphe Rückstand wird mit Diäthylather verrieben. Das eine

2 3

Mischung der Delta - und Delta -Cephemverbindungen enthaltende Produkt wird zur weiteren Reinigung an einer mit Kieselgel gefüllten Säule chromatographiert.

Das Isomerengemisch wird in einem inerten Lösungsmittel suspendiert oder gelöst und auf Eisbadtemperatur abgekühlt. Nach Zugabe von m-Chlorbenzoesäure im Überschuß wird das Reaktionsgemisch in der Kälte etwa 2 bis 4 Stunden und dann bei Zimmertemperatur etwa 2 Stunden gerührt und anschließend im Vakuum zur Trockne eingedampft. Das trockene Gemisch der Reaktionsprodukte wird in einer Mischung aus Wasser und einem mit Wasser nicht mischbaren Lösungsmittel, wie Äthylacetat, gelöst. Die organische Schicht wird abgetrennt, gewaschen und getrocknet und zur Trockne eingedampft. Das trockne Produkt wird gewöhnlich als amorpher Rückstand erhalten, der durch Umkristallisieren aus einem Lösungsmittel oder häufig durch Verreiben mit Diäthyläther zur Kristallisation gebracht werden kann. Das kristalline p-Nitrobenzyl-7-/2-(2-thienyl)-acetamido/^-/(1-methyl-iH-tetrazolyl)-thio/-3-cephem-4-carboxylatsulfoxid wird dann in trockenem Dimethylformamid gelöst und mit überschüssigem

3
Phosphortrxchlorid zu dem Delta -Cephemsulfid reduziert. Das Gemisch wird etwa 15 Minuten gerührt und dann in eine Mischung aus Äthylacetat und Wasser gegossen. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit Wasser gewaschen und getrocknet und dann zur Gewinnung des Sulfidesters eingedampft.

Die p-Nitrobenzylestergruppe des Delta -Cephemesters wird durch katalytische Hydrogenolyse mit 5-prozentiger Palladiumkohle bei Zimmertemperatur in an sich bekannter Weise entfernt.

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Für die Herstellung der Verbindungen der Formel I sind bestimmte Ausgangsstoffe bevorzugt. So sind in dem oben wiedergegebenen Reaktionsschema von den 3-Halogen-3-cephemverbindungen diejenigen bevorzugte Ausgangsstoffe, in deren Formel X für Chlor steht. Handelt es sich bei dem verwendeten Ausgangsmaterial um einen 3-Cephem-3-sulfonatester, dann sind die Methylsulfonyloxy- und p-Toluolsulfonyloxygruppen, die sich ergeben, wenn W Methyl oder Tolyl bedeutet, bevorzugt. Bevorzugte Estergruppen sind die oben bereits beschriebenen, nämlich p-Nitrobenzyl, p-Methoxybenzyl, 2,2,2-Trichloräthyl und Diphenylmethyl (Benzhydryl). Diese Estergruppen sind deswegen bevorzugt, weil sie sich leicht unter Bildung der antibiotisch wirksamen Verbindungen entfernen lassen. Die Methoden zur Entfernung dieser Estergruppen sind allgemein bekannt. So läßt sich die p-Nitrobenzylestergruppe durch katalytische Hydrogenolyse oder mit Zink und Salzsäure entfernen. Die Trichloräthylestergruppe wird mit Zink und Ameisensäure oder Essigsäure entfernt. Die p-Methoxybenzylgruppe und die Benzhydrylgruppe können mit Trifluoressigsäure in der Kälte abgespalten werden. Für den Fachmann ist ohne weiteres ersichtlich, daß andere leicht abspaltbare Estergruppen bei der Herstellung der hierin beschriebenen Verbindungen angewandt werden können. Auf dem Cephalosporingebiet ist eine große Vielfalt derartiger Estergruppen bekannt, die bei der Synthese dieser Klasse von Anti- . biotica eingesetzt werden.

Während der Herstellung der Verbindungen der Formel I, die als Rest R eine Phenylglycin- oder Thienylglycin-Seitenkette enthalten, ist es günstig, wenn die freie Aminogruppe in der alpha-Stellung der Seitenkette durch eine Aminoschutzgruppe geschützt ist. Eine große Vielfalt solcher Schutzgruppen ist auf diesem.Gebiet allgemein bekannt, beispielsweise ürethanaminoschutzgruppen, wie die tert.-Butyloxycarbonylgruppe, die Cyclopentyloxycarbonylgruppe und die Halogenalkoxycarbonylgruppen, die Enaminschutzgruppen, wie die mit Methylacetoacetat

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und anderen Diketonen und Ketoestern gebildeten sowie die Kohlenwasserstoffschutzgruppen, wie die Tritylgruppe. Diese Aminoschutzgruppen haben den Zweck, die Aminogruppe während des Verlauf der Umsetzungen zu schützen, die an anderen Stellen des Moleküls durchgeführt werden. Die hier besonders erwähnten Estergruppen, nämlich die tert.-Butyloxycarbonylgruppe, die 2,2,2-Trichloräthoxycarbonylgruppe und die mit Äthyl- oder Methylacetoacetat gebildete Enamingruppe, sind lediglich Beispiele für die große Anzahl der verschiedenen verwendbaren Schutzgruppen.

Die Verbindungen der Formel I können aber auch durch Umsetzung eines 7-Amino-3-chlor(brom)-3-cephem-4-carbonsäureesters (Formel I R = H) mit den oben beschriebenen niederen Alkylmercaptanen, Thiophenol oder substituierten Thiophenolen oder heterocyclischen Thiolen hergestellt werden. Nach der Substitutionsreaktion, mit der der Thiosubstituent in die 3-Stellung des Cephemrings eingeführt wird, wird das so erhaltene Gerüst mit einem Carbonsäurederivat

0
R'-C-OH

acyliert. Die Acylierung der T-Amino-S-thio-substituierten-3-cephem-4-carbonsäureester wird nach bekannten Acylierungs- . verfahren durchgeführt. Beispielsweise kann das Säurechlorid der für die Acylierung vorgesehenen Carbonsäure in einem inerten Lösungsmittel, zum Beisiel wässrigem Aceton, in Gegenwart eines Halogenwasserstoffakzeptors, zum Beispiel einer anorganschen Base, wie Natriumbicarbonat oder Natriumcarbonat, oder in Gegenwart eines organischen Amins, wie Triäthylamin oder Pyridin, mit dem Gerüstmolekül umgesetzt werden.

So wird beispielsweise p-Nitrobenzyl-T-amino-S-methylthio-S-cephem-4-carboxylat mit Phenylacetylchlorid in kaltem wässrigem Aceton, das Natriumbicarbonat im Überschuß enthält, umgesetzt,

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wodurch die acylierte Verbindung p-Nitrobenzyl-7-phenylacetamido-3-methylthio-3-cephem-4-carboxylat erhalten wird. In gleicher Weise wird Diphenylmethyl-7-amino-3-(1-inethyl-iH-tetrazol-5-ylthio)-3-cephem-4-carboxylat mit 2-Thienylacetylchlorid in wässrigem Aceton bei einer Temperatur von etwa 5 bis 10 °C in Gegenwart von Natriumbicarbonat zu Diphenylmethyl-7-/2-(2-thienyl)-acetamido/^-(1-methyl-1H-tetrazol-5-ylthio)-3-cephem-4-carboxylat umgesetzt.

Die niedrigen Alkylmercaptane/ Thiophenole und substituierten Thiophenole sind alle allgemein bekannte Verbindungen und leicht zugängliche Ausgangssstoffe. Auch die erfindungsgemäß verwendeten 5-substituierten Oxa- und Thiadiazole sind bekannte und leicht zugängliche Ausgangsstoffe. Das gleiche gilt auch für die 1-Alkyl-iH-tetrazol~5-thiol-verbindungen.

Die als Ausgangsstoffe dienenden 3-Halogen-3-cephem- und 3-Alkylsulfonyloxy- oder -Phenyl oder -substituiertes Phenylsulfonyloxy-3-cephem-ester sind bekannte Verbindungen, die nach bekannten Verfahren aus 7-Acylamido-(oder 7-Amino)-3-hydroxy-3-cephem-4-carbonsäureestern hergestellt v/erden. Die 3-Halogencephalosporine sind in den BE-Patentschriften 811 494 und 811 495 beschrieben und werden durch Umsetzung eines Halogenierungsmittels mit einem 7-Acylamido-(oder 7-Amino)-3-hydroxy-3-cephem-4-carbonsäureester hergestellt. Die 3-substituiertes-Sulfonyloxycephalosporine sind in BE-PS 813 170 beschrieben und werden durch Umsetzung eines substituierten Sulfonylhalogenids mit einem 7-Acylamido-(oder 7-Amino)-S-hydroxy-S-cephem^-carbonsäureester hergestellt.

Die Cephalosporinverbindungen der Formel I, die als Rest R. Wasserstoff enthalten, und ihre pharmazeutisch annehmbaren nichttoxischen Salze sind wertvolle antibakterielle Verbindungen, die das Wachstum von für Menschen und Tiere pathogenen Mikroorganismen inhibieren.

