DE60008862T2 - Thienopyrimidin verbindungen, ihre herstellung und verwendung - Google Patents

Description

• Die vorliegende Erfindung bezieht sich auf Thieno[2,3-d]pyrimidinverbindungen, die eine das Gonadotropin-freisetzende Hormon (GnRH) antagonisierende Aktivität zeigen, ihre Herstellung und Verwendung.
• STAND DER TECHNIK
• Die Ausscheidung von Hypophysenvorderlappenhormonen unterliegt der Rückkopplungskontrolle durch periphere Hormone, die aus Zielorganen der entsprechenden Hormone ausgeschieden werden, und durch die Ausscheidung regulierende Hormone aus dem Hypothalamus, der das obere Zentralorgan des Hypophysenvorderlappens ist (hierin nachstehend in dieser Beschreibung werden diese Hormone zusammen „Hypothalamushormone" genannt). Derzeit ist von den Hypothalamushormonen die Existenz von neun Arten Hormone, zum Beispiel Thyrotropin-freisetzendes Hormon (TRH) und Gonadotropin-freisetzendes Hormon [GnRH, manchmal LH-RH (Luteinisierungshormon-freisetzendes Hormon) genannt], bestätigt. Man ist davon überzeugt, daß diese Nypothalamushormone ihre Wirkungen über die Rezeptoren zeigen, von denen angenommen wird, daß sie im Hypophysenvorderlappen vorhanden sind, und es sind einschließlich beim Menschen Anstrengungen unternommen worden, die für diese Hormone spezifische Rezeptorgenexpression zu finden. Dementsprechend sollten auf diese Rezeptoren spezifisch und selektiv einwirkende Antagonisten oder Agonisten die Wirkung des Hypothalamushormons und die Ausscheidung des Hypophysenvorderlappenhormons steuern. Als Ergebnis wird von derartigen Antagonisten oder Agonisten erwartet, daß sie Hypophysenvorderlappenhormonkrankheiten verhindern oder behandeln.
• Eine GnRH-antagonisierende Aktivität besitzende, bekannte Verbindungen schließen von GnRH abgeleitete, lineare Peptide (USP-5 140 009 und USP-5 171 835), ein cyclisches Hexapeptidderivat (JP-A-61-191 698), ein bicyclisches Peptidderivat [Journal of Medicinal Chemistry, Bd. 36, S. 3265–3273, (1993)] und so weiter ein. Eine GnRH-antagonisierende Aktivität besitzende, nicht-peptidische Verbindungen schließen in der WO95/28405 (JP-A-8-295693), WO97/14697 (JP-A-9- 169767), WO97/14682 (JP-A-169735) und WO96/24597 (JP-A-9-169768) usw. beschriebene Verbindungen ein.
• Peptidverbindungen werfen eine große Anzahl zu lösender Probleme bezüglich der oralen Absorbierbarkeit, Dosierungsform, Dosierungsvolumen, Wirkstoffstabilität, verzögerten Wirkung, Stoffwechselstabilität usw. auf. Es besteht ein großer Bedarf an einem oralen GnRH-Antagonisten, insbesondere auf der Grundlage einer nicht-peptidischen Verbindung, der eine ausgezeichnete therapeutische Wirkung auf hormonabhängigen Krebs, z. B. Prostatakrebs, Endometriose, Frühreife usw. aufweist, der keine vorübergehende hypophysär-gonadotrope Wirkung (akute Wirkung) zeigt und der eine ausgezeichnete Bioverfügbarkeit aufweist.
• KURZE BESCHREIBUNG DER ZEICHNUNGEN
• 1 zeigt die prozentualen LH-Konzentrationen im Testaffenplasma. In der Zeichnung stellt

  

  Kontrollgruppe 1 dar, stellt -♦- Kontrollgruppe 2 dar, stellt -Δ- Verbindungsgruppe 1 dar, stellt -☐- Verbindungsgruppe 2 dar beziehungsweise stellt

  

  Verbindungsgruppe 3 dar.
• OFFENBARUNG DER ERFINDUNG
• Wir, die Erfinder, haben verschiedene Verbindungen untersucht und haben als Ergebnis zum ersten Mal gefunden, daß die folgende neue Verbindung, die einen Substituenten, eine Gruppe der Formel -NH-CO-NR¹R², worin jedes Symbol wie nachstehend definiert ist, in der para-Stellung der Phenylgruppe des Thieno-[2,3-d]pyrimidingerüsts aufweist, oder ein Salz davon [hierin nachstehend manchmal kurz als Verbindung (I) bezeichnet]. Wir haben auch gefunden, daß Verbindung (I) auf der Grundlage des vorstehenden, speziellen Substituenten eine unerwartete, ausgezeichnete GnRH-antagonisierende Aktivität und niedrige Toxizität aufweist und deshalb als Arzneimittel mit einer GnRH-Antagonisierungsaktivität zufriedenstellend ist und entwickelten die vorliegende Erfindung auf der Grundlage dieses Befundes.

  

  worin R¹ und R² jeweils ein Wasserstoffatom, eine Hydroxygruppe, eine C_1-4-Alkoxygruppe, eine C_1-4-Alkoxycarbonylgruppe oder eine C_1-4-Alkylgruppe darstellen, die substituiert sein kann;
  R³ ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom, eine Hydroxygruppe oder eine C_1-4-Alkoxygruppe darstellt, die substituiert sein kann, oder zwei benachbarte R³ zusammengenommen eine C_1-4-Alkylendioxygruppe bilden können;
  R⁴ ein Wasserstoffatom oder eine C_1-4-Alkylgruppe darstellt;
  R⁶ eine C_1-4-Alkylgruppe, die substituiert sein kann, oder eine Gruppe der Formel

  

  darstellt, worin R⁵ ein Wasserstoffatom darstellt oder R⁴ und R⁵ zusammengenommen einen Heterocyclus bilden können und
  n eine ganze Zahl 0 bis 5 darstellt.
• Demgemäß bezieht sich die vorliegende Erfindung auf
  (1) eine Verbindung der Formel

  

  worin R¹ und R² jeweils ein Wasserstoffatom, eine Hydroxygruppe, eine C_1-4-Alkoxygruppe, eine C_1-4-Alkoxycarbonylgruppe oder eine C_1-4-Alkylgruppe darstellen, die durch (i) Hydroxy, (ii) C_1-7-Acyloxy, (iii) Benzoyloxy, (iv) Amino, das durch 1 oder 2 aus C_1-6-Alkoxycarbonyl, Benzyloxycarbonyl, C_1-4-Acyl, C_1-4-Alkyl und C_1-3-Alkylsulfonyl ausgewählte Substituenten substituiert sein kann, (v) C_1-10-Alkoxy, (vi) C_3-7-Cycloalkyloxycarbonyl-C_1-3-alkoxy und (vii) C_1-3-Alkoxy-C_1-3-alkoxy substituiert sein kann;
  R³ ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom, eine Hydroxygruppe oder eine C_1-4-Alkoxygruppe darstellt, die durch dieselben, vorstehend angeführten Substituenten substituiert sein kann, oder zwei benachbarte R³ zusammengenommen eine C_1-4-Alkylendioxygruppe bilden können;
  R⁴ ein Wasserstoffatom oder eine C_1-4-Alkylgruppe darstellt;
  R⁶ eine C_1-4-Alkylgruppe, die durch dieselben, vorstehend angeführten Substituenten substituiert sein kann, oder eine Gruppe der Formel

  

  darstellt, worin R⁵ ein Wasserstoffatom darstellt oder R⁴ und R⁵ zusammengenommen einen 5- oder 6gliedrigen, N-haltigen Heterocyclus bilden können und
  n eine ganze Zahl 0 bis 5 darstellt, oder ein Salz davon,
  (2) eine Verbindung aus (1) oder ein Salz davon, die eine Verbindung der Formel

  

  ist, worin R¹ und R² jeweils ein Wasserstoffatom, eine Hydroxygruppe, eine C_1-4-Alkoxygruppe oder eine C_1-4-Alkylgruppe sind, die substituiert sein kann, wobei die Substituenten wie in (1) definiert sind;
  R³ ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom oder eine C_1-4-Alkoxygruppe ist;
  R⁴ eine C_1-4-Alkylgruppe ist und
  R⁵ wie in (1) definiert ist,
  (3) eine Verbindung aus (1) oder ein Salz davon, wobei R¹ eine C_1-3-Alkoxygruppe ist,
  (4) eine Verbindung aus (3) oder ein Salz davon, wobei R² ein Wasserstoffatom ist,
  (5) eine Verbindung aus (1) oder ein Salz davon, wobei R³ ein Wasserstoffatom ist,
  (6) eine Verbindung aus (1) oder ein Salz davon, wobei R⁶ eine Gruppe der Formel

  

  ist, worin R⁵ wie in (1) definiert ist,
  (7) eine Verbindung aus (2) oder ein Salz davon, wobei R⁴ eine C_1-3-Alkylgruppe ist und R⁵ ein Wasserstoffatom ist,
  (8) eine Verbindung aus (1) oder ein Salz davon, wobei n 1 oder 2 ist,
  (9) eine Verbindung aus (1) oder ein Salz davon, wobei R¹ (i) eine Hydroxygruppe, (ii) eine C_1-4-Alkoxygruppe oder (iii) eine C_1-4-Alkylgruppe ist, die durch Hydroxy oder C_1-4-Alkylcarbonyloxy substituiert sein kann;
  R² ein Wasserstoffatom, eine C_1-4-Alkylgruppe oder eine C_1-4-Alkoxycarbonylgruppe ist;
  R³ ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom, eine Hydroxygruppe oder eine C_1-4-Alkoxy-C_1-4-alkoxygruppe ist, oder zwei benachbarte R³ zusammengenommen eine C_{1- 3}-Alkylendioxygruppe bilden;
  R⁴ ein Wasserstoffatom oder eine C_{1- 3}-Alkylgruppe ist;
  R⁶ eine C_1-4-Alkoxy-C_1-4-alkylgruppe oder eine Gruppe der Formel

  

  ist, worin R⁵ ein Wasserstoffatom ist oder R⁴ und R⁵ zusammengenommen einen 5- oder 6gliedrigen N-haltigen Heterocyclus bilden, und n 1 oder 2 ist,
  (10) eine Verbindung aus (1) oder ein Salz davon, wobei R¹ eine Hydroxygruppe, eine Methoxygruppe oder eine C_{1- 3}-Alkylgruppe ist;
  R² ein Wasserstoffatom oder eine C_{1- 3}-Alkylgruppe ist;
  R⁴ eine C_{1- 3}-Alkylgruppe ist;
  R⁶ eine Benzylgruppe ist und
  n 0 ist,
  (11) 5-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)-1-(2,6-difluorbenzyl)-6-[4-(3-methoxyureido)phenyl]-3-phenylthieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion oder ein Salz davon,
  (12) ein Verfahren zum Herstellen einer Verbindung aus (1) oder eines Salzes davon, das das Umsetzen einer Verbindung der Formel

  

  worin jedes Symbol wie in (1) definiert ist, oder eines Salzes davon mit Carbonyldiimidazol oder Phosgen, gefolgt vom Umsetzen mit einer Verbindung der Formel

  

  worin jedes Symbol wie in (1) definiert ist, oder einem Salz davon umfaßt,
  (13) eine pharmazeutische Zusammensetzung, die eine Verbindung aus (1) oder ein Salz davon umfaßt,
  (14) eine pharmazeutische Zusammensetzung aus (13) zum Antagonisieren des Gonadotropin-freisetzenden Hormons,
  (15) eine pharmazeutische Zusammensetzung aus (14) zur Prophylaxe oder Behandlung einer Sexualhormon-abhängigen Krankheit,
  (16) Verwendung einer Verbindung aus (1) oder eines Salzes davon zum Herstellen einer pharmazeutischen Zusammensetzung zum Antagonisieren des Gonadotropin-freisetzenden Hormons.
• Jedes Symbol in den vorstehenden Formeln wird hierin nachstehend genauer beschrieben.
• Die „C_{1- 4}-Alkoxygruppe" für R¹ oder R² schließt zum Beispiel Methoxy, Ethoxy, Propoxy, Butoxy, Isopropoxy, t-Butoxy usw. ein. Neben anderen ist C_{1- 3}-Alkoxy bevorzugt. Methoxy ist bevorzugter.
• Die „C_{1- 4}-Alkoxycarbonylgruppe" für R¹ oder R² schließt zum Beispiel Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, Propoxycarbonyl, Isopropoxycarbonyl, Butoxycarbonyl, t-Butoxycarbonyl usw. ein. Neben anderen ist C_1-3-Alkoxycarbonyl bevorzugt. Methoxycarbonyl ist bevorzugter.
• Die „C_{1- 4}-Alkylgruppe" der „C_{1- 4}-Alkylgruppe, die substituiert sein kann" für R¹ oder R² schließt zum Beispiel eine geradkettige C_{1- 4}-Alkylgruppe (z. B. Methyl, Ethyl, Propyl, Butyl usw.), eine verzweigte C_{3 -4}-Alkylgruppe (z. B. Isopropyl, Isobutyl, sec-Butyl, tert-Butyl usw.) und so weiter ein. Neben anderen ist eine C_1-3-Alkylgruppe bevorzugt. Ethyl ist bevorzugter.
• Die „Substituenten" der „C_{1- 4}-Alkylgruppe, die substituiert sein kann" für R¹ und R² schließen zum Beispiel (i) Hydroxy, (ii) C_1-7-Acyloxy (z. B. C_1-6-Alkylcarbonyloxy wie etwa Acetoxy, Propionyloxy usw.), (iii) Benzoyloxy, (iv) Amino, das durch 1 oder 2 Substituenten substituiert sein kann, die aus der aus C_1-6-Alkoxycarbonyl (z. B. Methoxycarbonyl, Ethoxycarbonyl, tert-Butoxycarbonyl usw.), Benzyloxycarbonyl, C_{1- 4}-Acyl (z. B. C_1-3-Alkylcarbonyl wie etwa Acetyl, Propionyl usw.), C_{1- 4}-Alkyl (z. B. Methyl, Ethyl, Propyl, Butyl usw.) und C_1-3-Alkylsulfonyl (z. B. Methansulfonyl usw.), usw. bestehenden Gruppe ausgewählt sind [z. B. Amino, Dimethylamino, Methoxycarbonylamino, Ethoxycarbonylamino, tert-Butoxycarbonylamino, Benzyloxycarbonylamino, Acetylamino, Methansulfonylamino usw.], (v) C_1-10-Alkoxy (z. B. Methoxy, Ethoxy, Propoxy, tert-Butoxy usw.), (vi) C_3-7-Cycloalkyloxycarbonyl-C_1-3-alkoxy (z. B. Cyclohexyloxycarbonyloxy-1-ethoxy usw.), (vii) C_1-3-Alkoxy-C_1-3-alkoxy (z. B. Methoxymethoxy, Methoxyethoxy usw.) und so weiter ein. Neben anderen ist Hydroxy bevorzugt.
• Die „C_{1- 4}-Alkylgruppe" der „C_{1- 4}-Alkylgruppe, die substituiert sein kann" für R¹ und R² kann 1 bis 5, vorzugsweise 1 bis 3 vorstehend angeführte Substituenten in möglichen Stellungen aufweisen und wenn die Substituentenanzahl zwei oder mehr ist, können diese Substituenten gleich oder voneinander verschieden sein.
• Vorzugsweise ist eines von R¹ und R² ein Wasserstoffatom und ist das andere eine C_1-3-Alkoxygruppe.
• Das „Halogenatom" für R³ schließt zum Beispiel Fluor, Chlor, Brom, Iod usw. ein. Neben anderen ist Chlor bevorzugt.
• Die „C_1-4-Alkoxygruppe" der „C_1-4-Alkoxygruppe, die substituiert sein kann" für R³ schließt zum Beispiel Methoxy, Ethoxy, Propoxy, Isopropoxy, Butoxy, t-Butoxy usw. ein. Unter diesen ist Methoxy bevorzugt.
• Die „Substituenten" der „C_1-4-Alkoxygruppe, die substituiert sein kann" für R³ sind dieselben wie die vorstehend für die „Substituenten" der „C_1-4-Alkylgruppe, die substituiert sein kann" für R¹ oder R² angeführten. Neben anderen ist eine C_1-4-Alkoxygruppe bevorzugt.
• Die „C_1-4-Alkoxygruppe" kann 1 bis 5, vorzugsweise 1 bis 3 vorstehend angeführte Substituenten in möglichen Stellungen aufweisen und wenn die Substituentenanzahl zwei oder mehr ist, können diese Substituenten gleich oder voneinander verschieden sein.
• Die durch zwei benachbarte R³ gebildete „C_1-4-Alkylendioxygruppe" schließt zum Beispiel Methylendioxy, Ethylendioxy usw. ein.
• R³ ist vorzugsweise ein Wasserstoffatom.
• Die „C_1-4-Alkylgruppe" für R⁴ schließt zum Beispiel eine geradkettige C_1-4-Alkylgruppe (z. B. Methyl, Ethyl, Propyl, Butyl usw.), eine verzweigte C_3-4-Alkylgruppe (z. B. Isopropyl, Isobutyl, sec-Butyl, tert-Butyl usw.) und so weiter ein. Neben anderen ist eine C_1-3-Alkylgruppe bevorzugt. Methyl ist bevorzugter.
• Die „C_1-4-Alkylgruppe, die substituiert sein kann" für R⁶ ist dieselbe wie die vorstehend für die „C_1-4-Alkylgruppe, die substituiert sein kann" für R¹ oder R² angeführte.
• Der durch R⁴ und R⁵ gebildete „Heterocyclus" schließt zum Beispiel einen 5- oder 6gliedrigen, N-haltigen Heterocyclus usw. ein. Wenn R⁴ und R⁵ zusammen 5- oder 6-gliedrigen, N-haltigen Heterocyclus bilden, schließen Beispiele der Gruppe der Formel

