DE69836697T2

DE69836697T2 - Neue 3,6-Hemiketale der 9a-Azalidklasse

Info

Publication number: DE69836697T2
Application number: DE69836697T
Authority: DE
Inventors: Gabrijela Kobrehel; Gorjana Lazarevski; Mladen Vinkovic
Original assignee: GlaxoSmithKline Istrazivacki Centar Zagreb doo
Current assignee: Fidelta doo
Priority date: 1997-10-16
Filing date: 1998-10-13
Publication date: 2007-10-04
Anticipated expiration: 2018-10-14
Also published as: EP1036083B1; NO20001871L; BR9812808A; DK1036083T3; HK1032785A1; JP2001520234A; US6369035B1; HUP0004085A2; IL135648A; SI1437359T1; KR20010031160A; EE200000226A; EP1437359A2; NO20001871D0; BG104445A; PL340372A1; AU9362298A; KR100554549B1; DE69824201T2; WO1999020639A2

Description

Die Erfindung betrifft neue Verbindungen aus der Klasse der Makrolid-Antibiotika. Insbesondere betrifft sie neue 3,6-Hemiketale aus der Klasse der 9a-Azalide, ihre pharmazeutisch verträglichen Additionssalze mit anorganischen oder organischen Säuren, ein Verfahren zu ihrer Herstellung und deren Verwendung als Antibiotika oder als Zwischenverbindungen für die Synthese von anderen Makrolid-Antibiotika.
Das Makrolid-Antibiotikum Erythromycin A gilt seit mehr als 40 Jahren als ein bewährtes und wirksames Mittel zur Behandlung von durch grampositive und einige gramnegative Bakterien, bestimmte Spezies von Legionella, Mycoplasma, Chlamidia und Helicobacter verursachten respiratorischen und genitalen Infektionen. Die bemerkten Änderungen der Bioverfügbarkeit nach der oralen Verabreichung, gastrische Unverträglichkeit bei vielen Patienten und Verlust der Aktivität in saurem Medium, wobei bei dem inaktiven Metaboliten Anhydroerythromycin gebildet wird, sind die Grundmängel bei der klinischen Verwendung von Erythromycin. Die Spirocyclisierung des Aglykonringes wird jedoch durch chemische Umwandlung von C-9-Keton oder von Hydroxylgruppen in C-6- und/oder C-12-Stellungen erfolgreich verhindert. Auf diese Weise, z. B. durch Oximierung von C-9-Keton und anschließende Beckmann-Umlagerung und Reduktion, erhält man 9-Desoxo-9a-aza-9a-homoerythromycin A, das erste 15-gliedrige Makrolid-Antibiotikum mit einer in den Aglykonring eingeschlossenen 9a-Aminogruppe (Kobrehel G. et al., US 4,328,334 ; 5/1982). Durch reduktive Methylierung von 9-Aminen nach dem Eschweiler-Clark-Verfahren synthetisiert man 9-Desoxo-9a-methyl-9a-aza-9a-homoerythromycin (AZITHROMYCIN), einen Prototyp einer neuen Klasse von Makrolid-Antibiotika, nämlich Azalide (Kobrehel G. et al., BE 892357 ; 7/1982). Neben einem breiten antimikrobiellen Spektrum, das auch gramnegative Bakterien umfasst, ist Azithromycin auch durch eine lange biologische Halbwertszeit, einen spezifischen Transportmechanismus zum Anwendungsort und eine kurze Therapieperiode gekennzeichnet. Azithromycin penetriert leicht und wird innerhalb der menschlichen Phagozytzellen akkumuliert, was eine verbesserte Wirkung auf intrazelluläre pathogene Mikroorganismen aus den Klassen Legionella, Chlamidia und Helicobacter zur Folge hat.
Weiterhin ist bekannt, dass die C-6/C-12 Spirocyclisierung von Erythromycin A mittels O-Methylierung der C-6-Hydroxylgruppe des Aglykonringes (Watanabe Y. et al., US 4,331,803 ; 5/1982) erfolgreich inhibiert wird. Die Umsetzung von Erythromycin mit Benzyloxycarbonylchlorid und anschließende Methylierung des erhaltenen 2'-O,3'-N-bis(Benzyloxycarbonyl)-Derivats, Eliminierung der Schutzgruppen und 3'-N-Methylierung ergeben neben 6-O-Methylerythromycin (CLARITHROMYCIN) auch bedeutende Mengen von 11-O-Methylerythromycin und von mehrfach substituierten Analogen (Morimoto S. et al., J. Antibiotics, 1984, 37, 187). In Bezug auf Erythromycin A ist Clarithromycin wesentlich stabiler in saurem Medium und weist eine bessere in vitro Wirkung gegen grampositive Bakterienstämme auf (Kirst H.A. et al., Antimicrobial Agents and Chemoter., 1989, 1419). Auf ähnliche Weise wurde auch eine Reihe von O-Methylderivaten von Azithromycin (Kobrehel G. et al., US 5,250,518 ; 10/1993) synthetisiert. Obwohl die Hauptprodukte von O-Methylierung von Azithromycin, nämlich 11-O-Methyl-azithromycin (Beispiel 8) und 6-O-Methylazithromycin (Beispiel 6), eine bedeutende Wirkung gegen Standard-Bakterienstämme und klinische Isolate und Azythromycin-ähnliche pharmakokinetische Eigenschaften aufweisen, stellt die Gewinnung der Produkte in größeren Mengen wegen der Unselektivität der O-Methylierung ein zusätzliches technisches Problem dar. Die Bestimmung der Struktur der O-Methylderivate von Azithromycin basierte auf der Analyse von ¹H-¹H und ¹H-¹³C 2D NMR Spektren (300 MHz). Nachträglich wurde mittels NMR-Spektroskopie langer Reichweite zusätzlich bestimmt, dass die Substitution an der C-6-Hydroxylgruppe irrtümlicherweise Azithromycin zugeschrieben wurde und dass es sich eigentlich um 12-O-Methylazithromycin handelt. Weiterhin wurde festgestellt, dass die Verwendung von geeigneten Schutzgruppen an Hydroxylgruppen in 4''- und 11-Stellungen (besonders von Silylschutzgruppen wie Trimethylsilylgruppen) eine selektive O-Methylierung zur Folge hat und eine einfache Herstellung von 12-O-Methylazithromycin ermöglicht ( HR 970051A ; 10/97). Nachträglich führten Waddell S.T. et al. (Biorg. Med. Chem. Letters 8 (1998), 549–555) unabhängig von der letzterwähnten Patentanmeldung die O-Methylierung der Hydroxylgruppe in C-12-Stellung ein.
Es ist auch bekannt, dass neueste Forschungen an 14-gliedrigen Makroliden zur Entdeckung einer neuen Art von Makrolid-Antibiotika, nämlich Ketoliden, geführt haben. Anstelle der neutralen Zucker L-Cladinose, die für ihre Instabilität sogar in einem schwach sauren Medium bekannt ist, besitzen diese Verbindungen eine Ketogruppe in C-3-Stellung (Agouridas C. et al., EP 596802 A1 , 5/1994; Le Martret O., FR 2697524 A1 , 5/1994). Ketolide zeigen eine wesentlich bessere Wirkung gegen MLS-(Makrolid, Lincosamid und Streptogramin B) induzierte resistente Organismen (Jamjian C., Antimicrob. Agents Chemother., 1997, 41, 485). Diese wichtige Entdeckung führte zu einer großen Anzahl an 3-Ketoderivaten von Clarithromycin, meist an den C-11/C-12-Stellungen substituiert, was zahlreiche cyclische Carbonate, Carbamate und, kürzlich, Carbozate ergab. Der erste Schritt der Synthese von Ketoliden beinhaltet die Hydrolyse von Clarithromycin unter Bildung eines entsprechenden 3-Decladinosylderivates, (3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-Derivat), welches nach der Entfernung des Schutzes der 2'-Hydroxylgruppe (vorzugsweise durch Acylierung mit Chloriden oder Anhydriden von Carbonsäuren), einer Oxidation und Entschützung der 2'-Stellung unterworfen wird. Nach unserem Wissen sind C-11/C-12-substituierte Ketolide aus der Klasse der 9a-Azalid-Antibiotika bisher noch nicht beschrieben worden. Der erste Schritt, nämlich die Synthese von 3-Decladinosylderivaten von 9-Desoxo-9a-aza-9a-homoerythromycin und -azithromycin, wird in US 4,886,792 , 12/1989 beschrieben. Mit der Absicht, die C-3 Hydroxylgruppe von 3-Decladinosylazithromycin und seine 11-O-Methyl- und 12-O-Methylderivate mittels transannularer Addition der 6-Hydroxylgruppe an das neu gebildete C-3-Keton zu oxidieren, wurde eine bisher nicht beschriebene Reihe an bicyclischen und tricyclischen 3,6-Hemiketalen aus der Klasse der 9a-Azalide erhalten.
Die Synthese von 3,6-Hemiketalen von Azithromycin und O-Methylderivaten davon umfasst die Herstellung entsprechender 3-Decladinosylderivate, den Schutz der 2'-Hydroxylgruppe des Basiszuckers, D-Desosamin, mittels selektiver Acylierung, die Oxidation der Hydroxylgruppe in C-3-Stellung, die Entschützung der 2'-Stellung und das Cyclisieren der C-11- und C-12-Hydroxylgruppen. Erfindungsgemäße Aufgaben sind auch pharmazeutisch verträgliche Additionssalze von 3,6-Hemiketalen von Azithromycin und seiner O-Methylderivate mit organischen und anorganischen Säuren, Verfahren und Zwischenverbindungen für ihre Herstellung, sowie Herstellung und Anwendungsverfahren von pharmazeutischen Zubereitungen.
Die Erfindung betrifft

i) neue 3,6-Hemiketale aus der Klasse der 9a-Azalide,
ii) ein Verfahren zur Herstellung neuer 3,6-Hemiketale aus der Klasse der 9a-Azalide,
iii) die Verwendung neuer 3,6-Hemiketale aus der Klasse der 9a-Azalide als Antibiotika oder als Zwischenverbindungen für die Synthese anderer Makrolid-Antibiotika.