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In den folgenden Tabellen ist die antibakterielle Aktivität von repräsentativen Verbindungen der Formel I in vitro mitgeteilt .

Tabelle I zeigt die antibakterielle Aktivität von 7-(D-Phenylglycolamido)-3-(i-methyl-IH-tetrazol-5-ylthio)-3-cephem-4-carbonsäure gegen sechs Bakterienisolate. Die Aktivität wurde durch die Standard-Rundplatten-Prüfung bestimmt. Das Antibioticum wurde in Phosphatpuffer von pH 6 gelöst, und die Lösung wurde mit Phosphatpuffer von pH 6 auf Konzentrationen von 100, 50, 25 und 12,5 ,ug/ml verdünnt. Runde Papierblätter wurden mit den einzelnen Lösungen des Antibioticums gesättigt und auf Nähragarplatten aufgebracht, die mit etwa 10 Bakterien/ml Nähragar besamt waren. Die Platten wurden dann inkubiert, und die die Blätter umgebenden klaren Zonen der Wachstumsinhibierung wurden gemessen.

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Tabelle I

Antibakterielle Aktivität von 7-(D-Phenylglycylamido)-3-(i-methyl-IH-tetrazol-5-ylthio)-3-cephem-4-carbonsäure

Bakterien- Zonendurchmesser (mm)

isolat Antibioticum-Konzentration ( #ug) /ml

100 50 25 12,5*

Salmonella

typhosa SA12 20,8 17,2 16,0 14,0

Escherichia

cole EC14 19,4 16,7 15,6 13,6

Proteus

mirabilis PR6 18,2 15,2 14,0 11,6

Staphylococcus

aureus 3055 22,0 18,0 15,0 <6

Sarcina

lutea X186 35,5 . 32,0 3O,5 27,0

Bacillus

subtilis X12 25,0 23,0 19,0 6,5

niedrigste geprüfte Konzentration

Tabelle II zeigt die antibakterielle Wirksamkeit von 7-/2-(2-Thienyl) -acetamido/^- (1-methyl-1H-tetrazol-5-ylthio) -3-cephem-4-carbonsäure gegen mehrere Mikroorganismen. Die Aktivität wurde nach der gleichen Methode ermittelt, die in Verbindung mit Tabelle I beschrieben wurde.

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Tabelle II

Antibakterielle Aktivität von 7-/2-(2-Thienyl)-acetamido/-3-(1-methyl-1-H-tetrazol-5-ylthio)-3-cephem-4-carbonsäure

Rund-Platten-Methode

Prüfmikroorganismus

Staphylococcus aureus 3055 Bacillus subtiiis Sarcina Iutea Proteus vulgarus Salmonella gallinarum Escherichia coli Bacillus subtiiis Escherichia coli"

Zonendurchmesser (mm) Antibioticum-Konzentration 0,1 mg/ml

32 22 30 17 t⁺ 17 37 21

t = Spur Inhibitionszone Test auf minimalen Medium

Die unterste Grenze oder das Minimum der Inhibitorkonzentration (MIC) von T-[Ti- (2-Thienyl) -acetamido/-3-( 1-methy 1-1H-tetrazol-5-ylthio)-3-phem-4-carbonsäure gegen gramnegative Organismen und penicillinresistente Isolate von Staphylococcus ist in der folgenden Tabelle III angegeben. Die MIC-Werte wurden nach der abgestuften Plattenprüfmethode (Gradient-Plate test method, Bryson and Szybalski, Science, Bd. 116, S. 45 - 46, 1952) bestimmt.

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Tabelle III

Antibakterielle Aktivität von 7-/2-(2-Thienyl)-

(1--methyl-1H-tetrazol-5-ylthio) -3-cephem-4-carbonsäure

gegen
gramnegative und penicillinresistente Organismen

Prüfmikroorganismen

Shigella sp.

Escherichia coli Klebsiella pneumoniae Aerobacter aerogenes Salmonella heidelberg

Xl,1"

Minimum der Inhibitorkonzentration

/Ug/ml

16 16 16 7,5 4,0 >20 >20

Klinische Isolate von penicillisresistentem S. aureus,

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Die antibakterielle Aktivität der Cephalosporinverbindungen der Formel I, die als Rest R₂ eine Alkylgruppe mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder eine Phenyl- oder substituierte Phenylgruppe enthalten, ist etwas geringer als die Aktivität der bevorzugten Verbindungen der Formel I, die als Rest R- einen der beschriebenen heterocyclischen Reste enthalten. Die Wirksamkeit der Cephalosporinverbindungen/ die als Rest R₂ einen Alkylrest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder einen Phenyl- oder substituierten Phenylrest enthalten, ergibt sich aus dem Minimum der Inhibitorkonzentration von 7-£2-(2-Thienylacetamid£/-3-methylthio-3-cephem-4-carbonäure gegen gramnegative Organismen in der Abstufungsplattenprüfung. Diese Verbindung zeigt bei dieser Prüfung eine minimale Inhibitorkonzentration gegen Klebsiella pneumoniae, Aerobacter aerogenes und Salmonella heidelberg von 14, 21,5 bzw. 25 mcg/ml.

Die antibiotischen Verbindungen der Formel I eignen sich zur Unterdrückung des Wachstums von pathogenen Mikroorganismen und zur Bekämpfung von Infektionskrankheiten, wenn sie parenteral verabreicht werden. Sie können auch dazu verwendet werden, physiologische Flüssigkeiten frei von bakteriellen Verunreinigungen zu halten.

Die Antibiotica sind saure Verbindungen, weshalb sie mit anorganischen und organischen Basen unter Bildung von Salzen reagieren. Diese Salze zeigen gleichfalls antibakterielle Aktivität und können als stärker lösliche Formen der Antibiotica verwendet werden. Salze mit anorganischen Basen, zum Beispiel Alkalicarbonaten, wie Lithium-, Natrium- und Kaliumcarbonat oder -bicarbonat, können mit dem Antibioticum in Form der freien Säure in der gleichen Weise hergestellt werden wie die Salze anderer antibiotisch wirksamer Säuren der Cephalosporinreihe. Ferner können die Antibiotica Salze mit organischen Aminen, zum Beispiel mit sekundären Aminen, wie Diäthylamin, Diisopropylamin, Dicyclohexylarain und

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Dibenzylamin, bilden. Auch Äthanolamine, wie Monoäthanolamin und Diäthanolamin, können zur Ausbildung von Salzen der Cephalosporinsäuren verwendet werden.

Durch die folgenden Beispiele wird die Erfindung weiter erläutert.

Herstellung von 3-Hydroxy- und 3-Halogen-3-cephem-Ausgangsstoffen

Herstellung 1 p-Nitrobenzyl^-amino-S-rnethylencepham^-carboxylat-hydrochlorid

Zu einer Lösung von 965 mg (2 mMol) p-Nitrobenzyl-7-phenoxyacetamido-3-methylencepham-4-carboxylat in 10 ml Methylenchlorid werden 175 mg trockenes Pyridin und 460 mg Phosphorpentachlorid gegeben, und die Mischung wird bei Zimmertemperatur 6 Stunden gerührt. Nach Zugabe von 1 ml Isobutanol wird die Mischung über Nacht bei 0 °C stehengelassen. Der gebildete kristalline Niederschlag wird abfiltriert, und man erhält 430 mg (58 % Ausbeute) des Reaktionsprodukts, p-Nitrobenzyl^-amino-S-methylencepham-4-carboxylat-hydrochlorid.

Elementaranalyse, C₁^H_1gN_O₅SCl:

berechnet: C 46,69; H 4,18; N 10,89; gefunden: C 46,40; H 4,20; N 10,62.

IR (Nujol)

Carbonyl-Absorption bei 5,65 (ß-Lactam) und 5,75 (Ester) Micron.

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NMR (DMSO dg) Signale bei 6,34 (2d, 2H, C₂-4,98 (d, 1H, C₆-H); 4,7 - 4,4 (m, 6H, C₄-H, Ester-CH₂, C₄-CH₂ und C₇-H); und 2,4 - 1,6 (m, 4H, aromatisches H) tau.

Herstellung 2 p-Nitrobenzyl-7-amino-3-hydroxy-3-ce}phem-4-carboxylat-hydrochlorid

Eine Lösung von 3,85 g des wie in Herstellung 1 beschrieben hergestellten p-Nitrobenzyl^-amino-S-methylencepham^-carboxylathydrochlorids in 600 ml Methanol wird in einem Aceton-Trockeneis-Bad gekühlt. Durch die Lösung wird etwa 20 Minuten lang Ozon geleitet, wodurch sie eine blaßblaue Färbung annimmt. Nach Verdrängen des überschüssigen Ozons durch Stickstoff wird das als Zwischenprodukt gebildete Ozonid zersetzt, indem gasförmiges Schwefeldioxid bis zur negativen Kaliumjodid-Stärke-Reaktion durch das Reaktionsgemisch geleitet wird.