  

  eine Gruppe der Formel

  

  oder

  

  usw. ein.
• Neben anderen ist eine Gruppe der Formel

  

  bevorzugt.
• Vorzugsweise ist R⁶ eine Gruppe der Formel

  

  worin R⁵ wie vorstehend definiert ist.
• Vorzugsweise ist R⁴ C_1-3-Alkyl und ist R⁵ ein Wasserstoffatom.
• Vorzugsweise ist n 1 oder 2.
• Bevorzugte Beispiele der Verbindung (I) schließen eine Verbindung (Ia) ein.
• Bevorzugter ist eine Verbindung oder ein Salz davon, wobei R¹ eine Hydroxygruppe, eine Methoxygruppe oder eine C_1-3-Alkylgruppe ist; R² ein Wasserstoffatom oder eine C_1-3-Alkylgruppe ist; R⁴ eine C_1-3-Alkylgruppe ist; R⁶ eine Benzylgruppe ist und n 0 ist.
• Neben anderen ist eine Verbindung oder ein Salz davon bevorzugter, bei dem R¹ eine C_1-3-Alkoxygruppe ist; R² und R⁵ jeweils ein Wasserstoffatom sind; R⁴ eine C_1-3-Alkylgruppe ist; R⁶ eine Benzylgruppe ist und n 0 ist.
• Weitere bevorzugte Beispiele der Verbindung (I) schließen eine Verbindung oder ein Salz davon ein, worin R¹ (i) eine Hydroxygruppe, (ii) eine C_{1- 4}-Alkoxygruppe oder (iii) eine C_{1- 4}-Alkylgruppe ist, die durch Hydroxy oder C_{1- 4}-Alkylcarbonyloxy substituiert sein kann; R² ein Wasserstoffatom, eine C_{1- 4}-Alkylgruppe oder eine C_{1- 4}-Alkoxycarbonylgruppe ist; R³ ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom, eine Hydroxygruppe oder eine C_{1- 4}-Alkoxy-C_{1- 4}-alkoxygruppe ist oder zwei benachbarte R³ zusammengenommen eine C_{1- 3}-Alkylendioxygruppe bilden; R⁴ ein Wasserstoffatom oder eine C_{1- 3}-Alkylgruppe ist; R⁶ eine C_{1- 4}-Alkoxy-C_{1- 4}-alkylgruppe oder eine Gruppe der Formel

  

  ist, worin R⁵ ein Wasserstoffatom ist oder R⁴ und R⁵ zusammengenommen einen 5- oder 6gliedrigen Heterocyclus bilden und n 1 oder 2 ist.
• Als Verbindung (I) werden konkret
  5-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)-1-(2,6-difluorbenzyl)-6-[4-(3-methoxyureido)phenyl]-3-phenylthieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion oder ein Salz davon,
  5-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)-1-(2,6-difluorbenzyl)-6-[4-(3-hydroxyureido)phenyl]-3-phenylthieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion oder ein Salz davon,
  5-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)-1-(2,6-difluorbenzyl)-6-[4-(3-methylureido)phenyl]-3-phenylthieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion oder ein Salz davon,
  5-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)-1-(2,6-difluorbenzyl)-6-[4-(3-ethylureido)phenyl]-3-phenylthieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion oder ein Salz davon und so weiter angeführt.
• Neben anderen ist 5-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)-1-(2,6-difluorbenzyl)-6-[4-(3-methoxyureido)phenyl]-3-phenylthieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion oder ein Salz davon bevorzugt.
• Salze der Verbindung (I) sind vorzugsweise physiologisch annehmbare Säureadditionssalze. Derartige Salze schließen zum Beispiel Salze mit anorganischen Säuren (z. B. Salzsäure, Bromwasserstoffsäure, Salpetersäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure), Salze mit organischen Säuren (z. B. Ameisensäure, Essigsäure, Trifluoressigsäure, Fumarsäure, Oxasäure, Weinsäure, Maleinsäure, Citronensäure, Bernsteinsäure, Äpfelsäure, Methansulfonsäure, Benzolsulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure usw.) und so weiter ein. Wenn Verbindung (I) eine saure Gruppe aufweist, kann sie mit einer anorganischen Base (z. B. Alkalimetalle und Erdalkalimetalle wie etwa Natrium, Kalium, Calcium und Magnesium, Ammoniak) oder einer organischen Base (z. B. Trimethylamin, Triethylamin, Pyridin, Picolin, Ethanolamin, Diethanolamin, Triethanolamin, Dicyclohexylamin, N,N'-Dibenzyl-ethylendiamin usw.) ein physiologisch annehmbares Salz bilden.
• Verbindung (I) kann auf jede bekannte Weise, zum Beispiel gemäß den in der JP-A-9-169768, WO96/24597 offenbarten Verfahren oder dazu analogen Verfahren hergestellt werden. Konkret werden das folgende Herstellungsverfahren 1 und Herstellungsverfahren 2 angeführt. Die im folgenden Verfahren beschriebenen Verbindungen (II) bis (VII) schließen ihre Salze ein. Als ihre Salze wird zum Beispiel auf dieselben wie die Salze der Verbindung (I) Bezug genommen.
• Herstellungsverfahren 1

  
• In den vorstehenden Formeln stellt L eine Abgangsgruppe dar und die anderen Symbole sind wie vorstehend definiert.
• Die „Abgangsgruppe" für L schließt zum Beispiel 1-Imidazolyl, Halogen, eine Alkoxygruppe die substituiert sein kann usw. ein. Die „Alkoxygruppe, die substituiert sein kann" schließt zum Beispiel eine C_{1- 4}-Alkoxygruppe ein, die durch 1 bis 3 Halogene wie etwa Chlor, Brom usw. substituiert sein kann (z. B. 2,2,2-Trichlorethoxy usw.).
• Verbindung (II) kann durch die in der JP-A-9-169768 offenbarten Verfahren oder dazu analoge Verfahren hergestellt werden.
• Verbindung (I) kann durch Umsetzen der Verbindung (II) mit Carbonyldiimidazol (N,N'-Carbonyldiimidazol; CDI) oder Phosgen (Monomer, Dimer oder Trimer) unter Erhalten der Verbindung (IV), gefolgt vom Umsetzen mit der Verbindung (III) hergestellt werden. Die Reaktion kann ohne Isolieren der Verbindung (IV) durchgeführt werden oder die Verbindung (IV) kann als gereinigte Form in der nächsten Reaktion verwendet werden.
• Verbindung (IV) kann auch durch Umsetzen der Verbindung (II) mit zum Beispiel einer Chlorameisensäureesterverbindung (z. B. Chlorameisensäure-2,2,2-trichlorethylester, Chlorameisensäure-1-chlorethylester usw.) hergestellt werden.
• Bei der Reaktion der Verbindung (II) mit Carbonyldiimidazol oder Phosgen usw. wird das Carbonyldiimidazol oder Phosgen usw. in einer Menge von etwa 1 bis 3 Mol bezogen auf ein Mol der Verbindung (II) verwendet.
• Diese Reaktion wird vorteilhafterweise in einem gegenüber der Reaktion inerten Lösungsmittel durchgeführt.
• Beispiele des Lösungsmittels schließen Ether (z. B. Ethylether, Dioxan, Dimethoxyethan, Tetrahydrofuran usw.), aromatische Kohlenwasserstoffe (z. B. Benzol, Toluol usw.), Amide (z. B. Dimethylformamid, Dimethylacetamid usw.), halogenierte Kohlenwasserstoffe (z. B. Chloroform, Dichlormethan usw.) und so weiter ein.
• Die Reaktionstemperatur ist üblicherweise etwa 0 bis 150°C, vorzugsweise Raumtemperatur (etwa 15 bis 25°C). Die Reaktionszeit ist üblicherweise etwa 1 bis 36 Stunden.
• Diese Reaktion wird auch in der Gegenwart einer Base durchgeführt. Die „Base" wird durch anorganische Basen wie etwa Natriumcarbonat, Natriumhydrogencarbonat, Kaliumcarbonat, Kaliumhydrogencarbonat, Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid und Thalliumhydroxid und organische Basen wie etwa Triethylamin und Pyridin usw. veranschaulicht.
• Die Menge der „Base" ist etwa 2 bis 20 Mol, vorzugsweise etwa 5 bis 12 Mol bezogen auf ein Mol Verbindung (II).
• Die folgende Reaktion mit Verbindung (III) kann unter denselben Bedingungen wie die vorstehende Reaktion der Verbindung (II) mit Carbonyldiimidazol oder Phosgen durchgeführt werden. Die Menge der Verbindung (III) ist etwa 2 bis 20 Mol, vorzugsweise etwa 5 bis 10 Mol, bezogen auf ein Mol Verbindung (II) oder Verbindung (IV). Die Reaktionstemperatur ist üblicherweise etwa 0 bis 150°C, vorzugsweise Raumtemperatur (etwa 15 bis 25°C). Die Reaktionszeit ist üblicherweise etwa 1 bis 6 Stunden.
• Verbindung (III) und Carbonyldiimidazol oder Phosgen können gleichzeitig mit Verbindung (II) umgesetzt werden.
• Herstellungsverfahren 2

  
• In den vorstehenden Formeln stellt R⁷ ein Wasserstoffatom oder eine Alkylgruppe dar, stellt R⁸ eine Alkylgruppe dar und sind die anderen Symbole wie vorstehend definiert.
• Die „C_{1- 4}-Alkylgruppe" für R⁷ oder R⁸ schließt zum Beispiel die „C_{1- 4}-Alkylgruppe" der „C_{1- 4}-Alkylgruppe, die substituiert sein kann" für R¹ oder R² ein.
• Verbindung (V) kann auf jede an sich bekannte Weise hergestellt werden. Zum Beispiel wird p-Nitrophenylaceton mit einer Cyanessigesterverbindung und Schwefel [z. B. Chem. Ber., 99, 94–100 (1966)] umgesetzt und das so erhaltene 2-Amino-4-methyl-5-(4-nitrophenyl)thiophen wird den in der JP-A-9-169768, WO96/24597 offenbarten Verfahren oder dazu analogen Verfahren unterzogen.
• 1) Wenn R⁷ ein Wasserstoffatom ist, kann Verbindung (I) durch Umsetzen von Verbindung (V) mit einer Verbindung der Formel

  

