WO2000069259A1 - Solution aqueuse de conservation de tissus et d'organes - Google Patents

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Silvina Ramella Virieux
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    • A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
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    • A01N1/00—Preservation of bodies of humans or animals, or parts thereof
    • A01N1/02—Preservation of living parts
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    • Y10T436/10—Composition for standardization, calibration, simulation, stabilization, preparation or preservation; processes of use in preparation for chemical testing
    • Y10T436/108331—Preservative, buffer, anticoagulant or diluent

Definitions

  • tissues in particular but not limited to the veins, arteries, valves, vessels ....
  • organ preservation solution is meant a single aqueous preservation solution capable of preserving a multitude of organs, and in particular, but not limited to, the liver, the heart and the kidney.
  • the organ (s) or tissue (s) are subjected to an inevitable period of ischemia before being transplanted into a recipient. Consequently, the liquids used for the preservation of organs must simultaneously fulfill three objectives, namely: • washing the graft of residual blood,
  • organ preservation is static hypothermic preservation. This method consists of rinsing the removed organ with a cooled preservation solution, then keeping the organ in this solution until the time of the subsequent transplant.
  • this method ensures the preservation of the organs for only a limited period, this period hardly exceeding 24 hours for the kidney, 12 to 18 hours for the liver and 4 to 6 hours for the heart.
  • Organ preservation liquids previously offered have different compositions depending on the organs to be preserved.
  • the EURO COLLINS liquid marketed by FRESENIUS resulting from a mixture of the intracellular type (potassium concentration higher than the sodium concentration) exclusively ionic, that is to say free from any macromolecule and the BELZER-VTASPAN liquid also known as UW (University of Wisconsin) marketed by DUPONT.
  • the BELZER-VTASPAN liquid also known as UW (University of Wisconsin) marketed by DUPONT.
  • UW Universality of Wisconsin
  • compositions of each of these liquids are shown in Table 1 below.
  • the solution used for cardiac preservation is of the extracellular type (rich in sodium), while the preservation solution for the preservation of the kidney and liver is of the intracellular type ( rich in potassium).
  • the problem which the invention proposes to solve is to provide a single solution capable of ensuring the conservation of any organ, and in particular of the liver, kidney and heart.
  • Another object of the invention is to prepare a solution which is capable not only of preserving the organs, but also of preserving the tissues.
  • Another objective of the invention is to increase the duration and the quality of the preservation.
  • the invention provides an aqueous solution for preserving tissues and organs.
  • This solution is characterized in that it is of the extracellular type and in that it comprises calcium ions (Ca 2+ ) and purified polyethylene glycol of molecular weight equal to 35,000.
  • solution of the extracellular type is meant a solution comprising a sodium (Na + ) concentration of at least 30 millimoles, advantageously 125 millimoles.
  • a cardioplegic solution is obtained.
  • the extracellular solution of the invention made it possible to ensure not only the preservation of the heart and the tissues, but also the preservation of organs such as the kidney and the liver, for which solutions of the intracellular type have hitherto been proposed.
  • the Applicant has found that the presence of calcium within the extracellular composition made it possible to conserve not only the heart, but also the other organs of the liver and kidney type, for which the calcium was previously absent.
  • the PEG is a purified non-linear PEG, that is to say a PEG synthesized from PEG molecules of lower molecular weight.
  • the purification is carried out by dialysis with the aim of removing all the molecules resulting from the oxidation of PEG or necessary for its manufacture, in particular molecules with a molecular weight of less than 15,000.
  • the concentration of Ca 2+ ions is between 0.1 and 2 millimoles, advantageously 0.5 millimoles.
  • the macromolecule has a molecular weight equal to 35,000, making it possible to guarantee the oncotic pressure, thereby improving the efficiency of preservation.
  • said macromolecule improves the glomerular and tubular functions and produces a diuretic effect.