Das Reaktionsgemisch wird im Vakuum eingdampft, und der Rückstand wird in 200 .ml 0,1n Chlorwasserstoff in Methylenchlorid gelöst. Nach Eindampfen der Lösung zur Trockne wird das hinterbleibende Reaktionsprodukt in Aceton gelöst. Beim Abkühlen fallen 3,15 g p-Nitrobenzyl^-amino-S-hydroxy-S-cephem^-carboxylat-hydrochlorid als kristalline Festsubstanz aus.

IR (Nujöl): Carbonyl-Absorption bei 5,55 (ß-Lactamcarbonyl) und
5,02 (Estercarbony!wasserstoff gebunden an 3-Hydroxy) Micron.

Elektrometrische Filtration (66 % DMF) pKa 4,0 und 6,3.

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Herstellung 3

p-Nitrobenzyl-7-/2-(2-thienyl)-acetamido/^-hydroxy-3-cephem-4 -carboxylat

Eine Lösung von 1,55 g p-Nitrobenzyl^-amino-S-hydroxy-S-cephem-4-carboxylat-hydrochlorid in 30 ml Aceton, das 364 mg (0,5 ml, 3,6 mMol) Triäthylamin enthält, wird mit 962 mg Harnstoff versetzt. Unter Rühren bei Zimmertemperatur wird tropfenweise eine Lösung von 730 rag (4,4 mMol) 2-Thiophenacetylchlorid in 20 ml Aceton zu der Mischung gegeben. Nach 2,5 Stunden wird das Reaktonsgemisch abfiltriert und eingedampft. Der Rückstand wird in Äthylacetat gelöst, und die Lösung wird nacheinander mit Wasser, einer 5-prozentigen Natriumbicarbonatlösung, 5-prozentiger Salzsäure und einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen. Die gewaschene Lösung wird getrocknet und dann im Vakuum eingdampft, wodurch 1,2 g des Reaktionsprodukts als kristalliner Rückstand erhalten werden. Durch Umkristallisieren des Produkts aus Äthylacetat erhält man reines p-Nitrobenzyl-7-/2-(2-thienyl)-acetamidoZ-S-hydroxy-S-cephem^-carboxylat mit folgenden Spektraldaten:

IR (Nujol): Absorptionspeaks bei 3,0 (Amid-NH), 5,68 (ß-Lactam-carbonyl) und 6,1 (Amid und Esterwasserstoff gebunden an 3-OH) Micron.

NMR (CDCl-j/DMSO dg): Signale bei 6,54 (2d, 2H, C₂H₂), 6,16 (s, 2H, Seitenketten-CH»), 4,90 (d, 1H, C^H) 4,60 (d, 2H, Ester CH₃), 4,43 (q, 1H, C₇H), 3,1-1,6 (m, 7H, aromatisches H) und 1,30 (d, IH, Amid NH) tau.

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Herstellung 4

Diphenylmethy1-7-/2-(2-thienyl)-acetamido/^-chlor-3-cephem-4-carboxylat

Eine Lösung von 4,2 g Diphenylmethyl-7-/2-(2-thienyl)-acetamido/-3-hydroxy-3-cephem-4-carboxylat in 44 ml trockenem Dimethylformamid wird mit 865 mg Phosphortrichlorid versetzt. Das Gemisch wird 1,5 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt und dann in eine Mischung aus Äthylacetat und 5-prozentiger wässriger Salzsäure gegossen. Die Äthylacetatschicht wird abgetrennt, mit 5-prozentiger Salzsäure und Wasser gewaschen und getrocknet, Nach Einengen der getrockneten Lösung im Vakuum kristallisiert das Produkt aus. Der 3-Chlorester wird abfiltriert, mit kaltem Äthylacetat gewaschen und getrocknet; Ausbeute 2,2 g.

Elementaranalyse, C₂gH₂₁N₃O₄S₂C1:

berechnet: C 59,48; H 4,03; N 5,34; Cl 6,75; gefunden: C 59,77; H 4,25; N 5,40; Cl 6,91.

NMR (CDCl₃): Signale bei 6,49 (ABq, 2H, C₂-H₃), 6,22 (s, 2H, alpha-CH₂), 5,08 (d, 1H, Cg-H), 4,19 (q, 1H, C₇-H), 3,13 - 2,5 (m, 15H, C₇-NH, Ester CH und aromatisches H) tau.

IR (CHCl₃): Absorptionspeaks bei 2,9 (Amid NH), 5,55, 5,72 und 5,90 (ß-Lactam-, Ester- und Amidcarbonyl) und 6,60 (Amid II) Micron.

UV (Dioxan) : lambda,,,,,, 275 m,u, epsilon = 8700.

max /

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Herstellung 5

p-Nitrobenzy 1-7-/2- (2-thienyl) -acetamido/-S- __ 4-carboxylat (über Thionylchlorid)

Eine Lösung von 1,9 g (4 mMol) p-Nitrobenzy1-7-/2-(2-thienyl)-acetamido/-3-hydroxy-3-cephem-4-carboxylat in 10 ml DMF (über einem Molekularsieb getrocknet) wird mit 950 mg (0,58 ml, 8 mMol) frisch destilliertem Thionylchlorid versetzt. Die Mischung wird 6,5 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt und dann in 100 ml Äthylacetat gegossen. Dieses Gemisch wird dreimal mit je 30 ml 5-prozentiger Salzsäure und mit gesättigter Natriumchloridlösung extrahiert. Die gewaschene Äthylacetatlösung wird filtriert und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird mit Äther verrieben und liefert 1,2 g p-Nitrobenzyl-7-/2- (2-thienyl) -acetamidoy-S-chlor-S-cephem-4-carboxylat als bräunliche kristalline Festsubstanz, die bei etwa 164 bis 166 ⁰C schmilzt.

Elementaranalyse, C₂₀H₁,N₃OgS-Cl:

berechnet: C 48,63; H 3,27; N 8,51; Cl 7,18; gefunden: C 48,47; H 3,29; N 8,78; Cl 6,96.

IR (Chloroform) Absorptionsbanden bei 2,9 (Amid NH), 5,59 (ß-Lactamcarbonyl), 5,75 (Estercarbonyl) und 5,92 Micron (Amidcarbonyl).

UV Absorptionsspektrum (Acetonitril) lambda ^„ 235 m₇u, epsilon = 12 100

lambda _χ 268 m,u, epsilon =15 800. Massenspektrum 493 m/e.

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NMR (CDCl₃) Signale bei 6,39 (ABq, 2H, C₂-H₃), 6,17 (s, 2H, alpha-CH₂), 4,99 (d, 1H, Cg-H), 4,64 (s, 2H, Ester CH₃), 4,19 (q, 1H, C₇-H), 3,45 (d, 1H, C₇-NH), 3,1 - 1,67 (m, 7H, aromatisches H) tau.

Herstellung 6
7-/2-(2-Thienyl)-acetamido/-3-brom-3-cephem-4-carbonsäure

Eine Lösung von 19 g (40 mMol) p-Nitrobenzyl-7-/2-(2-thienyl)-acetamido/-3-hydroxy-3-cephem-4-carboxylat in 300 ml trockenem DMF wird mit 15 g (56 ^mMoI) Phosphortribromid versetzt, und das Reaktionsgemisch wird bei Zimmertemperatur über Nacht gerührt. Danach wird es in eine Mischung aus Äthylacetat und Wasser gegossen, und die organische Phase wird abgetrennt, wiederholt mit Wasser gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Die getrocknete organische Phase wird im Vakuum zur Trockne eingedampft. Das etwa 9 g ausmachende rohe Reaktionsprodukt wird durch Chromatographieren an 500 g Kieselsäuregel unter Verwendung von Äthylacetat/Hexan (55 : 45 Volumen/Volumen) als Elutionsmittel gereinigt. Das Eluat wird unter vermindertem Druck zur Trockne eingedampft, und der trockne Rückstand liefert beim Verreiben mit Diäthyläther kristallines p-Nitrobenzy 1-7-/2- (2-thienyl) -acetamidoy-S-brom-S-cephenr^-carboxylat.

UV (Äthanol) lambda „ 270 m,u (epsilon =13 300)

ΙΠαΧ /

und lambda 243 m,u (epsilon =12 700)

Uta X /

Elementaranalyse, C₃₀H₁₆BrN₃OgS₃:

berechnet: C 44,61; H 3,OO; N 7,81; Br 14,84; gefunden: C 44,78; H 3,03; N 7,65; Br 14,91.

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NMR-Spektrum (DiMSO d_g)

Signale bei 6,21 (s, 2H, alpha-CH₂>, 5,98 (ABq, 2H, C₂-H₂), 4,72 (d, 1H, Cg-H), 4,51 (s, 2H, Ester-CH₂), 4,20 (q, TH, C₇-H), 3,04 - 1,74 (m, 7H, aromatisches H) und 0,66 (d, 1H, C₇-CH) tau.

Der erhaltene 3-Bromester wird folgendermaßen gespalten: mg (1,0 mMol) des Esters werden bei Zimmertemperatur in Äthanol in Gegenwart eines vorreduzierten 5 % Palladiumauf-Kohle enthaltenden Katalysators hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert, und das Filtrat wird unter vermindertem Druck zur Trckne eingedampft. Der Rückstand wird mit Diäthyläther verrieben, und man erhält 180 mg (44 %) kristalline 7-/2- (2-Thienyl) -acetamidoy-B-brom-S-oephem^-carbonsäure.