  worin jedes Symbol wie vorstehend definiert ist, oder einem Salz davon [hierin nachstehend manchmal kurz als Verbindung (VI) bezeichnet] in Gegenwart eines Kondensationsmittels unter Erhalten von Verbindung (VII), gefolgt vom Unterziehen der Cyclisierung hergestellt werden.
• Das „Kondensationsmittel" schließt zum Beispiel Benzotriazol-1-yloxytripyrrolidinophosphonium-hexafluorphosphat (PyBOP) usw. ein.
• Die Menge des „Kondensationsmittels" ist etwa 1 bis 3 Mol bezogen auf ein Mol Verbindung (V).
• Diese Reaktion wird vorteilhafterweise in einem gegenüber der Reaktion inerten Lösungsmittel durchgeführt.
• Beispiele des Lösungsmittels schließen Alkohole (z. B. Ethanol, Methanol usw.), aromatische Kohlenwasserstoffe (z. B. Benzol, Toluol usw.), Amide (z. B. Dimethylformamid, Dimethylacetamid usw.), halogenierte Kohlenwasserstoffe (z. B. Chloroform, Dichlormethan usw.) und so weiter ein.
• Die Reaktionstemperatur ist üblicherweise etwa 0 bis 150°C, vorzugsweise Raumtemperatur (etwa 15 bis 25°C). Die Reaktionszeit ist üblicherweise etwa 1 bis 36 Stunden.
• Auf das auf die vorstehend angeführte Weise hergestellte Produkt kann die nächste Reaktion angewendet werden, während es sich noch roh im Reaktionsgemisch befindet oder es kann auf jede gewöhnliche Weise aus dem Reaktionsgemisch isoliert werden.
• Verbindung (VII) wird der Cyclisierung in Gegenwart einer Base unterzogen.
• Die „Base" wird durch anorganische Basen wie etwa Natriummethoxid, Natriumcarbonat, Natriumhydrogencarbonat, Kaliumcarbonat, Kaliumhydrogencarbonat, Natriumhydroxid, Kaliumhydroxid und Thalliumhydroxid und organische Basen wie etwa Triethylamin und Pyridin usw. veranschaulicht., Die Menge der „Base" ist etwa 2 bis 20 Mol, vorzugsweise etwa 5 bis 12 Mol, bezogen auf ein Mol Verbindung (VII).
• Diese Reaktion wird vorteilhafterweise in einem gegenüber der Reaktion inerten Lösungsmittel durchgeführt.
• Beispiele des Lösungsmittels schließen Alkohole (z. B. Ethanol, Methanol usw.), aromatische Kohlenwasserstoffe (z. B. Benzol, Toluol usw.), Amide (z. B. Dimethylformamid, Dimethylacetamid usw.), halogenierte Kohlenwasserstoffe (z. B. Chloroform, Dichlormethan usw.) und so weiter ein.
• Die Reaktionstemperatur ist üblicherweise etwa 0 bis 150°C, vorzugsweise Raumtemperatur (etwa 15 bis 25°C). Die Reaktionszeit ist üblicherweise 1 bis 36 Stunden.
• 2) Wenn R⁷ eine Alkylgruppe ist, kann Verbindung (I) durch Umsetzen von Verbindung (V) mit einer aktivierten Verbindung (VI) hergestellt werden.
• Die aktivierte Verbindung (VI) kann auf jede an sich bekannte Weise, zum Beispiel durch Umsetzen eines aluminiumorganischen Reagenzes mit Verbindung (VI) in einem gegenüber der Reaktion inerten Lösungsmittel hergestellt werden.
• Das „aluminiumorganische Reagenz" schließt zum Beispiel Trimethylaluminium, Dimethylaluminiumchlorid usw. und eine diese enthaltende Lösung usw. ein.
• Die Menge des „aluminiumorganischen Reagenzes" ist etwa 1 bis 5 Mol, vorzugsweise etwa ein Mol bezogen auf ein Mol Verbindung (VI).
• Beispiele des Lösungsmittels schließen halogenierte Kohlenwasserstoffe (z. B. Chloroform, Dichlormethan usw.) und so weiter ein.
• Die Reaktionstemperatur ist üblicherweise etwa 0 bis 150°C, vorzugsweise Raumtemperatur (etwa 15 bis 25°C). Die Reaktionszeit ist üblicherweise etwa 1 bis 6 Stunden.
• Die Cyclisierung kann durch Umsetzen von (V) mit einer aktivierten Verbindung (VI) unter Erhalten von Verbindung (I) durchgeführt werden.
• Die Menge der „Verbindung (V)" ist etwa 1/5 Volumen eines Gemisches aus Verbindung (VI) und dem aluminiumorganischen Reagenz.
• Diese Reaktion wird vorteilhafterweise in einem gegenüber der Reaktion inerten Lösungsmittel durchgeführt.
• Ein derartiges Lösungsmittel ist dasselbe wie das bei der zum Erhalten einer aktivierten Verbindung (VI) verwendete.
• Die Reaktionstemperatur ist üblicherweise etwa 0 bis 150°C, vorzugsweise Raumtemperatur (etwa 15 bis 25°C). Die Reaktionszeit ist üblicherweise etwa 1 bis 48 Stunden.
• Verbindung (I) kann durch herkömmliche Trennmittel wie etwa Umkristallisation, Destillation und Chromatographie usw. isoliert und gereinigt werden.
• Wenn Verbindung (I) in freier Form erhalten wird, kann sie durch an sich bekannte oder dazu analoge Verfahren in ein Salz umgewandelt werden. Wenn Verbindung (I) in Salzform erhalten wird, kann sie durch an sich bekannte oder dazu analoge Verfahren in die freie Form oder ein anderes Salz umgewandelt werden.
• Verbindung (I) kann ein Hydrat oder ein Nicht-Hydrat sein. Das Hydrat wird durch ein Monohydrat, Sesquihydrat und Dihydrat veranschaulicht.
• Wenn Verbindung (I) als Gemisch optischer aktiver Konfigurationen erhalten wird, kann sie durch herkömmliche optische Trenntechniken in die (R)- und (S)-Form aufgetrennt werden.
• Verbindung (I) kann durch ein Isotop (z. B. ³N, ¹⁴C, ³⁵S usw.) markiert sein.
• Die Verbindung (I) der vorliegenden Erfindung (hierin nachstehend auch als „Verbindung der vorliegenden Erfindung" bezeichnet) besitzt eine ausgezeichnete GnRH-antagonisierende Aktivität und niedrige Toxizität. Außerdem sind die orale Absorbierbarkeit, der Wirkungserhalt, die Stabilität und Pharmakokinetik ausgezeichnet. Weiterhin kann sie leicht hergestellt werden. Die Verbindung der vorliegenden Erfindung kann daher sicher bei einem Säuger (z. B. Mensch, Affe, Rind, Pferd, Hund, Katze, Kaninchen, Ratte, Maus usw.) zur Prophylaxe und/oder Behandlung von Krankheiten, die von männlichen oder weiblichen Hormonen abhängen, Krankheiten, die auf einen Überschuß dieser Hormone zurückzuführen sind usw. durch Unterdrücken der Gonadotropinausscheidung durch ihre GnRH-Rezeptor-antagonisierende Wirkung unter Steuern der Plasmakonzentration der Sexualhormone verwendet werden.
• Zum Beispiel ist die Verbindung der vorliegenden Erfindung zur Prophylaxe und/oder Behandlung von Sexualhormon-abhängigem Krebs (z. B. Prostatakrebs, Uteruskrebs, Brustkrebs, Hypophysentymor usw.), Prostatahypertrophie, Hysteromyom, Endometriose, Frühreife, Amenorrhöe, prämenstruellem Syndrom, multilokulärem Ovarsyndrom, Pickel usw. brauchbar. Die Verbindung der vorliegenden Erfindung ist auch zur Steuerung der Fortpflanzung bei Männern und Frauen (z. B. Schwangerschaftssteuerungsmittel, Steuermittel des Menstruationszyklus usw.) brauchbar. Die Verbindung der vorliegenden Erfindung wird auch als männliches oder weibliches Kontrazeptivum oder als weibliches Ovulationsauslösungsmittel verwendet. Aufgrund ihrer Umkehrwirkung nach dem Absetzen kann die Verbindung der vorliegenden Erfindung zum Behandeln von Unfruchtbarkeit verwendet werden.
• Außerdem ist die Verbindung der vorliegenden Erfindung zur Steuerung des tierischen Östrus, Verbesserung der Fleischqualität und Förderung des tierischen Wachstums auf dem Gebiet der Tierzucht brauchbar. Die Verbindung der vorliegenden Erfindung ist auch als Fischablaichförderer brauchbar.
• Die Verbindung der vorliegenden Erfindung kann auch zum Unterdrücken eines vorübergehenden Anstiegs der Plasmakonzentration von Testosteron (Flare- Phänomen), der bei der Verabreichung eines GnRH-Superagonisten wie etwa Leuprorelinacetat beobachtet wird, verwendet werden. Die Verbindung der vorliegenden Erfindung kann in Kombination mit einem GnRH-Superagonisten wie etwa Leuprorelinacetat, Gonadrelin, Buserelin, Triptorelin, Goserelin, Nafarelin, Histrelin, Deslorelin, Meterelin, Lecirelin und so weiter verwendet werden. Neben anderen ist Leuprorelinacetat bevorzugt.
• Es ist ferner vorteilhaft, die Verbindung der vorliegenden Erfindung zusammen (in Kombination oder in Begleitung) mit wenigstens einem aus einem steroidalen oder nicht-steroidalen Androgenantagonisten oder Antiestrogen, Chemotherapeutikum, GnRH-antagonistischen Peptid, α-Reduktaseinhibitor, α-Rezeptorinhibitor, Aromataseinhibitor, 17β-Hydroxysteroid-Dehydrogenase-Inhibitor, Inhibitor der Nebennierenandrogenproduktion, Proteinkinaseinhibitor, Wirkstoff für die Hormontherapie und einem einen Wachstumsfaktor oder seinen Rezeptor antagonisierenden Wirkstoff neben anderen zu verwenden.
• Das vorstehend angeführte „Chemotherapeutikum" schließt Ifosfamid, UTF, Adriamycin, Peplomycin, Cisplatin, Cyclophosphamid, 5-FU, UFT, Methotrexat, Mitomycin C, Mitoxantron usw. ein.
• Das vorstehend angeführte „GnRH-antagonistische Peptid" schließt nicht-orale GnRH-antagonistische Peptide wie etwa Cetrorelix, Ganirelix, Abarelix usw. ein.
• Der vorstehend angeführte „Inhibitor der Nebennierenandrogenproduktion" schließt Lyase-Inhibitoren (C_17,20-Lyase) usw. ein.
• Der vorstehend angeführte „Proteinkinaseinhibitor" schließt Tyrosinkinaseinhibitor usw. ein.
• Die „Wirkstoffe für die Hormontherapie" schließen neben anderen Antiestrogene, Progesterone (z. B. MPA usw.), Androgene, Estrogene und Androgenantagonisten ein.
• Der „Wachstumsfaktor" kann jede Substanz sein, die die Zellvermehrung fördert und schließt im allgemeinen Peptide mit Molekulargewichten nicht über 20 000 ein, die die Wirkung bei niedrigen Konzentrationen durch das Binden an Rezeptoren entfalten. Insbesondere können neben anderen (1) EGF (Epidermiswachstumsfaktor) oder Substanzen mit im wesentlichen derselben Aktivität (z. B. EGF, Heregulin (HER2-Ligand) usw.), (2) Insulin oder Substanzen mit im wesentlichen derselben Aktivität (z. B. Insulin, IGF-1 (insulinähnlicher Wachstumsfaktor), IGF-2 usw.), (3) FGF (Fibroblastenwachstumsfaktor) oder Substanzen mit im wesentlichen derselben Aktivität (aFGF, bFGF, KGF (Keratinozytenwachstumsfaktor), HGF (Hepatozytenwachstumsfaktor), FGF-10 usw.) und (4) andere Wachstumsfaktoren (z. B. CSF (Koloniestimulierungsfaktor), EPO (Erythropoietin), IL-2 (Interleukin-2), NGF (Nervenwachstumsfaktor), PDGF (aus Blutplättchen stammender Wachstumsfaktor) und TGFβ (transformierender Wachstumsfaktor ß) angeführt werden.
• Der vorstehend angeführte „Wachstumsfaktorrezeptor" kann jeder Rezeptor sein, der den Wachstumsfaktor binden kann, wobei der EGF-Rezeptor, Heregulinrezeptor (HER2), Insulinrezeptor 1, Insulinrezeptor 2, IGF-Rezeptor, FGF-Rezeptor 1, FGF-Rezeptor 2 usw. eingeschlossen sind.
• Der den Wachstumsfaktor antagonisierende Wirkstoff schließt neben anderen Herceptin (Anti-HER2-Rezeptorantikörper) ein.
• Als den Wachstumsfaktor oder Wachstumsfaktorrezeptor antagonisierender Wirkstoff kann Herbimycin, PD153035 [z. B. Science, 265 (5175) S. 1093, (1994)] usw. angeführt werden.
• Eine weitere Klasse den Wachstumsfaktor oder Wachstumsfaktorrezeptor antagonisierender Wirkstoffe schließt HER2-Antagonisten ein. Der HER2-Antagonist kann jede Substanz sein, die die Aktivität von HERZ (d. h. die Phosphorylierungsaktivität) hemmt, und schließt somit einen Antikörper, eine niedermolekulare Verbindung (synthetisches oder natürliches Produkt), ein Antisense-Material, einen HER2-Liganden, Heregulin und jedes davon mit teilweise abgeänderter oder mutierten Struktur ein. Er kann weiterhin eine Substanz sein, die die HER2-Aktivität durch Antagonisieren des HER2-Rezeptors (z. B. HER2-Rezeptorantikörper) hemmt. Die niedermolekulare Verbindung mit einer HER2-antagonisierenden Aktivität schließt zum Beispiel die in der WO98/03505 beschriebenen Verbindungen, insbesondere 1-[3-[4-[2-((E)-2-Phenylethenyl)-4-oxazolylmethoxy]phenyl]propyl]-1,2,4-triazol und so weiter ein.
• Bei Prostatahypertrophie schließen Beispiele einer derartigen Kombination die Verbindung der vorliegenden Erfindung in Kombination mit dem GnRH-Superagonisten, Androgenantagonisten, Antiestrogen, GnRH-antagonistischen Peptid, α-Reduktaseinhibitor, α-Rezeptorinhibitor, Aromataseinhibitor, 17β-Hydroxysteroid-Dehydrogenase-Inhibitor, Inhibitor der Nebennierenandrogenproduktion, Phosphorylaseinhibitor und so weiter ein.
• Bei Prostatakrebs schließen Beispiele einer derartigen Kombination die Verbindung der vorliegenden Erfindung in Kombination mit dem GnRH-Superagonisten, Androgenantagonisten, Antiestrogen, Chemotherapeutikum (z. B. Ifosfamid, UTF, Adriamycin, Peplomycin, Cisplatin usw.), GnRH-antagonistischen Peptid, Aromataseinhibitor, 17β-Hydroxysteroid-Dehydrogenase-Inhibitor, Inhibitor der Nebennierenandrogenproduktion, Phosphorylaseinhibitor, Wirkstoff für die Hormontherapie wie etwa Estrogene (z. B. DSB, EMP usw.), Androgenantagonisten (z. B. CMA usw.), dem einen Wachstumsfaktor oder seinen Rezeptor antagonisierenden Wirkstoff und so weiter ein.
• Bei Brustkrebs schließen Beispiele einer derartigen Kombination die Verbindung der vorliegenden Erfindung in Kombination mit dem GnRH-Superagonisten, Chemotherapeutikum (z. B. Cyclophosphamid, 5-FU, UFT, Methotrexat, Adriamycin, Mitomycin C, Mitoxantron usw.), GnRH-antagonistischen Peptid, Aromataseinhibitor, Inhibitor der Nebennierenandrogenproduktion, Phosphorylaseinhibitor, Wirkstoff für die Hormontherapie wie etwa Antiestrogen (z. B. Tamoxifen usw.), Progesteronen (z. B. MPA usw.), Androgenen, Estrogenen usw., einem Wachstumsfaktor oder seinen Rezeptor antagonisierenden Wirkstoff und so weiter ein.
• Wenn die Verbindung der vorliegenden Erfindung als prophylaktisches und/oder therapeutisches Mittel für die vorstehend angeführten Krankheiten verwendet wird oder auf dem Gebiet der Tierzucht oder Fischerei verwendet wird, kann sie oral oder nicht-oral, mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger formuliert, normalerweise in Form fester Zubereitungen wie etwa Tabletten, Kapseln, Granulate und Pulver zur oralen Verabreichung oder in Form intravenöser, subkutaner, intramuskulärer oder anderer Injektionen, Suppositorien oder sublingualer Tabletten zur nicht-oralen Verabreichung verabfolgt werden. Sie kann auch sublingual, subkutan, intramuskulär oder auf andere Weise in Form von Zubereitungen sublingualer Tabletten, Mikrokapseln usw. mit verzögerter Freisetzung verabreicht werden. In Abhängigkeit von der Schwere der Symptome, dem Alter, Geschlecht, Gewicht und der Empfindlichkeit des Patienten, der Verabreichungsdauer und -abständen, der Eigenschaft, dem Verteilen und der Art der pharmazeutischen Zubereitung, der Art des aktiven Bestandteils usw. ist die tägliche Dosis keiner Einschränkung unterworfen. Zur Verwendung bei der Behandlung der vorstehend beschriebenen, sexualhormonabhängigen Krebsarten (z. B. Prostatakrebs, Gebärmutterkrebs, Brustkrebs, Hypophysentumor), Prostatahypertrophie, Hysteromyom, Endometriose, Frühreife usw. ist die tägliche Dosis normalerweise etwa 0,01 bis 30 mg, vorzugsweise etwa 0,02 bis 10 mg und bevorzugter 0,1 bis 10 mg, insbesondere bevorzugt 0,1 bis 5 mg je kg Säuger, normalerweise in 1 bis 4 verteilten Dosen.
• Die vorstehenden Dosen sind auf die Verwendung der Verbindung der vorliegenden Erfindung auf dem Gebiet der Tierzucht oder der Fischerei anwendbar. Die tägliche Dosis ist etwa 0,01 bis 30 mg, vorzugsweise etwa 0,1 bis 10 mg je kg Gewicht des zu behandelnden Organismus, normalerweise in 1 bis 3 verteilten Dosen.
• Bei der pharmazeutischen Zusammensetzung der vorliegenden Erfindung ist die Menge der Verbindung (I) etwa 0,01 bis 100 Gew.-% des Gesamtgewichts der Zusammensetzung.
• Die vorstehenden pharmazeutisch annehmbaren Träger sind verschiedene organische oder anorganische Trägersubstanzen, die als pharmazeutische Materialien allgemein verwendet werden und Arzneimittelträger, Gleitmittel, Bindemittel und Zerfallhilfsmittel für feste Zubereitungen und Lösungsmittel, Lösungshilfen, Suspendiermittel, Isotoniemittel, Puffer und schmerzlindernde Mittel für flüssige Zubereitungen einschließen. Andere pharmazeutische Additive wie etwa Konservierungsmittel, Antioxidantien, Färbemittel und Süßstoffe können bei Bedarf verwendet werden.
• Bevorzugte Arzneimittelträger schließen zum Beispiel Lactose, Sucrose, D-Mannit, Stärke, kristalline Cellulose und leichtes Kieselsäureanhydrid ein. Bevorzugte Gleitmittel schließen zum Beispiel Magnesiumstearat, Calciumstearat, Talk und kolloidales Siliziumoxid ein. Bevorzugte Bindemittel schließen zum Beispiel kristalline Cellulose, Sucrose, D-Mannit, Dextrin, Hydroxypropylcellulose, Hydroxypropylmethylcellulose und Polyvinylpyrrolidon ein. Bevorzugte Zerfallhilfsmittel schließen zum Beispiel Stärke, Carboxymethylcellulose, Carboxymethylcellulosecalcium, vernetztes Carmellosenatrium und Carboxymethylstärkenatrium ein. Bevorzugte Lösungsmittel schließen zum Beispiel Wasser zur Injektion, Alkohol, Propylenglykol, Macrogol, Sesamöl und Maisöl ein. Bevorzugte Lösungshilfen schließen zum Beispiel Polyethylenglykol, Propylenglykol, D-Mannit, Benzylbenzoat, Ethanol, Trisaminomethan, Cholesterin, Triethanolamin, Natriumcarbonat und Natriumcitrat ein. Bevorzugte Suspendiermittel schließen zum Beispiel Tenside wie etwa Stearyltriethanolamin, Natriumlaurylsulfat, Laurylaminopropionsäure, Lecithin, Benzalkoniumchlorid, Benzethoniumchlorid und Monostearylglycerin und hydrophile Polymere wie etwa Polyvinylalkohol, Polyvinylpyrrolidon, Carboxymethylcellulosenatrium, Methylcellulose, Hydroxymethylcellulose, Hydroxyethylcellulose und Hydroxypropylcellulose ein. Bevorzugte Isotoniemittel schließen zum Beispiel Natriumchlorid, Glycerin und D-Mannit ein. Bevorzugte Puffer schließen zum Beispiel Pufferlösungen von Phosphaten, Acetaten, Carbonaten, Citraten usw. ein. Bevorzugte schmerzlindernde Mittel schließen zum Beispiel Benzylalkohol ein. Bevorzugte Konservierungsmittel schließen zum Beispiel p-Oxybenzoesäureester, Chlorbutanol, Benzylalkohol, Phenethylalkohol, Dehydroacetsäure und Sorbinsäure ein. Bevorzugte Antioxidantien schließen zum Beispiel Sulfate und Ascorbinsäure ein.
• Durch Zufügen von Suspendiermitteln, Lösungshilfen, Stabilisatoren, Isotoniemitteln, Konservierungsmitteln und so weiter kann aus der Verbindung der vorliegenden Erfindung durch ein allgemein bekanntes Verfahren eine intravenöse, subkutane oder intramuskuläre Injektion hergestellt werden. In derartigen Fällen kann die Verbindung der vorliegenden Erfindung bei Bedarf durch ein allgemein bekanntes Verfahren gefriergetrocknet werden. Beim Verabreichen an Menschen kann die Verbindung der vorliegenden Erfindung zum Beispiel sicher oral oder nicht-oral als solche oder als pharmazeutische Zusammensetzung verabreicht werden, die durch ihr Mischen mit einem geeignet ausgewählten pharmakolo gisch annehmbaren Träger, Arzneimittelträger und Verdünnungsmittel hergestellt wurde.
• Derartige pharmazeutische Zusammensetzungen schließen orale Zubereitungen (z. B. Pulver, Granulate, Kapseln, Tabletten), Injektionen, Tropfinfusionen, äußerliche Zubereitungen (z. B. nasale Zubereitungen, transdermale Zubereitungen) und Suppositorien (z. B. rektale Suppositorien, vaginale Suppositorien) ein.
• Diese Zubereitungen können durch allgemein bekannte Verfahren hergestellt werden, die zu pharmazeutischen Herstellungsverfahren allgemein verwendet werden.
• Eine Injektion kann zum Beispiel durch Herstellen einer wäßrigen Injektion aus der Verbindung der vorliegenden Erfindung zusammen mit einem Dispergiermittel (z. B. von Atlas Powder Company, USA, hergestelltes Tween 80, von Nikko Chemicals Co., Ltd., hergestelltes HCO 60, Polyethylenglykol, Carboxymethylcellulose, Natriumalginat), einem Konservierungsmittel (z. B. Methylparaben, Propylparaben, Benzylalkohol), einem Isotoniemittel (z. B. Natriumchlorid, Mannit, Sorbit, Glucose) und anderen Additiven oder einer öligen Injektion in Lösung, Suspension oder Emulsion in einem Pflanzenöl wie etwa Olivenöl, Sesamöl, Baumwollsamenöl oder Maisöl, Propylenglykol oder dergleichen hergestellt werden.
• Eine orale Zubereitung kann durch Formulieren der Verbindung der vorliegenden Erfindung durch ein allgemein bekanntes Verfahren nach der Zugabe eines Arzneimittelträgers (z. B. Lactose, Sucrose, Stärke), eines Zerfallhilfsmittels (z. B. Stärke, Calciumcarbonat), eines Bindemittels (z. B. Stärke, Gummiarabicum, Carboxymethylcellulose, Polyvinylpyrrolidon, Hydroxypropylcellulose), eines Gleitmittels (z. B. Talk, Magnesiumstearat, Polyethylenglykol 6000) und anderer Additive und wenn nötig Überziehen des formulierten Produkts zum Zweck der Geschmacksüberdeckung, eines Auflösens im Darm oder der verzögerten Freisetzung durch ein allgemein bekanntes Verfahren hergestellt werden. Überzugsmittel zu diesem Zweck schließen zum Beispiel Hydroxypropylmethylcellulose, Ethylcellulose, Hydroxymethylcellulose, Hydroxypropylcellulose, Polyoxyethylenglykol, Tween 80, Pluronic F68, Celluloseacetatphthalat, Hydroxypropylmethylcellulosephthalat, Hydroxymethylcelluloseacetatsuccinat, Eudragit (hergestellt von Rohm Company, Deutschland; Methacrylsäure/Acrylsäure-Copolymer) und Farbstoffe (z. B. Eisenoxid, Titandioxid) ein. Für eine magensaftresistente Zubereitung kann eine Zwischenphase zwischen der magensaftresistenten Phase und der wirkstoffhaltigen Phase für die Zwecke des Trennens der beiden Phasen durch ein allgemein bekanntes Verfahren bereitgestellt werden.
• Eine äußerliche Zubereitung kann durch Vermischen der Verbindung der vorliegenden Erfindung als feste, halbfeste oder flüssige Zusammensetzung durch ein allgemein bekanntes Verfahren hergestellt werden. Eine derartige feste Zusammensetzung wird zum Beispiel durch Pulverisieren der Verbindung der vorliegenden Erfindung als solche oder im Gemisch mit einem Arzneimittelträger (z. B. Glykol, Mannit, Stärke, mikrokristalline Cellulose), einem Verdickungsmittel (z. B. Naturkautschuk, ein Cellulosederivat, Acrylsäurepolymer) und anderen Additiven hergestellt. Eine derartige flüssige Zusammensetzung wird durch Herstellen einer öligen oder wäßrigen Suspension aus der Verbindung der vorliegenden Erfindung auf nahezu dieselbe Weise wie bei der Injektion hergestellt. Die halbfeste Zusammensetzung ist vorzugsweise ein wäßriges oder öliges Gel oder eine Salbe. Alle diese Zusammensetzungen können pH-Regulierungsmittel (z. B. Kohlensäure, Phosphorsäure, Citronensäure, Salzsäure, Natriumhydroxid), Konservierungsmittel (z. B. p-Oxybenzoesäureester, Chlorbutanol, Benzalkoniumchlorid) und andere Additive enthalten.
• Ein Suppositorium wird durch Zubereiten der Verbindung der vorliegenden Erfindung als ölige oder wäßrige feste, halbfeste oder flüssige Zusammensetzung durch ein allgemeines Verfahren hergestellt. Für derartige Zusammensetzungen brauchbare ölige Grundlagen schließen Glyceride höherer Fettsäuren (z. B. Kakaofett, von Dynamit Nobel Company, Deutschland, hergestellte Witepsole), mittlere Fettsäuren (z. B. von Dynamit Nobel Company, Deutschland, hergestelltes MIGLYOL) und Pflanzenöle (z. B. Sesamöl, Sojabohnenöl, Baumwollsamenöl) ein. Wäßrige Grundlagen schließen zum Beispiel Polyethylenglykole und Propylenglykol ein. Grundlagen für wäßrige Gele schließen zum Beispiel Naturkautschuke, Cellulosederivate, Vinylpolymere und Acrylsäurepolymere ein.
• BESTE AUSFÜHRUNGSWEISE DER ERFINDUNG
• Die vorliegende Erfindung wird hierin nachstehend mittels der folgenden Bezugsbeispiele, Beispiele, Zubereitungsbeispiele und Versuchsbeispiele genauer beschrieben, ist jedoch nicht darauf beschränkt.
• ¹H-NMR mit Tetramethylsilan als innerem Standard mittels des Sprektrometers Varian GEMINI 200 (200 MHz), des Spektrometers JEOL LAMBDA 300 (300 MHz) oder des Spektrometers Bruker AM500 (500 MHz) bestimmt; alle δ-Werte sind in ppm dargestellt. Solange nicht anders besonders angegeben ist „%" Gewicht. Ausbeute bedeutet Mol/Mol %.
• Die anderen hierin verwendeten Symbole weisen die folgenden Definitionen auf:
  s: Singulett
  d: Dublett
  t: Triplett
  dt: doppeltes Triplett
  m: Multiplett
  br: breit
  TFA: Trifluoressigsäure
  THF: Tetrahydrofuran
  Me: Methyl
  Et: Ethyl
• Der Ausdruck „Raumtemperatur" bezeichnet den Bereich von etwa 15 bis 25°C, sollte jedoch nicht als streng einschränkend aufgefaßt werden.
• Beispiele
• Bezugsbeispiel 1
• Ethyl-2-amino-4-methyl-5-(4-nitrophenyl)thiophen-3-carboxylat