  • the polyethylene glycol concentration of the solution of the invention is between 0.01 and 5 millimoles, preferably less than 1 millimole, advantageously equal to 0.03 millimoles.
  • the aqueous preservation solution of the invention further comprises an impermeable anion, a sugar, a membrane stabilizing agent, a buffer solution, an anti-free radical agent and a source of energy.
  • the pH of the solution of the invention is between 6.5 and 8, advantageously 7.4.
  • the aqueous preservation solution further comprises: - from 20 to 40 millimoles of raffinose,
  • the aqueous preservation solution of the invention comprises: Raffinose 30 millimoles PEG 35000 purified 0.03 millimoles MgS0 4 5 millimoles KH 2 PO 4 25 millimoles CaCl 2 0.5 millimoles Gluthation 3 millimoles Adenosine 5 millimoles Allopurinol 1 millimole
  • the storage solution of the invention applies to static hypothermic storage and is used at a temperature between 2 and 10 ° C, advantageously 4 ° C.
  • the preparation of the solution consists in dissolving all the constituents in an aqueous solution, the pH of the solution obtained being reduced to 7.4 by addition of NaOH.
  • the performances of the aqueous preservation solution of the invention were compared on the kidney and the liver with regard to the BELZER-VIASPAN solution marketed by DUPONT.
  • KREPS Henseleit-bicarbonate enriched in energy substrate and containing albumin. We distinguish in this example three different groups:
  • Group A control group directly perfused with the artificial solution without prior preservation
  • Group B organ stored for a period of 24 hours ischemia at a temperature of 4 ° C in a BELZER-VTASPAN preservation solution before re-perfusion with the artificial solution;
  • Group C organ stored for a period of 24 hours of ischemia at a temperature of 4 ° C in the storage solution of the invention.
  • Bile flow after transplant is an index of good liver function. Bile flow rates were calculated after a 24 hour hypothermic retention period.
  • the bile flow is stable during the two hours of infusion. As the table shows, bile flow is minimal during the first 30 minutes of infusion, then increases until it reaches a maximum after 60 minutes to remain stable during the second hour of infusion.
  • liver preserved in the solution of the invention (C) has the highest bile flow (0.56).
  • Indocyanine green by rapidly attaching to plasma proteins, is distributed in the vascular volume. It is specifically purified by the liver and concentrated in the bile. The presence of indocyanine green in the liver depends on the infusion rate and its excretion depends on the energy status of the hepatocytes. It follows that this parameter gives not only information on the integrity of endothelial cells, but also information on the integrity of hepatocytes
  • Transaminases are intracellular enzymes. Their presence in the perfusate indicates cell lysis. The results are shown in the table below (Table 5).
  • livers perfused with solution B of the intracellular type release more ASAT and ALAT than the livers stored in the solution of the invention of extracellular type (C).
  • the replacement of hydroxyethyl starch in solution B with polyethylene glycol results in a significant decrease in cell lysis.
  • Creatine kinase is an isoenzyme that is found specifically in endothelial cells. Its release in the perfusion liquid therefore shows lysis of these cells.
  • endothelial cells undergo severe damage. The loss of viability of endothelial cells takes place only after infusion and the rate of cell death depends on the quality of storage and therefore on the storage solution.
  • Time 0 referenced in the table below (Table 6) corresponds to the re-perfusion of the grafts. Under these conditions, the liquid recovered is the preservation liquid kept 24 hours in the liver.
  • the measured CK-BB activity is therefore a marker for the damage to the endothelial cells suffered during the conservation period.
  • solution C The effectiveness of the preservative liquid of the invention was compared with that of the BELZER-VIASPAN liquid (solution B) and EURO COLLINS (solution D).
  • the urine flow rate of the kidneys perfused with liquid A remains lower than the urine flow rate of the kidneys without prior conservation.
  • kidneys preserved in the solution of the invention have the highest flow rate.
  • This parameter measures the glomerular function of the kidney and provides information on the glomerular filtration rate.
  • solution C of the invention has a significant improvement.
  • the sodium reabsorption rate measures renal tubular function. The results are shown in Table 9 below.