Die vorliegenden 3,6-Hemiketale aus der Klasse der 9a-Azalide der allgemeinen Formel (I)
sind dadurch gekennzeichnet, dass
R¹ einzeln für Hydroxyl steht,
R³ einzeln für Wasserstoff oder zusammen mit R⁶ für eine Ethergruppe steht,
R⁴ einzeln für Wasserstoff oder eine (C₁-C₄)Acylgruppe steht,
R⁵ einzeln für eine Methylgruppe steht,
R⁶ einzeln für eine Hydroxylgruppe steht oder zusammen mit R³ für eine Ethergruppe steht,
R⁷ einzeln für Wasserstoff, eine (C₁-C₁₂)Alkylgruppe oder zusammen mit R⁸ und C-11/C-12-Kohlenstoffatomen für ein zyklisches Carbonat steht,
R⁸ einzeln für eine (C₁-C₁₂)Alkylgruppe oder zusammen mit R⁷ und C-11/C-12-Kohlenstoffatomen für ein zyklisches Carbonat steht,
und ihre pharmazeutisch verträglichen Additionssalze mit anorganischen oder organischen Säuren mittels der folgenden Schritte erhalten werden.
Schritt 1A:
Azithromycin der allgemeinen Formel (I), wobei R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht,
R², R³, R⁴, R⁷ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁸ Methyl ist und R⁶ eine Hydroxylgruppe ist, wird mit organischen Carbonsäurechloriden der Formel (III), CICOO(CH₂)_n-AR (III)wobei n 1–7 ist und Ar jeweils für nichtsubstituierte oder substituierte Arylgruppen mit bis zu 18 Kohlenstoffatomen steht, vorzugsweise mit Benzyloxycarbonylchlorid, in Gegenwart von Basen, vorzugsweise von Natriumhydrogencarbonat, in einem reaktionsinerten Lösungsmittel, vorzugsweise in Benzol oder Toluol, umgesetzt, wobei 2'-O,3'-N-Bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-azithromycin (Kobrehel G. et al., US 5,250,518 ; 5/1993) der allgemeinen Formel (I), wobei R¹ für L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R², R³, R⁷ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppen stehen und R⁶ eine Hydroxylgruppe ist, erhalten wird, welche anschließend einer Silylierung der Hydroxylgruppen in

A/ 4''- und 11-Stellungen mit einem 2-5-äquimolaren Überschuss eines Silylierungsmittels in einem organischen inerten Lösungsmittel bei einer Temperatur von 0–5°C während 5–8 Stunden unterworfen wird, wobei neues 4''-11-O-Bis(trimethylsilyl)-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), wobei R¹ für eine L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R² und R⁷ einander gleich sind und für Trimethylsilylgruppen stehen, R³ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppen stehen und R⁶ eine Hydroxylgruppe ist, erhalten wird, oder in
B/ 4''-Stellung mit einem 1,1-2-äquimolaren Überschuss eines Silylierungsmittels in einem organischen inerten Lösungsmittel bei einer Temperatur von 0–5°C während 1 Stunde unterworfen wird, wobei neues 4'''-O-Trimethylsilyl-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N- desmethyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), wobei R¹ für eine L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R² für eine Trimethylsilylgruppe steht, R³, R⁷ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppen stehen und R⁵ für eine Hydroxylgruppe steht, erhalten wird.

Als Silylierungsmittel werden 1,1,1,3,3,3-Hexamethyldisilazan, Trimethylsilylchlorid, Bis(trimethylsilyl)acetamid und ähnliche Mittel zur Einführung der Trimethylsilylgruppe, vorzugsweise ein Gemisch von Trimethylsilylchlorid und Trimethylsilylimidazol, verwendet. Als geeignetes Lösungsmittel werden Pyridin, Ethylacetat, N,N-Dimethylformamid, Methylenchlorid und ähnliches, vorzugsweise Pyridin, verwendet.
Schritt 2A:
Durch Umsetzung von 4'',11-O-Bis(trimethylsilyl)-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-azithromycin aus dem Schritt 1A/ bzw. 4''-O-Trimethylsilyl-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-azithromycin aus dem Schritt 1B/ mit 1,3 bis 10 Mol eines entsprechenden Alkylierungs-, vorzugsweise eines Methylierungsmittels, in Gegenwart von 1,1 bis 8,5 Mol einer geeigneten Base, bei einer Temperatur von –15°C bis Raumtemperatur, vorzugsweise bei 0–5°C, in einem reaktionsinerten Lösungsmittel, kommt es

A/ zu einer selektiven Alkylierung, vorzugsweise Methylierung der C-12-Hydroxylgruppe, wobei 4''-O-Bis(trimethylsilyl)-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-desmethyl-12-O-methyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), wobei R¹ für eine L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R² und R⁷ einander gleich sind und für Trimethylsilylgruppen stehen, R³ für Wasserstoff steht, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppen stehen, R⁶ eine Hydroxylgruppe ist und R⁸ Methyl ist, erhalten wird, oder
B/ zu einer Alkylierung, vorzugsweise Methylierung der C-11- oder C-12-Hydroxylgruppe, wobei ein Gemisch von 4''-O-Trimethylsilyl-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-11-O-methyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), wobei R¹ für eine L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R² für eine Trimethylsilylgruppe steht, R³ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppen stehen, R⁶ für eine Hydroxylgruppe steht und R⁷ Methyl ist, oder 4''-O-Trimethylsilyl-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-desmethyl-12-O-methyl- azithromycin der allgemeinen Formel (I), wobei R¹ für eine L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R² für eine Trimethylsilylgruppe steht, R³ und R⁷ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ und R⁵ einander gleich sind und für Benzyloxycarbonylgruppen stehen, R⁶ für eine Hydroxylgruppe steht und R⁸ Methyl ist, erhalten wird.

Als geeignete Alkylierungsmittel werden (C₁-C₁₂)Alkylhalogenide, vorzugsweise Methyliodid, Dimethylsulfat, Methylmethansulfonat oder Methyl-p-toluolsulfonat, vorzugsweise Methyliodid verwendet. Geeignete Basen sind Alkalimetallhydrid, (Lithiumhydrid, Natriumhydrid oder Kaliumhydrid), Alkalimetallhydroxid (Kaliumhydroxid oder Natriumhydroxid) oder Alkalimetallmethylamid (Lithiumamid, Natriumamid oder Kaliumamid), vorzugsweise Natriumhydrid. Geeignete reaktionsinerte Lösungsmittel sind Dimethylsulfoxid, N,N-Dimethylformamid, N,N-Dimethylacetamid oder Hexamethylphophorsäuretriamid, vorzugsweise N,N-Dimethylformamid, Dimethylsulfoxid oder ein Gemisch davon mit Tetrahydrofuran.
Schritt 3A:
4''-11-O-Bis(trimethylsilyl)-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-12-O-methyl-azithromycin aus dem Schritt 2A/ oder das erhaltene Gemisch von 4''-O-Trimethylsilyl-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-11-O-methyl-azithromycin und 4''-O-Trimethylsilyl-2'-O,3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-12-O-methyl-azithromycin aus dem Schritt 2B/ unterwirft man einer Hydrogenolysereaktion gemäß des Verfahrens von E.H. Flynn et al. (Journal of American Chemical Society, 77, 3104, 1950), um Schutzgruppen in 2'- und 3'-Stellung zu entschützen, und anschließend einer Entsilylierung gemäß des üblichen Verfahrens in niedrigen Alkoholen, vorzugsweise Isopropanol, in Gegenwart von Ameisensäure in

A/ 4''- und 11-Stellungen im Schritt 2A/, wobei 3'-N-Demethyl-12-O-methyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), wobei R¹ für eine L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R², R³, R⁴, R⁵ und R⁷ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁶ eine Hydroxylgruppe ist und R⁸ Methyl ist, erhalten wird, oder in
B/ 4''-Stellung im Schritt 2B/, wobei ein Gemisch von 3'-N-Demethyl-11-O-methyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), wobei R¹ für eine L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R², R³, R⁴, R⁵ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁶ eine Hydroxylgruppe ist, R⁷ Methyl ist, und 3'-N-Demmethyl-12-O-methyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), wobei R¹ für eine L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R², R³, R⁴, R⁵ und R⁷ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁶ eine Hydroxylgruppe ist und R⁸ Methyl ist, erhalten wird.

