DE60035053T2

DE60035053T2 - Hämatologische kontrolle und system für hämatologische viel-parameter-messungen

Info

Publication number: DE60035053T2
Application number: DE60035053T
Authority: DE
Inventors: Wayne L. Omaha RYAN; John Omaha SCHOLL
Original assignee: Streck Laboratories Inc
Current assignee: Streck Laboratories Inc
Priority date: 1999-08-20
Filing date: 2000-08-17
Publication date: 2008-01-31
Anticipated expiration: 2020-08-18
Also published as: US20020019053A1; CA2382199C; US6399388B1; AU6645900A; US20020022271A1; EP1212613B1; DE60035053D1; CA2382199A1; EP1212613A4; US6403377B1; ATE363657T1; US6406915B2; WO2001014872A1; JP2005121661A; EP1212613A1; US6221668B1; JP2003507740A

Description

GEBIET DER ERFINDUNG
Die vorliegende Erfindung betrifft im Allgemeinen hämatologische Kontrollzusammensetzungen und -systeme und im Besonderen eine hämatologische Kontrollzusammensetzung und ein hämatologisches Kontrollsystem, das zur Messung einer Vielzahl von Parametern in einer Blutprobe mit einem automatisierten Multiparameter-Hämatologie-Instrument verwendet wird.
HINTERGRUND DER ERFINDUNG
Hämatologische Kontrollen für verschiedene automatisierte Instrumente, die beispielsweise rote und weiße Blutkörperchen-Zählungen und Blutplättchen-Zählungen aufnehmen, sind im Fachgebiet bekannt und werden in den folgenden US-Patentschriften Nrn. 3,558,522 ; 3,873,467 ; 4,179,398 ; 4,219,440 ; 4,299,726 ; 4,324,687 ; 4,358,394 ; und 4,436,821 beschrieben. Derzeit macht eine Blutanalyse die Verwendung von einem oder mehreren verschiedenen Einzelinstrumenten und daraus folgend von verschiedenen Blutproben und Blutprobenpräparaten zur Analyse der verschiedenen Blutkomponenten erforderlich. Einige hämatologische Instrumente verfügen nun allerdings über die Möglichkeit, verschiedene Blutparameter zu messen, ohne das Erfordernis getrennter Probenpräparation für jeden Parameter, der gerade getestet wird. Solche Instrumente umfassen das Beckman Coulter STKS- oder Gen-S-System, Abbott Cell-Dyn 4000 Hematology System, Bayer ADVIA 120 und das Sysmex XE2100 System. Diese verbesserten automatisierten Instrumente können eines oder mehrere der Folgenden messen: 1) Retikulozyten, 2) rote Blutkörperchen, 3) nukleierte rote Blutkörperchen, 4) Plättchen, 5) retikulierte Plättchen, 6) weiße Blutkörperchen, einschließlich Lymphozyten, Monozyten, Neutrophile, Eosinophile, Basophile, und 7) weiße Blutkörperchen mit sämtlichen Phänotypen. Somit wäre es wünschenswert, eine hämatologische Kontrollzusammensetzung bereitzustellen, die als Kontrolle in Verbindung mit diesen Instrumenten verwendet werden könnte.
Bei der bevorzugten Ausführungsform umfasst eine hämatologische Kontrollzusammensetzung zur Verwendung mit einem automatisierten Multiparameter-Hämatologie-Instrument eine flüssige Suspension von teilchenförmigen Substanzen, die messbare Merkmale wie Vollblut aufweist. Die Kontrollzusammensetzung umfasst eine oder mehrere Blutkörperchen (d.h. Zellen, die gehandhabt oder behandelt werden, um eine solche Komponente nachzustellen, wie sie im Vollblut vorkommt) oder ihre Analoga (insgesamt als Blutzellkomponenten bezeichnet), die fixiert, stabilisiert oder durch andere Behandlung vor der Endsuspension präpariert sein können oder nicht. Bei verschiedenen Ausführungsformen können die Blutzellenkomponenten aus einer Quelle stammen, die die Größe, Form oder andere messbare Merkmale von menschlichem, tierischem oder anderem Vollblut aufweist. Beispielsweise enthalten die US-Patentschriften Nrn. 4,198,206 ; 4,436,821 ; 5,008,021 ; 5,262,327 ; 5,270,208 ; 5,432,089 ; 5,460,797 ; 5,672,474 ; 5,677,145 ; 5,731,205 ; 5,811,099 und 5,981,282 jeweils Beispiele für diese Typen von Blutzellenkomponenten. Die Kontrolle besitzt eine oder mehrere Blutkomponenten, die den entsprechenden Komponenten in Vollblut gleichen, bei Messung durch das automatisierte Multiparameter-Hämatologie-Instrument. Bei einer solchen Messung würde die Kontrollzusammensetzung die Kalibrierung, den Betrieb und die Akkumulation von Qualitätssicherungsdaten für das automatisierte Multiparameter-Hämatologie-Instrument unterstützen.
Ebenfalls von potentiellem Interesse können die US-Patentschrift Nr. 5,888,790 und "Improved Isolation of Normal Human Reticulocytes via Exploitation of Chloride-Dependent Potassium Transport", Sorette et al., Blood, Bd. 80, Nr. 1 (1. Juli) 1992; Ss. 249-254 sein.
ZUSAMMENFASSUNG DER ERFINDUNG
Es wird eine hämatologische Kontrolle und ein System zur hämatologischen Multiparametermessung bereitgestellt. Die hämatologische Kontrolle stellt die Werte für die verschiedenen Blutbestandteile bereit, die das Multiparameter-Hämatologie-Instrument zu messen vermag. Die hämatologische Kontrollzusammensetzung umfasst Komponenten zur Simulation von Retikulozyten-, weißen Blutkörperchen-, roten Blutkörperchen-, Plättchen- oder retikulierten Plättchenbestandteilen von Vollblut.
Verfahren zur Herstellung und Verwendung der hämatologischen erfindungsgemäßen Kontrollzusammensetzung werden hier ebenfalls bereitgestellt.
Das erfindungsgemäße System umfasst auch ein Hämatologie-Instrument, eine Kontrolle und kann weiterhin Ausgabe- oder Lesevorrichtungen einschließen. Bei einer Ausführungsform umfasst das System weitere periphere Vorrichtungen, wie eine Vorrichtung zur Probennachführung und zu ihrer Zuordnung zu bestimmten Daten, wie ein Strichcodescannersystem.
AUSFÜHRLICHE BESCHREIBUNG DER BEVORZUGTEN AUSFÜHRUNGSFORMEN
Die erfindungsgemäße hämatologische Kontrollzusammensetzung umfasst Komponenten zum Simulieren von einer oder mehreren der folgenden Bestandteile von Vollblut: Retikulozyten, weiße Blutkörperchen, rote Blutkörperchen, nukleierte rote Blutkörperchen, Plättchen oder retikulierte Plättchen. Bei einer Ausführungsform werden die Komponenten in einem isotonischen Medium, das vorzugsweise Lipoprotein einschließt, suspendiert. Die erfindungsgemäße hämatologische Kontrollzusammensetzung stellt Werte für verschiedene Blutbestandteile bereit, die ein Hämatologie-Instrument, wie ein hämatologisches Multiparameter-Instrument, zu messen vermag. Beispiele für hämatologische Multiparameter-Instrumente umfassen diejenigen, die im Handel unter den Bezeichnungen Beckman Coulter STKS oder Gen-S-Systems, Abbott Cell-Dyn 4000 Hematology System, Bayer ADVIA 120 System, Sysmex XE2100 System oder dergleichen uneingeschränkt erhältlich sind.
Die vorliegende Diskussion umfasst mehrere Ansätze, eine erfindungsgemäße Kontrolle vorzunehmen, wobei anerkanntermaßen eine sehr stark bevorzugte Ausführungsform eine Kontrolle mit Komponenten in Betracht zieht, welche die Merkmale von Vollblut simuliert, um Anzeigen auf einem Beckman Coulter GEN-S-Instrument für rote Blutkörperchen, die fünf Populationen von weißen Blutkörperchen, Retikulozyten und Plättchen zu erhalten. Somit wird eine Suspension bereitgestellt, die eine Vielzahl von Teilchen einschließt, die ähnliche Lichtstreuungs-, Leitfähigkeits-, Impedanz-, optische (einschließlich Fluoreszenz), photometrische oder auf anderen Eigenschaften beruhende Reaktionen aufweisen, die durch das Instrument bei Betrieb nachgewiesen werden, wie es für die entsprechenden Komponenten von Vollblut der Fall wäre.
Es wird davon ausgegangen, dass der Begriff "Kontrollzusammensetzung", wie hier verwendet, eine oder mehrere Blutkomponenten (d.h. Blutbestandteile sowie Analoge davon) bedeutet, die, bei Kombination oder bei alleiniger Verwendung in ausreichender Weise, die relevanten Merkmale von Vollblut simulieren, die das Instrument testet. Das Folgende befasst sich mit der Herstellung von verschiedenen konstitutiven Komponenten. Die erfindungsgemäße Kontrolle betrachtet ein Gemisch von zwei oder mehreren Blutkomponenten und vorzugsweise einer Retikulozyten-Komponente und einer Komponente, die mindestens drei und vorzugsweise fünf Subpopulationen von weißen Blutkörperchen simuliert. Die Prozentangaben beziehen sich, wenn nicht anderweitig angegeben, auf das Volumen.
Retikulozyten-Komponente
Die Retikulozyten-Komponente der Kontrollzusammensetzung umfasst eine Komponente, die die relevanten Merkmale zum Nachweis von Retikulozyten unter Verwendung eines erfindungsgemäßen hämatologischen Instruments aufweist. Demnach kann die Kontrolle zweckmäßigerweise stabilisierte Retikulozyten (d.h. unreife denukleierte rote Blutkörperchen, die etwas Ribonucleinsäure enthalten) oder ein Analoges davon enthalten. Beispielsweise kann die Retikulozyten-Komponente unter den möglichen Ausführungsformen echte Säuger-Retikulozyten umfassen, die beispielsweise durch Säuger (z. B. Human)-Erythrozytenverkapselung oder durch Isolierung aus Vollblut hergestellt werden. Die Retikulozyten-Komponente wird auf jede beliebige geeignete Weise hergestellt. Siehe z. B. US-Patentschrift Nr. 5,432,089 . Alternativ ist es möglich, geeignete Retikulozyten durch Erhalt von Blut aus einem anämischen Tier (z. B. einem Schwein, einer Ziege, einem Kaninchen oder dergleichen) zu erhalten.
