DE2643871A1 - Verfahren zur untersuchung enzymatischer und anderer biochemischer reaktionen - Google Patents
Verfahren zur untersuchung enzymatischer und anderer biochemischer reaktionenInfo
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Description
GLAWE, DELFS, MOLL & PARTNER PATENTANWÄLTE
DR.-ING. RICHARD GLAWE, MÖNCHEN
DIPL.-ING. KLAUS DELFS. HAMBURG DIPL.-PHYS. DR. WALTER MOLL, MÖNCHEN
AU Kabi , Lindhagensgatan 133, DIPL-CHEM-DR-ULRICHMENGDEHl1HAMBURG
104 25 Stockholm, Schweden
8 MÖNCHEN 26 2 HAMBURG
POSTFACH 37 POSTFACH 2570
LIEBHERRSTR 20 ROTHENBAUM-
LIEBHERRSTR. 20 CHAUSSEE 58
TEL. (089) 22 65 48 TEL. {040) 4 10 20
TELEX 52 25 05 TELEX 21 29 21
HAMBURG
M/Li/ad
ρ 8159/76
Veriahreii zur untersuchung, en/.ymatischer und anderer
biochemischer Ko ο Ic t ionen. _
Die Erl inJuiig oetriil t ein Veriahren zur Untersuchung
enzymatischer und anderer biochemischer Reaktionen, bei
denen die bubstanz, deren Aktivität oder Konzentration bestimmt werden soli, au. ein Tür die Liocheiiiische
Reaktion sye/ii isches SubaLrat einwirkt.
Das Verlahren der Eri indLirif, soli u. a. dazu dienen,
eiizymatische Aktivitäten zu bestininien, insbesondere
von Enzymen vom Typ der berinproLeasen (Thrombin, Plasmin,
Trypsin und der^l „ ) . liini^e dieser Enzyme regulieren die
IjIu t koagulation und Flbrinolyse, und Störungen, bei den
normalen Enzynunen^en verursachen pathologische Veränderungen,
beispielsweise ilaeniorrha^ien oder Thrombosen.
Das Veriahren der 1Ori"indunfc Kann auch zur Untersuchung
von immunologischen Reaktionen, ζ. i>. Antigen-Ant ikörper-Koppiun^en,
verwendet werden. Andere Systeme, die ebenialls
untei"suclit werden können, sind beispielsweise Inhibitor-Knzym-iiüpplungen,
Rezeptor-liorrnon-Kopplungen und
liezeptor-Steroid-lvupplungen.
709815/1QS3
Es ist bekannt, daß man enzymatisch^ Reaktionen mittels
"Enzymelectroden" untersuchen kann, bei denen die
Potentialdifferenz über für die Abfallprodukte der Reaktion
spezifischen Membranen gemessen wird, el". Gough D,A„ und
Andrade J.D0, Enzyme Electrodes, Science VoI9IOO9 S. 380-384,
Für die Untersuchung immunologischer Reaktionen ist es bekannt, daß man mit Nickel metallisierte Glasplatten
verwenden kann, auf denen eine Oberflächenschicht von
Antigenen adsorbiert ist. ^enn die Glasplatte "in eine
Antikörper enthaltende Lösung getaucht wird, findet eine Kopplung zwischen den Antigenen und den Antikörpern statt,
so daß sich die Schichtdicke vergrößert. Die Kopplung1
wird bestimmt, indem man die Sciiichtdicke auf optischem
Wege mittels eines Ellipsometers mißt, cf„ Rothen A00
Immunologie and enzymatic reactions carried out at a
solid-liquid interface, Physiol „Chenioa Physics 5s 1973°
Es ist auch bekannt, die enzymatisch^ Aktivität mittels
einer Konductometrischen Methode zu bestimmen, of, 4,
Lawrence A.J0 und Moores G0R0, Coductometry in Enzyme
Studies, Eur. J.. -JiIo ehem. 24 (1972), S „ 538-546„
Es ist weiterhin bekannt, daß organische Molekül© auf Electrodenoberflächen adsorbiert werden können und di©
elektrischen Eigenschaften der Electroden veräKü.d©5ras
cf. Bockris Jo0'M„ und Keddy A.KJ., Modem Electro=
chemistryj Plenum Press, Vol. 2, Kap« 7«
Ss sind auch spezielle Substrate mit hoher Empfindlich=
keit. gegenüber den fraglichen Enzymen entwickelt t'/ordaxij,
insbesondere vom 'i'yp der Amidsubstrate „ Diese h©±s©is di©
109815/10
Eigenschaft auf, dal.i sie in Gegenwart des Eiiayms unter
Bildung von ahroiiioijhoren Produkten hydrolysiert werden
können. Die auftretende Farbänderung kann in leicliter
Iseise spektraxjhotonie krisch bestimmt werden, beispielsweise
mittels eines optischen Absorp tionsspektronieters.