Elektrometrische Titration (66-prozentiges wässriges DMF) pKa 4,4; MG 393 (ber. = 403)

Elementaranalyse, C₁₃H₁₁BrN₂O₄S₂. 1/2 Diäthylätherat:

berechnet: C 40,91; H 3,66; N 6,36; Br 18,15; gefunden: C 41,29; H 3,20; N 6,29; Br 18,50.

NMR-Spektrum (CDCl₃)

Signale bei 8,8 (t, Diäthyläther-CH₃), 6,68 - 5,86 (m, C₃-H₃, alpha-CH₂ und Diäthyläther-CH₂), 4,90 (d, 1H, C₆-H), 3,0 - 2,63 (m, 3H, aromatisches H), und 1,9 (d, 1H, Amid NH) tau.

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Herstellung 7

7-(D-Madelamido)-S-chlor-S-cephem-^ -carbonsäure

Eine Suspension von 812 mg (2 mMol) p-Nitrobenzyl-7-amino-3-chlor-3-cephem-4-carboxylathydrochlorid in 40 ml Äthylacetat wird mit einer Lösung von 520 mg (5 mMol) Natriumbisulfit in 40 ml Wasser versetzt. Das Gemisch wird unter kräftigem Rühren mit 395 mg (2,2 mMol) D-Mandelsäure-O-carboxyanhydrid versetzt. Nach 1,5-stündigem Rühren bei Zimmertemperatur wird die wässrige Schicht abgetrennt und mit Äthylacetat gewaschen. Die Äthylacetatwaschflüssigkeit wird mit der Äthylacetatschicht vereinigt, und die vereinigten Äthylacetatlösungen werden mehrere Male mit Wasser gewaschen, getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird mit Äther verrieben und ergibt 685 mg p-Nitrobenzyl-7-(D-mandelamido)-S-chlor-S-cephem-4-carboxylat, das bei etwa 158 bis 164 ⁰C unter Zersetzung schmilzt.

Elementaranalyse, C₂₂H₁₈N₃O₇SCl:

berechnet: C 52,44; H 3,60; N 8,34; Cl 7,04 %; gefunden: C 52,25; H 3,45; N 8,58; Cl 6,82 %.

NMR (CDCl₃):

Signale bei 6,24 (ABq, 2H, C₃-H₂), 5,0 - 4,7 (m, 2H, C₆-H und alpha-H), 4,57 (s, 2H, Ester CH₃), 6,23 (q, 1H, C₇-H), und 2,8 - 1,2 (m, 10H, aromatisches H und C₇-NH) tau.

UV (Acetonitril) : lambda 265 m,u (epsion =18 600) .

max / ^

200 mg des Reaktionsprodukts werden in Gegenwart von 5 % •Palladium-auf-Kohle hydriert. Man erhält 75 mg 7-(D-Mandelamido)-3-chlor-3-cephem-4-carbonsäure.

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NMR (D₂o-Natriumbicarbonat):

Signale bei 6,42 (ABq, 2H, C₃-H₂), 4,90 (d, 1H, Cg-4,68 (s, 1H, alpha-CH), 4,37 (d, 1H, C₇-H) und 2,49 (s, 5H, aromatisches H) tau.

B. Herstellung von Sulfonatestern

Herstellung 8

(2-Thienyl)-acetamidoy-S-methylsulfonyloxy-S-cephem-4-carbonsäure

Eine Lösung von 4,75 g (10 mMol) p-Nitrobenzyl-7-/2-(2-thienyl)-acetamido/-3-hydroxy-3-cephem-4-carboxylat in 50 ml trockenem Dimethylacetamid wird mit 2 ml Propylenoxid versetzt. Zu der Lösung wird unter Rühren 1 Äquivalent Methansulfonylchlorid gegeben, und das Rühren wird noch 3 Stunden fortgesetzt. Das Reaktonsgemisch wird in Äthylacetat aufgenommen.und mit einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen. Die gewaschene organische Phase v/ird im Vakuum zur Trockne eingedampft, und der erhaltene Rückstand wird durch präparative Dünnschichtchromatographie an Kieselsäuregel unter Verwendung einer Mischung aus 65 % Äthylacetat und Hexan zur Elution gereinigt.

Elementaranalyse, C₂₁H₁QN₃OgS₃:

berechnet: C 45,56; H 3,46; N 7,59; S 17,38; gefunden: C 45,74; H 3,56; N 7,30; S 17,06.

Das magnetische Kernresonanzspektrum und das Infrarotabsorptionsspektrum stehen mit der Struktur des erhaltenen Produkts im Einklang.

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NMR (DMSO dg) delta-Werte:

3,47 (s, 3H, Methyl); 3,80 (breites s, 2H, Seitenketten-CH₂); 3,91 (q, 2H, C₃H₂); 5,29 (d, 1H, C_gH); 5,46 (breites s, 2H, Ester CH₃); 5,84 (q, 1H, C₇H); 6,86 - 7,44 (m, 3H, Thiophen); und 7,98 (q, 4H, Phenyl).

IR (Aufschlämmung) 1785, 1350 und 1158 cm"¹ UV (Äthanol) lambda_mriv 264 m,u.

IuclX /

2 g des obigen Produkts werden in einem Lösungsmittelgemisch aus 15 ml Methanol und 20 ml Tetrahydrofuran gelöst und mit

3 g eines vorreduzierten 5 % Palladium-auf-Kohle enthaltenden Katalysators versetzt. (Der Katalysator ist vor seiner Verwendung in 15 ml Methanol eine Stunde vorreduziert worden.) Das Gemisch wird 1,5 Stunden hydriert und nimmt in dieser Zeit die theoretische Wasserstoffmenge auf.

Der Katalysator wird abfiltriert, und das Filtrat wird auf einem Rotationsverdampfer im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird in 20 ml Äthylacetat gelöst und mit 20 ml kaltem Wasser versetzt. Der pH-Wert der Lösung wird mit einer Natriumbicarbonatlösung auf 7 eingestellt, und die organische Schicht wird abgetrennt. Die wässrige Phase wird nach Beschichten mit Äthylacetat mit 1η Salzsäure auf einen pH-Wert von 2,0 eingestellt. Die organische Schicht wird abgetrennt und mit einem Äthylacetatextrakt der angesäuerten wässrigen Schicht vereinigt. Nach Trocknen der vereinigten organischen Lösungen über Magnesiumsulfat und Eindampfen zur Trockne erhält man das Produkt der Esterspaltung, die 7-/2-(2-Thienyl)-acetamido/-3-methylsulfonyloxy-3-cephem-4-carbonsäure.

NMR (Aceton d_ß) delta-Werte:

3,33 (s, 3H, Methyl); 3,50 - 4,00 (m, 4H, 2 χ CH₂); 5,10 (d, 1H, C₆H); 5,88 (d, 1H, C₇H); 6,80 - 7,40 (m, 3H, Thiophen).

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IR (KBr) 1795, 1175 cm"¹

UV (Äthanol) lambda^ ■ 265 Hi₇U (Schulter)

max /

Elektrometrische Titration. (8Q-prozentige wässrige

Methylcellosolve) pKa 3,9,

Herstellung 9

7-/2- (2-Thienyl) -acetamido/-3- (p-töluölsulfonyloxy)^3—cephem-

4-carbonsäure

Eine Lösung von 9,5 g (20 mMol) p-Nitrobenzy1-7-/2-(2-thienyl)-acetamido/-3-hydroxy-3-cephem-4-carboxylat in 30 ml DMAc und 30 ml Propylenoxid wird bei Eisbadtemperatur gehalten und mit 4,2 g (22 mMol, 1,1 Äquivalente) p-Toluolsulfonylchlorid versetzt. Das Reaktionsgemisch wird bei Eisbadtemperatur etwa 15 Stunden und dann bei Zimmertemperatur etwa 3 Stunden gerührt. Nach Eindampfen zur Entfernung überschüssigen Propylenoxids wird das konzentrierte Reaktonsgemisch in Äthylacetat gelöst. Die Lösung wird mit gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet. Durch Eindampfen der trockenen Lösung unter vermindertem Druck erhält man den rohen Tosylatester als trockenen Rückstand. Dieser wird in Äthylacetat gelöst und an mit Wasser entaktiviertem Kieselsäuregel (Woelm-Silicagel, 10 % Wasser entaktiviert) in einer Glassäule chroma tographiert. Die Säule wird mit 45 Volumenprozent Hexan in Äthylacetat eluiert. Es werden vier Fraktionen von etwa 100 ml aufgefangen. Die Fraktionen 2 und 3 werden vereinigt und unter vermindertem Druck eingedampft, wodurch man 4,75 g p-Nitrobenzyl-7-/2-(2-thienyl)-acetamidoZ-S-(p-toluolsulfonyloxy)-3-cephem-4-carboxylat in Mischung mit dem entsprechenden 2-Cephemisomeren erhält. .