Bei einer bestimmten bevorzugten Ausführungsform wird die Retikulozyten-Komponente durch ein Verkapselungsverfahren unter Verwendung von Nichtretikulozyten-Blutkörperchen, wie rote Blutkörperchen, aus einem Menschen oder einer anderen Quelle hergestellt. Die roten Blutkörperchen werden verkapselt und stabilisiert. Zur Veranschaulichung werden bei einer Ausführungsform rote Blutkörperchen mit einem relativ hohen MCV (z. B. etwa 85 bis etwa 95 fl und stärker bevorzugt von etwa 88 bis etwa 92 fl) bereitgestellt.
Die Zellen werden in einem geeigneten Verdünnungsmittel (z. B. etwa 0,15 M NaCl) in einem oder in mehreren Waschschritten gewaschen. Die Zellen werden anschließend auf einen gewünschten Hämatokritwert konzentriert, z. B. größer als etwa 50% und stärker bevorzugt größer als etwa 70%.
Anschließend werden die Zellen mit RNA verkapselt. Beispielsweise wird RNA in die roten Blutkörperchen durch einen geeigneten Lyseschritt, z. B. durch hypotonische Lyse, eingekapselt. Dies kann auf vielen Wegen erfolgen, einschließlich durch Mischen roter Blutkörperchen mit einer RNA-Lösung mit einem geeigneten pH-Wert und einer geeigneten Osmolarität. Beispielsweise kann die Lösung eine kleinere Menge an RNA (stärker bevorzugt etwa 1%) enthalten und besitzt einen pH zwischen etwa 7 und 8 (stärker bevorzugt etwa 7,6). Die Lösung wird eingestellt (z. B. mit NaCl), um eine Osmolarität von etwa 40 mOsm zu erhalten.
Die roten Blutkörperchen werden mit der RNA-Lösung in einem geeigneten Anteil, der wie gewünscht variieren kann, vermischt. Bei einer vorliegenden bevorzugten Ausführungsform beträgt das Volumenverhältnis von gepackten roten Blutkörperchen etwa 0,8 bis etwa 1,2: etwa 1 bis etwa 2 und stärker bevorzugt beträgt es etwa 1:1,4. Vor der Lyse oder in einem frühen Stadium der Lyse werden die roten Blutkörperchen und die RNA-Lösung vorinkubiert, wie durch Erwärmen auf über Raumtemperatur (z. B. etwa 37°C). Die Zellen werden in dem Gemisch lysiert, und anschließend werden die roten Blutkörperchen wieder verschlossen. Beispielsweise werden die roten Blutkörperchen wieder verschlossen, indem sie in eine Kochsalzlösung eingebracht und anschließend über Raumtemperatur erhitzt werden (z. B. Zugabe von etwa 0,5 Volumina von etwa 12% NaCl-Lösung und anschließendes Erwärmen oder Tempern der Zellen bei etwa 37°C für etwa 1 h).
Das resultierende Gemisch wird in einen Scheidetrichter gegossen und für einen geeigneten Zeitraum, z. B. mindestens etwa 18 h, bei Raumtemperatur inkubieren gelassen. Anschließend werden die Zellen vom unteren Teil des Trichters gesammelt (z. B. von etwa 70% ab dem Boden oder niedriger). Die Zellen werden mit einem geeigneten Verdünnungsmittel, wie dem Verdünnungsmittel aus Tabelle 1 oder 4, gewaschen. Gegebenenfalls werden etwa 0,5 bis etwa 5% und stärker bevorzugt etwa 0,75% Streck Laboratories Produkt Nr. 233301, auch als STA-Cell bekannt (von Streck Laboratories (Omaha, Nebraska) erhältlich), zugesetzt. Bei der vorliegenden erläuterten Ausführungsform werden die Zellen somit auf eine Weise behandelt, die sie gegenüber einer Nachweisfärbung (z. B. Methylenblau) empfindlich macht.
Bei einer anderen Ausführungsform wird die Retikulozyten-Komponente (wie mit einem Aldehyd oder einem anderen geeigneten Fixierungsmittel) in einem Lactose- oder einem anderen geeigneten Verdünnungsmittel fixiert. Ein gleichartiges Verdünnungsmittel ohne das Fixierungsmittel kann ebenfalls zum Waschen eingesetzt werden.
Weiße Blutkörperchen-Komponente
Bei der vorliegenden Ausführungsform wird die Komponente der Kontrolle, die die Merkmale von weißen Blutkörperchen in Vollblut simulieren soll, aus einem biologischen Material hergestellt. Insbesondere ist das Material ein zellbiologisches Material, und vorzugsweise umfasst das Material menschliche weiße Blutkörperchen (wenngleich Blutkörperchen aus einem beliebigen geeigneten Tier eingesetzt werden können). Bei einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung umfasst die weiße Blutkörperchen-Komponente Materialien zur Replikation der relevanten messbaren Merkmale für einige oder alle von jedem der fünf weißen Blutkörperchentypen, nämlich Lymphozyten, Monozyten, Neutrophile, Eosinophile und Basophile, und sie werden wiederum in ihren in der Technik offenbarten Konzentrationen (siehe z. B. Tabelle 6) bereitgestellt.
Die weiße Blutkörperchen-Komponente der hämatologischen Kontrollzusammensetzung umfasst ein Blutkörperchen (z. B. ein weißes Blutkörperchen) oder ein Analoges davon, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus weißen Blutkörperchen für verschiedene Zelltypen, weißen Blutkörperchen für alle Phänotypen und aus Gemischen davon. Die US-Patentschriften Nrn. 5,270,208 und 5,262,327 stellen Beispiele für eine geeignete weiße Blutkörperchen-Komponente bereit (siehe auch US-Patentschrift Nr. 5,529,933 ). Natürlich erkennt der Fachmann, dass die vorliegende Erfindung nicht auf weiße Blutkörperchen-Komponenten, die nur aus weißen Blutkörperchen hergestellt werden, begrenzt ist. Analoge, die aus irgendeiner einer Vielzahl von anderen Quellen hergestellt wurden, sind möglich, einschließlich, jedoch nicht beschränkt auf, rote Blutkörperchen aus Vögeln, Reptilien, Säugern, etc.
Die Zellen werden gepackt bereitgestellt (z. B. 2 bis 3 Packungen pro Flasche). Die Zellen werden mit einer Reihe von Schritten zur selektiven Lyse von sämtlichen unerwünschten Blutkörperchen, die in dem Material, wie bereitgestellt, vorhanden sind, behandelt; zum Waschen der Zellen; und zum Fixieren oder zum anderweitigen Stabilisieren der Zellen.
Die selektive Lyse kann auf jede beliebige Weise erreicht werden, beispielsweise durch Kontaktieren der unerwünschten Blutkörperchen mit einem Lysemittel. Jedes beliebige geeignete Lysemittel kann eingesetzt werden. Gepufferte Halogenide, wie Ammoniumchlorid und Trizma-Base (z. B. etwa 7,5 g Ammoniumchlorid und 2 g Tris pro 1), zeigen eine geeignete Klasse von Lysemitteln auf, dort, wo die unerwünschten Zellen rote Blutkörperchen einschließen. Die Lyse wird durch eine Reihe von aufeinander folgenden Waschschritten mit dem Lysemittel erreicht. Gegebenenfalls wird mit den Zellen vor der Lyse ein Vorfixierungsschritt durchgeführt, wie durch ihr In-Kontakt-Bringen mit einem geeigneten Fixierungsmittel, durch Erwärmen oder durch beides. Beispielsweise werden die Zellen mit einer gepufferten antimikrobiellen Kochsalzlösung, (die gegebenenfalls ein Verdünnungsmittel, wie in Tabelle 4 beschrieben, enthält), zusammengebracht, die eine geeignete Menge eines Fixierungsmittels (z. B. etwa 0,11% Formaldehyd) einschließt.
Die Lyse kann in einem einzigen Schritt oder in einer Vielzahl von Schritten (z. B. für etwa 1 h, anschließend für etwa 25 min) erfolgen, wobei nach jedem Schritt das Lysemittel entfernt und frisches Mittel eingebracht wird. Nach der Lyse werden die Zellen zur Entfernung des Lysemittels gewaschen. Jede geeignete Waschzusammensetzung und jede Waschtechnik können eingesetzt werden. Beispielsweise kann die zuvor genannte gepufferte antimikrobielle Kochsalzlösung (ohne ein Fixierungsmittel) eingesetzt werden. Unter Verwendung dieser Lösung werden die Zellen in mindestens einem Schritt und vorzugsweise in zwei Schritten gewaschen, wobei die Zellen mit einer geeigneten Geschwindigkeit (z. B. etwa 900 U/min für etwa 10 min) (z. B. etwa 200 × g) zentrifugiert werden.
Vor dem Fixieren kann es bevorzugt sein, die Zellen ferner in einem Albumin enthaltenden Verdünnungsmittel, wie etwa 2% BSA in einem Verdünnungsmittel, wie dasjenige von Tabelle 1, vorzubehandeln. Vorzugsweise besitzt das Verdünnungsmittel einen pH-Wert von etwa 8 und eine Osmolarität von etwa 175 bis etwa 300 (z. B. etwa 215). Jede geeignete Zeitdauer für die Vorbehandlung kann eingesetzt werden, z. B. etwa 1 h, wenn sie bei etwa 6°C gehalten werden.
Die Zellen werden auf jede geeignete Weise fixiert, die zur Denaturierung des Proteins auf der Zelloberfläche ausreicht. Die Zellen können erwärmt, mit einem Fixierungsmittel kontaktiert werden oder beides. Der Fachmann erkennt, dass, obwohl das bevorzugte Fixierungsmittel ein Aldehyd ist, jedes geeignete Mittel (vorzugsweise in einer hypotonischen Lösung), einschließlich beispielsweise derjenigen, die einen Aldehyd, einen Alkohol, einen heterocyclischen Harnstoff (z. B. Diazolidinylharnstoff (bekannt als DU), Imidazolidinylharnstoff (bekannt als IDU) oder ein Gemisch davon) enthalten, oder ein Gemisch davon verwendet werden kann. Unter den geeigneten Fixierungsmitteln ist ein besonders wirksames, Alkohol enthaltendes Mittel 50 Vol.-% [1-Methyl-2-(5-methyl-3-oxazolidinyl)-ethoxy]methoxy]-methanol (z. B. NUOSEPT 145, von HULS America, Inc.) oder ein Gemisch davon. Bei einer vorliegenden bevorzugten Ausführungsform wird der Aldehyd aus der Gruppe gewählt, bestehend aus Formaldehyd, Glutaraldehyd und Gemischen davon.