Abstract

Solution aqueuse de conservation de tissus et d'organes, caractérisée en ce qu'elle est du type extracellulaire et en ce qu'elle comprend des ions calcium (Ca2+) et du polyéthylène glycol purifié de poids moléculaire égal à 35 000.

Description

SOLUTION AQUEUSE DE CONSERVATION DE TTSSTTS ET D'ORGANES.
L'invention se rapporte à une solution aqueuse de conservation de tissus et d'organes. Par « tissus », on désigne notamment mais de façon non limitative les veines, artères, valves, vaisseaux... . Par "solution de conservation d'organes", on désigne une solution aqueuse de conservation unique apte à conserver une multitude d'organes, et notamment, mais de façon non limitative, le foie, le coeur et le rein.
Après avoir été prélevés chez le donneur, le ou les organes ou les tissus, sont soumis avant d'être greffés chez un receveur, à une période inévitable d'ischémie. Par conséquent, les liquides mis en oeuvre pour la conservation d'organes doivent remplir simultanément trois objectifs, à savoir : • laver le greffon du sang résiduel,
• refroidir l'organe,
• assurer une prévention et une protection efficace contre les lésions provoquées par l'ischémie.
La méthode de conservation d'organes la plus répandue est la conservation hypothermique statique. Cette méthode consiste à rincer l'organe prélevé avec une solution de conservation refroidie, puis à maintenir l'organe dans cette solution jusqu'au moment de la greffe ultérieure. Cependant, cette méthode assure la conservation des organes pour seulement une période limitée, cette période ne dépassant guère 24 heures pour le rein, 12 à 18 heures pour le foie et 4 à 6 heures pour le coeur.
Les liquides de conservation d'organes proposés jusqu'alors présentent des compositions différentes en fonction des organes à conserver.
Ainsi, sont préconisés pour la conservation du rein, le liquide EURO COLLINS commercialisé par FRESENIUS, résultant d'un mélange du type intracellulaire (concentration en potassium supérieure à la concentration en sodium) exclusivement ionique c'est-à-dire exempt de toute macromolécule et le liquide BELZER-VTASPAN connu également sous le nom de UW (Université du Wisconsin) commercialisé par DUPONT. Concernant la conservation hépatique, celle-ci peut être assurée au moyen de la solution BELZER-VIASPAN précitée.
Enfin, on a proposé pour la conservation de greffons cardiaques, le liquide SAINT THOMAS résultant d'un mélange purement ionique du type extracellulaire (concentration en sodium supérieure à la concentration en potassium) exempt de macromolécule, commercialisé par les Laboratoires AGUETTANT.
Les compositions de chacun de ces liquides figurent dans le tableau 1 ci- après.
Tableau 1
Figure imgf000004_0001
Comme déjà dit et comme le montre le tableau récapitulatif ci-dessus, la solution retenue pour la conservation cardiaque est du type extracellulaire (riche en sodium), alors que la solution de conservation pour la conservation du rein et du foie est du type intracellulaire (riche en potassium).
Comme déjà dit, le principal inconvénient de ces solutions est de ne pouvoir être aptes à assurer la conservation de tous les organes.
En d'autres termes, le problème que se propose de résoudre l'invention est de fournir une solution unique susceptible d'assurer la conservation de tout organe, et notamment du foie, rein et coeur.
Un autre objectif de l'invention est de préparer une solution qui soit apte non seulement à conserver les organes, mais également à conserver les tissus.
Un autre objectif de l'invention est d'augmenter la durée et la qualité de la conservation.
Pour résoudre ces problèmes, l'invention propose une solution aqueuse de conservation de tissus et d'organes.
Cette solution se caractérise en ce qu'elle est du type extracellulaire et en ce qu'elle comprend des ions calcium (Ca2+) et du polyethylene glycol purifié de poids moléculaire égal à 35 000.
Dans la suite de la description et dans les revendications, par solution du type extracellulaire, on désigne une solution comprenant une concentration en sodium (Na+) d'au moins 30 millimoles, avantageusement 125 millimoles.
Pour une concentration inférieure à 30 millimoles, on obtient une solution cardioplégique.
Le Demandeur a constaté que de façon surprenante, la solution de type extracellulaire de l'invention permettait d'assurer non seulement la conservation du cœur et des tissus, mais également la conservation d'organes tels que le rein et le foie, pour lesquels étaient proposées jusqu'alors des solutions du type intracellulaires.
En outre et de façon tout aussi surprenante, le Demandeur a constaté que la présence de calcium au sein de la composition extracellulaire permettait de conserver non seulement le coeur, mais également les autres organes du type foie et rein, pour lesquels le calcium était jusque là absent.
Enfin, alors que toutes les solutions comprenant des macromolécules, dont le poids moléculaire est de 20 000, le Demandeur a découvert que l'utilisation de macromolécule du type polyethylene glycol de poids moléculaire égal à 35 000 permettait d'améliorer la conservation des organes.
Dans une forme de réalisation avantageuse, le PEG est un PEG purifié non linaire, c'est-à-dire un PEG synthétisé à partir de molécules de PEG de poids moléculaire inférieur.