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Eine bei Eisbadtemperatur gehaltene Lösung von 1,26 g des Isomerengemisches in 20 ml Methylenchlorid wird mit einer Lösung von 0,4 g m-Chlorperbenzoesäure in 20 ml Methylenchlorid versetzt. Die Mischung wird 40 Minuten gerührt und dann zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird mit Isopropanol verrieben, abfiltriert, mit Äther gewaschen und getrocknet und ergibt 1,1 g Produkt, p-Nitrobenzyl-7-/_2-(2-thienyl)-acetamido/^-(p-toluolsulfonyloxy)-S-cephem^-carboxylat-sulfoxid.

Elementaranalyse, C₂₇H₂₃N₃O.. S₃:

berechnet: C 50,23; H 3,59; N 6,51; gefunden: C 49,98; H 3,30; N 6,53.

Das Delta -Cephemsulfoxid wird in folgender Weise zu dem Delta -Cephemsulfid reduziert:

Eine bei Eisbadtemperatur gehaltene Lösung von 1,Og des SuIfoxids in 25 ml Acetonitril, die 5 ml DMF enthalten, wird unter Rühren mit 0,157 g Phosphortribromid versetzt. Das Reaktionsgemisch wird noch eine Stunde in der Kälte gerührt. Nach Zugabe von Äthylacetat und gesättigter wässriger Natriumchloridlösung zu dem Gemisch wird das Produkt mit der Äthylacetatschicht abgezogen, die dreimal mit gesättigter Natriumchloridlösung gewaschen wird. Durch Trocknen und Eindampfen der organischen Phase erhält man 1,1 g des gebildeten p-Nitrobenzyl-7-/2-(2-thienyl)-acetamido/^-(p-toluolsulfonyloxy)-3-cephem-4-carboxylats.

Dieses Produkt wird über einem vorreduzierten 5 % Palladium-auf-Kohle enthaltenden Katalysator in Methanol-THF nach der in "Herstellung 8" beschriebenen Arbeitsweise hydriert, wodurch die freie Carbonsäure erhalten wird, 7-/2-(2-Thienyl)-acetamido/-3-(p-toluolsulfonyloxy)-3-cephem-4-carbonsäure.

6 0 9 8 2 b / Ί Ü Ί 3

NMR (CDCl₃) delta-Werte:

2,47 (s, 3H, Methyl); 3,40 - 4,10 (m, 4H, C₂ und Seitenkette CH₂); 5,05 (d, 2H, CgH); 5,80 (q, 1H, C₇-H); 6,85 - 7,38 (m, 3H, Thiophen); 7,61 (q, 4H, Phenyl).

IR (CHCl₃) 1790, 1380, 1170 cm"¹

Elektrometrische Titration (80-prozentige wässrige Methyl-

cellosolve) pKa 4,4 und 4,25.

UV (Äthanol) lambda^^^ 265 m,u (Schulter).

IucLX /

Herstellung 10

7-(D-Phenylglycylamido)-S-methylsulfonyloxy-S-cephem-

4-carbonsäure

Eine Lösung von 11,1 g p-Nitrobenzyl^-amino-S-hydroxy-S-cephem-4-carboxylat-hydrochlorid in 500 ml Tetrahydrofuran wird mit 15,1 g Natriumbisulfit versetzt. Die Mischung wird eine Stunde bei Zimmertemperatur gerührt, worauf 6,4 g N-(tert.-Butyloxycarbonyl) phenylglycin und 6,25 g N-Äthoxy carbonyl- 2 -äthoxy-1,2-dihydrochinolin (EEDQ) zugegeben werden. Das Reaktionsgemisch wird 7 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt und dann zur Entfernung des Tetrahydrofurans eingdampft. Das Konzentrat wird in Äthylacetat gelöst, und die Lösung wird nacheinander mit einer Natriuinbicarbonatlösung, verdünnter Salzsäure und einer gesättigten Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet. Die getrocknete Lösung wird zur Trockne eingedampft und ergibt 11,14 g p-Nitrobenzyl-7-(N-tert.-butyloxycarbonyl-D-phenylglycylamido)-3-hydroxy-3-cephem-4-carboxylat.

ORIGINAL INSPECTED 60982b/1013

Eine Lösung von 11,14 g dieses Produkts in 50 ml DMAc, die 25 ml Propylenoxid enthalten, wird bei Zimmertemperatur mit 1,47 ml Methansulfonylchlorid versetzt. Nach etwa 3-stündigem Rühren und nach Zugabe von v/eiteren 1,47 ml Methansulf onylchlorid wird die Mischung noch weitere 15 Stunden gerührt _Ψ Das Reaktionsgemisch wird mit Äthylacetat verdünnt 'und viermal mit einer gesättigten Natriumchloridlösung extrahiert. Die gewaschene organische Phase wird getrocknet und zur Trockne eingedampft, wodurch das gebildete rohe p-Nitrobenzyl-7-(N-tert.-butyloxycarbonyl-D-phenylglycylamido)-3-methylsulfonyloxy-3-cephem-4-carboxylat erhalten wird. Dieses Produkt wird durch Lösen in Methylenchlorid und Fällen mit Hexan gereinigt. Das gereinigte Produkt wird filtriert und getrocknet; Ausbeute 8,09 g.

Die p-Nitrobenzylgruppe wird durch Hydrieren des Produkts in Gegenwart von vorreduziertem 5 % Palladium-auf-Kohle enthaltendem Katalysator nach der in "Herstellung 8" beschriebenen Arbeitsweise entfernt. Es werden 4,21 g der freien Säure erhalten.

1,545 g der so erhaltenen freien Säure werden in 3 ml trockenem Acetonitril gelöst und mit 1,7 g p-Toluolsulfonsäure versetzt. Das Reaktionsgemisch wird über Nacht bei Zimmertemperatur gerührt. Nach Zugabe von Wasser wird der pH-Wert mit Natriumbicarbonatlösung auf 5,0 eingestellt. Dann wird das

609826/10-13

Gemisch zur Entfernung des Acetonitrils eingedampft, und der wässrige Rückstand wird filtriert. Der pH-Wert des Filtrats wird auf 4,0 eingestellt, und das Filtrat wird gefriergetrocknet. Das Trocknungsprodukt wird mit Aceton verrieben und abfiltriert. Die feste Substanz wird in 15 ml Wasser gelöst und bei Eisbadtemperatur mit etwa 5 ml Aceton versetzt. Aus der " kalten Lösung kristallisiert die gebildete 7-(D-Phenylglycylamido)-3-methylsulfonyloxy)-3-cephem-4~carbonsäure aus, die abfiltriert, mit kaltem Wasser und Aceton gewaschen und getrocknet wird; Ausbeute 143 mg.

Elementaranalyse, C₁₆H₁₇N₃O₇S₂S

berechnet: C 44,92; H 4,01; N 9,83; gefunden: C 44,13; H 4,24; N 9,26.

Elektrometrische Titration (80-prozentige wässrige Methyl-

cellosolve) pKa 3,6 und 6,75.

IR (Aufschlämmung) 1780, 1360 und 1178 cm"¹

UV (pH 6 Puffer) lambda^_v 261 m,u (epsilon = 8400)

max /

NMR (DMSO d,) delta-Werte:
ο

3,28 (s, 3H, Methyl); 3,55 (q, 2H, C₃-CH₂); 4,92 - 5,1 (m, 2H, CgH und CH der Seitenkette); 5,68 (q, 1H, C₇-H); 7,48 (m, 5H, Phenyl).

6 0 9 8 2 b / 1 0 1 3

C. Herstellung von 3-thiosubstituierten 3-CephemvgrDxriaungeTi

Beispiel 1

p-Nitrobenzyl-7-/2-(2-thienyl)-acetamido/-3-/(1-methyl-1H-tetra-

zol-5-yl) -thio_/-3-cephem-4-carboxylat

Eine Lösung von 4,9 g (10 mMol) p-Nitrobenzyl-7-/2-(2-thienyl)-acetamido/-3-chlor-3-cephem-4-carboxylat und 10 mMol 1-MethyliH-tetrazol-5-thiol in 60 ml Dimethylsulfoxid (mit Molekularsieb getrocknet) wird mit 4,16 g (40 mMol) Natriumbisulfit in vier gleichen Anteilen in Abständen von jeweils 1 Stunde versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 5 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt und dann unter Rühren in eine Mischung aus Wasser und Äthylacetat gegossen. Die organische Schicht wird abgetrennt, mehrere Male mit Wasser extrahiert, über Magnesiumsulfat getrocknet und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der amorphe Rückstand wird mit Diäthyläther verrieben und an einer mit Kieselsäuregel gefüllten Säule chromatographiert. Das eluierte

2 Reaktionsprodukt ist ein Gemisch aus der gebildeten Delta und Delta -Cephemverbindung und etwas nicht umgesetzem Ausgangsmaterial .