Zur Veranschaulichung wird ein Fixiergemisch so hergestellt, dass es etwa 10 Teile Zellen, etwa 20 Teile destilliertes Wasser, ein Mittel zur Erhöhung der Osmolarität durch die Zellmembran, zur Unterstützung der Bildung von Cluster in Streudiagrammpopulationsauslesungen oder für beides (z. B. etwa 5 g/l eines Zuckers, wie Sorbit), ein Mittel zur Unterstützung der Stabilisierung der Auslesung von Monozyten (z. B. etwa 4% DU) und ein Fixierungsmittel, wie etwa 4 Teile Formaldehyd und etwa 0,1 Teile Glutaraldehyd einschließt. Das Fixieren wird für einen geeigneten Zeitraum und bei einer geeigneten Temperatur durchgeführt. Unter Verwendung dieses Fixierungsmittels wird das Fixieren etwa 2 bis etwa 3 Tage lang bei etwa 22°C (d.h. erwärmt vor dem Fixieren nach der Kühlung) durchgeführt.
Die fixierten Zellen werden mit einem geeigneten Spülmaterial (z. B. ein Zellstabilisator in einem Verdünnungsmittel) gewaschen, um das Fixierungsmittel zu entfernen. Zur Veranschaulichung werden 2 Wäschen während Zentrifugation bei etwa 900 U/min für etwa 10 min (z. B. etwa 200 xg) in einer Lösung vorgenommen, die einen Metallhalogenid-(z. B. etwa 5% NaF)-Zellstabilisator in einem Verdünnungsmittel (z. B. ein Verdünnungsmittel mit der in Tabelle 2 ausgeführten Zusammensetzung) enthält.
Bei einer weiteren erläuternden Ausführungsform werden beim Herstellen der weißen Blutzellkomponente für die erfindungsgemäße Kontrollzusammensetzung die Zellen durch Standardabtrennung aus Vollblut oder aus einem Teil des zuvor fraktionierten Vollbluts, das die gewünschte Zellpopulation enthält, erhalten. Die Zellen werden resuspendiert, beispielsweise in einer Phosphat-gepufferten Lösung, die Polyethylenglycol 20.000 (PEG), Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA) und Magnesiumgluconat mit 2% Rinderserumalbumin enthält. Die Osmolarität dieser Lösung reicht vorzugsweise aus, um die weißen Blutkörperchen vor der Fixierung (z. B. etwa 215 mosm) zu quellen. Anschließend können die Zellen in dieser Lösung z. B. bei etwa 6°C 1 h gelagert werden.
Die Zellen werden in einem geeigneten Medium fixiert, um vorzugsweise die Oberfläche zu denaturieren oder um das Konservieren der Zellmorphologie anderweitig zu erreichen. Zur Erläuterung bei einer Ausführungsform in einer Lösung von destilliertem Wasser, das 5 g/l Sorbit, 7,4% Formaldehyd und 0,125% Glutaraldehyd enthält. Natürlich können andere geeignete Fixierungsmittel in geeigneten Mengen verwendet werden. Bei einer stark bevorzugten Ausführungsform werden die weißen Blutkörperchen und die Fixierlösung bei einer Temperatur gehalten, die zur Bereitstellung einer entsprechenden weißen Blutkörperchenzusammensetzung ausreicht (z. B. zwischen etwa 4°C und 12°C). Das Fixierungsmittel wird den Zellen in einem geeigneten Verhältnis zugesetzt. Beispielsweise wird bei einer Ausführungsform ein Verhältnis von 10 ml Zellsuspension zu 24 ml Fixierlösung verwendet. Das destillierte Wasser in der Fixierlösung quillt die weißen Blutkörperchen weiter, während das Fixierungsmittel die Zellmembran stabilisiert. Die Zellen werden somit 2 Tage bei Raumtemperatur in dem Fixierungsmittel belassen.
Nach der Fixierung werden die Zellen vorzugsweise gewaschen. Bei einem Aspekt werden sie in einer Phosphat-gepufferten Lösung gewaschen. Eine solche Lösung enthält Polyethylenglycol, (PEG), Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA), Magnesiumgluconat und Rinderserumalbumin. Lipoproteinkonzentrat wird in einer Menge von 150 mg/dl HDL zugesetzt, um die Zellen vor der Verwendung zu lagern, um die Stabilität der Streudiagrammposition zu verbessern, während die weißen Blutkörperchen noch nicht den anderen Komponenten der Kontrollzusammensetzung zugesetzt werden.
Es wird davon ausgegangen, dass weiße Blutkörperchen, die wie in der US-Patentschrift Nr. 5,459,073 beschrieben zur Durchflusscytometrie hergestellt werden, zur Phänotypisierung eingesetzt werden können. Durch Mischen der beiden Typen von weißen Zellen können beide Anforderungen, d.h. weiße Blutkörperchen für verschiedene Zelltypen und Phänotypen, erfüllt werden, da die zur Phänotypisierung hergestellten Zellen im Allgemeinen nicht mit der Position von anderen weißen Blutkörperchen auf den Histogrammen/Streudiagrammen interferieren sollten.
In Kontrollen für bestimmte Instrumente müssten weiße Blutkörperchen möglicherweise verdünnt oder konzentriert werden, beispielsweise ist für die Zell-Dyn-Instrumente eine Verdünnung auf eine Zellzahl von 10.000 bevorzugt.
Rote Blutkörperchen-Komponente
Bei der vorliegenden Ausführungsform wird die Komponente der Kontrolle, die die Merkmale von roten Blutkörperchen im Vollblut simulieren soll, aus einem biokompatiblen Material hergestellt. Insbesondere ist das Material ein zellbiologisches Material, und vorzugsweise umfasst das Material menschliche rote Blutkörperchen (obwohl gleichwertige Blutkörperchen aus jedem beliebigen geeigneten Tier eingesetzt werden können).
Die Zellen, wie bereitgestellt, werden aus dem flüssigen Medium oder dem Überstand, in dem sie geliefert werden, durch jede geeignete Trenntechnik abgetrennt, einschließlich, jedoch nicht begrenzt auf, Zentrifugation, Filtration oder dergleichen. Die Zellen werden nacheinander mit einem oder mehreren (z. B. 3) aufeinanderfolgenden Waschschritten gewaschen, wonach überschüssiger Überstand entfernt wird. Vorzugsweise werden die Zellen in einem Verdünnungsmittel (z. B. wie das Verdünnungsmittel von Tabelle 2) gewaschen und gegebenenfalls in einer oder mehreren zusätzlichen Komponenten, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einem Zellstabilisator, einem Albumin, einem Mittel zur Verminderung der Zellhämolysewahrscheinlichkeit in Gegenwart von Sauerstoff, und Gemischen davon, gewaschen. Bei einem stärker bevorzugten Aspekt werden die zusätzlichen Komponenten aus der Gruppe ausgewählt, bestehend aus einem Metallhalogenid-Zellstabilisator, Rinderserumalbumin (RSA), einem Antioxidans und Gemischen davon. Bei noch einer stärker bevorzugten Ausführungsform ist das Verdünnungsmittel eines, wie dasjenige aus Tabelle 4, und es enthält etwa 0,003 bis etwa 0,010 (und stärker bevorzugt etwa 0,005%) NaF, etwa 2% RSA und etwa 0,005 bis etwa 0,020 (und stärker bevorzugt etwa 0,010%) Sulfasalizin. Wenn gewünscht kann auch das Verdünnungsmittel aus Tabelle 1 verwendet werden.
Gegebenenfalls werden je nach Endanwendung und kommerziellen Überlegungen ein oder mehrere Mittel zur Herabsetzung der Zersetzungsgeschwindigkeit in einer geeigneten Menge eingesetzt; beispielsweise etwa 0,25 bis etwa 2%, und stärker bevorzugt etwa 0,75% eines Materials, das von Streck Laboratories (Omaha, Nebraska) unter der Produktnummer 233301 oder der Bezeichnung STA-CELL (welches Material auch zweckmäßigerweise für eine oder mehrere der anderen Komponenten zugesetzt werden kann) zur Verfügung steht. Weiterhin werden die Zellen gegebenenfalls vorzugsweise in einer im Wesentlichen glucosefreien Umgebung hergestellt. Bei wieder einer anderen fakultativen Ausführungsform werden die Zellen nach dem Waschen fixiert (z. B. durch einen geeigneten Proteindenaturierungsschritt, wie durch Glutaraldehydfixierung) und anschließend weiter gewaschen.
Die Zellen können beliebig lange gewaschen und (in der gleichen Waschlösung oder in einer anderen, z. B. in einer mit höherer Konzentration) beliebig oft resuspendiert werden.
Der Fachmann wird erkennen, dass die roten Blutkörperchen von sämtlichem anderen Zellmaterial freigewaschen werden können, wie durch Verwendung eines Magnesiumgluconatverdünnungsmittels.
Zur weiteren Erläuterung-werden bei einer anderen Ausführungsform konzentrierte rote Blutkörperchen bereitgestellt, die von dem dazugehörigen Überstand abgetrennt wurden, und es werden konzentrierte menschliche rote Blutzellpackungen in einer Lösung (z. B. Phosphat-gepufferte Lösung, die PEG (MW = 20.000) enthält) suspendiert und über Nacht absetzen gelassen. Der Überstand wird anschließend entfernt, und 0,5% NaCl mit PEG wird den gepackten roten Blutkörperchen in einem gleichen Volumen zugesetzt und bei Raumtemperatur 4-5 h stehen gelassen. Der Überstand wird wieder entfernt, und die Zellen werden in der NaCl-Lösung resuspendiert und über Nacht bei 6°C gelagert. Die Packungen werden weiterhin auf übermäßige Hämolyse untersucht und aus dem Bestand genommen. Die verbleibenden Packungen werden auf der Grundlage der MCV zu Chargen vereinigt, wobei 12-14 Packungen zur Herstellung einer Charge zusammengefasst werden. Die Chargen werden wiederum in der NaCl-Lösung etwa 4-5 h bei Raumtemperatur resuspendiert. Natürlich können andere Zeiten und Temperaturen eingesetzt werden.