  
• Ein Gemisch aus 4-Nitrophenylaceton (35,0 g, 195 mMol), Ethylcyanacetat (23,8 g, 195 mMol), Ammoniumacetat (3,1 g, 40 mMol) und Essigsäure (9,1 ml, 159 mMol) wurde 24 Stunden unter Rückfluß erhitzt, während das erzeugte Wasser durch die Wirkung einer Dean-Stark-Falle entfernt wurde. Nach dem Abkühlen wurde das Reaktionsgemisch unter verringertem Druck eingeengt und der Rückstand wurde zwischen Dichlormethan und wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung verteilt. Der organische Extrakt wurde mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde an Kieselgel unter Ergeben einer öligen Verbindung chromatographiert. Das so erhaltene Öl wurde in Ethanol gelöst, gefolgt von der Zugabe von Schwefel (5,0 g, 160 mMol) und Diethylamin (16,0 ml 160 mMol) und das Gemisch wurde 2 Stunden bei 60 bis 70°C gerührt. Nach dem Abkühlen wurde das Reaktionsgemisch unter verringertem Druck unter Liefern eines Rückstands eingeengt, der zwischen Dichlormethan und wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung verteilt wurde. Der organische Extrakt wurde mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Ergeben des rohen Produkts an Kieselgel chromatographiert, das unter Ergeben der Titelverbindung als rote Platten (22,2 g, 52%) aus Ether-Hexan umkristallisiert wurde.
  Schmp. 168–170°C (aus Ether-Hexan umkristallisiert) Elementaranalyse für C₁₄H₁₄N₂O₄S

  

  ¹H-NMR (200MHz, CDCl₃) δ: 1.39 (3H, t, J=7.1Hz), 2.40 (3H, s), 4.34 (2H, q, J=7.1Hz), 6.27 (2H, br), 7.48 (2H, d, J=8.7Hz), 8.23 (2H, d, J=8.7Hz).
  IR (KBr): 3446, 3324, 1667, 1580, 1545, 1506, 1491, 1475, 1410, 1332 cm^–1.
• Bezugsbeispiel 2
• 5-Methyl-6-(4-nitrophenyl)-3-phenylthieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion

  
• Einer Lösung der in Bezugsbeispiel 1 erhaltenen Verbindung (5,00 g, 16,32 mMol) in Pyridin (30 ml) wurde Phenylisocyanat (2,66 ml, 24,48 mMol) zugefügt. Nach 6 Stunden Rühren bei 45°C wurde das Reaktionsgemisch unter verringertem Druck eingeengt und der Rückstand wurde in Ethanol (6 ml) gelöst. Dieser Lösung wurde 28%iges Natriummethoxid (7,86 g, 40,80 mMol) zugefügt und das Gemisch wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Anschließend wurde 2N Salzsäure (25 ml, 50 mMol) zugefügt und das Lösungsmittel Ethanol wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde filtriert, mit Wasser-Ethanol gewaschen, im Vakuum getrocknet und unter Ergeben der Titelverbindung als gelbes Pulver (6,09 g, 98%) aus Ethanol umkristallisiert.
  Schmp. >300°C Elementaranalyse für C₁₉H₁₃N₃O₄S·0.3H₂O

  

  ¹H-NMR (300MHz, DMSO-d₆) δ: 2.50 (3H, s), 7.31–7.46 (5H, m), 7.78 (2H, d, J=8.8Hz), 8.32 (2H, d, J=8.8Hz), 12.50 (1H, s).
  IR (KBr): 1715, 1657, 1593, 1510 cm^–1.
• Bezugsbeispiel 3
• 1-(2,6-Difluorbenzyl)-5-methyl-6-(4-nitrophenyl)-3-phenylthieno[2,3-d]-pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion

  
• Einer Lösung der in Bezugsbeispiel 2 erhaltenen Verbindung (52,54 g, 0,131 mMol) in N,N-Dimethylformamid (1,0 l) wurde Kaliumcarbonat (19,00 g, 0,138 Mol), Kaliumiodid (22,90 g, 0,138 Mol) und 2,6-Difluorbenzylchlorid (22,40 g, 0,138 Mol) zugefügt und das Gemisch wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Dieses Reaktionsgemisch wurde unter Ergeben eines Rückstands unter verringertem Druck eingeengt, der zwischen Chloroform und wäßriger Natriumchloridlösung verteilt wurde. Die wäßrige Schicht wurde mit Chloroform extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Ergeben der Titelverbindung als hellgelbe Kristalle (61,50 93%) an Kieselgel chromatographiert.
  Schmp. 280–282°C Elementaranalyse für C₂₆H₁₇N₃O₄SF₂

  

  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) δ: 2.57 (3H, s), 5.38 (2H, s), 6.94 (2H, d, J=8.1Hz), 7.42–7.58 (8H, m), 8.29 (2H, d, J=8.8Hz)
  IR (KBr): 1719, 1669, 1524, 1473 cm^–1.
• Bezugsbeispiel 4
• 5-Brommethyl-1-(2,6-difluorbenzyl)-6-(4-nitrophenyl)-3-phenylthieno-[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion

  
• Ein Gemisch aus der in Bezugsbeispiel 3 (30,34 g, 0,060 Mol) erhaltenen Verbindung, N-Bromsuccinimid (12,81 g, 0,072 Mol), α,α'-Azobisisobutyronitril (1,15 g, 0,007 Mol) und Chlorbenzol (450 ml) wurde 3 Stunden bei 85°C gerührt. Nach dem Abkühlen wurde das Reaktionsgemisch mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde anschließend unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Ergeben der Titelverbindung als gelbe Nadeln (80,21 g, 100%) aus Ethylacetat umkristallisiert.
  Schmp. 228–229°C
  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) δ: 4.77 (2H, s), 5.38 (2H, s), 6.96 (2H, t, J=8.1Hz), 7.29–7.58 (6H, m), 7.79 (2H, d, J=8.5Hz), 8.35 (2H, d, J=8.5Hz).
  IR (KBr): 1721, 1680, 1524, 1473, 1348 cm^–1.
  FAB-Mass. m/z 584(MH)⁺
• Bezugsbeispiel 5
• 5-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)-1-(2,6-difluorbenzyl)-6-(4-nitrophenyl)-3-phenylthieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion

  
• Einer Lösung der in Bezugsbeispiel 4 erhaltenen Verbindung (80,00 g, 0,119 mMol) in N,N-Dimethylformamid (600 ml) wurde Ethyldiisopropylamin (27,00 ml, 0,155 mMol) und Benzylmethylamin (18,45 ml, 0,143 Mol) unter Eiskühlung zugefügt. Nach 2 Stunden Rühren bei Raumtemperatur wurde das Reaktionsgemisch eingeengt und der Rückstand wurde zwischen Ethylacetat und gesättigter wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung verteilt. Die wäßrige Schicht wurde mit Ethylacetat extrahiert. Die organischen Extrakte wurden vereinigt und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Ergeben eines gelben Öls (74,90 g, 100%) chromatographiert, das unter Ergeben der Titelverbindung als gelbe Nadeln aus Ethylacetat umkristallisiert wurde.
  Schmp. 173–174°C Elementaranalyse für C₃₄H₂₆N₄O₄SF₂·0.5H₂O

  

  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) [freies Amin] δ: 1.31 (3H, s), 3.60 (2H, s), 3.96 (2H, s), 5.39 (2H, s), 6.95 (2H, t, J=8.2Hz), 7.18–7.55 (11H, m), 8.02 (2H, d, J=9.0Hz), 8.26 (2H, d, J=9.0Hz).
  IR (KBr) [Hydrochlorid] : 1719, 1678, 1597, 1520 cm^–1.
• Bezugsbeispiel 6
• 6-(4-Aminophenyl)-5-(N-benzyl-N-methylaminomethyl)-1-(2,6-difluorbenzyl)-3-phenylthieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion

  
• Einer Lösung der in Bezugsbeispiel 5 erhaltenen Verbindung (3,00 g, 4,80 mMol) in Ameisensäure (30 ml) wurde 1M Chlorwasserstofflösung in Ether (14,4 ml, 14,4 mMol) und 10% Palladiumkohle (300 mg) unter Eiskühlung zugefügt und die Hydrierung wurde bei Raumtemperatur unter Atmosphärenbedingungen 2 Stunden bei stetigem Rühren durchgeführt. Dieses Reaktionsgemisch wurde durch Celite filtriert und das Filtrat wurde unter verringertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde zwischen Dichlormethan und gesättigter, wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung verteilt. Die wäßrige Schicht wurde mit Dichlormethan extrahiert und die organischen Extrakte wurden vereinigt und getrocknet (MgSO₄). Das Lösungsmittel wurde anschließend unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Ergeben der Titelverbindung als weiße Kristalle (2,41 g, 84%) chromatographiert.
  Schmp. 205–207°C Elementaranalyse für C₃₄H₂₈N₄O₂SF₂·0.1AcOEt·1.2H₂O