Ein Substrat, das für die optische bestimmung von enzymatisciien
Aktivitäten verwendbar ist und klinische Untersuchungen, beispielsweise bezüglich der Antithrombin
und Prothrombinmengen erI eichtert, ist in der US-PS 3 88A-beschrieben.
Ein Nachteil der optischen t-ie;.'iiüethode ist dadurch begründet,
daß eine ziemlich komplizierte und teure apparative Vorrichtung und eine erhebliche Substratmenge
Tür das Meßverlahren erforderlich ist. Weiterhin ist es
nicht möglich, die enzymatiscne Aktivität im Blut infolge der Trübung desselben direkt zu bestimmen, Statt dessen
muß mit A1IaSrHa (bei entfernten roten Blutkörperchen) oder
Serum (bei ebenfalls entfernten Fibrinogen.) gearbeitet werden.
Die Erfindung ist auf ein einfaches Verfahren gerichtet,
durch das die oben genannten Nachteile vermieden werden. Das Verfahren, der Erfindung ist im xiresentliciien dadurch
gekennzeichnett daß man zunächst die Kapazität zwischen
zwei Elektroden in Gegenwart lediglich des Substrats und
anschließend die Kapazität in Anwesenheit der Substanz,
deren Aktivität oder Konzt-ntration bestimmt werden soll,
mißts wobei die Kapazitätsänderung pro Zeiteinheit oder
die Gesanitkapazitätsünderung ein Maß für die Aktivität
oder Konzentration der Substanz darstellt»
Im folgenden wird das Verfahren der Erfindung näSiez" erläutex*t5
wobei auf die Zeichnungen Bezug genoiBHien wird.
Es zeigens
Figur 1 eine elektrische Meßvorrichtung zur Meßung der Kapazität zwischen den Ele^troden^
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264387 ϊ
-ir- >
Figur 2 ein vereiiiraciites äquivalentes Schaltdiagramm
für die Meßeinrichtung,,
Figur 3 eine Kurve der gemessenen Kapazität in Abhängigkeit
von der Zeit bei zugegebenem Suustrat,
Figur- h eine scliematische Darstellung des Verfahrens
zur Bestimmung der enzymatisehen Aktivität,
Figur 5 eine Kurve der Bedeckung der adsorbierten
Substratmoleküle (-\-1/C ) als Funktion der
Substratkonzentration xn der Lösungs
Figur 6 eine schematische Darstellung des Verfahrens
bei der Untersuchung immunologische!* Reaktionen
und
Figur 7 eine schematische Ansicht des Verfahrens bei
der Untersucimiig einer biochemischen Reaktion.t
bei der das Substrat in der umgebenden Lösung 1 beeinflusst wird.