Die Hydrogenolyse wird in einer Lösung von niederen Alkoholen, vorzugsweise Ethanol, in Gegenwart von NaOAc/HOAc Puffer (pH 5), mit einem Katalysator wie Palladiumschwarz oder Palladium auf Kohle, bei einem Wasserstoff-Druck von 1 bis 20 Bar bei Raumtemperatur durchgeführt.
Schritt 4A:
3'-N-Demethyl-12-O-methyl-azithromycin aus dem Schritt 3A/ oder das erhaltene Gemisch von 3'-N-Demethyl-11-O-methyl-azithromycin und 3'-N-Desmethyl-12-O-methyl-azithromycin aus dem Schritt 3B/ unterwirft man einer reduktiven 3'-N-Methylierung mit 1–3 Äquivalenten Formaldehyd (37%) in Gegenwart einer gleichen oder zweifachen Menge von Ameisensäure (98–100%) und eines Hydrierungskatalysators oder einer anderen Wasserstoffquelle, in einem reaktionsinerten Lösungsmittel, wie Halogenkohlenwasserstoffen, niederen Alkoholen oder niederen Ketonen, vorzugsweise Chloroform, bei Rückflusstemperatur des Reaktionsgemisches, wobei – im Fall der Verbindung aus dem Schritt 3A/ – 12-O-Methyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), wobei R¹ für eine L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R², R³, R⁴ und R⁷ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁵ und R⁸ einander gleich sind und für Methyl stehen und R⁶ eine Hydroxylgruppe ist, erhalten wird, oder – im Fall von Produkten aus dem Schritt 3B/ – ein Gemisch von 11-O-Methyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), wobei R¹ für eine L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R², R³, R⁴ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁵ und R¹ einander gleich sind und für Methyl stehen und R⁶ eine Hydroxylgruppe ist, und von 12-O-Methyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I), wobei R¹, R², R³, R⁴, R⁵, R⁶, R⁷ und R⁸ die für den Fall der 3'N-Methylierung von Verbindungen aus dem Schritt 3A/ angegebenen Bedeutungen haben, erhalten wird.
Schritt 5A:
12-O-Methyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I) aus dem Schritt 4A unterwirft man der Hydrolyse mit starken Säuren, vorzugsweise mit 0,25–1,5 N Chlorwasserstoffsäure oder Dichloressigsäure in einem Gemisch von Wasser und einem Alkohol, vorzugsweise Methanol, Ethanol oder Isopropanol, für 10–30 Stunden bei Raumtemperatur, wobei 3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-3-oxy-12-O-methyl-azithromycin der allgemeinen Formel (I) erhalten wird, wobei R¹ und R⁶ einander gleich sind und für Hydroxylgruppen stehen, R³, R⁴ und R⁷ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen und R⁵ und R⁸ einander gleich sind und für Methyl stehen.
Schritt 6A:
3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-3-oxy-12-O-methyl-azithromycin aus dem Schritt 5A unterwirft man gegebenenfalls einer selektiven Acylierung der Hydroxylgruppe in 2'-Stellung. Die Acylierung wird mit Chloriden oder Anhydriden von Carbonsäuren mit bis zu 4 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise mit Essigsäureanhydrid, in Gegenwart von anorganischen oder organischen Basen in einem reaktionsinerten organischen Lösungsmittel bei einer Temperatur von 0–30°C durchgeführt, wobei 3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-3-oxy-12-O-methyl-azithromycin-2'-O-acetat der allgemeinen Formel (I) erhalten wird, wobei R¹ und R⁶ einander gleich sind und für Hydroxylgruppen stehen, R³ und R⁷ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ (C₁-C₄)Acyl ist und R⁵ und R⁸ einander gleich sind und für Methyl stehen.
Als geeignete Basen werden Natriumhydrogencarbonat, Natriumcarbonat, Kaliumcarbonat, Triethylamin, Pyridin, Tributylamin, vorzugsweise Natriumhydrogencarbonat, verwendet. Als geeignetes inertes Lösungsmittel wird Methylenchlorid, Dichlorethan, Aceton, Pyridin, Ethylacetat, Tetrahydrofuran, vorzugsweise Methylenchlorid, verwendet.
Schritt 7A:
3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-3-oxy-12-O-methyl-azithromycin-2'-O-acetat aus dem Schritt 6A unterwirft man gegebenenfalls einer Oxidation der Hydroxylgruppe in C-3-Stellung mit Jones-Reagenz oder Diimiden gemäß einem modifizierten Moffat-Pfitzner Verfahren [DMSO und 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethyl-carbodiimid in Gegenwart von Pyridintrifluoracetat], wobei 3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-12-O-methyl-azithromycin-3,6-hemiketal-2'-O-acetat der allgemeinen Formel (I) erhalten wird, wobei R¹ für eine Hydroxylgruppe steht, R³ zusammen mit R⁶ für eine Ethergruppe steht, R⁴ (C₁-C₄)Acyl ist, R⁵ und R⁸ einander gleich sind und für Methyl stehen und R⁷ Wasserstoff ist.
Schritt 8A:
3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-12-O-methyl-azithromycin-3,6-hemiketal-2'-O-acetat aus dem Schritt 7A unterwirft man gegebenenfalls einer Solvolyse in niederen Alkoholen, vorzugsweise in Methanol, bei einer Temperatur von Raumtemperatur zur Rückflusstemperatur des Lösungsmittels, wobei 3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-12-O-methyl-azithromycin-3,6-hemiketal der allgemeinen Formel (I) erhalten wird, wobei R¹ für eine Hydroxylgruppe steht, R³ zusammen mit R⁶ für eine Ethergruppe steht, R⁴ und R⁷ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen und R⁵ und R⁸ einander gleich sind und für Methyl stehen.
Verbindungen der Formel (I), wobei R¹ für eine Hydroxylgruppe steht, R³ zusammen mit R⁶ für eine Ethergruppe steht, R⁴ Wasserstoff ist, R⁵ Methyl ist und R⁷ und R⁸ zusammen mit C-11/C-12-Kohlenstoffatomen für ein zyklisches Carbonat stehen, werden mittels der folgenden Schritte erhalten.
Schritt 1B:
Azithromycin der allgemeinen Formel (I), wobei R¹ für eine L-Cladinosylgruppe der Formel (II) steht, R², R³, R⁴, R⁷ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁵ Methyl ist und R⁶ eine Hydroxylgruppe ist, wird einer Hydrolyse mit starken Säuren, vorzugsweise mit 0,25–1,5 N Chlorwasserstoffsäure oder Dichloressigsäure in einem Gemisch von Wasser und einem Alkohol, vorzugsweise Methanol, Ethanol oder Isopropanol, für 10 – 30 Stunden bei Raumtemperatur unterworfen, wobei 3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-3-oxy-azithromycin der allgemeinen Formel (I) erhalten wird, wobei R¹ und R⁶ einander gleich sind und für Hydroxylgruppen stehen, R³, R⁴, R⁷ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen und R⁵ Methyl ist.
Schritt 2B:
3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-3-oxy-azithromycin aus Schritt 1B unterwirft man einer selektiven Acylierung der Hydroxylgruppe in 2'-Stellung. Die Acylierung wird mit Chloriden oder Anhydriden von Carbonsäuren mit bis zu 4 Kohlenstoffatomen, vorzugsweise mit Essigsäureanhydrid, in Gegenwart von anorganischen oder organischen Basen in einem reaktionsinerten organischen Lösungsmittel bei einer Temperatur von 0–30°C durchgeführt, wobei 3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-3-oxy-azithromycin-2'-O-acetat der allgemeinen Formel (I) erhalten wird, wobei R¹ und R⁶ einander gleich sind und für Hydroxylgruppen stehen, R³ und R⁷ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ (C₁-C₄)Acyl ist und R⁵ Methyl ist.
Als geeignete Basen werden Natriumhydrogencarbonat, Natriumcarbonat, Kaliumcarbonat, Triethylamin, Pyridin, Tributylamin, vorzugsweise Natriumhydrogencarbonat, verwendet. Als geeignetes inertes Lösungsmittel wird Methylenchlorid, Dichlorethan, Aceton, Pyridin, Ethylacetat, Tetrahydrofuran, vorzugsweise Methylenchlorid, verwendet.
Schritt 3B:
3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-3-oxy-azithromycin-2'-O-acetat aus dem Schritt 2B unterwirft man einer Oxidation der Hydroxylgruppe in C-3-Stellung mit Jones-Reagenz oder Diimiden gemäß einem modifizierten Moffat-Pfitzner Verfahren [DMSO und 1-(3-Dimethylaminopropyl)-3-ethyl-carbodiimid in Gegenwart von Pyridintrifluoracetat], wobei 3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-azithromycin-3,6-hemiketal-2'-O-acetat der allgemeinen Formel (I) erhalten wird, wobei R¹ für eine Hydroxylgruppe steht, R³ zusammen mit R⁶ für eine Ethergruppe steht, R⁴ (C₁-C₄)Acyl ist, R⁵ Methyl ist und R⁷ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen.
Schritt 4B:
3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-azithromycin-3,6-hemiketal-2'-O-acetat aus dem Schritt 3B unterwirft man einer Solvolyse in niederen Alkoholen, vorzugsweise in Methanol, bei einer Temperatur von Raumtemperatur zur Rückflusstemperatur des Lösungsmittels, wobei 3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-azithromycin-3,6-hemiketal der allgemeinen Formel (I) erhalten wird, wobei R¹ für eine Hydroxylgruppe steht, R³ zusammen mit R⁶ für eine Ethergruppe steht, R⁴, R⁷ und R⁸ einander gleich sind und für Wasserstoff stehen und R⁵ Methyl ist.
Schritt 5B:
3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-azithromycin-3,6-hemiketal aus dem Schritt 4B unterwirft man anschließend einer Umsetzung mit Ethylencarbonat in Gegenwart von anorganischen und organischen Basen, vorzugsweise Kaliumcarbonat, in einem reaktionsinerten Lösungsmittel, vorzugsweise Ethylacetat, wobei 3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-azithromycin-3,6-hemiketal 11,12-zyklisches Carbonat der allgemeinen Formel (I) erhalten wird, wobei R¹ für eine Hydroxylgruppe steht, R³ zusammen mit R⁶ für eine Ethergruppe steht, R⁴ Wasserstoff ist, R⁵ Methyl ist und R⁷ und R⁸ zusammen mit C-11- und C-12-Kohlenstoffatomen für ein zyklisches Carbonat stehen.
Pharmazeutisch verträgliche Additionssalze, die ein weiterer Gegenstand der vorliegenden Erfindung sind, werden durch Umsetzung von neuen Verbindungen der allgemeinen Formel (I) mit einer mindestens äquimolaren Menge einer entsprechenden anorganischen oder organischen Säure wie Chlorwasserstoffsäure, Iodwasserstoffsäure, Schwefelsäure, Phosphorsäure, Essigsäure, Propionsäure, Trifluoressigsäure, Maleinsäure, Citronensäuresäure, Stearinsäure, Bernsteinsäure, Ethylbernsteinsäure, Methansulfonsäure, Benzolsulfonsäure, p-Toluolsulfonsäure, Laurylsulfonsäure und ähnlichen Säuren, in einem reaktionsinerten Lösungsmittel erhalten. Die Additionssalze werden durch Filtration, falls sie im reaktionsinerten Lösungsmittel unlöslich sind, durch Ausfällen mit einem Nichtlösungsmittel oder durch Eindampfen des Lösungsmittels, am häufigsten durch Gefriertrocknung, isoliert.
Antibakterielle in vitro Wirksamkeit der Verbindungen der allgemeinen Formel (I) und ihrer pharmazeutisch verträglichen Additionssalze mit anorganischen oder organischen Säuren wurde an einer Reihe von Standardtestmikroorganismen in einem Mueller-Hinton-Medium (Difco-Laboratories, Detroit, MI) durch eine übliche Methode der zweifachen Verdünnung gemäß Empfehlung von NCCLS (The National Commitee for Clinical Laboratory Standards) bestimmt. Jeder Testmikroorganismus wurde auf die End-Inokulumgröße von 5 × 10⁵ cfu/ml inokuliert, und die Inkubation wurde auf anaerobe Weise bei 37°C während 18 Stunden durchgeführt. Die MIC in dem flüssigen Medium wurde als die niedrigste Konzentration eines antibakteriellen Mittels, die sichtbares Wachstum in Mikroverdünnungsbehältern inhibierte, bestimmt. Kontrollorganismen wurden von ATCC (The American Type Culture Collection) erhalten. Alle Standards wurden mittels einer Standardprozedur identifiziert und bei –70°C gelagert. Die Ergebnisse von 12-O-Methyl-azithromycin auf Standardtestmikroorganismen und klinischen Isolaten im Vergleich zu Azithromycin werden in Tabelle 1 und Tabelle 2 gezeigt.
Durch Bestimmung der Konzentration von 12-O-Methyl-azithromycin im Serum nach einer einzelnen oralen Dosis von 20 mg/kg an einer Gruppe von 36 männlichen Ratten in Zeitintervallen von 0,25 bis 24 Stunden wurde herausgefunden, dass das Antibiotikum sehr schnell in das Serum absorbiert wurde. Die Analyse der Peaks legte das Bestehen einer enterohepatischen Zirkulation nahe. Zwischen 0,5 und 1 Stunde fiel die Konzentration sehr schnell ab, wonach sie wiederholt anstieg. Die maximale Konzentration der Substanz wurde nach 2 Stunden erreicht (Cmax 248,8 ng/ml). Ein sekundäres Maximum wurde 4 Stunden nach Verabreichung erreicht. Die Halbwertszeit betrug 5,2 Stunden und die totale AUC betrug 1993,4 h ng/ml.
Das Verfahren zur Herstellung neuer 3,6-Hemiketale aus der Klasse der 9a-Azaliden wird durch die nachfolgenden Beispiele dargestellt.
Herstellung 1
2'-O,3'-N-Bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-azithromycin A (nicht Gegenstand der vorliegenden Erfindung)
Zu einer Lösung von Azithromycin (17 g, 0,0227 Mol) in Toluol (170 ml) wurde NaHCO₃ (74,8 g, 0,890 Mol) zugegeben und anschließend das Reaktionsgemisch unter Rühren auf Rückflusstemperatur (80–85°C) erhitzt. Zu der Reaktionssuspension wurden innerhalb 1 Stunde unter Rühren 102 ml von 50% Benzyloxycarbonylchlorid (104,04 g, 0,305 Mol) in Toluol zugetropft. Das Reaktionsgemisch wurde bei gleicher Temperatur weitere 2 Stunden gerührt und über Nacht bei Raumtemperatur stehengelassen. Nach Filtration wurde der Niederschlag mit Toluol (85 ml) gewaschen und die Toluollösung wurde zweimal mit 0,25 N HCl (170 ml) und zweimal mit 1,5% wässriger NaCl-Lösung (170 ml) extrahiert. Zu Toluol wurde Wasser (340 ml) (pH 3,1) zugegeben, der pH des Reaktionsgemischs wurde mit 6 N HCl auf 2,0 eingestellt, die Schichten wurden getrennt und die organische Schicht wurde noch dreimal mit Wasser (340 ml) extrahiert, wobei der pH von 2,0 aufrechterhalten wurde. Zu den vereinigten Wasserextrakten wurde CH₂Cl₂ (125 ml) zugegeben, der pH wurde mit einer wässrigen NaOH-Lösung (20%) auf 10 eingestellt, die Schichten wurden getrennt, und die wässrige Schicht wurde wieder mit CH₂Cl₂ (125 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden über K₂CO₃ getrocknet, filtriert und bei vermindertem Druck eingedampft, wobei 16,5 g eines dicken Ölrückstandes erhalten wurden, der gegebenenfalls mit Niederdruckchromatographie über eine Kieselgel 60-Säule (230–400 mesh ASTM) gereinigt wurde. Dazu wurde das Rohprodukt in CH₂Cl₂ (20 ml) gelöst und unter Stickstoffdruck von 0,5 Bar auf eine Kieselgelsäule (50 g) aufgebracht. Um restliches Benzylchlorformiat und seine Zerfallsprodukte zu entfernen, wurde CH₂Cl₂ (150 ml) über die Säule geführt, wonach durch Verwendung des Lösungssystems Methylenchlorid-Methanol, 9:1 (200 ml) und Eindampfen von Fraktionen, die das chromatographisch homogene Titelprodukt enthielten, 11,53 g des TLC reinen 2'-O,3'-N-Bis-(benzyloxycarbonyl)-N-demethyl-azithromycins mit physikalisch-chemischen Konstanten, wie sie in US-Patentschrift 5,250,518 von 10/1993 beschrieben sind, erhalten wurden.
Beispiel 1
4'',11-O-Bis(trimethylsilyl)-2'-O,3'-N-bis(benzylozycarbonyl)-3'-N-demethyl-azithromycin (nicht Gegenstand der vorliegenden Erfindung)
Zu einer Lösung von 2'-O,3'-N-Bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-azithromycin (5,0 g, 0,005 Mol) in Pyridin (50 ml), gekühlt auf 0–5°C, wurden unter Stickstoffstrom Trimethylsilylimidazol (3,3 ml, 0,0226 Mol) und Trimethylsilylchlorid (3,0 ml, 0,0179 Mol) zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde 6 Stunden bei gleicher Temperatur gerührt, n-Hexan (60 ml) und Wasser (100 ml) wurden zugegeben, die Schichten wurden getrennt, und die organische Schicht wurde mit gesättigter NaHCO₃-Lösung (60 ml) und Wasser (60 ml) gewaschen. Nach der Trocknung über MgSO₄, Filtration und Eindampfen des Lösungsmittels bei vermindertem Druck wurden 5,48 g eines weißen amorphen Niederschlags erhalten, der gegebenenfalls durch Niederdruckchromatographie über eine Kieselgelsäule unter Verwendung des Systems CH₂Cl₂-CH₃OH, 9:1, gereinigt wurde. Die Vereinigung und Eindampfen von chromatographisch homogenen Fraktionen ergab das Titelprodukt mit den folgenden physikalisch-chemischen Konstanten:

TLC Methylenchlorid-Methanol, 90:1 Rf 0,875
Ethylacetat-N-Hexan-Diethylamin, 100:100:20 Rf 0,942
(IR (KBr) cm^–1: 3524, 2969, 2692, 1754, 1732, 1708, 1498, 1456, 1382, 1335, 1252, 1168, 1116, 1060, 1005, 895, 841, 754, 696.
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 7.32–7.23 (Ph), 5.12, 4.98 (CH₂-Ph), 4.85 (H-1''), 4.70 (H-1'), 4.65 (H-2'), 4.46 (H-3'), 4.26 (H-5''), 4.42 (H-3), 3.72 (H-5'), 3.66 (H-11), 3.49, 3.47 (H-5), 3.20 (H-4''), 3.32, 3.18 (3''-OCH₃), 2.83, 2.79 (3'-NCH₃), 2.78 (H-2), 2.64 (H-10), 2.35 (H-9a), 2.33 (H-2''a), 2.11 (9a-NCH₃), 1.94 (H-9b), 1.91 (H-8), 1.64 (H-14a), 1.94 (H-4), 1.50 (H-2''b), 1.50 (H-14b), 1.27, 1.25 (6-CH₃), 1.24 (5''-CH₃), 1.19 (5'-CH₃), 1.12 (3''-CH₃), 1.16 (12-CH₃), 1.26 (2-CH₃), 0.89 (10-CH₃), 0.95 (8-CH₃), 0.85 (14-CH₃), 1.02 (4-CH₃), 1.02 (4-CH₃), 0.16 (11-OSi(CH₃)₃ und 0.13/4''-OSi(CH₃)₃/.
¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 176.2 (C-1), 156.2, 156.4 (OCO), 154.5, 154.4 (NCO), 136.7–127.5 (Ph), 100.2 (C-1'), 97.3 (C-1''), 83.9 (C-5), 80.7 (C-4''), 75.0 (C-3), 75.0 (C-2'), 75.3 (C-6), 73.2 (C-3''), 69.4, 69.2, 67.1, 66.8 (CH₂-Ph), 64.8 (C-5''), 62.3 (C-10), 54.8 (C-3'), 49.4, 49.2 (3''-OCH₃), 46.2 (C-2), 38.5 (C-7), 39.4 (C-4), 34.2 (9a-NCH₃), 35.9, 35.6 (C-2''), 36.2, 36.1 (C-4'), 29.0 (3'-NCH₃), 25.6 (C-8), 27.8 (6-CH₃), 21.9 (3''-CH₃), 21.5 (8-CH₃), 20.7 (5'-CH₃), 23.4 (C-14), 18.4 (5''-CH₃), 16.0 (2-CH₃), 11.6 (14-CH₃), 9.6, 9.5 (4-CH₃), 8.3 (10-CH₃) 1.2/11-OSi(CH₃)/₃ und 0.67 /4''-OSi(CH₃)₃/.
ES-MS 1147

Beispiel 2
3'-N-Demethyl-12-O-methyl-azithromycin (nicht Gegenstand der vorliegenden Erfindung)
Zu einer Lösung des Produktes aus Beispiel 1 (1,0 g, 0,0009 Mol) in N,N-Dimethylformamid (20 ml) wurden Methyliodid (0,43 ml, 0,0069 Mol) und 60% Natriumhydrid (0,23 g, 0,0058 Mol) schrittweise innerhalb von 3 Stunden bei Raumtemperatur zugegeben. Das Reaktionsgemisch wurde bei der gleichen Temperatur weitere 30 Minuten gerührt, die Reaktion wurde durch Zugabe von Triethylamin (2 ml) gestoppt, in ein Gemisch von 10% wässriger NaHCO₃-Lösung (50 ml) und Wasser (50 ml) transferiert und mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit einer gesättigten NaCl-Lösung und Wasser gewaschen, über MgSO₄ getrocknet, filtriert und bei vermindertem Druck eingedampft, wobei 0,93 g eines gelben Niederschlags erhalten wurden [Rf 0,832, Methylenchlorid-Methanol, 90:1, IR (KBr) cm^–1: 3516, 1752, 1732, 1705, 1456, 1382, 1336, 1253, 1169, 1116, 1062, 1004, 896, 840, 754, 696]. Das Produkt wurde in Ethanol (20 ml) gelöst, es wurden NaOAc/HOAc Puffer mit pH 5 (0,17 ml Essigsäure, 0,263 g Natriumacetat, 0,22 ml Ethanol und 1 ml Wasser) und Pd/C 10% (0,6 g) zugegeben, und das Reaktionsgemisch wurde unter Rühren 5 Stunden in einem Autoklav bei einem Wasserstoffdruck von 5 Bar hydriert. Der Katalysator wurde abfiltriert, das Filtrat wurde bis zu einem dicken Sirup eingedampft, und es wurden CH₂Cl₂ (10 ml) und Wasser (15 ml) zugegeben, der pH-Wert des Gemischs wurde mit 2 N HCl auf 4 eingestellt, die Schichten wurden getrennt und, nach der Einstellung des pH auf 9,5 mit 20% NaOH, wurde die wässrige Schicht mit CH₂Cl₂ (3 × 10 ml) extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden über K₂CO₃ getrocknet, filtriert und eingedampft. Der Niederschlag wurde in Isopropanol (10 ml) gelöst, Wasser (10 ml) und einige Tropfen Ameisensäure wurden zugegeben, und es wurde 30 Minuten bei Raumtemperatur gerührt, mit Isopropylacetat bei pH 9,5 extrahiert, was nach dem Eindampfen bei vermindertem Druck 0,43 g des Titelproduktes mit den folgenden physikalisch-chemischen Konstanten ergab:

IR (KBr) cm^–1: 3672, 3496, 2962, 1727, 1458, 1375, 1343, 1280, 1263, 1118, 1085, 1048, 1005, 998.
¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 177.4 (C-1), 102.7 (C-1'), 95.5 (C-1''), 83.4 (C-5), 79.7 (C-12), 78.0 (C-3), 76.6 (C-11), 74.0 (C-13), 73.9 (C-6), 74.3 (C-2'), 73.0 (C-3''), 68.8 (C-9), 65.7 (C-5''), 60.1 (C-3'), 61.2 (C-10), 52.8 (12-OCH₃), 49.8 (3''-OCH₃), 45.5 (C-2), 41.5 (C-4), 33.1 3'-NCH₃, 36.8 (9a-NCH₃), 35.1 (C-2''), 28.8 (C-4'), 27.0 (C-8).
EI-MS m/z 748.