  

  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) δ: 2.05 (3H, s), 3.56 (2H, s), 3.83 (2H, br), 3.88 (2H, s), 5.36 (2H, s), 6.70 (2H, d, J=8.8Hz), 6.88–6.94 (2H, m), 7.21–7.31 (8H, m), 7.41–7.53 (5H, m).
  IR (KBr): 1715, 1657, 1628, 1537 cm^–1.
• Bezugsbeispiel 7
• 5-Chlormethyl-1-(2,6-difluorbenzyl)-6-[4-(3-methoxyureido)phenyl]-3-phenylthieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion

  
• Einer Lösung der nachstehend beschriebenen Beispielverbindung Nr. 1 (2,00 g, 3,00 mMol) in Tetrahydrofuran (90 ml) wurde 1-Chlorethylchlorformat (0,42 ml, 3,89 mMol) bei –78°C zugefügt. Man ließ das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur erwärmen und das Gemisch wurde 2 Stunden gerührt. Dieses Reaktionsgemisch wurde zwischen Chloroform und wäßriger Natriumchloridlösung verteilt und die wäßrige Schicht wurde mit Chloroform extrahiert. Die Extrakte wurden vereinigt, mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Ergeben der Titelverbindung als weißes Pulver (1,68 g, 96%) chromatographiert.
  Schmp. 217–219°C
  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) δ: 3.83 (3H, s), 4.84 (2H, s), 5.37 (2H, s), 6.94 (2H, t, J=8.2Hz), 7.15 (1H, S), 7.28–7.65 (11H, m).
  IR (KBr): 1717, 1671, 1628, 1541, 1508, 1473 cm^–1.
  FAB-Mass. m/z 583(MH)⁺
• Bezugsbeispiel 8
• Unter Verwenden der in Bezugsbeispiel 6 erhaltenen Verbindung als Ausgangsmaterial wurden die folgenden Bezugsbeispielverbindungen Nr. 8-1 bis 8-3 auf dieselbe Weise wie die nachstehend beschriebenen Beispiele 1 und 2 erhalten. Bezugsbeispielverbindung Nr. 8-1

  

  Ausbeute: 64%
  Schmp. 190–194°C Bezugsbeispielverbindung Nr. 8-2

  

  Ausbeute: 91%
  Schmp. 210–215°C Bezugsbeispielverbindung Nr. 8-3

  

  Ausbeute: 82%
  Schmp. 254–257°C
• Bezugsbeispiel 9
• Ethyl-2-ethoxycarbonylamino-4-methyl-5-(4-nitrophenyl)thiophen-3-carboxylat

  
• Die in Bezugsbeispiel 1 erhaltene Verbindung (500 mg, 1,63 mMol) wurde in Toluol (9 ml) gelöst, gefolgt von der Zugabe von Ethylchlorformat (0,19 ml, 1,96 mMol) und das Gemisch wurde 5 Stunden unter Rückfluß erhitzt. Nach dem Abkühlen wurde das Reaktionsgemisch unter verringertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde unter Ergeben der Titelverbindung als gelbes Pulver (90 mg, 79%) an Kieselgel chromatographiert.
  Schmp. 130–131°C (aus Ethylacetat-Hexan umkristallisiert)
  ¹H-NMR (200MHz, CDCl₃) δ: 1.35 (3H, t, J=7.1Hz), 1.42 (3H, t, J=7.2Hz), 2.42 (3H; s), 4.31 (2H, q, J=7.1Hz), 4.39 (2H, q, J=7.2Hz), 7.59 (2H, d, J=9.0Hz), 8.27 (2H, d, J=9.0Hz), 10.66 (1H, s).
  IR (KBr): 1740, 1665, 1597, 1557, 1533, 1516, 1352, 1257 cm^–1.
• Bezugsbeispiel 10
• Ethyl-2-[N-(2,6-difluorbenzyl)-N-ethoxycarbonylamino]-4-methyl-5-(4-nitrophenyl)thiophen-3-carboxylat

  
• Einer Lösung der in Bezugsbeispiel 9 erhaltenen Verbindung (490 mg, 1,30 Mol) in N,N-Dimethylformamid (20 ml) wurde Kaliumcarbonat (196 mg, 1,42 Mol), Kaliumiodid (236 mg, 1,42 Mol) und 2,6-Difluorbenzylchlorid (232 mg, 1,42 mMol) zugefügt und das Gemisch wurde 5 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Dieses Reaktionsgemisch wurde eingeengt und der Rückstand wurde zwischen Chloroform und wäßriger Natriumchloridlösung verteilt. Die wäßrige Schicht wurde mit Chloroform extrahiert. Die organischen Extrakte wurden vereinigt und mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde an Kieselgel chromatographiert und das erhaltene amorphe Pulver wurde unter Ergeben der Titelverbindung als gelbe, pulverförmige Kristalle (520 mg, 79%) aus Methanol umkristallisiert.
  Schmp. 91–92°C
  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) δ: 1.15–1.35 (6H, m), 2.40 (3H, s), 4.15–4.29 (4H, m), 4.97 (2H; s), 6.86 (2H, t, J=7.8Hz), 7.25–7.32 (1H, m), 7.51 (2H, d, J=8.8Hz), 8.25 (2H, d).
  IR (KBr): 1717, 1597, 1524, 1475, 1392, 1348 cm^–1.
• Bezugsbeispiel 11
• Ethyl-4-brommethyl-2-[N-(2,6-difluorbenzyl)-N-ethoxycarbonylamino]-5-(4-nitrophenyl)thiophen-3-carboxylat

  
• Ein Gemisch aus der in Bezugsbeispiel 10 erhaltenen Verbindung (20 g, 39,64 Mol), N-Bromsuccinimid (7,76 g, 43,60 Mol), α,α'-Azobisisobutyronitril (0,72 g, 4,36 Mol) und Tetrachlorkohlenstoff (300 ml) wurde 2 Stunden bei 100°C gerührt. Nach dem Abkühlen wurde dieses Reaktionsgemisch mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Ergeben der Titelverbindung als amorphes Pulver (23 g, 100%) an Kieselgel chromatographiert.
  Schmp. 105–108°C
  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) δ: 1.15–1.39 (6H, m), 4.09–4.39 (4H, m), 4.71 (2H, s), 4.99 (2H, s), 6.86 (2H, t, J=7.8Nz), 7.22–7.32 (1H, m), 7.72 (2H, d, J=8.0Hz), 8.32 (2H, d, J=8.0Hz).
  IR (KHr): 1725, 1628, 1522, 1475, 1379, 1348 cm^–1.
  FAB-Mass. m/z 582 (MH⁺).
• Bezugsbeispiel 12
• Ethyl-4-(N-benzyl-N-methylaminomethyl)-2-[N-(2,6-difluorbenzyl)-N-ethoxycarbonylamino]-5-(4-nitrophenyl)thiophen-3-carboxylat

  
• Einer Lösung der in Bezugsbeispiel 11 erhaltenen Verbindung (2,0 g, 3,43 mMol) in N,N-Dimethylformamid (20 ml) wurde Ethyldiisopropylamin (0,90 ml, 5,15 mMol) und Benzylmethylamin (0,53 ml, 4,11 mMol) unter Eiskühlung zugefügt und das Gemisch wurde 3 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Dieses Reaktionsgemisch wurde eingeengt und der Rückstand wurde zwischen Ethylacetat und gesättigter, wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung verteilt. Die wäßrige Schicht wurde mit Ethylacetat extrahiert, Die organischen Extrakte wurden vereinigt und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Ergeben der Titelverbindung als gelbes Öl (2,1 g, 48%) an Kieselgel chromatographiert.
  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) δ: 1.18–1.44 (6H, m), 1.95 (3H, s), 3.27 (2H, s), 3.70 (2H, s), 4.20–4.32 (4H, m), 5.03 (2H, s), 6.80 (2H, t, J=7.8Hz), 7.10–7.27 (6H, m), 7.52 (2H, d, J=8.0Hz), 8.24 (2H, d, J=8.0Hz).
  IR (KBr)1719, 1628, 1597, 1522, 1473, 1402, 1377, 1348 cm^–1.
• Bezugsbeispiel 13
• Ethyl-5-(4-aminophenyl)-4-(N-benzyl-N-methylaminomethyl)-2-[N-(2,6-difluorbenzyl)-N-ethoxycarbonylamino]thiophen-3-carboxylat

  
• Einer Lösung der in Bezugsbeispiel 12 erhaltenen Verbindung (10,0 g, 16,03 mMol) in Ameisensäure (100 ml) wurde 1M HCl-Lösung in Ether (48 ml, 48 mMol) und 10% Palladiumkohle (1000 mg) unter Eiskühlung zugefügt und die Hydrierung wurde unter Atmosphärenbedingungen 5 Stunden bei Raumtemperatur durchgeführt. Dieses Reaktionsgemisch wurde mit Hilfe von Celite filtriert und das Filtrat wurde unter verringertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde zwischen Dichlormethan und gesättigter, wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung verteilt und die wäßrige Schicht wurde mit Dichlormethan extrahiert. Die organischen Extrakte wurden vereinigt und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Erge ben der Titelverbindung als weißes amorphes Pulver (7,9 g, 83%) an Kieselgel chromatographiert.
  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) δ: 1.15–1.31 (6H, m), 1.90 (3H, s), 3.21 (2H, s), 3.65 (2H, s), 3.79 (2H, s), 4.09–4.24 (4H, m), 5.01 (2H, s), 6.67–6.80 (4H, m), 7.12–7.26 (8H, m).
  IR (KBr): 1717, 1628, 1493, 1406, 1379 cm^–1.
• Bezugsbeispiel 14
• Ethyl-4-(N-benzyl-N-methylaminomethyl)-2-[N-(2,6-difluorbenzyl)-N-ethoxycarbonylamino]-5-[4-(3-methoxyureido)phenyl]thiophen-3-carboxylat

  
• Einer Lösung der in Bezugsbeispiel 13 erhaltenen Verbindung (0,9 g, 1,52 mMol) in Dichlormethan (20 ml) wurde Triethylamin (0,43 ml, 3,09 mMol) unter Eiskühlung zugefügt. Dieser Lösung wurde N,N'-Carbonyldiimidazol (0,492 g, 3,03 mMol) unter Eiskühlung zugefügt und man ließ das Gemisch auf Raumtemperatur erwärmen und rührte 48 Stunden. Das Reaktionsgemisch wurde erneut eisgekühlt und es wurde O-Methylhydroxylamin-hydrochlorid (1,27 g, 15,2 mMol), Triethylamin (2,2 ml, 15,8 mMol) und Dichlormethan (5 ml) zugefügt. Man ließ das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur erwärmen und rührte 3 Stunden. Dieses Reaktionsgemisch wurde zwischen Chloroform und wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung verteilt und die wäßrige Schicht wurde mit Chloroform extrahiert. Die organischen Extrakte wurden vereinigt, mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄). Der Rückstand wurde unter Ergeben der Titelverbindung als hellgelbes, amorphes Pulver (0,93 g, 92%) an Kieselgel chromatographiert.
  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) δ: 1.16 (3H, br s), 1.29 (3H, t, J=7.1Hz), 1.91 (3H, s), 3.22 (2H, s), 3.67(2H, s), 3.82 (3H, s), 4.17 (2H, br s), 4.21 (2H, d, J=7.1Hz), 5.02 (2H, s), 6.78 (2H, t, J=7.8Hz), 7.12–7.32 (6H, m), 7.40 (2H, d, J=8.6Hz), 7.53 (2H, d, J=8.6Hz), 7.62 (1H, s).
  IR (KHr) : 3300, 2982, 1719, 1628, 1591, 1528, 1473, 1408 cm^–1.
• Bezugsbeispiel 15
• 4-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)-2-[N-(2,6-difluorbenzyl)-N-ethoxycarbonylamino]-5-[4-(3-methoxyureido)phenyl]thiophen-3-carbonsäure

  
• Einer Lösung der in Bezugsbeispiel 14 erhaltenen Verbindung (0,1 g, 0,15 mMol) in Ethanol (2,5 ml) wurde eine Lösung von 2N Natriumhydroxid in Wasser (0,37 ml, 0,74 mMol) zugefügt. Dieses Reaktionsgemisch wurde 1 Stunde bei Raumtemperatur und weitere 18 Stunden bei 55°C gerührt. Nach dem Abkühlen wurde das Reaktionsgemisch mit 2N Salzsäure neutralisiert und zwischen Ethylacetat und gesättigter, wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung verteilt. Die wäßrige Schicht wurde mit Ethylacetat extrahiert. Die organischen Extrakte wurden vereinigt, mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Ergeben der Titelverbindung als farbloses amorphes Pulver (0,078 g, 81%) an Kieselgel chromatographiert. Elementaranalyse für C₃₂H₃₂N₄O₆SF₂

  

  ¹H-NMR (200MHz, CDCl₃) δ: 1.0–1.35 (3H, br s), 2.16 (3N, s), 3.84 (3H, s), 3.84 (2H, s), 3.88 (2H, s), 4.10–4.30 (2H, br s), 6.77 (2H, t), 6.70–6.85 (1H, br s), 7.15–7.35 (8H, m), 7.58 (2H, d, J=8.0Hz), 7.50–7.65 (1H, br s), 7.90–8.00 (1H, br s).
• Bezugsbeispiel 16
• 4-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)-2-[N-(2,6-difluorbenzyl)-N-ethoxycarbonylamino]-3-(4-methoxymethoxyphenylaminocarbonyl)-5-[4-(3-methoxyureido)-phenyl]thiophen

  
• Einer Lösung der in Bezugsbeispiel 15 erhaltenen Verbindung (0,80 g, 1,23 mMol), Triethylamin (0,88 ml, 6,31 mMol) und 4-Methoxymethoxyanilin (0,96 g, 6,27 mMol) in Dichlormethan (25 ml) wurde Benzotriazol-1-yloxytripyrrolidinophosphonium-hexafluorphosphat (PyBOP) (0,72 g, 1,38 mMol) unter Eiskühlung zugefügt. Man ließ das Gemisch auf Raumtemperatur erwärmen und rührte 14 Stunden. Dieses Reaktionsgemisch wurde zwischen Chloroform und gesättigter, wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung verteilt und die wäßrige Schicht wurde mit Chloroform extrahiert. Die organischen Extrakte wurden vereinigt, mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Ergeben der Titelverbindung als hellgelbes amorphes Pulver (0,82 g, 93%) an Kieselgel chromatographiert.
  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) δ: 1.21 (3H, br s), 2.07 (3H, br s), 3.20 (2H, s), 3.47 (3H, s), 3.68 (2H, s), 3.83 (3H, s), 4.24 (2H, br s), 5.07 (2H, br s), 5.13 (2H, s), 6.75 (2H, t, J=7.9Hz), 6.93 (2H, d, J=9.0Hz), 7.12–7.18 (3H, m) , 7.23–7.25 (4H, m), 7.43 (2H, d, J=9.0Hz), 7.54 (2H, d, J=8.5Hz), 7.65 (1H, s).
  IR (KBr) : 3288, 2940, 1717, 1672, 1628, 1598, 1564, 1528, 1510, 1473 cm^–1.
• Bezugsbeispiel 17
• Ethyl-2-[N-(2,6-Difluorbenzyl)-N-ethoxycarbonylamino]-4-[N-(2-methoxyethyl)-N-methylaminomethyl]-5-(4-nitrophenyl)thiophen-3-carboxylat