1 g (1,75 mMol) dieser Mischung, p-Nitrobenzyl-7-/2-(2-Thienyl)-acetamido/-3-/(1-methyl-iH-tetrazol-5-yl-thiol./-2- und 3-cephem-4-carboxylat, werden in 60 ml Isopropanol und 1O ml Methylenchlorid suspendiert. Die Suspension wird in einem Eis-Wasser-Bad gekühlt und mit 370 mg (2,1 mMol) m-Chlorperbenzoesäure versetzt. Das Reaktionsgemisch wird 3 Stunden in der Kälte und dann etwa 2 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt. Anschließend wird es im Vakuum zur Trockne eingedampft, und der Rückstand wird in einer Mischung aus Äthylacetat und Wasser gelöst. Die organische Schicht wird abgetrennt, mit Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Der amorphe Rückstand wird mit Diäthyläther verrieben, wodurch man kristallines

6 0 9 8 2 5/1013

p-Nitrobenzyl-7-/2-(2-thienyl)acetamido/-3-Al-methyl-1H-tetrazol-5-yl)-thioZ-S-cephem-^-carboxylatsulfoxid erhält. Ausbeute 1 g .

Elementaranalyse, C₂₂H₁QN₇O₇S-:

berechnet: C 44,82; H 3,25; N 16,63; S 16,31; gefunden: C 44,68; H 3,04; N 16,41; S 16,57.

1 g (1,7 mMol) dieses Sulfoxid-3-cephem-p-nitrobenzylesters wird in 10 ml trockenem Dimethylformamid (Molekularsieb) gelöst und in einem Eis-Wasser-Bad gekühlt. Zu der kalten Lösung gibt man unter Rühren 700 mg (5,1 mMol) Phosphortrichlorid. Die Mischung wird 15 Minuten gerührt und dann in eine Mischung aus Äthylacetat und Wasser gegossen. Die organische Phase wird abgetrennt, mehrere Male mit Wasser gewaschen, getrocknet und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Man erhält so 800 mg (Ausbeute 82 %) des Sulfoxidreduktionsprodukts p-Nitrobenzyl-7-/2-(2-thienyl) -acetamidoZ-S-^O-methyl-IH zol-5-yl) -thio_/-3-cephem-4-carboxylat.

NMR (CDCl₃) Signale bei 6,4 (ABq, 2H, C₂-H), 6,09 (s, 2H, alphaCH₂), 5,88 (s, 3H Tetra-ZOl CH₃), '4,86 (d, 1H, Cg-H), 4,55 (s, 2H, Ester CH₂), 4,08 (q, 1H, C₇-H) und 3,05 - 1,62 (m, 7H, aromatisches H) tau.

Beispiel 2

7-/2-(2-Thienyl)-acetamido/-3-/;(1-methyl-1H-tetrazol-5-yl)

thio/-3-cephem-4-carbonsäure

Eine Lösung von 500 mg (0,87 mMol) p-Nitrobenzyl~7-/2-(2-thienyl) -acetamido/-3-/(1 -methyl-1H-tetrazol-5-yl) -thioZ-S-cephem-4-carboxylat in 5 ml Tetrahydrofuran und 75 ml Methanol wird

60982b/10 13

mit 500 mg 5 % Palladium-auf-Kohle versetzt. Der Katalysator wird in 15 ml Äthylalkohol unter einem Wasserstoffdruck von 3,5 kg/cm 30 Minuten bei Zimmertemperatur vorreduziert.

Das Gemisch.wird bei Zimmertemperatur 1 Stunde bei einem Wasserstoffdruck von 3,5 kg/cm hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert und auf dem Filter mit Tetrahydrofuran und Methanol gewaschen, worauf die Waschflüssigkeiten mit dem Filtrat vereinigt werden. Nach Eindampfen im Vakuum zur Trockne wird der Rückstand in einer Mischung aus Äthylacetat und Wasser gelöst. Der pH-Wert der Mischung wird mit 1n Natriumhydroxid auf 6,7 eingestellt und die wässrige Schicht wird abgetrennt und mit Äthylacetat gewaschen. Die wässrige Schicht wird mit Äthylacetat beschichtet und mit 1n Salzsäure auf pH 2,5 angesäuert. Die Äthylacetatschicht wird abgetrennt, mit Wasser gewaschen, getrocknet, und im Vakuuum zur Trockne eingedampft. Der Rückstand wird mit Diäthylather verrieben und im Vakuum getrocknet. Man erhält 180 mg (Ausbeute 46 %) 7-/2-(2-Thienyl)-acetamido/-3-/(1-methyl-1H-tetrazol-5-yl)-thio/-3-cephem-4-carbonsäure.

Bei einer Dünnschichtchromatographie mit Kieselsäuregel und Chloroform/Methanol (7:3 Volumen/Volumen) erweist sich das Produkt als ein Material das nur einen Flecken gibt.

Die elektrometrische Titration des Produkts in Wasser ergibt eine titrierbare Gruppe mit einem pKa-Wert von 3,5.

Das UV-Absorptionsspektrum zeigt Maxima bei 270 m,u (epsilon =7400) und 233 m,u (epsilon 12 200).

Elementaranalyse, ^ci5^Hi4^N6°4^Soi

berechnet: C 41,09; H 3,22; N 19,17; gefunden: C 40,84; H 3,44; N 19,09.

6098 2 b/ 101 3

Beispiel 3

p-Nitrobenzyl-7-/D-2-(tert.-butyloxycarbamido)-2-phenylacetamido/-3-(5-methyl-1 ,3,4-thiadiazol-2-yl)-thio3₁/-3-(und-2-) cephem-4-carboxylat

Zu einer Lösung von 6 g (10 mMol) p-Nitrobenzyl-7-/^D-2-(tert.-butoxycarbamido) ^-phenylacetamido/^-chlor-S-cephem^-car*" boxylat und 5,3 g (40 mMol) 5-Methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl~ thiol in 60 ml molekularsiebgetrocknetem Dimethylsulfoxid werden 4,16 g (40 mMol) Natriumbisulfit in 4 gleichen Teilen in Abständen von je einer Stunde gegeben. Das Reaktionsgemisch wird 5 Stunden gerührt und dann in eine Mischung aus Äthylacetat und Wasser gegossen. Die organische Phase wird abgetrennt, mit Wasser gewaschen, getrocknet und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Das Rohprodukt wird durch Umkristallisieren aus einer Mischung von 100 ml Äthylacetat, 200 ml Diäthyläther und 100 ml Petroläthern (Skellysolve B) gereinigt. Man erhält 3 g (Ausbeute 43 %) kristallines Produkt, das aus ein*
isomeren besteht.

2 3

dukt, das aus einer Mischung der Delta - und Delta -Cephem-

Elementaranalyse, ^C3o^H3o^N6°8^S3^:

berechnet: C 51,56; H 4,33; N 12,03; gefunden: C 51,36; H 4,51; N 11,75.

Beispiel 4

7-(D-Phenylglycylamido)-3-/(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl) thio/-3(-2)-cephem-4-carbonsäure

2g (2,9 mMol) p-Nitrobenzyl-7-/D-2-(tert.-butyloxycarbamido)-2-phenylacetamido/-3-/(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl)-thio/-3(-2)-cephem-4-carboxylat (wie im vorhergehenden Beispiel beschrieben hergestellt) werden in einer Mischung aus Methanol

609825/10 13

und Tetrahydrofuran in Gegenwart von vorreduzierter 5-prozentiger Palladiumkohle hydriert. Das Reduktionsgemisch wird abfiltriert, das Filtrat wird zur Trockne eingedampft und der Rückstand wird durch Verreiben mit Diäthyläther, der eine Spur Äthylformiat enthält, zur Kristallisation gebracht. Man erhält 821 mg (Ausbeute 51 %) der unveresterten 7-/D-2-(tert.-Butyloxycarbamido)-2-phenylacetamido/-3-/5-methyl-1,3)4-thiadiazol-2-yl)-thio/-3(-2)-cephem-4-carbonsäure.

Elementaranalyse, ^C23^H25^N5°6^S3^:

berechnet: C 49,01; H 4,47; N 12,42; S 17,07; gefunden: C 49,13; H 4,73; N 12,30; S 16,80.

Das Produkt wird in Acetonitril gelöst, das bezogen auf das Cephalosporin 2 Moläquivalente p-Toluolsulfonsäure enthält, und die Lösung wird bei Zimmertemperatur etwa 15 Stunden gerührt. Nach Verdünnen mit Wasser wird der pH-Wert der Mischung mit Triäthylamin auf etwa 5 eingestellt. Die gebildete 7-(D-Phenylglycylamido) -3-/^(5-methyl-1,3 ,4-thiadiazol-2-yl)-thio/-3-(2-)-cephem-4-carbonsäure fällt als kristalliner Feststoff aus.

Beispiel 5

p-Nitrobenzyl-7-/D-2-tert.-butyloxycarbamido)-2-phenylacetamido/-3-/^1-methyl-1H-tetrazol-5-yl)-thio/-3-cephem-4-carboxylat

Zu einer Lösung von 603 mg (1 mMol) p-Nitrobenzyl-7-/D-2-(tert.-butyloxycarbamido) ^-phenylacetamido/^-chlor-S-cephem-4-carboxylat und 464 mg (4 mMol) 1-Methyl-iH-tetrazol-5-ylthiol in 6 ml molekularsiebgetrockneten Dimethylsulfoxids werden 416 mg (4 mMol) Natriumbisulfit in 4 gleichen

609825/101 3

Anteilen in Abständen von je einer Stunde gegeben. Das Reaktionsgemisch wird 5 Stunden bei Zimmertemperatur gerührt und dann in eine Mischung aus Äthylacetat und Wasser gegossen. Die organische Phase wird abgetrennt,· mehrmals mit Wasser gewaschen, getrocknet und im Vakuum zur Trockne eingedampft. Der amorphe Rückstand kristallisiert beim Verreiben mit Diäthylather und man erhält 450 mg (Ausbeute 66 %) kristallines Produkt.