Eine erste Ausfuhrungsi'orm des Veriahrens der Erfindung
■wird im Zusanirneniiang mit de j Bestimmung der enzpaatischen
Aktivität von Serinpro teasen beschrieben» Das Veri'alxren
beruht aui der Tatsache, daL das verwendete Substrat die Eigenschaft zeigt, au! einer metallischen Oberfläche adsorbiert
und in Gegenwart der fraglichen Enzyme desorbiert zu werden«
In Figur 1 ist eine i-iel.ivorrichfri.ing gezeigt, durch die die
¥echse1spannungs-Impedanz zwischen zwei in eine Lösung
eintauchenden Platin-Elektroden 2, '.. gemessen vird, Di©
Meßvorrichtung umfaßt eine Impedanzbrücke 1, einen Signal= generator j und einen Verstärker mit einem NuI!detektor*
Zu Beginn enthält die Meßvorrichtung lediglich eins Puffer= lösung mit einem pH-Wert von 8P2 und einer lonenkonsentration
von 0,15· hei diesem pll-toert und dieser Ionenstärke weisen
die hier untersuchten Enzyme eine optimale Aktivität auf.
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Eine hohe loneiikün/ejitration führt zu Auswirkungen au! die
Elektrodenpol arisierunt;, wenn die Messung bei relativ
niedrigen Frequenzen (1 Ui >
kiiz in diesem Falle) ausgewertet wird. Der Keihenwj· rstand R wird durch die
Leitfähigkeit aes Elektrolyts und die Kapazität C hauptsächlich durch die Elektroderipolarisierung und
eine ggf. adsorbierte jMolekülschiclit be s ti nun i .
Wie aus Figur 1 ersichtlich ist die Kerbvorrichtung so
eingeschlossen, daß sie einen der Abzweigungen der Impedanzbrücke
darstellt.
kenn nun eine kleine Menge des Polypeptidsubstrats
des in der US-PS '_, öoh byo genannten Typs zu der Pufferlösung
zugegeben wird, ändert sicli die gemessene Kapazität
C in Abhängigkeit von der Zeit gemäß Figur 3·
Die Kapazität C verringert sich in Abhängigkeit von der Zeit, wie aus Kurve a in Figur 'j ersichtlich ist,
und zwar in Abhängigkeit von dem Umstand, daß Polypeptidmoleküle
aul den iiMektroüeuoberilächen adsorbiert
werden. Allmählich bildet sich ein Gleichgewicht zwischen
den Polypeptidmoleküleri In der Lösung und den aul' den
Klektroderioberflächen adsorbierten Molekülen. Vermutlich
wird dabei eine morioniolekulare Schicht von Substratmolekülen
aui UBn. Elektrodenoberflachen adsorbiert.
Wenn nun eine Enzym!ösurig, die das Polypeptid abspalten
kann, am Punkt A der Figur '3 zugesetzt wird, ändert sich die gemessene Kapazität C erneut. Die Kapazität C steigt
S S
und erreicht erneut ihren ursprünglichen Ivert, wie aus
Kurve b der Figur 3 ersichtlich ist. Die Kapazitätsänderung hängt im wesentlichen von der Tatsache ab, daß das zugesetzte
Enzym auf das adsorbierte Polypeptid einwirkt. ■
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Das zugesetzte Enzym kann beispielsweise Thrombin, Trypsin oder Plasmin (Serinproteasen) sein, die das Polypeptide
substrat hydrolysieren, wobei die adsorbierten Moleküle vollständig oder teilweise gelöst oder "verbraucht" werden,
so daß sich die Kapazität der Meßvorrichtung ändert.
Die Änderung· der Kapazität pro Zeiteinheit, d. h. die AnfangsSteigung der Kurve b der Figur 3» ist ein Maß für
die enzymatisch© Aktivität.
Die Meßvorrichtung kann mittels einer bekannten Enzynimenge
geeicht werden. Die Eichkurve kann dann bei der Messung einer Lösung mit einem unbekannten Gehalt an Enzym verwendet
werden. Bei der Messung in Blutplasma ist dann die Menge an Antienzym von Interesse. Die genannte Mengs
kann bestimmt werfen, indem man eine bekannte Enzymmeng® zu dem Blutplasma hinzufügt. Nach einigen Minuten, wenn
das Antienzym inhibiert \\rorden ist, kann die verbleibende
Enzymmenge bestimmt werden. Venn man dieses Verfahren für zwei verschiedene Enzyme oder Plasmamengen auswertet,
kaiin die ursprüngliche Antienzymmenge extrapoliert werden.