  
• Einer Lösung der in Bezugsbeispiel 11 erhaltenen Verbindung (12,82 g, 22,0 mMol) wurde Ethyldiisopropylamin (7,7 ml, 44,2 mMol) und N-(2-Methoxyethyl)-methylamin (3,5 ml, 32,6 mMol) in Ethylacetat (120 ml) zugefügt. Das Gemisch wurde 20 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Dieses Reaktionsgemisch wurde zwischen Ethylacetat und gesättigter, wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung verteilt und die wäßrige Schicht wurde mit Ethylacetat extrahiert. Die organischen Extrakte wurden vereinigt, mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Ergeben der Titelverbindung als braunes Öl (10,27 g, 79%) an Kieselgel chromatographiert.
  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) [freies Amin] δ: 6–1.38 (6H, m), 2.08 (3H, s), 2.46 (2H, t, J=6.0Hz), 3.28 (3H, s), 3.36 (2H, t, J=6.0Hz), 3.63 (2H, s), 4.09–4.32 (4H, m), 5.01 (2H, s), 6.86 (2H, t , J=8.1Hz), 7.21–7.32 (1H, m), 7.70 (2H, d, J=8.7Hz), 8.23 (2H, d, J=8.7Hz).
  IR (KBr): 2984, 1725, 1628, 1597, 1520, 1473 cm^–1.
  FAB-Mass. m/z 592(MH)⁺
• Bezugsbeispiel 18
• 1-(2,6-Difluorbenzyl)-5-[N-(2-methoxyethyl)-N-methylaminomethyl]-3-(3,4-methylendioxyphenyl)-6-(4-nitrophenyl)thieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion

  
• Einer Lösung von 3,4-Methylendioxyanilin (3,30 g, 24,3 mMol) in Toluol (80 ml) wurde eine Lösung von 1,01 M Dimethylaluminiumchlorid in Hexan (22,2 ml, 22,0 mMol) unter Eiskühlung zugefügt. Das Gemisch wurde 1 Stunde unter Eiskühlung gerührt. Diesem Reaktionsgemisch wurde eine Lösung der in Bezugsbeispiel 17 erhaltenen Verbindung (2,20 g, 3,70 mMol) in Toluol (30 ml) zugefügt und das Gemisch wurde 20 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Dieses Reaktionsgemisch wurde in Eiswasser gegossen und zwischen Ethylacetat und gesättigter, wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung verteilt. Die wäßrige Schicht wurde mit Ethylacetat extrahiert. Die organischen Extrakte wurden vereinigt, mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (Na₂SO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Ergeben des rohen Produkts an Kieselgel chromatographiert und unter Ergeben der Titelverbindung als braune Kristalle (0,60 g, 68%) aus Ethylacetat-Hexan umkristallisiert.
  Schmp. 190–192°C Elementaranalyse für C₃₁H₂₆N₄O₇SF₂

  

  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) [freies Amin] δ: 2.21 (3H, s), 2.68 (2H, t, J=5.7Hz), 3.31 (3H, s), 3.44 (2H, t, J=5.7Hz), 3.87 (2H, s), 5.38 (2H, s), 6.03 (2H, s), 6.73–6.76 (2H, m), 6.90–6.97 (3H, m), 7.28–7.38 (1H, m), 8.00 (2H, d, J=8.7Hz), 8.26 (2H, d, J=8.7Hz).
  IR (KBr) : 2894, 1719, 1671, 1628, 1597, 1547, 1520, 1487, 1462, 1348, 1243 cm^–1.
• Bezugsbeispiel 19
• 6-(4-Aminophenyl)-1-(2,6-difluorbenzyl)-5-[N-(2-methoxyethyl)-N-methylaminomethyl]-3-(3,4-methylendioxyphenyl)thieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion

  
• Einer Lösung der in Bezugsbeispiel 18 erhaltenen Verbindung (1,56 g, 2,50 mMol) in Ameisensäure (30 ml) wurde eine Lösung von 1M Chlorwasserstoff in Ether (7,4 ml, 7,4 mMol) und 10% Palladiumkohle (200 mg) unter Eiskühlung zugefügt und die Hydrierung wurde unter Atmosphärenbedingungen bei Raumtemperatur unter ständigem Rühren 2 Stunden durchgeführt. Dieses Reaktionsgemisch wurde durch Celite filtriert und das Filtrat wurde unter verringertem Druck eingeengt. Der Rückstand wurde zwischen Chloroform und gesättigter, wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung verteilt. Die wäßrige Schicht wurde mit Chloroform extrahiert und die organischen Extrakte wurden vereinigt, mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (Na₂SO₄). Das Lösungsmit tel wurde anschließend unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Ergeben des rohen Produkts an Kieselgel chromatographiert und unter Ergeben der Titelverbindung als braune Kristalle (1,46 g, 96%) aus Ethylacetat-Hexan umkristallisiert.
  Schmp. 200–202°C Elementaranalyse für C₃₁H₂₈N₄O₅SF₂·1.0H₂O

  

  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) [freies Amin] δ: 2.13 (3H, s), 2.63 (2H, t, J=5.7Hz), 3.26 (3H, s), 3.41 (2H, t, J=5.7Hz), 3.80 (2H, s), 5.34 (2H, s), 6.01 (2H, s), 6.68–6.76 (4H, m); 6.89–6.93 (3H, m), 7.24–7.39 (3H, m).
  IR (KBr): 2926, 1715, 1667,1628, 1533, 1506, 1464 cm^–1.
• Bezugsbeispiel 20
• 5-Chlormethyl-1-(2,6-difluorbenzyl)-3-(3,4-ethylendioxyphenyl)-6-[4-(3-methoxyureido)phenyl]thieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion

  
• Unter Verwenden der im folgenden Beispiel 8 erhaltenen Verbindung als Ausgangsmaterial wurde die Titelverbindung auf dieselbe Weise wie in Bezugsbeispiel 7 erhalten.
  Ausbeute: 63%
  Schmp. 204–209°C
• Beispiel 1
• 5-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)-1-(2,6-difluorbenzyl)-6-[4-(3-methoxyureido)phenyl]-3-phenylthieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion (Beispielverbindung Nr. 1)

  
• Einer Lösung der in Bezugsbeispiel 6 erhaltenen Verbindung (5,0 g, 8,41 mMol) in Dichlormethan (120 ml) wurde Triethylamin (2,34 ml, 16,82 mMol) unter Eiskühlung zugefügt, gefolgt vom Rühren. Diesem Reaktionsgemisch wurde N,N'-Carbonyldiimidazol (2,73 g, 16,82 mMol) unter Eiskühlung zugefügt. Man ließ das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur erwärmen und es wurde 42 Stunden gerührt. Das Gemisch wurde anschließend erneut eisgekühlt und O-Methylhydroxylamin-hydrochlorid (7,02 g, 84,08 mMol) und Triethylamin (11,7 ml, 84,08 mMol) wurden zugefügt. Man ließ das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur erwärmen und rührte 3 Stunden. Dieses Reaktionsgemisch wurde anschließend zwischen Chloroform und gesättigter Natriumhydrogencarbonatlösung verteilt. Die wäßrige Schicht wurde mit Chloroform extrahiert. Die Extrakte wurden vereinigt, mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Ergeben eines hellgelben Feststoffs an Kieselgel chromatographiert und unter Ergeben der Titelverbindung als weiße Kristalle (4,52 g, 80%) aus Chloroform-Ether umkristallisiert.
  Schmp. 204–205°C Elementaranalyse für C₃₆H₃₁N₅O₄SF₂

  

  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) δ: 2.05 (3H, s), 3.57 (2H, s), 3.82 (3H, s), 3.90 (2H, s), 5.37 (2H, s), 6.92 (2H, d, J=8.2Hz), 7.16–-7.31 (9H, m), 7.42–7.57 (5H, m), 7.63 (1H, s), 7.73 (2H, d, J=8.8Hz).
  IR (KBr): 3338, 3064, 1717, 1669, 1628, 1591, 1531, 1470 cm^–1.
• Beispiel 2
• 5-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)-1-(2,6-difluorbenzyl)-6-[4-(3-methoxyureido)phenyl]-3-phenylthieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion-hydrochlorid (Beispielverbindung Nr. 2)

  
• Einer Lösung der in Beispiel 1 erhaltenen weißen Kristalle (38,34 g, 57,42 mMol) in Dichlormethan (800 ml) wurde Chlorwasserstoff (1M Lösung in Diethylether) (100 ml) unter Eiskühlung zugefügt und das Gemisch wurde 10 Minuten bei derselben Temperatur gerührt. Dieses Reaktionsgemisch wurde unter verringertem Druck eingeengt und der Rückstand wurde unter Ergeben der Titelverbindung als weißes Pulver (40,0 g, 99%) aus Methanol-Ether umkristallisiert.
  Schmp. 182–185°C Elementaranalyse für C₃₆H₃₁N₅O₄SF₂·HCl·0.5H₂O

  

  IR (KBr): 3440, 3042, 1713, 1665, 1628, 1593, 1539, 1473 cm^–1.
  FAB-Mass.m/z 668(MH)⁺
• Beispiel 3
• Unter Verwenden der in Bezugsbeispiel 6 erhaltenen Verbindung als Ausgangsmaterial wurden die Beispielverbindungen Nr. 3-1 bis 3-9 auf dieselbe Weise wie bei Beispiel 1 und 2 erhalten. Beispielverbindung Nr. 3-1

  

  Ausbeute: 91%
  Schmp. 175–180°C [Hydrochlorid] Beispielverbindung Nr. 3-2

  

  Ausbeute: 81%
  Schmp. 179–182°C (Hydrochlorid] Beispielverbindung Nr. 3-3

  

  Ausbeute: 80%
  Schmp. 172–177°C [Hydrochlorid] Beispielverbindung Nr. 3-4

  

  Ausbeute: 99%
  Schmp. 193–197°C [Hydrochlorid] Beispielverbindung Nr. 3-5

  

  Ausbeute 91%
  Schmp. 201–204°C [Hydrochlorid] Beispielverbindung Nr. 3-6

  

  Ausbeute 89%
  Schmp. 210–215°C [Hydrochlorid] Beispielverbindung Nr. 3-7

  

  Ausbeute: 89%
  Schmp. 199–200°C [freies Amin] Beispielverbindung Nr. 3-8

  

  Ausbeute: 93%
  Schmp. 195–198°C [Hydrochlorid] Beispielverbindung Nr. 3-9

  

  Ausbeute: 95%
  Schmp. 165–170°C [Hydrochlorid]
• Beispiel 4
• Unter Verwenden der in Bezugsbeispiel 7 hergestellten Verbindung als Ausgangsmaterial wurden die Beispielverbindungen Nr. 4-1 bis 4-5 auf dieselbe Weise wie in Bezugsbeispiel 5 erhalten. Beispielverbindung Nr. 4-1

  

  Ausbeute: 80%
  Schmp. 177–180°C [Hydrochlorid] Beispielverbindung Nr. 4-2

  

  Ausbeute: 77%
  Schmp. 205–210°C [Hydrochlorid] Beispielverbindung Nr. 4-3

  

  Ausbeute: 77%
  Schmp. 182–185°C [Hydrochlorid] Beispielverbindung Nr. 4-4

  

  Ausbeute: 14%
  Schmp. 270°C (Zers.) [Hydrochlorid] Beispielverbindung 4-5

  

  Ausbeute: 26%
  Schmp. 260°C (Zers.) [freies Amin]
• Beispiel 5
• 5-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)-1-(2,6-difluorbenzyl)-6-[4-(3-hydroxyureido)phenyl]-3-phenylthieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion

  
• Einer Lösung der in Bezugsbeispiel 6 erhaltenen Verbindung (2,0 g, 3,36 mMol) in Dichlormethan (40 ml) wurde Triethylamin (0,94 ml, 6,73 mMol) unter Eiskühlung zugefügt, gefolgt vom Rühren. Anschließend wurde N,N'-Carbonyldiimidazol (1,09 g, 6,73 mMol) dem Reaktionsgemisch unter Eiskühlung zugefügt. Man ließ das Reaktionsgemisch auf Raumtemperatur erwärmen und es wurde 24 Stunden gerührt. Das Reaktionsgemisch wurde erneut eisgekühlt und es wurde O-(2,4-Dimethoxybenzyl)hydroxylamin (3,11 g, 16,98 mMol) zugefügt. Man ließ das Reaktionsgemisch anschließend auf Raumtemperatur zurückkehren und rührte 19 Stunden. Dieses Reaktionsgemisch wurde zwischen Chloroform und gesättigter, wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung verteilt und die wäßrige Schicht wurde mit Chloroform extrahiert. Die Extrakte wurden vereinigt, mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Einer Lösung des Rückstands in Dichlormethan (50 ml) wurde Trifluoressigsäure (5 ml) zugefügt, gefolgt von 20 Minuten Rühren bei Raumtemperatur. Dieses Reaktionsgemisch wurde zwischen Chloroform und gesättigter, wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung verteilt und die wäßrige Schicht wurde mit Chloroform extrahiert. Die Extrakte wurden vereinigt, mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Ergeben eines weißen amorphen Pulvers an Kieselgel chromatographiert und unter Ergeben der Titelverbindung als weiße Kristalle (2,2 g, 100%) aus Chloroform-Ether umkristallisiert.
  Schmp. 164–165°C
  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) δ: 2.05 (3H, s), 3.46 (2H, s), 3.92 (2H, s), 5.35 (2H, s), 6.65(IH, br), 6.90 (2H, t; J=8.0Hz), 7.28–7.65 (15H, m), 8.04 (1H, s), 9.73 (1H, br).
  IR (KBr) : 3326, 2856, 1715, 1665, 1628, 1591, 1531, 1468 cm^–1.
  FAB-Mass.m/z 654(MH)⁺
• Beispiel 6
• 5-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)-1-(2,6-difluorbenzyl)-6-[4-(3-hydroxyureido)phenyl]-3-phenylthieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion-hydrochlorid

  
• Einer Lösung der in Beispiel 5 erhaltenen weißen Kristalle (60 mg, 0,094 mMol) in Dichlormethan (5 ml) wurde Chlorwasserstoff (1M Lösung in Diethylether) (0,2 ml) unter Eiskühlung zugefügt, gefolgt von 10 Minuten Rühren bei derselben Temperatur. Dieses Reaktionsgemisch wurde unter verringertem Druck eingeengt und der Rückstand wurde unter Ergeben der Titelverbindung als weißes Pulver (72 mg, 100%) aus Methanol-Ether umkristallisiert.
  Schmp. 180–186°C Elementaranalyse für C₃₅H₂₉N₅O₄SF₂·0.1HCl·1.0H₂O

  

  IR (KBr) : 3388, 3066, 1713, 1663, 1628, 1593, 1537, 1473 cm^–1.
• Beispiel 7
• 5-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)-1-(2,6-difluorbenzyl)-6-[4-[3-(2-hydroxyethyl)ureido]phenyl]-3-phenylthieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion

  
• Einer Lösung der Beispielverbindung Nr. 3-7 (900 mg, 1,24 mMol) in THF (20 ml) wurde 5N Kaliumhydroxidlösung in Wasser (7 ml) unter Eiskühlung zugefügt, gefolgt von 1 Stunde Rühren bei 60°C. Dieses Reaktionsgemisch wurde zwischen Ethylacetat und gesättigter Natriumchloridlösung verteilt und die wäßrige Schicht wurde mit Ethylacetat extrahiert. Die Extrakte wurden vereinigt, mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde an Kieselgel unter Ergeben eines weißen, amorphen Pulvers chromatographiert, das unter Ergeben der Titelverbindung als weiße Kristalle (850 mg, 88%) aus Chloroform-Methanol-Ether umkristallisiert wurde.
  Schmp. 220–222°C Elementaranalyse für C₃₇H₃₃N₅O₄SF₂

  

  ¹H-NMR (300MHz, DMSO-d₆) δ: 1.93 (3H,s) 3.17 (2H, q, J=4.8Hz), 3.45–3.47 (4H, m), 3.81 (2H, s), 4.76 (1H, t, J=5.1Hz), 5. 28 (2H, s), 6.28 (1H, t, J=5.4Hz), 7.12–7.28 (9H, m), 7.44–7.58 (8H, m), 8.79 (1H, s).
  IR (KBr): 3530, 3364, 3066, 2958, 2884, 1715, 1667, 1595, 1531, 1470 cm^–1.
  FAB-Mass. m/z 682 (MH)⁺
• Beispiel 8
• 5-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)-1-(2,6-difluorbenzyl)-3-(3,4-ethylendioxyphenyl)-6-[4-(3-methoxyureido)phenyl]thieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion

  
• Einer Lösung von 3,4-Ethylendioxyanilin (3,90 g, 25,8 mMol) in Dichlormethan (100 ml) wurde eine Lösung von 1,01M Dimethylaluminiumchlorid in Hexan (25,5 ml, 25,8 mMol) unter Eiskühlung zugefügt. Man ließ das Gemisch 1 Stunde unter Rühren auf Raumtemperatur erwärmen. Dieser Lösung wurde eine Lösung der in Bezugsbeispiel 14 erhaltenen Verbindung (3,44 g, 5,16 mMol) in Dichlormethan (60 ml) zugefügt und das Gemisch wurde 1 Tag bei Raumtemperatur gerührt. Dieses Reaktionsgemisch wurde zwischen Chloroform und gesättigter wäßriger Natriumchloridlösung verteilt und die wäßrige Schicht wurde mit Chloroform extrahiert. Die organischen Schichten wurden vereinigt, mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Ergeben der Titelverbindung als weißes amorphes Pulver (3,2 g, 85%) an Kieselgel chromatographiert.
  Schmp. 185–187°C Elementaranalyse für C₃₈H₃₄N₅O₆SF₂Cl·H₂O

  

  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) δ: 2.05 (3H, s), 3.57 (2H, s), 3.83 (3H, s), 3.90 (2H, s), 4.29 (4H, s), 5.35 (2H, s), 6.75–7.01 (5H, m), 7.12–7.33 (7H, m), 7.55 (2H, d, J=8.0Hz), 7.63 (1H, s), 7.72 (2H, d, J=8.0Hz).
  IR (KBr) : 1717, 1702, 1686, 1657, 1636, 1626, 1560, 1543, 1522, 1510, 1475 cm^–1.
• Beispiel 9
• Unter Verwenden der in Bezugsbeispiel 14 erhaltenen Verbindung als Ausgangsmaterial wurden die Beispielverbindungen 9-1 bis 9-2 auf dieselbe Weise wie in Beispiel 8 erhalten. Beispielverbindung Nr. 9-1

  

  Ausbeute: 60%
  Schmp. 148–151°C [freies Amin] Beispielverbindung Nr. 9-2

  

  Ausbeute: 54%
  Schmp. 169–170°C [Hydrochlorid]
• Beispiel 10
• 5-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)-1-(2,6-difluorbenzyl)-3-[4-(methoxymethoxy)phenyl]-6-[4-(3-methoxyureido)phenyl]thieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion (Beispielverbindung Nr. 10)

  
• Einer Lösung der in Bezugsbeispiel 16 erhaltenen Verbindung (0,84 g, 1,09 mMol) in wasserfreiem Methanol (50 ml) wurde eine Lösung von Natriummethoxid (2,10 g, 10,4 mMol) in wasserfreiem Methanol (20 ml) unter Eiskühlung zugefügt. Dieses Gemisch wurde 2,5 Stunden gerührt, während man die Temperatur auf Raumtemperatur ansteigen ließ. Dieses Reaktionsgemisch wurde mit 1N Salzsäure (10,9 ml, 10,9 mMol) neutralisiert und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde zwischen Chloroform und gesättigter wäßriger Natriumchloridlösung verteilt und die wäßrige Schicht wurde mit Chloroform extrahiert. Die organischen Extrakte wurden vereinigt, mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde aus Ethylacetat-Isopropylether unter Ergeben der Titelverbindung als weiße Kristalle (0,632 g, 80%) umkristallisiert.
  Schmp. 189–191°C Elementaranalyse für C₃₈H₃₅N₅O₆SF₂

  

  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) δ: 2.05 (3H, s), 3.49 (3H, s), 3.57 (2H, s), 3.82 (3H, s), 3.91 (2H, s), 5.21 (2H, s), 5.36 (2H, s), 6.92 (2H, d, J=8.0Hz), 7.14–7.35 (11H, m), 7.55 (2H, d, J=8.5Hz), 7.63 (1H, s), 7.72 (2H, d, J=8.5Hz).
  IR (KBr): 3380, 2940, 2830, 1717, 1703, 1669, 1628, 1589, 1524, 1464 cm^–1.
• Beispiel 11
• 5-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)-1-(2,6-difluorbenzyl)-3-(4-hydroxyphenyl)-6-[4-(3-methoxyureido)phenyl]thieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion

  
• Die Beispielverbindung 10 (0,35 g, 0,48 mMol) wurde in Aceton (10 ml) gelöst und anschließend wurde 6N Salzsäure (1,0 ml, 6,0 mMol) zugefügt. Das Gemisch wurde 6 Stunden bei Raumtemperatur gerührt und mit einer Lösung von 2N Natriumhydroxid (3 ml, 6,0 mMol) in Wasser unter Eiskühlung neutralisiert und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde zwischen Chloroform und gesättigter, wäßriger Natriumchloridlösung verteilt und die wäßrige Schicht wurde mit Chloroform extrahiert. Die organischen Extrakte wurden vereinigt, mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Ergeben eines farblosen, amorphen Pulvers (0,18 g, 55%) an Kieselgel chromatographiert und unter Ergeben der Titelverbindung als weiße Kristalle (0,067 g) aus Chloroform-Methanol umkristallisiert.
  Schmp. 178–182°C Elementaranalyse für C₃₆H₃₁N₅O₅SF₂·0.4H₂O

  

  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) δ: 2.04 (3H, s), 3.56 (2H, s), 3.80 (3H, s), 3.90 (2H, s), 5.35 (2H, s), 6.89–6.98 (4H, m), 7.08 (2H, d, J=8.8Hz), 7.15–7.31 (6H, m), 7.57 (2H, d, J=8.6Hz), 7.69 (2H, d, J=8.6Hz), 7.87 (1H, s), 8.27 (1H, s), 8.88 (1H, s).
  IR (KBr): 3446, 1717, 1663, 1630, 1601, 1534, 1520, 1473 cm^–1.
• Beispiel 12
• 5-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)-1-(2,6-difluorbenzyl)-6-[4-[(3-methoxy-3-methoxycarbonyl)ureido]phenyl]-3-phenylthieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion

  
• Einer Lösung der Beispielverbindung Nr. 1 (0,334 g, 0,5 mMol) in Tetrahydrofuran (10 ml) wurde Triethylamin (0,08 ml, 0,6 mMol) und Methylchlorformat (0,0425 ml, 0,55 mMol) unter Eiskühlung zugefügt und das Gemisch wurde 1 Stunde unter Eiskühlung und anschließend 1 Stunde bei Raumtemperatur gerührt. Diesem Gemisch wurde Triethylamin (0,08 ml, 0,6 mMol) und Ethylchlorformat (0,0425 ml, 0,55 mMol) zugefügt und das Gemisch wurde 2 Stunden bei 40°C und anschließend 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Diesem Gemisch wurde wäßrige Natriumchloridlösung zugefügt und es wurde mit Ethylacetat extrahiert. Die Extrakte wurden vereinigt, mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Ergeben des rohen Produkts an Kieselgel chromatographiert und unter Ergeben der Titelverbindung als farblose Kristalle (0,204 g, 56%) aus Ethylacetat-Diethylether umkristallisiert.
  Schmp. 150–152°C Elementaranalyse für C₃₈H₃₃N₅O₆SF₂

  

  ¹H-NMR (200MHz, CDCl₃) δ: 2.06 (3H, s), 3.57 (2H, s), 3.91 (2H, s), 3.93 (3H, s), 3.98 (3H, s), 5.37 (2H, s), 6.92 (2H, t, J=8.2Nz), 7.15–7.60 (11H, m), 7.57 (2H, d, J=8.6Hz), 7.73 (2H, d, J=8.6Hz), 10.06 (1H, s).
  IR (KBr): 1746, 1713, 1663, 1537, 1460, 1339, 1200, 1034, 737 cm^–1.
• Beispiel 13
• 1-(2,6-Difluorbenzyl)-5-[N-(2-methoxyethyl)-N-methylaminomethyl]-6-[4-(3-methoxyureido)phenyl]-3-phenylthieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion

  
• Einer Lösung der in Bezugsbeispiel 7 erhaltenen Verbindung (0,86 g, 1,48 mMol) in N,N-Dimethylformamid (15 ml) wurde Ethyldiisopropylamin (0,34 ml, 1,92 mMol), Kaliumiodid (245 mg, 1,48 mMol) und N-(2-Methoxyethoxyethyl)methylamin (0,19 ml, 1,78 mMol) zugefügt und das Gemisch wurde 2 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Dieses Reaktionsgemisch wurde unter Ergeben eines Rückstands eingeengt, der zwischen Ethylacetat und gesättigter, wäßriger Natriumhydrogencarbonatlösung verteilt wurde. Die wäßrige Schicht wurde mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten Extrakte wurden mit wäßriger Natriumchloridlösung gewaschen und getrocknet (MgSO₄) und das Lösungsmittel wurde unter verringertem Druck abdestilliert. Der Rückstand wurde unter Ergeben der Titelverbindung als weiße Kristalle (840 mg, 89%) an Kieselgel chromatographiert.
  Schmp. 161–163°C Elementaranalyse für C₃₂H₃₁N₅O₅SF₂·0.5H₂O

  

  ¹H-NMR (300MHz, CDCl₃) [freies Amin] δ: 2.14 (3H, s), 2.64 (2H, t, J=5.9Hz), 3.27 (3H, s), 3.41 (2H, t, J=5.9Hz), 3.83 (5H, s), 5.37 (2H, s), 6.93 (2H, t, J=8.2Hz), 7.12–7.63 (12H, m).
  IR (KBr) : 1709, 1663, 1560, 1522 cm^–1.
• Beispiel 14
• 1-(2,6-Difluorbenzyl)-3-(3,4-ethylendioxyphenyl)-5-[N-(2-methoxyethyl)-N-methylaminomethyl]-6-[4-(3-methoxyureido)phenyl]thieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion

  
• Unter Verwenden der in Bezugsbeispiel 20 erhaltenen Verbindungen als Ausgangsmaterial wurde die Titelverbindung auf dieselbe Weise wie bei Beispiel 13 erhalten.
  Ausbeute: 79%
  Schmp. 155–156°C [freies Amin]
• Beispiel 15
• 1-(2,6-Difluorbenzyl)-5-[N-(2-methoxyethyl)-N-methylaminomethyl]-6-[4-(3-methoxyureido)phenyl]-3-(3,4-methylendioxyphenyl)thieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion

  
• Unter Verwenden der in Bezugsbeispiel 19 erhaltenen Verbindung als Ausgangsmaterial wurde die Titelverbindung auf dieselbe Weise wie bei Beispiel 1 erhalten.
  Ausbeute: 72%
  Schmp. 150–152°C [freies Amin]
• Zubereitungsbeispiel 1
• Unter Verwenden von 100 mg Beispielverbindung Nr. 1, 165 mg Lactose, 25 mg Maisstärke, 4 mg Polyvinylalkohol und 1 mg Magnesiumstearat werden durch ein herkömmliches Verfahren Tabletten hergestellt.
• Zubereitungsbeispiel 2
• Die Beispielverbindung Nr. 2 (5 g) wird in destilliertem Wasser zur Injektion unter Einstellen eines Gesamtvolumens von 100 ml gelöst. Diese Lösung wird durch ein Membranfilter von 0,22 μm (hergestellt von Sumitomo Electric Industries, Ltd. oder Sartorius) aseptisch filtriert und zu 2 ml je gewaschenem, sterilem Gläschen verteilt, gefolgt vom Gefriertrocknen durch ein herkömmliches Verfahren unter Liefern einer gefriergetrockneten, injizierbaren Zubereitung von 100 mg/Gläschen.
• Zubereitungsbeispiel 3
• Unter Verwenden von 100 mg Beispielverbindung Nr. 4-2, 165 mg Lactose, 25 mg Maisstärke, 4 mg Polyvinylalkohol und 1 mg Magnesiumstearat werden durch ein herkömmliches Verfahren Tabletten hergestellt.
• Zubereitungsbeispiel 4
• Die Beispielverbindung Nr. 4-2 (5 g) wird in destilliertem Wasser zur Injektion unter Einstellen eines Gesamtvolumens von 100 ml gelöst. Diese Lösung wird durch ein Membranfilter von 0,22 μm (hergestellt von Sumitomo Electric Industries, Ltd. oder Sartorius) aseptisch filtriert und zu 2 ml je gewaschenem, sterilem Gläschen verteilt, gefolgt vom Gefriertrocknen durch ein herkömmliches Verfahren unter Liefern einer gefriergetrockneten, injizierbaren Zubereitung von 100 mg/Gläschen. Zubereitungsbeispiel 5

  (1) Beispielverbindung Nr. 1 oder Nr. 4-2	5 g
  (2) Lactose/kristalline Cellulose (Teilchen)	330 g
  (3) D-Mannit	29 g
  (4) niedrigsubstituierte Hydroxypropylcellulose	20 g
  (5) Talk	25 g
  (6) Hydroxypropylcellulose	50 g
  (7) Aspartam	3 g
  (8) Dikaliumglycyrrhizinat	3 g
  (9) Hydroxypropylmethylcellulose 2910	30 g
  (10) Titanoxid	3,5 g
  (11) gelbes Eisensesquioxid	0,5 g
  (12) leichtes Kieselsäureanhydrid	1 g