Das Infrarotspektrum des Produkts in Chloroform zeigt Absorptionsmaxima bei 2,93 (Amid NH), 5,59 (breit, ß-Lactam- und Estercarbonyl-Absorption) und 5,92 (breite Amid II-Bande) Mikron.

Das U. V.-Absorptionsspektrum des Produkts in Acetonitril zeigt ein Maximum bei 265 m,u (epsilon = 17 000).

Elemenataranalyse, ^C29^H3o^W8°8^S2^:

berechnet: C 51,02; H 4,43; N 16,41; gefunden: C 50,82; H 4,40; N 16,51 .

Beispiel 6

7-(D-Phenylglycylamido)-3-/(1-methyl-iH-tetrazol-5-yl)-thio/-3-cephem~4-carbonsäure

2 g (2,9 mMol)) des nach dem vorstehenden Beispiel erhaltenen Produkts werden in 150 ml Methylalkohol, der 10 ml Tetrahydrofuran enthält, gelöst und in Gegenwart von 2 g vorreduzierter 5-prozentiger Pallaliumkohle bei einem Wasserstoffdruck von 3,5 kg/cm hydriert. Der Katalysator wird abfiltriert und auf dem Filter mit Tetrahydrofuran und dann mit Methylalkohol gewaschen. Das mit den Waschflüssigkeiten vereinigte Filtrat wird im Vakuum zur Trockne

609825/1013

eingedampft, und der Rückstand wird in einer Äthylacetat-Wasser-Mischung gelöst. Der pH-Wert der Mischung wird mit 1n Natriumhydroxid auf etwa 7 eingestellt. Die wässrige Schicht wird abgetrennt, mit Äthylacetat gewaschen, mit neuem Äthylacetat beschichtet und mit In Salzsäure auf pH 1,5 angesäuert. Die Äthylacetatschicht wird abgetrennt, mit Wasser gewaschen, über Magnesiumsulfat getrocknet und zur Trockne eingedampft. Das rohe entesterte Produkt wird in einer Menge von 1,1 g (Ausbeute 68 %) aus Diäthylather, der eine Spur Äthylformiat enthält, in kristalliner Form erhalten.

Das UiV.'-«Absorptionsspektrum des Produkts in Acetonitril zeigt ein Maximum bei 28O m.u (epsilon =10 200).

Elemen.taranalyse _r C^-H-i-N^OgS^^/^H^O:

berechnet: C 47,19; H 4,71; N 17,62; gefunden: C 47,05; H 4,79; N 17,O3.

740 mg (1,46 mMol) der erhaltenen 7-/D-2-(tert.-Butyloxycarbamido) -2-phenylacetamido/-3-/^( 1 -methyl-iH-tetrazol-5-yl) thio/-3-cephem-4-carbonsäure werden in 14 ml Acetonitril, das 610 mg (3,2 mMol) p-Toluolsulfonsäure enthält, gelöst. Das Gemisch wird über Nacht bei Raumtemperatur gerührt und dann mit 1,4 ml Wasser verdünnt. Der pH-Wert der Lösung wird mit Triäthylamin auf 5 eingestellt. Die gebildete 7- (D-Phenylglycylamido) -3;-£(1 -methyl-iH-tetrazol-5-yl) thio/-3-cephem-4-carbonsäure fällt als weiße kristalline Festsubstanz aus. Das Produkt wird abfiltriert, mit Acetonitril gewaschen und im Vakuum getrocknet. Man erhält 440 mg Substanz (Ausbeute 65 %).

Die elektrometrische Titration des Produkts in 66-prozentigem Dimethylformamid zeigt das Vorliegen von zwei titrierbaren Gruppen mit pKa-Werten von 3,75 (COOH) und 7,0. Das aus den Titrationswerten errechnete Molekulargewicht beträgt 468. Das berechnete Molekulargewicht ist 466.

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Das UV-Absorptionsspektrum des Produkts in pH 6 Phosphatpuffer zeigt ein Maximum bei 275 m,u (epsilon = 8 900).

Das magnetische Kernresonanzspektrum (D₂O-DCl) zeigt Signale bei 6,70 (ABq, 2H, C₃-H₂), 5,91 (s, 3H, Tetrazol CH₃), 4,78 (d, 1H, Cg-H), 4,09 (d, 1H, C₇-H) und 2,36 (s, 5H, aromatisches H) .

Elementaranalyse, C₁₇H-QN₇OcS-:

berechnet: C 43,86; H 4,11; N 21,06; S 13,78; gefunden: C 43,65; H 3,89; N 20,78; S 13,52.

Beispiel 7

p-Nitrobenzyl-7-/_2-(2-thienyl) -acetamidoZ-S-methylthio-S-cephem-4 -carboxylat

Eine Lösung von 157 mg (0,2 5 mMol) p-Nitrobenzyl-7-£2-(2-thienyl)-acetamido/-3-p-toluolsulfonyloxy-3-cephem-4-carboxylat in 8 ml Dimethylformamid wird in einem Acetonitril-Trockeneisbad auf etwa -41 ⁰C abgekühlt und in eine bei einer Temperatur von etwa -45 ⁰C gehaltene Lösung von 0,014 ml (0,25 mMol) Methylmercaptan in 4 ml Dimethylformamid, das 12 mg Natriumhydrid enthält, gegossen. Das Reaktionsgemisch wird 1,5 Stunden gerührt und mit 1 ml Eisessig versetzt. Der durch Eindampfen des Reaktionsgemische erhaltene Rückstand wird mit Äthylacetat extrahiert. Der Extrakt wird mit einer gesättigten Natriumchloridlösung und mit 5-prozentiger Salzsäure gewaschen. Der gewaschene Extrakt wird über Magnesiumsulfat getrocknet und dann zur Trockne eingedampft. Das hinterbleibende öl wird über Nacht im Vakuum getrocknet, und der gebildete gelbe Niederschlag wird abfiltriert. Man erhält so 180 mg Rohprodukt, das durch präparative Dünnschichtchromatographie an mit Kieselsäuregel überzogenen Platten

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gereinigt wird. Das Rohprodukt wird als Lösung- in Chloroform auf die Platten aufgetragen und die Platten werden mit einer 7:3 (Volumen/Volumen)-Mischung von Benzol mit Äthylacetat entwickelt.

Beispiel 8

p-Nitrobenzyl-7-£2-(2-thienyl)-acetamidcy-S-phenylthio-B-cephem-4-carboxylat

Zu 6 ml trockenem Dimethylformamid mit einem Gehalt von 12 mg Natriumhydrid werden 0,026 ml Thiophenol gegeben und die erhaltene Lösung wird auf etwa -41 ⁰C abgekühlt. Die kalte Lösung wird mit einer Lösung von 123 mg p-Nitrobenzyl-7-/2-(2-thienyl)-acetamido/-3-chlor-3-cephem-4-carboxylat in 6 ml Dimethylformamid von -41 ⁰C versetzt. Das Reaktionsgemisch wird in der Kälte 2,5 Stunden gerührt und dann in 200 ml Äthylacetat gegossen. Die Lösung wird mit 5-prozentiger Salzsäure und Salzlösung gewaschen und über Magnesiumsulfat getrocknet. Durch Eindampfen der getrocknenten Äthylacetatlösung zur Trockne erhält man 141 mg Rohprodukt, das durch präparative Dünnschichtchromatographie an Kieselsäuregelplatten, die mit Benzol/Äthylacetat (7:3, Volumen/Volumen) entwickelt werden, gereinigt wird. Das Produkt wird aus den Chromatogrammen mit einer Mischung aus Chloroform, Äthylacetat und Essigsäureanhydrid extrahiert. Durch Filtrieren und Eindampfen des Extrakts erhält man 50 mg des gereinigten Produkts.

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-5O-

Beispiel 9

p-Nitrobenzyl-7-72- (2-thienyl) -acetamido/-^- (4-tert.-butylphenylthio)-3-cephein-4-carboxylat

Nach der im vorhergehenden Beispiel für die Herstellung des S-Phenylthio-S-cephemesters beschriebenen Arbeitsweise werden 123 mg p-Nitrobenzyl-7-/2-(2-thienyl)-acetamido/-3-chlor-3-cephem-4-carboxylat bei -41 ⁰C 2 Stunden mit 4-tert.-Butylthiophenol in Dimethylformamid mit einem Gehalt an Natriumhydrid umgesetzt/ wodurch man 205 mg rohes p-Nitrobenzyl-7-/2-(2-thienyl) -acetamido/^-(4-tert.-butylphenylthio) -3-cephem-4-carboxylat erhält, das durch das 3-Chlor-3-cephem-Ausgangsmaterial und 4-tert.-Butylthiophenol verunreinigt ist. 195 mg dieses Rohprodukts werden durch präparative Dünnschichtchromatographie an mit Kieselsäuregel beschichteten Platten gereinigt, die mit Benzol/Äthylacetat (7:3, Volumen/ Volumen) entwickelt werden. Man erhält 76 mg Substanz. Das magnetische Kernresonanzspektrum in deuteriertem Chloroform und das Infrarotabsoprtionsspektrum des gereinigten Produkts steht im Einklang mit seiner Struktur. Das Massenspektrum des gereinigten Produkts ergibt ein Stammion bei 623 m/e.