Das im folgenden beschriebene Verfahren zur Bestimmung
der enzymatischen Aktivität wird schematisch in Figur h
erläutert, wobei Figur h a die Meßeinrichtung mit den in die Substratlösung· eintauchenden Elektroden zeigt,
und wobei die Substratmoleküle S zwischen Molekülen ±n der Lösung und auf den Elektrodenoberflächen adsorbierten
Molekülen verteilt sind. Bei niedrigen Konzentrationen wird das Verhältnis zwischen diesen konstant gehalten»
Wenn die Konzentration ansteigt, werden die Elektrodenoberflächen allmählich aufgelullt und ein immer kleiner
werdender Teil der zugesetzten Moleküle werden adsorbiert
werden. In Figur 5 zeigt ein Diagramm die Dicke des*
Schicht bei verschiedenen Konzentrationen des Polypeptide
Substrats (die Menge an Polypeptid einer Konzentration von T mM in 0,5 ml Pufferlösung). Das Diagramm zeigt,
daß bei hohen Peptidkonzentrationen vermutlich eine
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Monoschicht von Peptidmolekülen adsorbiert wird. Eine
weitere Zugabe von Substrat steigert dann lediglich, die Anzahl der Moleküle in der Lösung.
Wenn nun:.gemäß Figur h b ein Enzym zugesetzt wird, beeinflussen
die Enzymnioleküle E die Moleküle in der
Lösung sowie die adsorbierten Moleküle. In Figur h c
ist gezeigt, wie sich die Reihenkapazität C in Abhängigkeit
von der Zeit ändert, wenn Substratmoleküle S und anschließend Enzymmoleküle E zugegeben werden.
Da die Meßeinrichtung lediglich Änderungen in der Anzahl
der adsorbierten Moleküle mißt, ist es erwünscht, daß die Auswirkungen aui" die adsorbierten Moleküle so
groß wie möglich sind. Ein Empfindlichkeitsoptimum ist daher in Gegenwart einer bestimmten Menge des
zugegebenen Peptids zu erwarten. Bei einer niedrigen
Peptidkonzentration liegt ein Empfindlxchkeitsverlust
vor, da die EIeJstrodenoberflachen einen geringen Füllungswirkungsgrad aufweisen, und bei hohen Konzentrationen
beeinflusst der grüßte Teil des zugesetzten Enzyms die
Moleküle in der Lösung.
Die Messungen zeigen ebenfalls, daß eine derartiges Optimum existiert.
In dem soeben beschriebenen .Beispiel besteht das Substrat
aus einem l'olypeptid des in der US-PS 3 884 896 beschriebenen
Typs, d. h. mit einer Empfindlichkeit gegenüber
Thrombin und anderen proteolytischen Enzymen vom Typ
der Peptid-peptidolr> drolasen. Das verwendete Substrat
wird in Gegenwart des hier vorliegenden Enzyms hydrolysiert und bildet ein Produkt, das spectiophotometrisch gemessen
werden kann. Das verwendete Substrat ist keinesfalls für die hier beschriebene elektrische Bestimmung optimal, die
Hauptsache ist, daß das Substrat fest bzw. gründlich an den Elektroden haftet und das ein signifikanter Teil bei
der enzymatrischen Hydrolyse gelöst wird, wodurch, eine signifikante Änderung der Kapazität der Metallelektroden
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erzielt wird. Das Suustrat soll daher in einer solchen
\veise halten, d.aü die "sensitive" Bindung Tür das
Enzym zugänglich ist. Experimente haben gezeigt, daß das Substrat die Oberfläche nicht vollständig absättigen
soll, luu einen optiualen Avirkurigsgrad der
Messung zu erreichen. In dem beschriebenen Beispiel ist das Substrat ebenfalls zu der Pufferlösung in der
Mei3vorrichtung gegeben worden, wonach das Substrat an Metallelektroden adsorbiert wurde. Gemäß einer Alternative
kann man die EIe kfcroden vor der Messung mit einer Substratschicht ausrüsten, d. h. vorbereitete
Elektroden \'erwendeji, und die resultierende Änderung
der Kapazität beim Eintauchen dieser EIeKroden in die
fragliche Enzymlösung untersuchen. Dementsprechend
ist es nicht erforderlich, daß das Substrat an der Metallelektrode adsorbiert wird; das Subsfcat kann
beispielsweise chemisch an der Elektrodenoberfläche gebunden sein, vorausgesetzt, daß die Substratmoleküle
derartige Eigenschaften aufweisen, dass die "sensitive11
Bindung dem Enzym zugänglich ist und dass ein Teil oder die Gesamtheit der Substrcitnioleküle abgelöst werden
j wenn das Enzym auf das Molekül einwirkt.