• Die Komponenten (1), (3), (4), (5), (6), (7) und (8) werden in gereinigtem Wasser suspendiert oder gelöst und auf die Kernteilchen (2) unter Liefern feiner Grundgranula subtilae aufgetragen, die anschließend mit den Komponenten (9) bis (11) unter Liefern überzogener feiner Granula subtilae weiter überzogen wurden, die anschließend mit dem Bestandteil (12) unter Liefern von 500 g 1%iger feiner Granula subtilae der Verbindung gemischt wurden. Diese Granula subtilae werden in 500 mg gefalzte Granula subtilae aufgeteilt.
• Versuchsbeispiel 1
• (1) Herstellung von ¹²⁵I-Leuprorelin
• Einem 10 μl 3 × 10^–4 M wäßrige Leuprorelinlösung und 10 μl 0,01 mg/ml Lactoperoxidase enthaltenden Röhrchen wurden 10 μl (37 Bq) Na¹²⁵I-Lösung zugefügt.
• Nach dem Rühren wurden 10 μl 0,001%iges H₂O₂ zugefügt und die Reaktion wurde 20 Minuten bei Raumtemperatur durchgeführt. Durch Zufügen von 700 μl 0,05%iger TFA-Lösung (Trifluoressigsäure) wurde die Reaktion angehalten, gefolgt von der Reinigung durch Umkehrphasen-HPLC. Die HPLC-Bedingungen werden nachstehend dargestellt. ¹²⁵I-Leuprorelin wurde bei einer Retentionszeit von 26 bis 27 Minuten eluiert.
  Säule: TSKgel ODS-80^TM (TM bezeichnet ein eingetragenes Warenzeichen; dasselbe trifft nachstehend zu) CTR (4,6 mm × 10 cm)
  Elutionsmittel: Lösungsmittel A (0,05% TFA)
  Lösungsmittel B (40% CH₃CN-0,05% TFA) 0 Minuten (100% Lösungsmittel A) – 3 Minuten (100% Lösungsmittel A) – 7 Minuten (50% Lösungsmittel A + 50% Lösungsmittel B) – 40 Minuten (100% Lösungsmittel B)
  Elutionstemperatur: Raumtemperatur
  Elutionsgeschwindigkeit: 1 ml/min
• (2) Herstellung einer GnRH-Rezeptoren enthaltenden Membranfraktion aus dem Hypophysenvorderlappen der Ratte
• Hypophysenvorderlappen wurden aus vierzig Wistar-Ratten (8 Wochen alt, männlich) isoliert und mit eisgekühltem Homogenisatpuffer [25 mM Tris-HCl (Tris(hydroxymethyl)aminomethan), 0,3 M Sucrose, 1 mM EGTA (Glykoletherdiamin-N,N,N',N'-tetraessigsäure), 0,25 mM PMSF (Phenylmethylsulfonylfluorid), 10 E/ml Aprotinin, 1 μg/ml Pepstatin, 20 μg/ml Leupeptin, 100 μg/ml Phosphoramidon, 0,03% Natriumazid, pH 7,5] gewaschen. Das Hypophysengewebe wurde in 2 ml Homogenisatpuffer aufgeschwemmt und mittels eines Polytron-Homogenisators homogenisiert. Das Homogenisat wurde 15 Minuten bei 700 × g zentrifugiert. Der Überstand wurde in ein Ultrazentrifugenrohr übernommen und 1 Stunde bei 100 000 × g unter Ergeben eines Membranfraktionspellets zentrifugiert. Dieses Pellet wurde in 2 ml Testpuffer [25 mM Tris-HCl, 1 mM EDTA (Ethylendiamintetraessigsäure), 0,1% BSA (Rinderserumalbumin), 0,25 mM PMSF, 1 μg/ml Pepstatin, 20 μg/ml Leupeptin, 100 μg/ml Phosphoramidon, 0,03% Natriumazid, pH 7,5] suspendiert und die Suspension wurde 1 Stunde bei 100 000 × g zentrifugiert. Die als Pellet isolierte Membranfraktion wurde in 10 ml Testpuffer erneut suspendiert, in Portionen aufgeteilt, bei –80°C aufbewahrt und bei Bedarf aufgetaut.
• (3) Herstellung einer humanen GnRH-Rezeptor enthaltenden CHO-Zellmembranfraktion (Ovarien des chinesischen Hamsters)
• Den humanen GnRH-Rezeptor exprimierende CHO-Zellen (10⁹ Zellen) wurden in mit 5 mM EDTA (Ethylendiamintetraessigsäure) ergänzter, phosphatgepufferter Kochsalzlösung (PBS-EDTA) suspendiert und 5 Minuten bei 100 × g zentrifugiert. Dem Zellpellet wurden 10 ml Zellhomogenisatpuffer (10 mM NaHCO₃, 5 mM EDTA, pH 7,5) zugefügt, gefolgt vom Homogenisieren mittels des Polytron-Homogenisators. Nach 15 Minuten Homogenisieren bei 400 × g wurde der Überstand in ein Ultrazentrifugenrohr überführt und 1 Stunde bei 100 000 × g unter Liefern eines Membranfraktionniederschlags zentrifugiert. Dieser Niederschlag wurde in 2 ml Testpuffer suspendiert und 1 Stunde bei 100 000 × g zentrifugiert. Die als Niederschlag isolierte Membranfraktion wurde in 20 ml Testpuffer erneut suspendiert, verteilt und bei –80°C vor dem Verwenden nach dem Auftauen gelagert.
• (4) Bestimmung der ¹²⁵I-Leuprorelinbindungshemmrate
• Die in vorstehend (2) und (3) hergestellte Ratten- und Humanmembranfraktion wurden mit dem Testpuffer unter Liefern einer Verdünnung von 200 μl/ml verdünnt, die anschließend zu 188 μl je Röhrchen verteilt wurde. Als die Ratten-Hypophysenvorderlappen-Membranfraktion verwendet wurde, wurden jedem Röhrchen gleichzeitig 2 μl einer Lösung von 0,1 mM Verbindung in 60% DMSO (Dimethylsulfoxid) und 10 μl 38 nM ¹²⁵I-Leuprorelin zugefügt. Bei der Zellmembranfraktion der CHO mit den exprimierten humanen GnRH-Rezeptoren wurden jedem Röhrchen gleichzeitig 2 μl einer Lösung von 2 mM Verbindung in 60% DMSO und 10 μl 38 nM ¹²⁵I-Leuprorelin zugefügt. Zum Bestimmen der maximalen Bindung wurde ein Reaktionsgemisch aus 2 μl 60% DMSO und 10 μl ¹²⁵I-Leuprorelin hergestellt. Zum Bestimmen der nicht-spezifischen Bindung wurde ein Reaktionsgemisch aus 2 μl 100 μM Leuprorelin in Lösung in 60% DMSO und 10 μl ¹²⁵I-Leuprorelin hergestellt.
• Als die Ratten-Hypophysenvorderlappen-Membranfraktion verwendet wurde, wurde die Reaktion 90 Minuten bei 4°C ausgeführt. Als die Membranfraktion der CHO mit exprimierten humanen GnRH-Rezeptoren verwendet wurde, wurde die Reaktion 60 Minuten bei 25°C ausgeführt. Nach jeder Reaktion wurde das Reak tionsgemisch abgesaugt und durch ein mit Polyethylenimin behandeltes Whatman-Glasfilter (GF-F) filtriert. Nach dieser Filtration wurde die Radioaktivität des auf dem Filterpapier verbliebenen ¹²⁵I-Leuprorelin mit einem Gammazähler gemessen.
• Der Ausdruck (TB-SB)/(TB-NSB) × 100 (worin SB = Radioaktivität bei zugesetzter Verbindung, TB = maximale gebundene Radioaktivität, NSB = nicht-spezifisch gebundene Radioaktivität) wurde zum Feststellen der Bindungshemmrate (%) jeder Testverbindung berechnet. Weiterhin wurde die Hemmrate durch Ändern der Konzentration der Testsubstanz bestimmt und die 50% Hemmkonzentration (IC₅₀-Wert) der Verbindung wurde aus einer Hill-Kurve berechnet. Die Ergebnisse werden nachstehend dargestellt.
• 
• Versuchsbeispiel 2
• Unterdrückung des Plasma-LH bei kastrierten Affen
• Die Beispielverbindung 2 wurde kastrierten, männlichen Cynomolgus-Affen (Macaca fascicularis) oral verabreicht und das Plasma-LH wurde mengenmäßig bestimmt. Die zum Versuchszeitpunkt in einem Alter von 4 Jahren 9 Monaten bis 6 Jahre 3 Monate verwendeten männlichen Cynomolgus-Affen waren mehr als 3 Monate vor der Untersuchung kastriert worden. Testtieren [n = 3] wurden 30 mg/kg (3 ml/kg) der in 0,5% Methylcellulose suspendierten Verbindung in einer Endkonzentration von 1% durch orale Verabfolgung gegeben und Kontrolltieren [n = 2] wurden 3 ml/kg des 0,5%igen Methylcellulose-Dispergiermittels durch orale Verabfolgung allein gegeben. 24 Stunden und unmittelbar vor der Verabfolgung und 2, 4, 6, 8, 24 und 48 Stunden nach der Verabfolgung wurde Blut für heparinisierte Plasmaproben aus der Oberschenkelvene gesammelt und sofort und Gefrierbedingungen gelagert.
• Die Plasmakonzentrationen wurden durch einen Biotest unter Verwenden von Maushodenzellen bestimmt. Die Hodenzellen wurden aus männlichen BALB/c-Mäusen (8 bis 9 Wochen alt) gesammelt und drei Mal mit 1 ml Dulbeccos modifiziertem Eagle-Medium (DMEM-H) gewaschen, das 20 mM HEPES und 0,2% BSA je Hoden enthielt. Nach 1 Stunde Inkubation bei 37°C wurden die Zellen durch ein Nylonmaschenfilter (70 μm) geführt und zu 8 × 10⁵ Zellen/Röhrchen in Reagenzgläser verteilt. Nachdem die Zellen zweimal mit 0,4 ml DMEM-N gewaschen worden waren, wurden 0,4 ml DMEM-H-Lösung, die entweder Pferde-LH (Sigma Company) als Standard-LH enthielt, oder zuvor bis zu 300fach verdünntes Affenplasma als Testprobe zugefügt, gefolgt von 2 Stunden bei 37°C. Die Testosteronkonzentration in dem Kulturüberstand wurde durch einen Radioimmuntest (CIS Diagnostics Company) bestimmt und die LH-Konzentration in dem Affentestplasma wurde aus der Standardkurve für das Standard-Pferde-LH berechnet.
• Die Ergebnisse werden zusammen in 1 angegeben.
• Die LH-Konzentration wird als Prozentsatz (%) der Grundlinien-LH-Konzentration unmittelbar vor der Verabreichung bei jedem einzelnen Cynomolgus-Affen ausgedrückt und wird als zeitlicher Verlauf dargestellt, wobei die Verabreichungszeit als 0 angenommen wird (durch den Pfeil bezeichnet) und Werte vor und nach der Verabfolgung durch ein Minus- beziehungsweise Pluszeichen angezeigt werden. Die Kontrollgruppe 1 (

  

  ) und die Kontrollgruppe 2 (-♦-) erhielten oral nur eine Dosis 0,5%iges Methylcellulose-Dispergiermittel (3 ml/kg), während die Verbindungsgruppe 1 (-Δ-), Verbindungsgruppe 2 (-☐-) und Verbindungsgruppe 3 (

  

  ) ähnlich eine Dispersion der Beispielverbindung Nr. 2 in 0,5% Methylcellulose (30 mg/kg, 3 ml/kg) erhielten.
• Die Kontrollgruppen zeigten selbst nach der Verabfolgung eine geringe Änderung der LH-Plasmakonzentration. Zum anderen zeigte die LH-Plasmakonzentration bei den Verbindungsgruppen unmittelbar nach der Verabreichung einen raschen Abfall und war 24 Stunden nach der Verabfolgung auf 20% der Grundlinie oder weniger gefallen. Darauf wurde 48 Stunden nach der Verabreichung ein Wiederanstieg der LH-Plasmakonzentration festgestellt.
• Die vorstehenden Ergebnisse zeigen, daß die oral verabfolgte Beispielverbindung eine bedeutsame Senkungswirkung auf die LH-Blutkonzentration aufweist.
• Aus den vorangehenden Ergebnissen ist offensichtlich, daß Verbindungen der vorliegenden Erfindung die Hypophysen-LH-RH-Rezeptoren antagonisieren und die LH-RH-Stimulation aus dem Hypothalamus unter Hemmen der LH-Freisetzung blockieren.
• INDUSTRIELLE ANWENDBARKEIT
• Die Verbindung der vorliegenden Erfindung besitzt eine ausgezeichnete, das Gonadotropin-freisetzende Hormon antagonisierende Aktivität. Sie ist ferner von guter oraler Absorbierbarkeit und ausgezeichneter Stabilität und Pharmakokinetik. Bei niedriger Toxizität ist sie auch in der Sicherheit ausgezeichnet. Daher kann die Verbindung der vorliegenden Erfindung als prophylaktisches oder therapeutische Mittel für hormonabhängige Krankheiten usw. verwendet werden. Konkret ist sie als prophylaktisches oder therapeutisches Mittel bei sexualhormonabhängigen Krebsarten (z. B. Prostatakrebs, Uteruskrebs, Brustkrebs, Hypophysentumor usw.), Prostatahypertrophie, Hysteromyom, Endometriose, Frühreife, Amenorhöesyndrom, multilokulärem Ovarsyndrom, Pickel usw. oder als Schwangerschaftssteuerungsmittel (z. B. Kontrazeptivum), Heilmittel für Unfruchtbarkeit oder als Menstruationssteuerungsmittel wirkungsvoll. Sie ist auch als Steuerungsmittel des tierischen Östrus, als Mittel zur Verbesserung der Fleischqualität oder Steuerungsmittel des tierischen Wachstums auf dem Gebiet der Tierzucht und als Fischablaichförderer auf dem Fischereigebiet brauchbar.

Claims (16)

1. Verbindung der Formel

   

   worin R¹ und R² jeweils ein Wasserstoffatom, eine Hydroxygruppe, eine C_1-4-Alkoxygruppe, eine C_1-4-Alkoxycarbonylgruppe oder eine C_1-4-Alkylgruppe darstellen, die durch (i) Hydroxy, (ii) C_1-7-Acyloxy, (iii) Benzoyloxy, (iv) Amino, das durch 1 oder 2 aus C_1-6-Alkoxycarbonyl, Benzyloxycarbonyl, C_1-4-Acyl, C_1-4-Alkyl und C_1-3-Alkylsulfonyl ausgewählte Substituenten substituiert sein kann, (v) C_1-10-Alkoxy, (vi) C_3-7-Cycloalkyloxycarbonyl-C_1-3-alkoxy und (vii) C_{1- 3}-Alkoxy-C_{1- 3}-alkoxy substituiert sein kann; R³ ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom, eine Hydroxygruppe oder eine C_1-4-Alkoxygruppe darstellt, die durch dieselben, vorstehend angeführten Substituenten substituiert sein kann, oder zwei benachbarte R³ zusammengenommen eine C_1-4-Alkylendioxygruppe bilden können; R⁴ ein Wasserstoffatom oder eine C_1-4 Alkylgruppe darstellt; R⁶ eine C_1-4-Alkylgruppe, die durch dieselben, vorstehend angeführten Substituenten substituiert sein kann, oder eine Gruppe der Formel

   

   darstellt, worin R⁵ ein Wasserstoffatom darstellt oder R⁴ und R⁵ zusammengenommen einen 5- oder 6gliedrigen, N-haltigen Heterocyclus bilden können und n eine ganze Zahl 0 bis 5 darstellt, oder ein Salz davon.
2. Verbindung des Anspruchs 1 oder ein Salz davon, die eine Verbindung der Formel

   

   ist, worin R¹ und R² jeweils ein Wasserstoffatom, eine Hydroxygruppe, eine C_1-4-Alkoxygruppe oder eine C_1-4-Alkylgruppe sind, die substituiert sein kann, wobei die Substituenten wie in Anspruch 1 definiert sind; R³ ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom oder eine C_1-4-Alkoxygruppe ist; R⁴ eine C_1-4-Alkylgruppe ist und R⁵ wie in Anspruch 1 definiert ist.
3. Verbindung des Anspruchs 1 oder ein Salz davon, wobei R¹ eine C_{1- 3}-Alkoxygruppe ist.
4. Verbindung des Anspruchs 3 oder ein Salz davon, wobei R² ein Wasserstoffatom ist.
5. Verbindung des Anspruchs 1 oder ein Salz davon, wobei R³ ein Wasserstoffatom ist.
6. Verbindung des Anspruchs 1 oder ein Salz davon, wobei R⁶ eine Gruppe der Formel

   

   ist, worin R⁵ wie in Anspruch 1 definiert ist.
7. Verbindung des Anspruchs 2 oder ein Salz davon, wobei R⁴ eine C_{1- 3}-Alkylgruppe ist und R⁵ ein Wasserstoffatom ist.
8. Verbindung des Anspruchs 1 oder ein Salz davon, wobei n 1 oder 2 ist.
9. Verbindung des Anspruchs 1 oder ein Salz davon, wobei R¹ (i) eine Hydroxygruppe, (ii) eine C_1-4-Alkoxygruppe oder (iii) eine C_1-4-Alkylgruppe ist, die durch Hydroxy oder C_1-4-Alkylcarbonyloxy substituiert sein kann; R² ein Wasserstoffatom, eine C_1-4-Alkylgruppe oder eine C_1-4-Alkoxycarbonylgruppe ist; R³ ein Wasserstoffatom, ein Halogenatom, eine Hydroxygruppe oder eine C_1-4-Alkoxy-C_1-4-alkoxygruppe ist, oder zwei benachbarte R³ zusammengenommen eine C_1-3-Alkylendioxygruppe bilden; R⁴ ein Wasserstoffatom oder eine C_1-3-Alkylgruppe ist; R⁶ eine C_1-4-Alkoxy-C_1-4-alkylgruppe oder eine Gruppe der Formel

   

   ist, worin R⁵ ein Wasserstoffatom ist oder R⁴ und R⁵ zusammengenommen einen 5- oder 6gliedrigen N-haltigen Heterocyclus bilden, und n 1 oder 2 ist.
10. Verbindung des Anspruchs 1 oder ein Salz davon, wobei R¹ eine Hydroxygruppe, eine Methoxygruppe oder eine C_1-3-Alkylgruppe ist; R² ein Wasserstoffatom oder eine C_1-3-Alkylgruppe ist; R⁴ eine C_1-3-Alkylgruppe ist; R⁶ eine Benzylgruppe ist und n 0 ist.
11. 5-(N-Benzyl-N-methylaminomethyl)-1-(2,6-difluorbenzyl)-6-[4-(3-methoxyureido)phenyl]-3-phenylthieno[2,3-d]pyrimidin-2,4(1H,3H)-dion oder ein Salz davon.
12. Verfahren zum Herstellen einer Verbindung des Anspruchs 1 oder eines Salzes davon, das das Umsetzen einer Verbindung der Formel

    

    worin jedes Symbol wie in Anspruch 1 definiert ist, oder eines Salzes davon mit Carbonyldiimidazol oder Phosgen, gefolgt vom Umsetzen mit einer Verbindung der Formel

    

    worin jedes Symbol wie in Anspruch 1 definiert ist, oder einem Salz davon umfaßt.
13. Pharmazeutische Zusammensetzung, die eine Verbindung des Anspruchs 1 oder ein Salz davon umfaßt.
14. Pharmazeutische Zusammensetzung des Anspruchs 13 zum Antagonisieren des Gonadotropin-freisetzenden Hormons.
15. Pharmazeutische Zusammensetzung des Anspruchs 14 zur Prophylaxe oder Behandlung einer Geschlechtshormon-abhängigen Krankheit.
16. Verwendung einer Verbindung des Anspruchs 1 oder eines Salzes davon zum Herstellen einer pharmazeutischen Zusammensetzung zum Antagonisieren des Gonadotropin-freisetzenden Hormons.