Jede Charge wird in einer Phosphat-gepufferten Lösung, die PEG, EDTA und Magnesiumgluconat enthält, resuspendiert. Die Zellen werden absitzen gelassen, der Überstand wird entfernt, und die Zellen werden in der obigen Lösung mit niedrigeren PEG-Konzentrationen zur Aufbewahrung bis zu 90 Tagen bei 6°C resuspendiert.
Ein Verdünnungsmittel, das zum Stabilisieren der roten Blutkörperchen auf dem Coulter STKS wirksam ist, umfasst eine Phosphat-gepufferte Lösung, die PEG, Na₂EDTA, Magnesiumgluconat und ein Antioxidans (z. B. Sulfasalacin oder α-Tocopherol) enthält, wobei das Antioxidans zugesetzt wird, um Hämolyse zu verhindern, wenn das Lipoprotein der erfindungsgemäßen Kontrollzusammensetzung zugesetzt wird. Die Endverdünnung enthält auch etwa 2% Rinderserumalbumin, um die Position der weißen Blutkörperchen zu verbessern. Nachdem die Zellen in diesem Verdünnungsmittel gewaschen wurden, wird STA-CELL von Streck Laboratories (Omaha, Nebraska) in einer Menge von etwa 75% des Gesamtvolumens der roten Blutkörperchen zugesetzt, um den MCV zusätzliche Stabilität zu verleihen.
Gegebenenfalls kann es bei bestimmten Anwendungen wünschenswert sein, die roten Blutkörperchen nach Entfernen von überschüssigen roten Blutkörperchen zu fixieren, wie durch langsame Zentrifugation. Beispielsweise wird für eine solche Ausführungsform das Verdünnungsmittel von Tabelle 1 eingesetzt. Die Zellen werden gewaschen und in dem Verdünnungsmittel auf eine geeignete Konzentration (z. B. etwa 4 × 10⁶/mm³) resuspendiert. Vorzugsweise beträgt der pH etwa 7, und in der Suspension befindet sich keine Glucose. Ungefähr 1:1 Anteile der Zellen werden mit dem Verdünnungsmittel und einer geeigneten Menge eines Fixierungsmittels (z. B. etwa 0,007% bis etwa 0,01% Glutaraldehyd (pro Count)) für eine geeignete Zeitdauer und bei einer geeigneten Temperatur (z. B. 22°C für etwa ein oder zwei Tage) gemischt. Die resultierenden Zellen werden anschließend mehrmals (z. B. etwa 3 bis etwa 8 Mal) in einem gleichen Verdünnungsmittel (vorzugsweise bei einem pH zwischen 7 und 8) gewaschen. Die Zellen werden bei etwa 1.500 etwa 15 min zentrifugiert. Dekantieren und Ultrabeschallung werden, sofern benötigt, durchgeführt. Ferner können die Zellen weiterhin, wenn gewünscht, durch die Zugabe einer geeigneten Menge von STA-CELL (z. B. etwa 0,75%) von Streck Laboratories, Inc. (Omaha, Nebraska) behandelt werden.
Nukleierte rote Blutkörperchen-Komponente
Sofern verwendet, umfasst die nukleierte rote Blutkörperchen-Komponente der erfindungsgemäßen Kontrollzusammensetzung nukleierte rote Blutkörperchen oder ein Analoges davon, wie aviäre rote Blutkörperchen, z. B. Truthahn- oder Hühner-Erythrozyten. Beispielsweise werden Truthahn-Erythrozyten in einer Phosphatgepufferten Lösung gewaschen und auf eine Zellzahl von etwa 1 × 10⁶/mm³ eingestellt. Die Zellen werden mit einer Phosphatlösung (Volumen entsprechend dem Zellvolumen) + 0,4% Bd./Bd. Glutaraldehyd bei Raumtemperatur 1 Tag lang fixiert und anschließend in einem Phosphatpuffer gewaschen.
Die fixierten Truthahn-Erythrozyten werden der erfindungsgemäßen Kontrollzusammensetzung zugesetzt, um eine Zellzahl entsprechend mindestens 10% der weißen Blutkörperchenzählung zu ergeben, um auf dem Coulter STKS oder dem Cell-Dyne 4.000, hergestellt von Abbott Laborstories, NRBC-Indentifizierungssignale zu erzeugen. Obwohl das vorliegende Beispiel die Verwendung von Truthahnzellen betrachtet, können Zellen aus anderen Zellquellen verwendet werden, wie es dem Fachmann bekannt ist.
Plättchen-Komponente
Bei einer bevorzugten Ausführungsform der vorliegenden Erfindung stellt die hämatologische Kontrollzusammensetzung zusätzlich eine Plättchenkomponente, vorzugsweise eine simulierte Plättchenkomponente bereit. Unter anderen möglichen Typen kann die Plättchenkomponente stabilisierte menschliche Plättchen oder simulierte Plättchen aus Ziegen-, Rinder- oder Schweine-Blutkörperchen einschließen. Bei einer Ausführungsform werden sie aus roten Blutkörperchen hergestellt. Siehe US-Patentschriften Nrn. 4,160,644 und 4,198,206 , die ein Beispiel für eine geeignete Plättchen-Referenzkontrolle und Herstellungsverfahren offenbaren. Der Fachmann kennt eine Anzahl von anderen Techniken zur Herstellung simulierter Plättchen.
Wie die Plättchen hergestellt werden, kann im Allgemeinen von der Quelle der Zellen abhängen (d.h. ob sie tierische Blutkörperchen sind, die geschrumpft, gequollen oder anderweitig größen- oder formbehandelt sind, um Plättchen zu gleichen, oder ob sie Plättchen aus Blut sind). Im Allgemeinen werden die Zellen gewaschen, gegebenenfalls vorfixiert, größen- und formbehandelt und dann fixiert oder anderweitig bezüglich Größe und Form stabilisiert und neutralisiert.
Beispielsweise wird die Plättchenkomponente aus tierischen Blutkörperchen, wie Ziegen-Erythrozyten, hergestellt. Die Zellen werden ein- oder mehrmals (z. B. etwa dreimal) in einer geeigneten Pufferlösung, wie gepufferte Kochsalzlösung (z. B. Phosphat-gepufferte Kochsalzlösung), gewaschen. Die Lösung kann eine geeignete Menge eines Chelatbildners (z. B. etwa 1% Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA)) enthalten.
Gegebenenfalls werden die Zellen in einer geeigneten Weise vorfixiert, um den Schritt ihrer Größen- und Formbehandlung zu unterstützen. Zur Erläuterung werden die Zellen mit einer geeigneten Vorfixierlösung (z. B. 1:1 der ursprünglichen Waschlösung mit einem Fixierungsmittel (z. B. etwa 0,0085% Glutaraldehyd)) in Kontakt gebracht. Die Menge eines solchen Fixierungsmittels kann natürlich zweckmäßigerweise nach Bedarf eingestellt werden, um die Größeneinteilungsrate (z. B. die Schrumpfrate) zu kontrollieren. Vorzugsweise wird die Vorfixierlösung auf eine erhöhte Temperatur (z. B. etwa 30°C) erwärmt, und das Vorfixieren wird eine ausreichende Zeit lang bei einer solchen Temperatur (z. B. etwa 90 min) durchgeführt. Nach dem Vorfixierschritt wird der Überstand entfernt, wie durch Zentrifugieren, Absaugen oder durch beides.
In Fällen, in denen die Größen- und Formbehandlung durchgeführt werden, um die Zellen zu schrumpfen und um eine simulierte Plättchenstruktur zu bilden, werden die Zellen vorzugsweise auf geeignete Weise (z. B. unter Verwendung eines Lysemittels, wie Ammoniumchlorid-Tris) lysiert. Während des Lysierens können Zellgröße und Zellform unter Verwendung eines geeigneten Instruments, wie das H3 von Bayer Corporation (ein hämatologischer Analysator mit einem laseroptischen Nachweissystem), überwacht werden. Anschließend werden die Zellen ein- oder mehrmals mit einem geeigneten Verdünnungsmittel (z. B. das Verdünnungsmittel von Tabelle 3) gewaschen.
Ebenso wie die zuvor genannten Blutkörperchen werden die simulierten Plättchen auf jede geeignete Weise fixiert, vorzugsweise eine, die das Protein auf der Zelloberfläche denaturiert. Bei einer besonders bevorzugten Ausführungsform werden die Zellen in einer 1:1-Lösung mit einem Verdünnungsmittel, wie dasjenige von Tabelle 3, und etwa 0,1% Formaldehyd fixiert. Vorzugsweise ist die Temperatur der Fixierungslösung für eine geeignete Zeitdauer (z. B. etwa 3 Tage) erhöht (z. B. etwa 37°C). Anschließend werden die Zellen mit einer geeigneten Waschlösung gewaschen, um das Fixierungsmittel zu entfernen, wobei vorzugsweise auch Maßnahmen zur Neutralisierung von nicht umgesetztem Fixierungsmittel, welches nicht an die Zelloberfläche gebunden hat, ergriffen werden. Zur Erläuterung, insbesondere dort, wo das Fixierungsmittel ein Aldehyd ist, wird eine geeignete Menge einer Glycinlösung bei der Waschlösung eingesetzt. Ein oder mehrere zusätzliche Waschschritte können durchgeführt werden, wobei nach Wunsch ein oder mehrere zusätzliche Waschlösungen eingesetzt werden. Beispielsweise können anschließende Waschschritte unter Verwendung der Waschzusammensetzung von Tabelle 3, Tabelle 4 oder eines Gemisches davon durchgeführt werden.
Es ist bekannt, dass die Plättchenkomponente aus menschlichem Blut unter Verwendung jedes geeigneten Verfahrens hergestellt werden kann. Beispielsweise wird menschliches Blut uneingeschränkt bevorzugt in einem Verdünnungsmittel mit einem Fixierungsmittel (z. B. ein Verdünnungsmittel, wie dasjenige von Tabelle 4 mit etwa 0,10% Formaldehyd) bereitgestellt. Gegebenenfalls werden die roten Blutkörperchen entfernt, und die resultierenden Zellen werden mit den fixierten Zellen vermischt. Beispielsweise werden die roten Blutkörperchen in Mengen von etwa 400 ml pro Behälter etwa 10 min bei etwa 900 U/min) zentrifugiert.