Figur 6 zeigt ein Beispiel, in dem die Meßeinrichtung
zur Untersuchung einer immunologischen Reaktion vom Typ der Antigen-Antikörper-Lirulung verwendet wird.
In Übereinstimmung mit dem soeben beschriebenen Beispiel
wird die Kapazität zwischen 2 Elektroden, 3 mittels einer Iiiipedanzbrücke 1 , die die gleichen
konstruktiven Merkmale wie die der Figur 1 aufweist„
gemessen. Die Elektrodenoberflächen werden entweder von- Anfang an mit Antigenen ausgerüstet oder die Elektroden
sind in eine Lösung mit Antigenen eingetaucht worden,
• β · y
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- r- to
\iobei Antigene auf den Elektrodenoberflächen adsorbiert
wurden Lind die Kapazität Tür diesen Fall bestimmt wurde. Dann werden die Elektroden in die Antikörper enthaltende
Lösung eingetaucht, wodurch die Antikörper an die adsorbierten
Antigene gebunden werden, so dai3 die Schicht
auf den Elektrouenober!'lachen dicker wird, d. h. die
Kapazität C sich verringert, Figur 0 a zeigt die in
eine Pufferlösung 'l eintauchenden Elektroden. Wenn Antigemuüleküle
·( mit b be/uiclmet) zugesetzt werden, tritt
eine Adsorption von Antigeniriolekülen auf der Elektrodenoberriäche
aal', bis schließlich ein Gleichgewicht zwischen Antigenen in der Lösung und aui der Elektrodenoberfläche
adsorbierten Antigenen gehalten wird, wie aus Figur 6 b
ersichtlich ist. In Figur ο c \>ird schließlich das Ver-Xaiii
- ι zur Zugabe von Antikörpern E zu der Lösung illustrier t. Einige der Antikörper werden an Antigene in der
Lösung und einige an Antigene aiu uen EIe ktrodenoberflächen
gebunden, selbst hier tritt schließlich ein
Gleichgewicht ein, vie aus Kurve ύ d ersichtlich ist, welche die lieihenkapazi tat C zwischen den Elektrodenoberflächen
als funktion der Zeit bei der Zugabe von Antigenen (b) und Antikörpern (e) erläutert. Die Anfangsteigung
uer Kur\e nach der Zugabe der Antikörper (e) wird durch die Konzentration der Antikörper bestimmt,
wodurch ein quantitatives WaJl hierfür erhalten wird. Eine quantitative I-iesoun;; der Antikörperkonzeiitration
kann auch aus der Ge.\>am^kapazitätsänderung bei der
Antikörperzugabe augeleitet werden.
In dem folgenuen Uej spiel bestehe das sx>ezifische Substrat
aus Antigenen, deren Moleküle die Eigenschaft zeigen müssen, an den Elektroden so anzuhaften, daß
die Antikörpermoleküle an die Aatigemuoleküle gebunden'
werden können. Weiterhin soll die gebildete Antigen-Antikürper-Schiclit
ah der Elektrode ausreichend festgehalten werden, i'.enn der An ti gen-An Lxkürper-Komplex von
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der Elektrodenoberfläche gelöst wird, arbeitet dieses Verfahren gemäß dem zuvor erläuterten Beispiel.