Beispiel 3
12-O-Methylazithromycin (nicht Gegenstand der vorliegenden Erfindung)
Einer Lösung von 3'-N-Demethyl-12-O-methyl-azithromycin aus Beispiel 2 (0,43 g, 0,0006 Mol) in CHCl₃ (20 ml) wurden Formaldehyd (37%) (0,047 ml, 0,0006 Mol) und Ameisensäure (98–100%) (0,042 ml, 0,0011 Mol) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 3 Stunden unter Rückfluss gerührt, auf Raumtemperatur abgekühlt, auf Wasser (20 ml) gegossen, und nach der Einstellung des pH auf 4,0 wurden die Schichten getrennt, und die wässrige Schicht wurde noch zweimal mit CHCl₃ extrahiert. Zu der wässrigen Schicht wurde CHCl₃ zugegeben, der pH-Wert wurde auf 9,5 eingestellt (2 N NaOH), die Schichten wurden getrennt, und die wässrige Schicht wurde noch zweimal mit CHCl₃ extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte bei pH 9,5 wurden getrocknet (K₂CO₃) und eingedampft, wobei 0,38 g des Titelproduktes erhalten wurde, das gegebenenfalls durch eine Chromatographie über eine Kieselgelsäule unter Verwendung des Systems CH₂Cl₂-CH₃OH-konz. NH₄OH, 90:9:1 gereinigt wurde.

TLC Methylenchlorid-Methanol-konz. Ammoniak, 90:9:0,5 Rf 0,363
Ethylacetat-N-Hexan-Diethylamin, 100:100:20 Rf 0,745
IR (KBr) cm^–1: 3499, 2972, 2940, 1736, 1633, 1460, 1381, 1259, 1168, 1110, 1059, 1082, 1054, 1013, 999.
¹H NMR (300 MHz CDCl₃) δ: 5.39 (H-13), 5.00 (H-1''), 4.43 (H-1'), 4.32 (H-3), 4.06 (H-5''), 3.68 (H-11), 3.65 (H-5), 3.51 (H-5'), 3.38 (12-OCH₃), 3.32 (3''-OCH₃), 3.24 (H-2'), 3.02 (H-4''), 2.73 (H-2), 2.69 (H-10), 2.49 (H-3'), 2.34 (H-2''a), 2.31 (H-9a), 2.29 /3'N(CH₃)₂/, 2.30 (9a-NCH₃), 2.12 (H-9b), 2.04 (H-4), 2.01 (H-8), 1.73 (H-14a), 1.68 (H-4'a), 1.66 (H-7a), 1.56 (H-2''b), 1.52 (H-14b), 1.36 (H-7b), 1.29 (6-CH₃), 1.21 (2-CH₃), 1.30 (5''-CH₃), 1.24 (H-4'b), 1.23 (3''-CH₃), 1.22 (5'-CH₃), 1.09 (12-CH₃), 1.29 (4-CH₃), 1.09 (10-CH₃), 0.92 (8-CH₃), 0.93 (14-CH₃).
¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 177.5 (C-1), 103.1 (C-1'), 95.2 (C-1''), 83.6 (C-5), 79.2 (C-12), 78.1 (C-3), 76.6 (C-11), 74.7 (C-13), 73.8 (C-6), 70.9 (C-2'), 68.8 (C-9), 65.6 (C-5''), 65.7 (C-3'), 61.6 (C-10), 52.8 (12-OCH₃), 49.4 (3''-OCH₃), 45.1 (C-2), 43.0 (C-7), 41.8 (C-4), 40.4 /3'N(CH₃)₂/, 36.8 (9a-NCH₃), 35.0 (C-2''), 29.0 (C-4'), 26.9 (C-8), 26.9 (6-CH₃), 22.0 (8-CH₃), 22.0 (C-14), 21.6 (3''-CH₃), 21.3 (5'-CH₃), 18.1 (5''-CH₃), 16.9 (12-CH₃), 14.6 (2-CH₃), 11.0 (14-CH₃), 9.6 (4-CH₃), 9.4 (10-CH₃).

Beispiel 4
3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-3-oxy-12-O-methyl-azithromycin
In 0,25 N Chlorwasserstoffsäure (80 ml) wurde 12-O-Methyl-azithromycin (1,7 g, 0,0022 Mol) aus Beispiel 3 gelöst, und es wurde 24 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Dem Reaktionsgemisch wurde CH₂Cl₂ (pH 1,8) zugesetzt, die Schichten wurden getrennt, und die wässrige Schicht wurde noch zweimal mit CH₂Cl₂ extrahiert. Wiederum wurde der wässrigen Schicht CH₂Cl₂ zugesetzt, der pH-Wert des Gemisches wurde mit konz. NH₄OH auf 9,0 eingestellt, die Schichten wurden getrennt, und die wässrige Schicht wurde mit CH₂Cl₂ extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte bei pH 9,0 wurden mit 10% wässriger NaHCO₃-Lösung und Wasser gespült, über K₂CO₃ getrocknet und eingedampft, was 1,25 g des Titelprodukts mit den folgenden physikalisch-chemischen Konstanten ergab:

TLC Methylenchlorid-Methanol-konz. Ammoniak, 90:9:0,5 Rf 0,315
Ethylacetat-N-Hexan-Diethylamin, 100:100:20 Rf 0,594
IR (KBr) cm^–1: 3450, 2971, 2933, 1711, 1648, 1460, 1381, 1272, 1261, 1171, 1113, 1078, 1049.
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 5.32 (H-13), 4.47 (H-1'), 3.78 (H-3), 3.66 (H-11), 3.58 (H-5), 3.58 (H-5'), 3.41 (12-OCH₃), 3.28 (H-2'), 2.67 (H-2), 2.80 (H-10), 2.53 (H-3'), 2.53 (H-9a), 2.27 /3'N(CH₃)₂/, 2.37 (9a-NCH₃), 2.07 (H-9b), 2.27 (H-4), 1.92 (H-8), 1.74 (H-14a), 1.68 (H-4'a), 1.59 (H-7a), 1.63 (H-14b), 1.51 (H-7b), 1.31 (6-CH₃), 1.31 (2-CH₃), 1.29 (H-4'b), 1.26 (5'-CH₃), 1.08 (12-CH₃), 1.05 (4-CH₃), 1.19 (10-CH₃), 0.93 (8-CH₃), 0.92 (14-CH₃).
¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 177.2 (C-1), 106.4 (C-1'), 94.7 (C-5), 78.0 (C-12), 79.0 (C-3), 78.3 (C-11), 75.1 (C-13), 72.9 (C-6), 70.2 (C-2'), 70.3 (C-9), 65.3 (C-3'), 62.1 (C-10), 52.5 (12-OCH₃), 44.3 (C-2), 41.8 (C-7), 35.7 (C-4), 39.9 /3'N(CH₃)₂/, 36.5 (9a-NCH₃), 27.9 (C-4'), 26.4 (C-8), 25.5 (6-CH₃), 20.8 (8-CH₃), 20.7 (C-14), 20.8 (5'-CH₃), 16.1 (12-CH₃), 15.7 (2-CH₃), 10.3 (14-CH₃), 7.6 (4-CH₃), 7.2 (10-CH₃).

Beispiel 5
3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-3-oxy-12-O-methyl-azithromycin-2'-O-acetat
Einer Lösung von 3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-3-oxy-12-O-methyl-azithromycin (1,3 g, 0,0022 Mol) aus Beispiel 4 in CH₂Cl₂ (20 ml) wurden NaHCO₃ (0,754 g, 0,009 Mol) und Essigsäureanhydrid (0,221 ml, 0,0023 Mol) zugesetzt und dann 10 Stunden bei Raumtemperatur gerührt. Nach Stehen über Nacht wurde dem Reaktionsgemisch gesättigte NaHCO₃-Lösung zugesetzt, die Schichten wurden getrennt, und die wässrige Schicht wurde mit CH₂Cl₂ extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit einer gesättigten NaHCO₃-Lösung und Wasser gespült, über K₂CO₃ getrocknet, filtriert und eingedampft, was 1,29 g eines weißen amorphen Niederschlags ergab.

TLC Methylenchlorid-Methanol-konz. Ammoniak, 90:9:0,5 Rf 0,489
Ethylacetat-N-Hexan-Diethylamin, 100:100:20 Rf 0,661
IR (KBr) cm^–1: 3448, 2974, 1749, 1718, 1637, 1458, 1377, 1242, 1169, 1115, 1045.
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 5.23 (H-13), 4.72 (H-2'), 4.70 (H-1'), 3.59 (H-11), 3.56 (H-5), 3.52 (H-3), 3.43 (H-5'), 3.33 (12-OCH₃), 2.72 (H-10), 2.71 (H-3'), 2.61 (h-2), 2.42 (H-9a), 2.30 (9a-NCH₃), 2.20 /3'N(CH₃)₂/, 2.12 (H-4), 1.99 (2'-COCH₃), 1.96 (H-9b), 1.80 (H-8), 1.67 (H-14a), 1.67 (H-4'a), 1.58 (H-14b), 1.47 (H-7a), 1.31 (H-4'b), 1.21 )2-CH₃), 1.18 (H-7b), 1.16 (5'-CH₃), 1.15 (6-CH₃), 1.10 (10-CH₃), 0.97 (12-CH₃), 0.86 (14-CH₃), 0.84 (8-CH₃), 0.81 (4-CH₃).
¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 176.5 (C-1), 169.4 (2'-COCH₃), 98.6 (C-1'), 84.3 (C-5), 77.3 (C-12), 78.3 (C-3), 76.7 (C-11), 74.6 (C-13), 72.4 (C-6), 70.7 (C-2'), 69.9 (C-9), 62.2 (C-3'), 62.3 (C-10), 51.9 (12-OCH₃), 43.0 (C-2), 40.1 (C-7), 35.2 (C-4), 39.6 /3'N(CH₃)₂/, 35.9 (9a-NCH₃), 30.0 (C-4'), 25.4 (C-8), 25.2 (6-CH₃), 20.6 (2'-COCH₃), 20.4 (8-CH₃), 20.0 (C-14), 20.2 (5'-CH₃), 15.9 (12-CH₃), 15.2 )2-CH₃), 9.7 (14-CH₃), 7.0 (4-CH₃), 6.4 (10-CH₃).

Beispiel 6
3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-12-O-methyl-azithromycin-3,6-hemiketal-2'-O-acetat
Einer Lösung von 3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-3-oxy-12-O-methyl-azithromycin-2'-O-acetat (1,3 g, 0,0020 Mol) aus Beispiel 5 in CH₂Cl₂ (15 ml) wurden Dimethylsulfoxid (4,35 ml) und N,N-Dimethylaminopropylethylcarbodiimid (4,55 g) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde auf 15°C abgekühlt, und anschließend wurde unter Rühren und Halten der Temperaturbei 15°C eine Lösung von Pyridiniumtrifluoracetat (4,61 g, 0,0234 Mol) in CH₂Cl₂ (10 ml) während 30 min zugetropft. Die Temperatur des Reaktionsgemisches wurde schrittweise auf Raumtemperatur erhöht, und es wurde weitere 2 Stunden gerührt, worauf die Umsetzung durch den Zusatz einer gesättigten NaCl-Lösung (25 ml) gestoppt wurde. Nach Alkalisieren mit 2 N NaOH auf 9,5 wurde das Reaktionsgemisch mit CH₂Cl₂ extrahiert, die organischen Extrakte wurden mit einer gesättigten NaCl-Lösung, NaHCO₃ und Wasser gespült und über K₂CO₃ getrocknet. Das Eindampfen von CH₂Cl₂ unter vermindertem Druck ergab 1,78 g eines öligen Rückstands.