Die so bereitgestellten Zellen werden in ein Fixierungsmittel übergeführt (z. B. etwa in Anteilen von 1:1 in ein Verdünnungsmittel, wie dasjenige von Tabelle 3, mit einer geeigneten Menge an Fixierungsmittel (z. B. etwa 0,075% Glutaraldehyd)). Das Fixieren erfolgt etwa 2 Tage bei etwa 22°C. Nach der Fixierung wird die Zentrifugation bei etwa 1.800 U/min etwa 20 min (für 400 ml-Behälter) durchgeführt. Zwei getrennte Sammlungen von Zellen werden vereinigt und gewaschen (wie in einer 1×-Verdünnung wie derjenigen von Tabelle 1) und anschließend zentrifugiert (z. B. bei etwa 1.800 U/min etwa 20 min). Gegebenenfalls werden die Zellen von den restlichen roten Blutkörperchen dekantiert. Ultrabeschallung kann, sofern gewünscht, verwendet werden, um die Plättchenverklumpung anzugehen. Das Dekantieren kann, sofern gewünscht, auch verwendet werden, um zu gewährleisten, dass Zellabfall und rote Blutkörperchen entfernt werden.
Die resultierenden Materialien werden sodann in einem Verdünnungsmittel resuspendiert. Ein Beispiel für ein geeignetes Verdünnungsmittel wäre dasjenige von Tabelle 1 ohne Glucose und mit einem pH von etwa 7.
Retikulierte Plättchenkomponente
Bei einer weiteren Ausführungsform der vorliegenden Erfindung umfasst die Kontrollzusammensetzung eine retikulierte Plättchenkomponente. Zur Erläuterung, ohne Einschränkung, würden Ziegen-Erythrozyten mit verkapselten Nucleinsäuren ein Beispiel für eine retikulierte Plättchenkomponente, die für die vorliegende Erfindung geeignet ist, darstellen. Weitere Analoge können ebenso verwendet werden.
Zur weiteren Erläuterung werden bei einer anderen Ausführungsform retikulierte Plättchen für die erfindungsgemäße Kontrollzusammensetzung durch Anregen einer porösen Blutkörperchenmembran, um den Eintritt von RNA in eine Zelle, den Austritt von Hämoglobin oder beides zu erlauben, hergestellt. Anschließend werden die Zellen größen- oder formbehandelt und stabilisiert. Zur Erläuterung werden Ziegen-Erythrozyten in einer Lösung von etwa 0,9% NaCl vorgelegt und auf 70-80% Hämatokrit (HCT) konzentriert. Gleiche Volumina von konzentrierten roten Blutkörperchen und 4% RNA-Lösung (jeweils 20 ml) eingestellt auf 300 mosm mit einem geeigneten Salz (z. B. KCl) werden miteinander vermischt und gegen 500 ml einer hypotonischen Lösung, wie eine Lösung, die Glycerin enthält (osm = 90-100), 90 min bei 6°C dialysiert. Die Dialyse ist erforderlich, um die Osmolarität langsam zu ändern, ohne die Zellen zu beschädigen. Die resultierende Osmolaritätsänderung in der roten Blutkörperchenlösung erfolgt von 300 mosm auf etwa 150 mosm. Dieser Prozess ruft in der Zellmembran Löcher hervor, um die RNA in der roten Blutkörperchenlösung in die roten Blutkörperchen eindringen zu lassen.
Die Osmolarität wird durch Dialyse der roten Blutkörperchen, die RNA enthalten, gegen eine isotonische Lösung wieder auf Isotonie gebracht. Diese Dialyse erfolgt bei Raumtemperatur für 30 min, und die End-Osmolarität der Zellen beträgt etwa 260 mosm. Dieses Verfahren verschließt die Löcher wieder, die durch die hypotonische Dialyse hervorgerufen wurden, und schließt somit die RNA im Inneren der Zellen ein.
80 ml des verschließenden Verdünnungsmittels, das 0,1% Nuosept 101 enthält, werden den verkapselten roten Blutkörperchen zugesetzt, und das Gemisch wird 3 h bei 37°C erwärmt. Dieser Erwärmungsschritt unterstützt die Lyse der aus dem Verkapselungsprozess geschwächten Zellen und härtet die Membranen der verkapselten roten Blutkörperchen.
Zur Erläuterung werden Ziegen-Erythrozyten von den anderen Bestandteilen des Ziegenvollbluts abgetrennt. Beispielsweise werden die Zellen dreimal in PBS gewaschen, um das Plasma und weiße Blutkörperchen zu entfernen. Die Konzentration wird auf 8 × 10⁶/mm³ eingestellt und mit einem PBS-Volumen, entsprechend demjenigen der Zellen, fixiert, die 0,224-0,320% Glutaraldehyd enthalten, wobei die Menge an Schutz bereitgestellt wird, die benötigt wird, um während des Schrumpfungsschrittes die ordnungsgemäße Lyse zu ermöglichen. Die Zellen werden bei 30°C 1 h inkubiert und bei 1.200 U/min 5 min zentrifugiert. Der Überstand wird entfernt, und das Zellvolumen wird auf 1/4 des fixierten Volumens eingestellt.
Eine Ammoniumchloridlösung wird den Zellen zum Angleichen an das ursprüngliche Volumen der fixierten Zellen zugesetzt. Ohne den Anspruch auf Theoriegebundenheit, ruft die Ammoniumchloridlösung in der Membran Löcher hervor, um zu ermöglichen, dass das Hämoglobin die Zellen verlässt, während der Glutaraldehyd vor der völligen Lyse schützt. Die Zellen werden bezüglich des Hämoglobinverlustes auf der Grundlage der (MPV) Abnahmen auf einem Bayer H-1 überwacht. Wenn das MPV bei 10 fl auf dem Bayer H-1 liegt, werden die Zellen mit einer Phosphat-gepufferten Salzlösung verdünnt und bei 1.800 U/min 20 min zentrifugiert. Der Überstand wird entfernt, und die Zellen werden gewaschen, um das freie Hämoglobin zu entfernen und um die Membran um das Hämoglobin zu schrumpfen, damit ein MPV von ungefähr 10 fl auf Impedanzinstrumenten, wie S + IV, hergestellt von Beckman Coulter, erzeugt wird.
Wenn das MPV bei 10 fl auf dem H-1 liegt, werden die Zellen mit einer Phosphatgepufferten Lösung verdünnt und bei 1.800 U/min 20 min zentrifugiert. Der Überstand wird entfernt, und die Zellen werden gewaschen, um freies Hämoglobin zu entfernen und um die Membran um das Hämoglobin zu schrumpfen, damit ein MPV von ungefähr 10 fl auf Impedanzinstrumenten, wie S + IV, hergestellt von Beckman Coulter, erzeugt wird.
Bei einer stärker bevorzugten Ausführungsform werden die Zellen zur Verhinderung weiteren Hämoglobinverlustes und weiterer Schrumpfung der Membran mehr als einmal beispielsweise mit 0,04% Glutaraldehyd in einem Volumen Phosphatgepufferter Lösung, entsprechend dem Zellvolumen bei einer Zählung von 1 × 10⁶/mm³, fixiert. Die Zellen werden über Nacht bei Raumtemperatur belassen und anschließend gewaschen. Obwohl das vorliegende Beispiel die Verwendung von Ziegenzellen betrachtet, können Zellen von anderen Zellquellen eingesetzt werden, wie stabilisierte menschliche Plättchen, wie es dem Fachmann bekannt sein wird.
Suspensionsmedium
Die vorliegende Erfindung betrifft ein Verfahren zur Herstellung einer hämatologischen Kontrollzusammensetzung zur Verwendung mit Multiparametersystemen, umfassend den Schritt des Mischens von einer oder mehreren einer Retikulozyten (Retik)-Komponente, einer weißen Blutkörperchenkomponente, einer roten Blutkörperchenkomponente, einer nukleierten roten Blutkörperchenkomponente, einer Plättchenkomponente und einer retikulierten Plättchenkomponente in einem isotonischen Suspensionsmedium.
Die Komponenten der Kontrolle werden vorzugsweise in entsprechenden Konzentrationen eines geeigneten Suspensionsmediums suspendiert, das es erlaubt, dass die Kontrolle durch automatisierte Instrumente durchgeführt wird. Das Suspensionsmedium besitzt somit einen pH von etwa 6,5 bis etwa 8,5 und ist isotonisch. Beispielsweise kann das isotonische Suspensionsmedium unter den möglichen Ausführungsformen der vorliegenden Erfindung einen Puffer, ein Antioxidanz, ein Protein oder ein Gemisch davon, z. B. Magnesiumgluconat/Ethylendiamintetraessigsäure (EDTA)/Phosphatpuffer mit nukleierten roten Blutkörperchen; den gleichen Puffer mit den Zusatzstoffen HDL, Sulfasalazin und alpha-Tocopherol oder den gleichen Puffer mit 3% Albumin einschließen.
Lipoprotein
Obgleich das in jedem Verdünnungsmittel vorhandende BSA die weiße Blutkörperchenposition auf dem Streudiagramm verbessert, wird auch Lipoprotein vorzugsweise in einer Menge verwendet, die wirksam ist, um ein Streudiagramm bereitzustellen, das Vollblut darstellt, einschließlich der richtigen Positionierung der 5 Subpopulationen von weißen Blutkörperchen. Siehe US-Patentschriften Nrn. 5,270,208 und 5,262,327 . Eine Lipoproteinquelle, vorzugsweise eine, die im Wesentlichen aus hoch dichtem Lipoprotein (d.h. HDL) besteht, wird der Kontrollzusammensetzung zu etwa 0,5 bis etwa 8,0 Vol.-% der Kontrolle und stärker bevorzugt zu etwa 100 bis 175 mg/dl zugesetzt, und weiterhin wird der Lipoproteinquelle α-Tocopherol zugesetzt, um Peroxide zu reduzieren, die durch Oxidation der Lipoproteine erzeugt wurden. Ein Beispiel für eine geeignete, im Handel erhältliche Form von Lipoprotein ist SUPERTRATE (erhältlich von der Fa. Bayer).
Mischungskomponenten
Stammvolumina der konstitutiven Komponenten werden in den folgenden ungefähren Konzentrationen hergestellt:

RBC: 6,0 × 10⁶/mm³

WBC: 150.000/mm³

Plättchen: 10 × 10⁶/mm³

Retikulozyten: 50% von 5,5 × 10⁶/mm³ Retikulozyten-Zählung

NRBC: 0,5 × 10⁶/mm³

Zur Herstellung der fertigen Kontrollzusammensetzung, beispielsweise in einem 5-1-Volumen, werden die Stammvolumina der konstitutiven Komponenten wie folgt kombiniert:

	ungefähre	ungefähres
	Zielzählung	Stammvolumen
RBC:	4,5 × 10⁶/mm³	3,750 ml
WBC:	8,0 × 10⁶/mm³	266 ml
Plt (Plättchen):	225 × 10⁶/mm³	112 ml
Retikulozyten:	3%	370 ml
NRBC:	0,01%	4,5 ml

Die vereinigten Bestandteile werden durch Zugabe eines geeigneten Endverdünnungsmittels (z. B. hergestellt gemäß der US-Patentschrift Nr. 5,262,327 , hier durch Bezugnahme eingeschlossen, (vorzugsweise SUPERTRATE oder eine gleichwertige Substanz enthaltend)) auf ein Endgesamtvolumen von 5 l gebracht. Der Fachmann erkennt, dass es andere Mittel und Verfahrensweisen gibt, um diese und andere Ausführungsformen der Erfindung herzustellen. Ferner können die Konzentrationen variiert werden, um Kontrollen mit zuvor festgelegten abnormen Messdaten beim Testen bereitzustellen.
Kontrollverwendung
Das Folgende erörtert Beispiele von Verfahren zur Verwendung der Kontrollzusammensetzung, um die Exaktheit und Reproduzierbarkeit des Betriebs eines automatisierten Multiparameter-Hämatologie-Instruments zu bestimmen. Beispielsweise wird ein automatisiertes Multiparameter-Hämatologie-Instrument, wie ein Beckman Coulter STKS oder Gen-S System, das Abbott Cell-Dyn 4000 Hematology System, Bayer ADVIA 120, und das Sysmax XE2100 System bereitgestellt, gegebenenfalls mit einem Objektträger-Präparationsmodul. Die beanspruchte Kontrollzusammensetzung wird erhalten oder hergestellt, die beispielsweise eine behandelte stabilisierte menschliche rote Blutkörperchenkomponente und eine Retikulozytenkomponente mit Qualitätskontrollwerten in einem ungefähren Bereich beispielsweise von 1%, 2,5% bzw. 9% enthält. Sie wird vor der Verwendung gekühlt. Zu Beginn der Testung wird die Kontrollzusammensetzung etwa 15 min auf Raumtemperatur aufwärmen gelassen, per Hand gemischt und auf Resuspension des Inhalts überprüft.
Die Kontrollzusammensetzung wird durch das gleiche Standardverfahren wie die Testproben hergestellt und ausgewertet, die chargenweise durch die Verwendung einer geeigneten Kassette mit Öffnungen zur Aufnahme von Teströhrchen getestet werden können. Nach der Präparation werden die Kontrollzusammensetzung und die Testproben durch Zählen der Populationsanzahl eines jeden betreffenden Komponententyps mit einem automatisierten Multiparameter-Hämatologie-Instrument, das eine visuelle Anzeige der Messwerte ergibt, ausgewertet.
Für ein Coulter-System kann das automatische Testinstrument die allgemein als VCS-Technologie (von der Fa. Beckman Coulter auf dem Markt) bekannte Technologie einsetzen. VCS analysiert im Allgemeinen Zellproben hinsichtlich gleichzeitiger Volumenleitfähigkeits- und Streumessungen. Üblicherweise wird eine Ausgangsprobe in Kombination mit geeigneten Reagenzien (die eine Komponente eines Testsatzes einschließen können) und physikalischem Rühren zur Lyse und Zellmessung durch Durchflusszytometrie eingesetzt.
Demnach kann die Probe durch das Coulter-Prinzip der "Gleichstrom"-Impedanz getestet werden, um das Zellvolumen in einer isotonischen Suspension zu messen. Leitfähigkeit kann beispielsweise durch Anlegen von Wechselstrom im Radiofrequenzbereich angewendet werden. Die Energie kann die Zelle durch Kurzschließen der bipolaren Lipidschicht der Zellmembran durchdringen.
Informationen über die Zellen sind auch mit Lichtstreutechniken möglich, wie aus den Streucharakteristiken, die an Zellen als Reaktion auf eine kohärente Lichtquelle, z. B. einen Laserstrahl, nachgewiesen werden.
Natürlich ist die Art und Weise der Probentestung keineswegs auf das Obige beschränkt. Wie erwähnt können weitere Prinzipien eingesetzt werden.