Beispiel 10

p-Nitrobenzyl-7-/2- (2-thienyl) -acetamido/-3-(4-f luorphenylthio) 3-cephem-4-carboxylat

Unter Anwendung der im vorstehenden Beispiel beschriebenen Reaktionsbedingungen, Reagentien und Lösungsmittel werden 123 mg des 3-Chlor-3-cephemesters mit 32 mg 4-Fluorthiophenol umgesetzt, wodurch 143 mg Rohprodukt erhalten werden. Dieses Rohprodukt wird durch präparative Dünnschichtchromatographie an Kieselsäuregel gereinigt, das mit Benzol/Sthylacetat (7:3, Volumen/Volumen) gereinigt wird. Das abgetrennte Produkt wird aus dem Kieselsäuregel mit Essigsäure extrahiert, wodurch 56 mg gereinigtes Produkt erhalten werden. Das Massenspektrum des Produkts zeigt ein Staramion bei 585 m/e.

609825/1013

Claims (9)

1. Patentansprüche

   3-Thiosubstituierte Cephalosporxnverbindungen der Formel I

   ¹t

   worin bedeuten:

   R Wasserstoff oder eine von einer Carbonsäure abgeleitete Acylgruppe der Formel

   Il

   R¹-C- ,

   worin R¹ für Cj-Cg-Alkyl, Cj-C-j-Halogenalkyl, C₁-C₃-Cyanalkyl, Phenyl, Methy!phenyl, Hydroxyphenyl, Halogenphenyl, Nitrophenyl, Aminophenl und Methoxyphenyl steht,

   oder eine Gruppe der Formel

   in der a und a¹, die untereinander gleich oder voneinander verschieden sein können, Wasserstoff, niedere Alkylreste mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, niedere Alkoxyreste mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen, Halogen, Hydroxylgruppen, Nitrogruppen, Aminogruppen oder Carboxygruppen, Z Sauerstoff oder Schwefel und m 0 oder 1 bedeuten,

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   oder eine Gruppe der Formel

   P-CH- ,

   P eine 2-Thienyl- oder 3-Thieny!gruppe oder eine gegebenenfalls substituierte Phenylgruppe der Formel

   darstellt, worin a und a¹ die oben angegebenen Bedeutungen haben, und

   Q für eine Hydroxyl-, Formyloxy-, Acetoxy-, Carboxy-, Sulfo- oder Aminogruppe oder eine durch tert.-Butyloxycarbonyl, 2,2,2-Trichloräthoxycarbonyl oder die Gruppe der Formel

   H
   -C=C-COOCH-

   ι -J

   ^CH3
   geschützte Aminogruppe steht,

   oder eine Gruppe der Formel

   worin R" für eine 2-Thienyl-, 3-Thienyl-, 2-Furyl-, 2-Oxazyl-, 2-Thiazyl- oder 1-Tetrazylgruppe steht;

   Wasserstoff, Benzyl, 4-Methoxybenzyl, 4-Nitrobenzyl, Dxphenylmethyl, 2,2,2-Trichloräthyl oder tert.-Butyl;

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   C.-C.-Alkyl, Phenyl oder substituiertes Phenyl der Formel

   t— ;

   worin a und a¹ die oben angegebenen Bedeutungen haben,

   oder einen heterocyclischen Substituenten der Formel

   w N oder N N

   —· »-R —·ν β

   worin R_ für einen Alkylrest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen steht;

   und die pharmazeutisch annehmbaren nichttoxischen Salze der Verbindungen, in deren Formel R₁ Wasserstoff bedeutet.

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2. 2. Verbindung nach Anspruch 1, in deren Formel R¹ eine Gruppe der Formel

   >—(Z) -CH / m 2

   a¹

   bedeutet.
3. 3. Verbindung nach Anspruch 1, in deren Formel R¹ eine Gruppe der Formel

   R"-CH₂-

   bedeutet.
4. 4. Verbindung nach Anspruch 1 oder 3, in deren Formel R" einen 2-Thienylrest und -S-R₂ einen Alkylthiorest mit 1 bis 4 Kohlenstoffatomen oder einen 5-Methyl-1,3,4-thiazol-2-ylthio-, 5-Methyl-1_/3_/4-oxadiazol-2-ylthio- oder 1-MethyliH-tetrazol-5-ylthiorest bedeutet.
5. 5. Verbindung nach Anspruch 1, in deren Formel R' eine Gruppe der Formel

   P-CH-

   Q
   bedeutet.

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6. 6, Verbindung nach Anspruch 1 oder 5, in deren Formel P Phenyl oder substituiertes Phenyl bedeutet.
7. 7. Verbindung nach einem der Ansprüche 1, 5 oder 6, in deren Formel Q eine Aminogruppe oder eine durch tert, Butyloxycarbonyl, 2,2,2-Trichloräthoxycarbonyl oder

   -C=CH-COOCH-

   ι -

   CH₃

   geschützte Aminogruppe und -S-R₂ eine 5-Methyl-1,3,4-thiadiazol-2-ylthio-, 5-Methyl-1,3,4-oxadiazol-2-ylthio- oder 1-Methyl-1H-tetrazol-5-ylthiogruppe bedeutet.
8. 8. Als Verbindungen nach Anspruch 1:

   p-Nitrobenzyl-7-/2-(2-thienyl)-acetamido/-3-/(1-methyliH-tetrazoi-5-yl)-thio/-3-cephem-4-carboxylat

   7-/2-(2-Thienyl)-acetamido/-3-/(1-methyl-1H-tetrazol-5-yl)-thio/-3-cephem-4-carbonsäure

   p-Nitrobenzyl-7-/D-2-(tert.-butyloxycarbamido)-2-phenylacetamidoZ-S-ZCS-methyl-i,3,4-thiadiazol-2-yl)-thio/-3-cephem-4-carboxylat

   7-(D-Phenylglycylamido)-3-/(5-methyl-1,3,4-thiadiazol-2-yl) thio/-3-cephem-4-carbonsäure

   p-Nitrobenzyl-7-/D-2-(tert.-butyloxycarbamido)-2-phenylacetamidc_:/-3-/(1-methyl-iH-tetrazol-5-yl)-thio/-3-cephem- 4-carboxylat

   6 0 9 8 2 b / 1 Q 1 3

   7-(D-Phenylglycylamido)-3-/(1-methyl-1H-tetrazol-5-yl) thio/-3-cephem-4-carbonsäure

   p-Nitrobenzyl-7-/2-(2-thienyl)-acetamidoZ-S-methylthio-3-cephem-4-carboxylat

   7-/2-(2-Thienyl)-acetamidoZ-S-methylthio-S-cephem-4-carbonsäure

   p-Nitrobenzy1-7-/2-(2-thienyl)-acetamido/-3-phenylthio-3-cephem-4-carboxylat

   7-/2-(2-Thienyl)-acetamido/-3-phenylthio-3-cephem-4-carbonsaure

   p-Nitrobenzy1-7-/2-(2-thienyl)-acetamidoZ-S-(4-tert. butylphenylthio)-3-cephem-4-carboxylat

   7-/2-(2-Thienyl)-acetamidoZ-S-(4-tert.-butylphenylthio)-3-cephem-4-carbonsäure

   p-Nitrobenzyl-7-/2-(2-thienyl)-acetamido/-3-(4-fluor phenylthio/-3-cephem-4-carboxylat

   7-/2-(2-Thienyl)-acetamidoZ-S-(4-fluorphenylthio)-3-cephem-4-carbonsäure
9. 9. Verfahren zur Herstellung von 3-thiosubstituierten

   Cephalosporinverbindungen der Formel I in Anspruch 1, da durch gekennzeichnet, daß man eine Cephalosporinverbindung der Formel II

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   worin R die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat, R-eine esterbildende Carbonsäureschutzgruppe und A Chlor, Brom oder eine Gruppe der Formel -0-SO₃-W bedeutet, worin W für einen Alkylrest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen, einen Phenyl- oder Halogenphenylrest, einen Alkylphenylrest mit 1 bis 3 Kohlenstoffatomen in der Alkylgruppe oder einen Nitrophenylrest steht, mit einer Thiolverbindung der Formel HSR₂* worin R₂ die in Anspruch 1 angegebene Bedeutung hat, umsetzt, und gegebenenfalls die esterbildende Carbonsäureschutzgruppe unter Bildung der Verbindung, die als Rest R₁ Wasserstoff enthält, entfernt.

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