Selbst für die Antikörper-Messung existiert eine optimale
Antigen-Konzentration in Abhängigkeit von dem Gleichgewicht,
das sich zwischen Antigenen in der Lösung und Antigenen auf der Elektrodenoberfläche ausbildet. Es
bildet sich sogar ein Gleichgewicht zwischen freien und gebundenen Antigen- bzw. Antikörper-Molekülen aus.
Falls die zu untersuchende Substanz lediglich auf das Substrat in der Lösung wirkt, wird das Verfahren in
der folgenden Weise durchgerührt.
Wenn man zu der Lösung in der Meßeinrichtung eine Substanz
gibt, die lediglich auf das Substrat in der Lösung wirkt, sj-iikt die Konzentration der Substratmoleküle.
Um das Gleichgewicht zwischen Substrat in der Lösung
und-adsorbiertem Substrat wiederherzustellen, wird adsorbiertes Substrat von der Elektrodenoberfläche gelöst.
Dies führt zu einer Verringerung der Schicht auf der Elektrodenoberflache und zu einer Zunahme der Kapazität
C , wie aus Figur '}'d ersichtlich ist. Die Kapazitätsänderung
pro Zeiteinheit, der Anstieg der Kurve bei Zugabe der hier in Hede stehenden Substanz, wird
durch die Substanzkonzentration bestimmt, wodurch eine diesbezügliche quantitative Messung erhalten wird*
Das gleiche gilt für die Gesamtkapazitätsänderung (nach einem längeren Zeitraum), die dementsprechend
als Maß für die Konzentration oder Aktivität der fraglichen Substanz verwendet werden kann.
In vielen Fällen wirkt die zugegebene Substanz sowohl auf das Substrat in der Lösung und das Substrat auf den
Elektroden. Die Kapazitätsänderung hängt dann von zwei Verfahren ab, ist jedoch immer noch ein quantitatives
Maß Tür die Konzentration oder Aktivität der zugesetzten
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.. .11
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Substanz.
In den vorstehend beschriebenen Beispielen wurden
Platinelektroden verwendet. Als Elektrodenmaterialien
können jedoch auch andere Metalle verwendet werden. Metalle wie Kupfer, Silber, Molybdän,Titan, Gold, Palladium
und Nickel/Chrom haben sich als ebenso gute Elektrodenmaterialien erwiesen. Es künn%!jedoch auch andere Elektrodenarten,
z.B. ilalbleiterelektroden, verwendet
werden. Für die Beispiele gilt weiterhin, daß die Impedanzbrücke vorzugsweise mit Ableitungen ausgerüstet
werden kann, die die Kapazitätsänderung pro Zeiteinheit ("momentane Enzymaktivität") und Gesamtkapazitätsänderung
("integrierte Enzymaktivität11) Tür die .Fragliche
Probe erkennen lassen.
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JS
Leerseite
Claims (10)
1. Verfahren zur Untersuchung enzymatischer und anderer
biochemischer Reaktionen, bei denen eine Substanz, deren Aktivität und/oder Konzentration bestimmt
werden soll, auf ein für die Reaktion spezifisches Substrat einwirkt, dadurch gekennzeichnet, daß man in einer mit dem Substrat beschichtete Elektrode
enthaltenden Meßvorrichtung die Kapazität als Kontrollwert bestimmt und danach die Substanz in die
Meßvorrichtung einbringt sowie die Kapazitätsänderung mißt.
werden soll, auf ein für die Reaktion spezifisches Substrat einwirkt, dadurch gekennzeichnet, daß man in einer mit dem Substrat beschichtete Elektrode
enthaltenden Meßvorrichtung die Kapazität als Kontrollwert bestimmt und danach die Substanz in die
Meßvorrichtung einbringt sowie die Kapazitätsänderung mißt.
2. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß die Substratschicht auf den Elektrodenoberflächen
durch Eintauchen derselben in eine das auf den Oberflächen adsorbierbare Substrat enthaltende Lösung
gebildet is t; .
3· Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet,
daß bei Zugabe der Substanz die auf den Elektrodenoberflächen adsorbierten Substratmoleküle vollständig
oder teilweise dissoziieren.
4. Verfahren nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß die adsorbierten Substratmoleküle bei Zugabe der
Substanz die zugegebenen Moleküle binden und die Schichtdicke auf den Elektrodenoberflächen vergrößern.
5. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß man die Kapazität zwischen den Elektroden mit
einer elektrischen Impedanzbrücke mißt.
einer elektrischen Impedanzbrücke mißt.
. . .13
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6. Verfahren nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet,
daß man Serinproteasen bestimmt, wobei das Substrat aus synthetischen, spaltbaren, für Serinproteasen
spezifischen Polypeptiden bestellt.
7. Verfahren nach Anspruch 6, gekennzeichnet durch ein Substrat einschließlich seiner Salze der folgenden
allgemeinen Formel
O O O
R1-NH-CH-C-NH- CH- C-NH- CH-C-NH-R
R2 R3 «jH2>n
NH
in der Il Wasserstoff, eine Alkyl carbonyl gruppe
mit 1-12 Kohleiist of !atomen, eine (J -Aminoalkylcarbonylgruppe
mit 1-12 Kohlenstoffatomen in gerader Kette, eine Cyclohexylcarbonylgruppe, eine
Cu -Cyclohexylcarbonylgruppe mit 1-6 Kohlenstof1-atomen
in gerader Kette, eine 4-Aininoethylcyclohexylcarbonylgruppe,
eine üenzoylgruppe, die ggf. mit einem Halogenatom, einar Me thyl-, einer Amino- oder
einer Phenylgruppe oder mehreren dieser Substituenten substituiert sein kann, eine (J -Phenylalkylcarbonylgruppe
mit 1-6 Kohlenstoffatomen in gerader Kette, eine Bensο!sulfonylgruppe, eine 4-Toiuylsulfonylgruppe
oder eine N0* -Benzoylplienylalanylgruppe;
R eine Phenyl-, Benzyl-, 4-Hydroxybenzyl-, h-Methoxybenzyl-
oder k-Methylbenzylgruppe; R„ eine
geradkettige, verzweigte, oder cyclische AlJcylgruppe
mit 3-ö Kohlenstoffatomen oder eine Phenyl- oder
Benzylgruppe;
7Q9815/10S3
η die Zahlen 3 oder 4; R. Wasserstoff oder eine
Guanylgruppe und R eine Phenyl-, Nitrophenyl-,
Meth.ylnitroph.enyl-, Dinitropheriyl-, Naphthyl-,
Nitronaphthyl-, Chinolyl- oder Nitrochinolylgruppe bedeuten.
8. Verfahren nach Anspruch k, dadurch gekennzeichnet,
daß die adsorbierten Substratmoleküle die Moleküle, deren Aktivität oder Konzentration bestimmt
werden soll, inhibieren.
9. Verfahren nach Anspruch k, dadurch gekennzeichnet,
daß die adsorbierten Substratmoleküle aus Rezeptoren für Hormone, deren Aktivität und/oder Konzentration
bestimmt werden soll, bestehen.
10. Elektroden, beschichtet mit einem biochemisch
... spezifischen Substrat, zur Bestimmung von enzymatischen,
immunologischen oder anderen biochemischen Aktivitäten, wobei das Substrat durch die zu bestimmende
Substanz beeinflusst wird, so daß sich
die Kapazität eines Meßgefäßes mit den beschichteten Elektroden im Vergleich zu Kontrollwerten,
bestimmt in der Meßeinrichtung in Abwesenheit der das Substrat beeinflussenden Substanz, ändert.
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