Die jeweiligen Populationszählungen, die aus der Analyse erhalten werden, werden entweder mit einem bekannten Referenzwert für jeden Komponententyp in der Kontrollzusammensetzung oder durch Vergleich der Populationszählungen für jeden Komponententyp in der Testprobe mit den entsprechenden Werten der Komponenten in der Kontrollzusammensetzung verglichen. Die Messwerte, die die Messung von Komponenten in der Kontrollzusammensetzung und in Testproben betreffen, werden gesammelt, aufgezeichnet, gespeichert, verglichen und durch elektronische Mittel, wie ein Computer, der mit der entsprechenden Software programmiert wurde und die entsprechende Datenfilestruktur enthält, ausgewertet. Tabelle 1

Reagenzien	besonders bevorzugte Konzentration
destilliertes Wasser	0,9 l
Methylparaben	0,40 g/l
PEG 20.000	3,00 g/l
EDTA, Dinatriumsalz	7,04 g/l
Magnesiumgluconat	3,92 g/l
Natriumphosphat, 2-basisch,	2,68 g/l
wasserfrei
Glucose	6,0 g/l
Natriumhydroxidplätzchen	0,8 g/l
Adenosin	0,25 g/l
Inosin	0,25 g/l
Neomycinsulfat	0,40 g/l
Chloramphenicol	0,15 g/l
*q.s. auf 1 l

Konzentriertes Rinderserumalbumin wird dem Produkt zu dem Zeitpunkt des Kombinierens der verschiedenen Zelltypen zugesetzt, um die Proteinkonzentration auf 3% des flüssigen Teils des Produkts einzustellen. Tabelle 2

Reagenzien	besonders bevorzugte Konzentration
destilliertes Wasser	0,91
Methylparaben	0,4 g/l
PEG 20.000	3,00 g/l
EDTA, Dinatriumsalz	11,73 g/l
Magnesiumgluconat	6,53 g/l
Natriumphosphat, 2-basisch,
wasserfrei	4,47 g/l
Glucose	10 g/l
Natriumhydroxidplätzchen	1,40 g/l
Adenosin	0,25 g/l
Inosin	0,25 g/l
Neomycinsulfat	0,40 g/l
Natriumfluorid	0,05 g/l
Chloramphenicol	0,15 g/l
*q.s. auf 1 l

Tabelle 3

Reagenzien	besonders bevorzugte Konzentration
destilliertes Wasser	0,91
Methylparaben	0,4 g/l
PEG 20.000	3,00 g/l
EDTA, Dinatriumsalz	16,75 g/l
Magnesiumgluconat	9,33 g/l
Natriumphosphat, 2-basisch,	6,39 g/l
wasserfrei
Natriumhydroxidplätzchen	2,04 g/l
Adenosin	0,25 g/l
Inosin	0,25 g/l
Neomycinsulfat	0,40 g/l
Chloramphenicol	0,15 g/l
*q.s. auf 1 l

Tabelle 4

Reagenzien	besonders bevorzugte Konzentration
destilliertes Wasser	11
Methylparaben	0,40 g/l
PEG 20.000	3,00 g/l
EDTA, Dinatriumsalz	11,73 g/l
Magnesiumgluconat	6,53 g/l
Natriumphosphat, 2-basisch,	4,47 g/l
wasserfrei
Glucose	10 g/l
Natriumhydroxidplätzchen	1,40 g/l
Adenosin	0,25 g/l
Inosin	0,25 g/l
Neomycinsulfat	0,40 g/l
Natriumfluorid	0,05 g/l
Rinderserumalbumin	20 g/l
Sulfasalazin	0,10 g/l
Chloramphenicol	0,15 g/l

* Cholesterol Supertrate, das α-Tocopherol enthält, wird dem Produkt zu dem Zeitpunkt des Kombinierens der verschiedenen Zelltypen zugesetzt. Cholesterol Supertrate wird zugesetzt (2 bis 3%), um die α-Tocopherol-Konzentration auf etwa 5 mg% in dem Produkt einzustellen
Der Fachmann erkennt, dass eine Anzahl der Bestandteile an Hand spezieller Beispiele offenbart wurden, dass allerdings jedes beliebige aus einer Anzahl von alternativen Bestandteilen in der vorgeschlagenen oder in unterschiedlicher Konzentration zweckmäßigerweise für solche Bestandteile ersetzt werden kann. Die folgende Tabelle 5 erläutert Beispiele verschiedener Alternativen und umfasst auch eine kurze Abhandlung der üblicherweise eingesetzten Konzentrationsbereiche, bei Einsatz in den Verdünnungsmitteln der Tabellen 1-4. Obwohl die Bestandteile unter Bezugnahme auf eine bestimmte Funktion beschrieben sind, sollte klar sein, dass eine solche Abhandlung ohne Ansinnen auf Theoriegebundenheit präsentiert wird. In einigen Fällen leistet der Bestandteil eine unterschiedliche oder eine zusätzliche Funktion.
Ferner erkennt der Fachmann, dass die Bezugnahme in Tabelle 5 auf die Funktionen, im Zusammenhang mit den vorliegenden bevorzugten Ausführungsformen, zur Auswahl zusätzlicher Alternativen erfolgen könnte. Somit besteht nicht die Intention, an den Umfang eines bestimmten erläuternden Bestandteils oder einer bestimmten erläuternden Konzentration gebunden zu sein, wo es offensichtlich ist, dass andere zweckmäßigerweise zusätzlich zu oder als Ersatz für einen solchen Bestandteil eingesetzt werden können.
Gleichermaßen können, wenn gewünscht, Bestandteile aus dem Verdünnungsmittel weggelassen werden. Somit kann zweckmäßigerweise eine Kombination von einigen der Bestandteile eingesetzt werden, um bestimmte Ergebnisse zu erzielen.

Vorzugsweise umfasst das Verdünnungsmittel ein oder mehrere Mittel, die als Tensid, Hämolyseinhibitor, Absetzhilfsmittel für rote Blutkörperchen, MCV-Stabilisator, Puffer, Metabolit, Osmolaritätseinstellhilfsmittel, Mikrobizid, Antimykotikum, Proteinquelle, Positionierhilfsmittel der weißen Blutkörperchensubpopulation, Antioxidanz, Zellabfallverringerer, oder als ein Gemisch davon funktionieren. Tabelle 5

Bestandteil	bevorzugte Konzentration	Konzentrationsbereich	andere
Polyethylenglycol (PEG MW 20.000)	3,00 g/l	1,00-10,00 g/l	PEG 8000, F68
Dinatrium-EDTA	11,75 g/l	7,00-17,00 g/l	Tetranatrium-EDTA
Magnesiumgluconat	6,50 g/l	3,5-9,5 g/l	Lactose
Natriumphosphat	4,50 g/l	2,5-6,5 g/l	Citrat, Borat, Trizma Base, Natriumbicarbonat
Glucose	10,00 g/l	0-10 g/l	andere Zucker
Adenosin	0,25 g/l	0,1-1,0 g/l	Inosin
Neomycinsulfat	0,40 g/l	0,1-0,8 g/l	Streptomycin, Kanamycin
Chloramphenicol	0,15 g/l	0,1-0,4 g/l	Piperacillin
Methylparaben	0,40 g/l	0,20-1,20 g/l	andere Antimykotika
Rinderserumalbumin	30,0 g/l	0,0-60,0 g/l	andere Proteinquellen
Chlolesterol Supertrate	30 ml/l	20-50 ml/l	Triglycerid Supertrate, Cholesterin, HDL-Supertrate, Cholesterin (aller erhältlich über Bayer)
Natriumfluorid	0,05 g/l	0,0-0,50 g/l	andere Halogenide
Sulfasalazin	0,10 g/l	0,0-0,50 g/l	andere Antioxidantien
α-Tocopherol (Vitamin E)	0,05 g/l	0,0-0,30 g/l	Ascorbinsäure, BHT, Deferoximinmesylat, Probucol, Rutin

Tabelle 6

Zelle	Bereich (ungefährer Prozentsatz weißer Blutkörperchen)
Lymphozyten	20 bis 45%
Monozyten	2 bis 10%
Neutrophile	40 bis 75%
Eosinophile	1 bis 6%
Basophile	bis zu 1%