TLC Methylenchlorid-Methanol-konz. Ammoniak, 90:9:0,5 Rf 0,176
Ethylacetat-N-Hexan-Diethylamin, 100:100:20 Rf 0,861

Beispiel 7
3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohegopyranosyl-oxy)-12-O-methyl-azithromycin-3,6-hemiketal
Einer Lösung von 3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-12-O-methyl-azithromycin-2'-O-acetat (1,78 g) aus Beispiel 6 in Methanol (50 ml) wurde 24 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Methanol wurde unter einem verminderten Druck eingedampft, der erhaltene Rückstand (1,65 g) wurde durch Niederdruckchromatographie über eine Kieselgelsäule unter Verwendung des Systems Methylenchlorid-Methanol-konz. Ammoniak, 90:9:0,5 gereinigt. Durch Eindampfen der kombinierten Extrakte mit Rf 0,082 wurde chromatographisch homogenes 3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-12-O-methyl-azithromycin-3,6-hemiketal mit den folgenden physikalisch-chemischen Konstanten erhalten:

TLC Methylenchlorid-Methanol-konz. Ammoniak, 90:9:0,5 Rf 0,082
Ethylacetat-N-Hexan-Diethylamin, 100:100:20 Rf 0,624
IR (CDCl₃) cm^–1: 3450, 2956, 2940, 1718, 1678, 1631, 1459, 1383, 1278, 1198, 1117, 1068, 1048, 1014, 963.
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 5.49 (H-13), 4.21 (H-1'), 3.83 (H-11), 3.75 (H-5), 3.52 (H-5'), 3.43 (12-OCH₃), 3.25 (H-2'), 2.59 (H-2), 2.93 (H-10), 2.50 (H-3'), 2.61 (H-9a), 2.29 /3'N(CH₃)₂)/, 2.40 (9a-NCH₃), 2.10 (H-9b), 2.06 (H-4), 1.88 (H-8), 1.77 (H-14a), 1.67 (H-4'a), 1.61 (H-7a), 1.64 (H-14b), 1.33 (H-7b), 1.31 (6-CH₃), 1.05 (2-CH₃), 1.27 (H-4'b), 1.26 (5'-CH₃), 1.08 (12-CH₃), 1.05 (4-CH₃), 1.19 (10-CH₃), 0.92 (8-CH₃), 0.93 (14-CH₃).
¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 176.2 (C-1), 105.8 (C-1'), 94.6 (C-5), 78.3 (C-12), 102.7 (C-3), 71.2 (C-11), 74.8 (C-13), 82.9 (C-6), 69.6 (C-2'), 64.5 (C-9), 65.1 (C-3'), 60.7 (C-10), 52.2 (12-OCH₃), 49.2 (C-2), 41.4 (C-7), 48.6 (C-4), 40.0 /3'N(CH₃)₂/, 40.5 (9a-NCH₃), 28.2 (C-4'), 29.1 (C-8), 26.5 (6-CH₃), 21.5 (8-CH₃), 21.6 (C-14), 20.8 (5'-CH₃), 16.3 (12-CH₃), 13.6 (2-CH₃), 10.7 (14-CH₃), 12.8 (4-CH₃), 10.7 (10-CH₃).

Beispiel 8
4''-O-Trimethylsilyl-2'-O-3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-azithromycin (nicht Gegenstand der vorliegenden Erfindung)
Einer Lösung von 2'-O,3'-N-Bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-azithromycin (5 g, 0,005 Mol) in Pyridin (30 ml), gekühlt auf 0–5°C, wurden Trimethylsilylimidazol (1,46 ml, 0,01 Mol) und Trimethylsilylchlorid (1,64 ml, 0,01 Mol) unter einem Stickstoffstrom zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 1 Stunde bei der gleichen Temperatur gerührt, n-Hexan (50 ml) und Wasser (25 ml) wurden zugesetzt, die Schichten wurden getrennt, und die organische Schicht wurde mit einer gesättigten NaHCO₃-Lösung (25 ml) und Wasser (25 ml) gespült. Nach Trocknen über MgSO₄, Filtration und Eindampfen des Lösungsmittels bei vermindertem Druck wurde ein amorpher Niederschlag (3,65 g) erhalten, der gegebenenfalls durch Niederdruckchromatographie über eine Kieselgelsäule unter Verwendung des Systems Methylenchlorid-Methanol-konz. Ammoniak, 90:9:0,5 gereinigt wurde. Durch Vereinigen und Eindampfen der chromatographisch homogenen Fraktionen mit Rf 0,670 wurde das Titelprodukt mit den folgenden physikalisch-chemischen Konstanten erhalten:

TLC Methylenchlorid-Methanol, 90:1 Rf 0,525
Ethylacetat-N-Hexan-Diethylamin, 100:100:20 Rf 0,862
IR (KBr) cm^–1: 3502, 2969, 2938, 1753, 1732, 1708, 1454, 1383, 1365, 1254, 1169, 1118, 1063, 1001, 897, 839, 754, 696.
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 7.34–7.26 (Ph), 5.13, 5.09 (CH₂-Ph), 5.07 (H-1''), 4.78 (H-1), 4.68 (H-13), 4.66 (H-2'), 4.55 (H-3'), 4.22 (H-5''), 4.13 (H-3), 3.96 (H-5'), 3.65 (H-11), 3.58, 3.54 (H-5), 3.15 (H-4''), 3.37, 2.99 (3''-OCH₃), 2.85, 2.81 (3'-NCH₃), 2.701 (H-2), 2.68 (H-10), 2.54 (H-9a), 2.35 (H-2''a), 2.31 (9a-NCH₃), 2.04 (H-9b), 1.97 (H-8), 1.90 (H-14a), 1.85 (H-4), 1.62 (H-7a), 1.50 (H-2''b), 1.44 (H-14b), 1.28, 1.27 (6-CH₃), 1.23 (5''-CH₃), 1.16 (5'-CH₃), 1.15 (H-7b), 1.04 (3''-CH₃), 1.15 (12-CH₃), 1.10 (2-CH₃), 1.10 (10-CH₃), 0.92 (8-CH₃), 0.89 (14-CH₃), 1.10 (4-CH₃).
¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 178.8 (C-1), 156.6, 156.3 (OCO), 154.7, 154.6 (NCO), 136.8–127.5 (Ph), 99.2 (C-1'), 94.8 (C-1''), 83.2, 83.1 (C-5), 80.5, 80.4 (C-4''), 77.3 (C-3), 75.1, 75.0 (C-2'), 74.1 (C-12), 73.8 (C-11), 73.2 (C-6), 73.2 (C-3''), 69.2, 69.0 67.2, 66.8 (CH₂-Ph), 64.8 (C-5''), 62.2 (C-10), 54.6 (C-3'), 49.3, 48.8 (3''-OCH₃), 44.7 (C-2), 41.5 (C-7), 41.1 (C-4), 36.1 (9a-NCH₃), 35.1, 35.0 (C-2''), 36.3, 35.7 (C-4'), 28.4 (3'-NCH₃), 26.3 (C-8), 26.8 (6-CH₃), 22.1 (3''-CH₃), 21.6 (8-CH₃), 21.4 (5'-CH₃), 21.0 (C-14), 18.7 (5''-CH₃), 15.9 (2-CH₃), 14.5 (12-CH₃), 11.0 (14-CH₃), 8.5 (4-CH₃), 7.1 (10-CH₃), 0.63/4''-OSi(CH₃)₃/.
ES-MS 1075.

Beispiel 9
11-O-Methyl-azithromycin und 12-O-Methyl-azithromycin (beide nicht Gegenstand der vorliegenden Erfindung)
Einer Lösung des Produkts von Beispiel 8 (3,0 g, 0,0028 Mol) in N,N-Dimethylformamid (50 ml) wurden nach und nach während 3 Stunden bei Raumtemperatur Methyliodid (1,29 ml, 0,0207 Mol) und 60% Natriumhydrid (0,69 g, 0,0174 Mol) bei Raumtemperatur zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 1 Stunde bei der gleichen Temperatur gerührt, die Umsetzung wurde durch Zugabe von Triethylamin (5 ml) gestoppt, es wurde in ein Gemisch von 10% wässriger NaHCO₃-Lösung (100 ml) und Wasser (100 ml) übergeführt und mit Ethylacetat extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte wurden mit einer gesättigten NaCl-Lösung und Wasser gespült und über MgSO₄ getrocknet, filtriert und unter vermindertem Druck eingedampft, wobei sich 2,9 g eines Gemisches von Produkten ergaben, die gegebenenfalls durch Niederdruckchromatographie über eine Kieselgelsäule unter Verwendung des Systems Methylenchlorid-Methanol, 90:1, gereinigt wurden, was ein chromatographisch homogenes 4''-O-Trimethylsilyl-2'-O-3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-11-O-methyl-azithromycin mit Rf 0,745 [IR (KBr): 3452, 2969, 1752, 1736, 1706, 1455, 1382, 1332, 1254, 1169, 1117, 1063, 1002, 914, 897, 840, 754, 697] und 4''-O-Trimethylsilyl-2'-O-3'-N-bis(benzyloxycarbonyl)-3'-N-demethyl-12-O-methyl-azithromycin mit Rf 0,485 [IR (KBr): 3450, 2958, 1754, 1718, 1708, 1458, 1383, 1252, 1168, 1068, 1010, 896, 842, 753, 695] ergab.
Das erhaltene Gemisch wurde in Ethanol (50 ml), NaOAc/HOAc-Puffer mit pH 5 (0,51 ml HOAc, 0,789 g NaOAc, 0,66 ml Ethanol und 3 ml Wasser) gelöst, und 10% Pd/C (1,5 g) wurden zugesetzt, und das Gemisch wurde unter Rühren 8 Stunden in einem Autoklaven bei einem Wasserstoffdruck von 5 bar hydriert. Der Katalysator wurde abfiltriert, das Filtrat wurde zu einem dicken Sirup eingedampft, Wasser (50 ml) und CHCl₃ (50 ml) wurden zugesetzt, und das Produkt wurde durch eine pH-Gradientenextraktion bei pH 4,0 und 9,5 isoliert. Die vereinigten organischen Extrakte bei pH 9,5 wurden über K₂CO₃ getrocknet und zu einem amorphen Niederschlag eingedampft. Der Niederschlag wurde in Isopropanol (20 ml), Wasser (20 ml) gelöst, und einige Tropfen Ameisensäure wurden zugesetzt, und er wurde 30 min bei Raumtemperatur gerührt, mit Isopropylacetat bei pH 9,5 extrahiert, über Natrimsulfat getrocknet und unter vermindertem Druck eingedampft. Das erhaltene Produkt wurde in CHCl₃ (50 ml), Formaldehyd (37%) (0,24 ml) gelöst, und Ameisensäure (98–100%) (0,22 ml) wurde zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 3 Stunden unter Rückfluss gerührt, auf Raumtemperatur abgekühlt, auf Wasser (20 ml) gegossen, und nach Einstellen des pH-Wertes auf 4,0 wurden die Schichten getrennt, und die wässrige Schicht wurde noch zweimal mit CHCl₃ extrahiert. Der wässrigen Schicht wurde CHCl₃ zugesetzt, der pH wurde auf 9,5 eingestellt (2 N NaOH), die Schichten wurden getrennt, und die wässrige Schicht wurde noch zweimal mit CHCl₃ extrahiert. Die vereinigten organischen Extrakte bei pH 9,5 wurden getrocknet (K₂CO₃) und eingedampft, was 1,25 g eines Niederschlags ergab, der über eine Kieselgelsäule unter Verwendung des Systems Methylenchlorid-Methanol-konz. Ammoniak, 90:9:1 chromatographiert wurde, was 0,40 g chromatographisch homogenes 11-O-Methyl-azithromycin mit den physikalisch-chemischen Konstanten wie in der US-Patentschrift 5,250,518 von 10/1993 angegeben, und 0,52 g 12-O-Methyl-azithromycin mit den physikalisch-chemischen Konstanten wie in Beispiel 3 angegeben ergab.
Beispiel 10
3-De(2,6-didesozy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohezopyranosyl-ozy)-3-ozy-azithromycin (nicht Gegenstand der vorliegenden Erfindung)
3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-3-oxy-azithromycin wurde aus Azithromycin nach dem Verfahren von Djokić et al. aus US 4,886,792 von 12/1989, Beispiel 3, hergestellt. Durch Auftrennen über eine Kieselgelsäule unter Verwendung des Lösungsmittelsystems Methylenchlorid-Methanol-konz. Ammoniak, 90:9:0,5 wurde ein chromatographisch homogenes Produkt mit den folgenden physikalisch-chemischen Konstanten erhalten:

TLC, Ethylacetat-Triethylamin, 95:5 Rf 0,371
IR (KBr) cm^–1: 3438, 2973, 2938, 1713, 1655, 1459, 1378, 1350, 1260, 1172, 1113, 1078, 1044, 957.
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 4.72 (H-13), 4.47 (H-1'), 3.78 (H-3), 3.58 (H-5), 3.56 (H-5'), 3.65 (H-11), 3.27 (H-2'), 2.66 (H-2), 2.74 (H-10), 2.52 (H-3'), 2.49 (H-9a), 2.28 (H-4), 2.26 /3'N(CH₃)₂/, 2.37 (9a-NCH₃), 2.06 (H-9b), 1.90 (H-14a), 1.90 (H-8), 1.67 (H-4'a), 1.62 (H-7a), 1.47 (H-7b), 1.53 (H-14b), 1.32 (6-CH₃), 1.30 (2-CH₃), 1.28 (H-4'b), 1.26 (5'-CH₃), 1.07 (12-CH₃), 1.06 (4-CH₃), 1.12 (10-CH₃), 0.92 (8-CH₃), 0.88 (14-CH₃).
¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 178.8 (C-1), 106.6 (C-1'), 94.7 (C-5), 72.9 (C-12), 79.2 (C-3), 75.5 (C-11), 77.1 (C-13), 74.0 (C-6), 70.3 (C-2'), 70.6 (C-9), 65.4 (C-3'), 62.2 (C-10), 44.2 (C-2), 41.7 (C-7), 35.6 (C-4), 39.9 /(3'N(CH₃)₂/, 36.8 (9a-NCH₃), 27.7 (C-4'), 26.3 (C-8), 25.5 (6-CH₃), 20.8 (8-CH₃), 20.5 (C-14), 20.9 (5'-CH₃), 15.7 (12-CH₃), 15.8 (2-CH₃), 10.5 (14-CH₃), 7.5 (4-CH₃), 7.3 (10-CH₃).

Beispiel 11
3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-3-oxy-azithromycin-2'-O-acetat (nicht Gegenstand der vorliegenden Erfindung)
Einer Lösung von 3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-3-oxy-azithromycin (10 g) aus Beispiel 10 in CH₂Cl₂ (150 ml) wurden NaHCO₃ (5,84 g) und Essigsäureanhydrid (1,68 ml) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde 12 Stunden bei Raumtemperatur gerührt, über Nacht stehengelassen und anschließend nach dem in Beispiel 5 beschriebenen Verfahren isoliert, was 11,21 g eines amorphen Niederschlags mit den folgenden physikalisch-chemischen Konstanten ergab:

TLC Ethylacetat-Triethylamin, 95:5 Rf 0,547
IR (KBr) cm^–1: 3458, 2973, 2937, 1748, 1716, 1648, 1459, 1376, 1240, 1170, 1114, 1081, 1045, 956.
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 4.71 (H-13), 4.79 (H-2'), 4.71 (H-1'), 3.84 (H-3), 3.61 (H-5), 3.50 (H-5'), 3.68 (H-11), 2.73 (H-10), 2.70 (H-2), 2.70 (H-3'), 2.48 (H-9a), 2.27 (H-4), 2.26 /3'N(CH₃)₂/, 2.36 (9a-NCH₃), 2.07 (COCH₃), 2.05 (H-9b), 1.90 (H-14a), 1.90 (H-8), 1.78 (H-4'a), 1.56 (H-7a), 1.24 (H-7b), 1.54 (H-14b), 1.23 (6-CH₃), 1.29 (2-CH₃), 1.32 (H-4'b), 1.24 (5'-CH₃), 1.11 (10-CH₃), 1.06 (12-CH₃), 0.90 (4-CH₃), 0.89 (8-CH₃), 0.88 (14-CH₃).

Beispiel 12
3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-azithromycin-3,6-hemiketal-2'-O-acetat (nicht Gegenstand der vorliegenden Erfindung)
Einer Lösung von 3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-3-oxy-azithromycin-2'-O-acetat (5,6 g) aus Beispiel 11 in CH₂Cl₂ (100 ml) wurden Dimethylsulfoxid (12,34 ml) und N,N-Dimethylaminopropylethylcarbodiimid (15,05 g) zugesetzt. Das Reaktionsgemisch wurde auf 15°C abgekühlt, und anschließend wurde unter Rühren und Halten der Temperatur bei 15°C eine Lösung von Pyridiniumtrifluoracetat (15,04 g) in CH₂Cl₂ (30 ml) nach und nach während 30 min zugetropft. Die Temperatur des Reaktionsgemisches wurde auf Raumtemperatur erhöht, es wurde für weitere 4 Stunden unter Rühren gehalten, und sodann wurde ein Produkt nach dem in Beispiel 6 beschriebenen Verfahren isoliert, was 5,26 g des Titelprodukts ergab.

TLC Ethylacetat-Triethylamin, 95:5 Rf 0,675

Beispiel 13
3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohezopyranosyl-ozy)-azithromycin-3,6-hemiketal (nicht Gegenstand der vorliegenden Erfindung)
Eine Lösung von 3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-azithromycin-3,6-hemilcetal-2'-O-acetat (5,2 g) aus Beispiel 12 in Methanol (100 ml) wurde 16 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen. Methanol wurde unter vermindertem Druck eingedampft, und das erhaltene Produkt wurde durch Niederdruckchromatographie über einer Kieselgelsäule unter Verwendung des Systems Methylenchlorid-Methanol-konz. Ammoniak, 90:9:1,5 gereinigt. Durch Eindampfen der vereinigten Fraktionen mit Rf 0,480 wurde chromatographisch homogenes 3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-azithromycin-3,6-hemiketal mit den folgenden physikalisch-chemischen Konstanten erhalten:

TLC Ethylacetat-Triethylamin, 95:5 Rf 0,447
IR (CDCl₃) cm^–1: 3468, 2976, 1713, 1638, 1459, 1382, 1197, 1116, 1068, 1049, 1014, 963.
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 4.94 (H-13), 4.21 (H-1'), 3.74 (H-5), 3.51 (H-5'), 3.23 (H-2'), 2.57 (H-2), 2.49 (H-3'), 2.23 /3'N(CH₃)₂/, 2.06 (H-4), 1.74 (H-8), 1.67 (H-4'a), 1.39 (6-CH₃), 1.28 (2-CH₃), 1.25 (H-4'b), 1.22 (5'-CH₃), 1.23 (4-CH₃), 1.10 (10-CH₃), 1.04 (8-CH₃), 0.92 (14-CH₃).
¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 176.9 (C-1), 106.1 (C-1'), 102.3 (C-3), 94.8 (C-5), 82.4 (C-6), 69.7 (C-2'), 68.5 (C-11), 66.4 (C-9), 65.3 (C-3'), 61.6 (C-10), 49.3 (C-2), 41.6 (C-7), 40.1 /3'N(CH₃)₂/, 31.0 (C-8), 28.2 (C-4'), 26.4 (6-CH₃), 20.8 (5'-CH₃), 13.6 (2-CH₃), 12.6 (4-CH₃), 11.4 (14-CH₃).
FAB-MS m/z 589

Beispiel 14
3-De(2,6-didesozy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-azithromycin-3,6-hemiketal 11,12-zyklisches Carbonat
Einer Lösung von 3-De(2,6-didesoxy-3-C-methyl-3-O-methyl-α-L-ribohexopyranosyl-oxy)-azithromycin-3,6-hemiketal (1 g) aus Beispiel 13 in Ethylacetat (30 ml) wurden Ethylencarbonat (0,5 g) und Kaliumcarbonat (0,5 g) zugesetzt. Die Reaktionssuspension wurde 10 Stunden unter Rückfluss gerührt, 16 Stunden bei Raumtemperatur stehengelassen und sodann filtriert. Ethylacetat wurde mit gesättigter NaCl-Lösung und Wasser gespült, über CaCl₂ getrocknet, filtriert und eingedampft, was 1,05 g eines öligen Rückstands ergab. Nach Auftrennen über eine Kieselgelsäule unter Verwendung des Systems Methylenchlorid-Methanol-konz. Ammoniak, 90:9:0,5 wurde das chromatographisch homogene Titelprodukt mit den folgenden physikalisch-chemischen Konstanten erhalten:

TLC Ethylacetat-Triethylamin, 95:5 Rf 0,514
IR (CDCl₃) cm^–1: 3498, 2975, 2941, 1812, 1724, 1638, 1459, 1381, 1359, 1333, 1292, 1234, 1173, 1115, 1082, 1045, 1015, 966.
¹H NMR (300 MHz, CDCl₃) δ: 5.03 (H-13), 4.61 (H-11), 4.23 (H-1'), 3.73 (H-5), 3.52 (H-5'), 3.52 (H-2'), 3,18 (H-9a), 2.90 (H-10), 2.54 (H-2), 2.50 (H-3'), 2.28 /3'N(CH₃)₂/, 2.10 (H-4), 2.07 (9a-NCH₃), 1.76 (H-7a), 1.95 (H-8), 1.86 (H-14a), 1.67 (H-4'a), 1.57 (H-9b), 1.55 (H-14b), 1.45 (12-CH₃), 1.37 (6-CH₃), 1.30 (2-CH₃), 1.28 (H-4'b), 1.23 (5'-CH₃), 1.24 (4-CH₃), 1.13 (H-7b), 1.18 (10-CH₃), 0.90 (8-CH₃), 0.92 (14-CH₃).
¹³C NMR (75 MHz, CDCl₃) δ: 176.1 (C-1), 153.5 (C=O Carbonat), 106.1 (C-1'), 101.6 (C-3), 93.6 (C-5), 83.7 (C-12), 82.7 (C-6), 78.9 (C-11), 77.9 (C-13), 69.6 (C-2'), 69.4 (C-5'), 63.6 (C-9), 65.3 (C-3'), 60.1 (C-10), 49.9 (C-2), 46.6 (C-4), 41.8 (C-7), 40.0/3'N(CH₃)₂/, 33.4 (9a-CH₃), 28.0 (C-4'), 26.8 (C-8), 25.1 (6-CH₃), 22.3 (C-14), 20.8 (5'-CH₃), 19.4 (8-CH₃), 14.1 (12-CH₃), 13.9 (2-CH₃), 12.1 (4-CH₃), 12.9 (10-CH₃), 10.1 (14-CH₃).