Weitere alternative beispielhafte Ausführungsform
Für die roten Blutkörperchenkomponente stabilisiert ein Verdünnungsmittel, das Mg-Gluconat und EDTA (z. B. etwa 3,92 g/l Mg Gluconat; 7,04 g/l EDTA-Dinatrium; 2,68 g/l NA₂HPO₄; Glucose 6 g/l/; und Mikrobizide (pH 7,1 und Osmolarität unter Verwendung von KCl von etwa 300)) enthält, rote Blutkörperchen so, dass die Erythrozyten-Parameter 200 Tage lang stabil sind.
Die weiße Blutkörperchenkomponente wird aus frischen menschlichen weißen Blutkörperchen hergestellt. Die Zellen werden von roten Blutkörperchen und Plättchen unter Verwendung des obigen Verdünnungsmittels freigewaschen. Die Zellen werden in Phosphat-gepufferter Salzlösung mit einer Osmolarität von 280 und einem pH von 7,2 suspendiert. Eine Lösung von 20% Nuosept 145 (Huls America) wird mit den weißen Blutkörperchen 1:1 vermischt, um eine Endkonzentration von etwa 10% (z. B. 9,11%) zu ergeben. Das Gemisch wird auf eine Temperatur von etwa 37 bis etwa 50°C für 6 Tage oder mehr gebracht. Anschließend werden die Zellen ein- oder mehrmals (z. B. dreimal) in einem geeigneten Verdünnungsmittel gewaschen, z. B. einem Verdünnungsmittel wie aus Tabelle 1, zentrifugiert (z. B. etwa 900 U/min für 10 min) und in einem Verdünnungsmittel, wie in Tabelle 1 (ohne Glucose und mit einem pH von etwa 7), resuspendiert.
Die Plättchenkomponente wird durch Freiwaschen menschlicher Plättchen von Vollblutkomponenten durch Zentrifugation bei niedriger Geschwindigkeit (900 U/min für 10 min) hergestellt. Die Plättchen werden anschließend durch Zugabe einer niedrigen Konzentration an Glutaraldehyd stabilisiert. Die Plättchen werden durch 1:1 Mischen mit dem Magnesiumgluconat-Verdünnungsmittel, das 0,075% Glutaraldehyd (Endkonzentration von 0,037% Glutaraldehyd) enthält, stabilisiert. Nach einer 22-°C-Inkubation werden die Zellen wiederum in dem Verdünnungsmittel gewaschen und sind gebrauchsfertig. Die gleiche Vorgehensweise kann für Rinder- oder Schweineplättchen eingesetzt werden.
Die Retikulozyten werden durch Verkapseln von Hefe-RNA, wie in der US-Patentschrift Nr. 5,432,089 beschrieben, die durch Referenz miteingeschlossen ist, hergestellt.
Die weiße Blutkörperchenkomponente kann zusammen mit roten Blutkörperchen zum Erreichen einer differentiellen Stabilität angesetzt werden, indem sie 20 Tage bei etwa 22°C gehalten werden.
Die Endkontrolle enthält die folgenden Zellkonzentrationen (Tabelle 7), zeigt ein Histogramm/Streudiagramm-Profil, das ein entsprechend positioniertes fünfteiliges Differential von weißen Blutkörperchen und Retikulozyten, das sich im wesentlichen Vollblut annähert und 200 Tage oder mehr stabil ist, einschließt. Diese Kontrolle stellt solche Ergebnisse für die Instrumente der Cell-Dyn-Serie, die Bayer H-3-Instrumente und die Sysmex SF-Instrumente bereit.

Claims

Hämatologische Kontrollzusammensetzung, umfassend: a) eine stabilisierte Retikulozytenkomponente mit einem Qualitätskontrollwert in einem Bereich von 1,0% bis 9,0% der roten Blutkörperchenzählung; und b) eine fixierte und stabilisierte weiße Blutkörperchenkomponente, die in der Lage ist, ein fünfteiliges Differential aufzuweisen.
Kontrollzusammensetzung nach Anspruch 1, wobei die Retikulozytenkomponente Retikulozyten oder ein Analog davon umfasst.
Kontrollzusammensetzung nach Anspruch 1 oder Anspruch 2, wobei die Retikulozytenkomponente Retikulozyten umfasst, die durch Human-rote Blutkörperchenverkapselung hergestellt sind.
Kontrollzusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die Retikulozytenkomponente Retikulozyten umfasst, die durch Isolierung aus Vollblut hergestellt werden.
Kontrollzusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die weiße Blutkörperchenkomponente ein Element umfasst, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus weißen Blutkörperchen für zelluläre Typen, weißen Blutkörperchen für sämtliche Phänotypen und aus Gemischen davon.
Kontrollzusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die weiße Blutkörperchenkomponente ein Element umfasst, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus weißen Blutkörperchen, die mit Glutaraldehyd stabilisiert sind; weißen Blutkörperchen, die mit Glutaraldehyd und Formaldehyd stabilisiert sind; und weißen Blutkörperchen, die mit 20% NuoSept 145 stabilisiert sind.
Kontrollzusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, wobei die weiße Blutkörperchenkomponente fixierte Zellen umfasst, die jeweils die folgenden Merkmale aufweisen: a) Lymphozyten in einer Menge von etwa 20 bis 45% der weißen Blutkörperchenkomponente; b) Monozyten in einer Menge von etwa 2 bis 10% der weißen Blutkörperchenkomponente; c) Neutrophile in einer Menge von etwa 40 bis etwa 75% der weißen Blutkörperchenkomponente; d) Eosinophile in einer Menge von etwa 1 bis 6% der weißen Blutkörperchenkomponente; und e) Basophile in einer Menge von bis zu etwa 1% der weißen Blutkörperchenkomponente.
Kontrollzusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, die weiterhin eine rote Blutkörperchenkomponente umfasst.
Kontrollzusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, die weiterhin eine nukleierte rote Blutkörperchenkomponente umfasst.
Kontrollzusammensetzung nach Anspruch 9, wobei die nukleierten roten Blutkörperchenkomponenten aviäre rote Blutkörperchen umfassen.
Kontrollzusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, die außerdem eine Plättchenkomponente umfasst, die simulierte Plättchen umfasst.
Kontrollzusammensetzung nach Anspruch 11, wobei die simulierten Plättchen Ziegen-Erythrozyten umfaßt.
Kontrollzusammensetzung nach Anspruch 11, wobei die Plättchenkomponente humane Plättchen umfasst.
Kontrollzusammensetzung nach einem der vorhergehenden Ansprüche, die weiterhin eine retikulierte Plättchenkomponente umfasst.
Verfahren zur Analyse von Vollblut, das die Schritte umfasst: a) Bereitstellen einer Blut-Kontrollzusammensetzung, die eine Retikulozytenkomponente; mit einem Qualitätskontrollwert im Bereich von 1,0 bis 9% der roten Blutkörperchenzählung; und eine weiße Blutkörperchenkomponente, die in der Lage ist, ein fünfteiliges Differential aufzuweisen, umfasst; b) Bereitstellen eines automatisierten Multiparameter-Hämatologie-Instruments; c) Bereitstellen einer Probe aus Patientenblut; d) Analysieren der Blutkontrollzusammensetzung in dem Instrument auf weiße Blutkörperchen- und Retikulozyten-Ablesewerten; und e) Analysieren der Probe aus Patientenblut in dem Instrument auf die weißen Blutkörperchen- und Retikulozyten-Ablesewerte.
Verfahren zur Herstellung einer hämatologischen Kontrollzusammensetzung zur Verwendung mit hämatologischen Multiparameter-Messsystemen, umfassend den Schritt des Mischens einer Retikulozytenkomponente, einer weißen Blutkörperchenkomponente und eines Lipoproteins in einem isotonischen Suspensionsmedium, wobei die Retikulozytenkomponente in der hämatologischen Kontrollzusammensetzung einen Qualitätskontrollwert in einem Bereich von 1,0 bis 9,0% der roten Blutkörperchenzählung aufweist.
Verfahren nach Anspruch 16, wobei die Retikulozytenkomponente Retikulozyten oder ein Analog davon umfasst.
Verfahren nach Anspruch 16 oder 17, wobei die weiße Blutkörperchenkomponente ein Element umfasst, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus weißen Blutkörperchen für zelluläre Typen, weißen Blutkörperchen für sämtliche Phänotypen und aus Gemischen davon.
Verfahren nach Anspruch 18, wobei die weißen Blutkörperchen für zelluläre Typen umfassen: a) Lymphozyten; b) Monozyten; c) Neutrophile; d) Eosinophile; und e) Basophile.
Verfahren nach einem der Ansprüche 16 bis 19, das weiterhin eine rote Blutkörperchenkomponente umfasst.
Verfahren nach einem der Ansprüche 16 bis 20, das weiterhin eine nukleierte rote Blutkörperchenkomponente umfasst.
Verfahren nach Anspruch 21, wobei die nukleierte rote Blutkörperchenkomponente aviäre rote Blutkörperchen umfasst.
Verfahren nach einem der Ansprüche 16 bis 22, das außerdem eine Plättchenkomponente umfasst.
Verfahren nach Anspruch 23, wobei die Plättchenkomponente Ziegen-rote Blutkörperchen umfasst.
Verfahren nach Anspruch 24, das weiterhin eine retikulierte Plättchenkomponente umfasst.
System zum Messen von Blutbestandteilen, umfassend (a) ein automatisiertes Testinstrument, und (b) eine Kontrolle zur Verwendung in dem Testinstrument, wobei die Kontrolle umfasst: 1. eine weiße Blutkörperchenkomponente; 2. ein isotonisches Suspensionsmedium mit einem Mittel darin zur Gewährleistung eines ordnungsgemäß positionierten fünfteiligen Streudiagramms, das aus den weißen Blutkörperchen-Subpopulationen erhalten ist; 3. eine Komponente, ausgewählt aus der Gruppe, bestehend aus einer roten Blutkörperchenkomponente; einer nukleierten roten Blutkörperchenkomponente; einer Plättchenkomponente; einer retikulierten Plättchenkomponente und aus Gemischen davon; und 4. eine Retikulozytenkomponente mit einem Qualitätskontrollwert im Bereich von 1,0% bis 9,0% der roten Blutkörperchenzählung.
System nach Anspruch 26, das außerdem eine Vorrichtung zur visuellen Anzeige der Ergebnisse eines Tests unter Verwendung des Systems umfasst.
System nach Anspruch 26 oder 27, das außerdem einen Strichcodescanner umfasst.
System nach einem der Ansprüche 26 bis 28, wobei das Instrument Zellen unter Verwendung des Coulter-Prinzips nachweist.
System nach einem der Ansprüche 26 bis 29, wobei das Instrument ein STKS-Instrument ist.
System nach einem der Ansprüche 26 bis 29, wobei das Instrument ein Gen-S-Instrument ist.