Claims

Verbindung der allgemeinen Formel (I)
dadurch gekennzeichnet, dass R¹ einzeln für Hydroxyl steht, R³ einzeln für Wasserstoff oder zusammen mit R⁶ für eine Ethergruppe steht, R⁴ einzeln für Wasserstoff oder eine (C₁-C₄)Acylgruppe steht, R⁵ einzeln für eine Methylgruppe steht, R⁶ einzeln für eine Hydroxylgruppe oder zusammen mit R³ für eine Ethergruppe steht, R⁷ einzeln für Wasserstoff, eine (C₁-C₁₂)Alkylgruppe oder zusammen mit R⁸ und C-11/C-12-C-Atomen für ein zyklisches Carbonat steht, R⁸ einzeln für eine (C₁-C₁₂)Alkylgruppe oder zusammen mit R⁷ und C-11/C-12-C-Atomen für ein zyklisches Carbonat steht, und ihre pharmazeutisch annehmbaren Additionssalze mit anorganischen oder organischen Säuren.
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R¹ und R⁶ beide gleich sind und für eine Hydroxylgruppe stehen, R³, R⁴ und R⁷ alle gleich sind und für Wasserstoff stehen und R⁵ und R⁸ beide gleich sind und für Methyl stehen.
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R¹ und R⁶ beide gleich sind und für eine Hydroxylgruppe stehen, R³ und R⁷ beide gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ Acetyl ist und R⁵ und R⁸ beide gleich sind und für Methyl stehen.
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R¹ für eine Hydroxylgruppe steht, R³ zusammen mit R⁶ für eine Ethergruppe steht, R⁴ Acetyl ist, R⁵ und R⁸ beide gleich sind und für Methyl stehen und R⁷ Wasserstoff ist.
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R¹ für eine Hydroxylgruppe steht, R³ zusammen mit R⁶ für eine Ethergruppe steht, R⁴ und R⁷ beide gleich sind und für Wasserstoff stehen und R⁵ und R⁸ beide gleich sind und für Methyl stehen.
Verbindung nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, dass R¹ für eine Hydroxylgruppe steht, R³ zusammen mit R⁶ für eine Ethergruppe steht, R⁴ Wasserstoff, R⁵ Methyl ist und R⁷ und R⁸ zusammen mit C-11/C-12-C-Atomen für ein zyklisches Carbonat stehen.
Verfahren für die Zubereitung von Verbindungen der allgemeinen Formel (I)
wobei R¹ einzeln für Hydroxyl steht, R³ einzeln für Wasserstoff oder zusammen mit R⁶ für eine Ethergruppe steht, R⁴ einzeln für Wasserstoff oder eine (C₁-C₄)Acylgruppe steht, R⁵ einzeln für eine Methylgruppe steht, R⁶ einzeln für eine Hydroxylgruppe oder zusammen mit R³ für eine Ethergruppe steht, R⁷ einzeln für Wasserstoff, eine (C₁-C₁₂)Alkylgruppe oder zusammen mit R⁸ und C-11/C-12-C-Atomen für ein zyklisches Carbonat steht, R⁸ einzeln für eine (C₁-C₁₂)Alkylgruppe oder zusammen mit R¹ und C-11/C-12-C-Atomen für ein zyklisches Carbonat steht, und ihre pharmazeutisch annehmbaren Additionssalze mit anorganischen oder organischen Säuren, dadurch gekennzeichnet, dass 12-O-Methylazithromycin einer Hydrolysereaktion mit verdünnten anorganischen Säuren, vorzugsweise mit 0,25 N Salzsäure, unterzogen wird, wodurch eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) gebildet wird, wobei R¹ und R⁶ beide gleich sind und für eine Hydroxylgruppe stehen, R³, R⁴ und R⁷ alle gleich sind und für Wasserstoff stehen und R⁵ und R⁸ beide gleich sind und für Methyl stehen, die dann optional einer Reaktion der selektiven Acylierung einer Hydroxylgruppe in der 2'-Position mit Chloriden und Anhydriden von Karbonsäuren mit bis zu 4 C-Atomen, vorzugsweise mit dem Essigsäureanhydrid, in einem reaktionsinerten organischen Lösungsmittel, vorzugsweise in Methylenchlorid, unterzogen wird, wodurch eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) gebildet wird, wobei R¹ und R⁶ beide gleich sind und für eine Hydroxylgruppe stehen, R³ und R⁷ beide gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ (C₁-C₄)Acyl ist und R⁵ und R⁸ beide gleich sind und für Methyl stehen, die dann optional der Oxidation mit einem Jones-Reagenten oder nach einem modifizierten Moffat-Pfitzner-Verfahren vorzugsweise mit N,N-Dimethylaminopropylethylcarbodiimid in Gegenwart von Dimethylsulfoxid und Pyridiniumtrifluoracetat als Katalysator in einem inerten organischen Lösungsmittel, vorzugsweise Methylenchlorid, bei einer Temperatur von 10°C bis Raumtemperatur unterzogen wird, wodurch eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) gebildet wird, wobei R¹ für eine Hydroxylgruppe, R³ zusammen mit R⁶ für eine Ethergruppe steht, R⁴ (C₁-C₄)Acyl ist, R⁵ und R⁸ beide gleich sind und für Methyl stehen und R⁷ Wasserstoff ist, die dann einer Deacylierungsreaktion in der 2'-Position mittels Solvolyse in niedrigen Alkoholen, vorzugsweise in Methanol, bei Raumtemperatur unterzogen wird, wodurch eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) gebildet wird, wobei R¹ für eine Hydroxylgruppe, R³ zusammen mit R⁶ für eine Ethergruppe stehen, R⁴ und R⁷ beide gleich sind und für Wasserstoff stehen und R⁵ und R⁸ beide gleich sind und für Methyl stehen, oder Azithromycin einer Hydrolysereaktion mit verdünnten anorganischen Säuren, vorzugsweise mit 0,25 N Salzsäure, unterzogen wird, wobei eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) gebildet wird, wobei R¹ und R⁶ beide gleich sind und für eine Hydroxylgruppe stehen, R³, R⁴, R⁷ und R⁸ alle gleich sind und für Wasserstoff stehen und R⁵ Methyl ist, die dann einer Reaktion der selektiven Acylierung einer Hydroxylgruppe in der 2'-Position mit Chloriden und Anhydriden von Karbonsäuren mit bis zu 4 C-Atomen, vorzugsweise mit dem Essigsäureanhydrid, in einem reaktionsinerten organischen Lösungsmittel, vorzugsweise in Methylenchlorid, unterzogen wird, wodurch eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) gebildet wird, wobei R¹ und R⁶ beide gleich sind und für eine Hydroxylgruppe stehen, R³, R⁷ und R⁸ alle gleich sind und für Wasserstoff stehen, R⁴ (C₁-C₄)Acyl und R⁵ Methyl ist, die dann der Oxidation mit einem Jones-Reagenten oder nach einem modifizierten Moffat-Pfitzner-Verfahren vorzugsweise mit N,N-Dimethylaminopropylethylcarbodiimid in Gegenwart von Dimethylsulfoxid und Pyridiniumtrifluoracetat als Katalysator in einem inerten organischen Lösungsmittel, vorzugsweise Methylenchlorid, bei einer Temperatur von 10°C bis Raumtemperatur unterzogen wird, wodurch eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) gebildet wird, wobei R¹ für eine Hydroxylgruppe, R³ zusammen mit R⁶ für eine Ethergruppe stehen, R⁴ (C₁-C₄)Acyl ist, R⁵ Methyl ist, R⁷ und R⁸ beide gleich sind und für Wasserstoff stehen, die dann einer Deacylierungsreaktion in der 2'-Position mittels Solvolyse in niedrigen Alkoholen, vorzugsweise Methanol, bei Raumtemperatur unterzogen wird, wodurch eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) gebildet wird, wobei R¹ für eine Hydroxylgruppe, R³ zusammen mit R⁶ für eine Ethergruppe steht, R⁴, R⁷ und R⁸ alle gleich sind und für Wasserstoff stehen und R⁵ Methyl ist, und die dann einer Reaktion mit Ethylencarbonat in Gegenwart von anorganischen oder organischen Basen, vorzugsweise Kaliumcarbonat, in einem reaktionsinerten Lösungsmittel, vorzugsweise Ethylacetat, unterzogen wird, wodurch eine Verbindung der allgemeinen Formel (I) gebildet wird, wobei R¹ für eine Hydroxylgruppe, R³ zusammen mit R⁶ für eine Ethergruppe steht, R⁴ Wasserstoff, R⁵ Methyl ist, und R⁷ und R⁸ zusammen mit C-11/C-12-C-Atomen für ein zyklisches Carbonat stehen.
Pharmazeutische Zusammensetzung, die zur Behandlung von bakteriellen Infektionen bei Menschen und Tieren nützlich ist und antibakteriell wirksame Mengen der Verbindung der allgemeinen Formel (I) oder ihrer pharmazeutisch annehmbaren Additionssalze nach Anspruch 1 in einer Kombination mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger umfasst.
Verwendung der Verbindung der allgemeinen Formel (I) oder ihrer pharmazeutisch annehmbaren Salze mit anorganischen oder organischen Säuren nach Anspruch 1 in einer Kombination mit einem pharmazeutisch annehmbaren Träger für die Herstellung einer pharmazeutischen Zusammensetzung zur Behandlung bakterieller Infektionen bei Menschen und Tieren.