En pratique, la purification est effectuée par dialyse en ayant pour objectif de supprimer toutes les molécules issues de l'oxydation du PEG ou nécessaires à sa fabrication en particulier les molécules de poids moléculaire inférieur à 15 000.
Pour assurer le redémarrage cardiaque dans le cas de la conservation du coeur, la concentration en ions Ca2+ est comprise entre 0,1 et 2 millimoles, avantageusement 0,5 millimoles.
Pour une concentration inférieure à 0,1 millimoles, on n'observe pas de redémarrage cardiaque.
Pour une concentration supérieure à 2 millimoles, on perturbe le fonctionnement cardiaque.
Comme déjà dit, pour éviter la formation d'oedèmes tissulaires et cellulaires, la macromolécule présente un poids moléculaire égal à 35 000 permettant de garantir la pression oncotique, améliorant ainsi l'efficacité de la conservation. Dans le cas de la conservation rénale, il apparaît en outre que ladite macromolécule améliore les fonctions glomérulaire et tubulaire et produit un effet diurétique.
En pratique, la concentration en polyethylene glycol de la solution de l'invention est comprise entre 0,01 et 5 millimoles, de préférence inférieure à 1 millimole, avantageusement égale à 0,03 millimole.
Pour une concentration inférieure à 0,01 millimole, on observe la formation d'oedèmes tissulaires et cellulaires.
Pour une concentration supérieure à 5 millimoles, la viscosité de la solution n'est pas satisfaisante.
Selon une autre caractéristique de l'invention, la solution aqueuse de conservation de l'invention comprend en outre un anion imperméant, un sucre, un agent stabilisant de membrane, une solution tampon, un agent antiradicalaire et une source d'énergie.
Par ailleurs, pour obtenir une solution du type extracellulaire, le pH de la solution de l'invention est compris entre 6,5 et 8, avantageusement 7,4.
Dans une forme de réalisation avantageuse, la solution aqueuse de conservation comprend en outre : - de 20 à 40 millimoles de raffinose,
- de 70 à 140 millimoles d'acide lactobionique,
- de 1 à 10 millimoles de MgS04,
- de 10 à 40 millimoles de H2PO4 (apportée par KH2P04),
- de 1 à 6 millimoles de Glutathion, - de 1 à 10 millimoles d'Adénosine,
- de 1,5 à 5 millimoles d'Allopurinol,
- de 10 à 40 millimoles de K+ apportées par KH2P04,
- de 30 à l50 millimoles de Na+ apportées par NaOH,
- avec pH = 6,5 à 8 - et osmolarité de 290 à 320 millimoles/kg Dans une forme avantageuse, la solution aqueuse de conservation de l'invention comprend : Raffinose 30 millimoles PEG 35000 purifié 0,03 millimoles MgS04 5 millimoles KH2PO4 25 millimoles CaCl2 0,5 millimoles Gluthation 3 millimoles Adénosine 5 millimoles Allopurinol 1 millimole
Na+ (apporté par NaOH) 125 millimoles K+ (apporté par KH2PO4) 25 millimoles pH = 7,4 osmolarité 300 millimoles/kg
La solution de conservation de l'invention s'applique à la conservation hypothermique statique et est utilisée à une température comprise entre 2 et 10° C, avantageusement 4° C.
L'invention et les avantages qui en découlent ressortiront mieux des exemples de réalisation ci-après.
Exemple 1
Préparation de la solution aqueuse de conservation multi-organes de l'invention
On prépare une solution aqueuse de conservation dont la composition est reproduite dans le tableau 2 suivant : Tableau 2
Figure imgf000009_0001
La préparation de la solution consiste à dissoudre l'ensemble des constituants dans une solution aqueuse, le pH de la solution obtenue étant ramené à 7,4 par addition du NaOH.
Exemple 2
On a comparé dans cet exemple les performances de la solution aqueuse de conservation de l'invention sur le rein et le foie au regard de la solution BELZER- VIASPAN commercialisée par DUPONT.
Pour ce faire, les essais sont réalisés sur des organes isolés et perfusés selon des techniques connues. Pour l'essentiel, ces techniques consistent en l'isolement total ex-vivo de l'organe et en sa perfusion avec une solution artificielle du type
KREPS Henseleit-bicarbonate enriche en substrat énergétique et contenant de l'albumine. On distingue dans cet exemple trois groupes différents :
• Groupe A : groupe contrôle directement perfusé avec la solution artificielle sans conservation préalable ;
• Groupe B : organe conservé pendant une période d'ischémie de 24 heures à une température de 4° C dans une solution de conservation BELZER- VTASPAN avant re-perfusion avec la solution artificielle ;
• Groupe C : organe conservé pendant une période de 24 heures d'ischémie à une température de 4° C dans la solution de conservation de l'invention.
1/ Conservation hépatique
Pour apprécier l'efficacité de la solution de conservation de l'invention sur la conservation hépatique, on a étudié les paramètres suivants :
a) Paramètres fonctionnels
1 - Variation du débit biliaire
Le débit biliaire après greffe est un indice de bon fonctionnement du foie. Les débits biliaires ont été calculés après une période de conservation hypothermique de 24 heures.
Les résultats figurent dans le tableau suivant (tableau 3).
Tableau 3
Figure imgf000010_0001
Pour le groupe A, le débit biliaire est stable pendant les deux heures de perfusion. Comme le montre le tableau, le débit biliaire est minimal pendant les 30 premières minutes de perfusion, puis augmente jusqu'à atteindre un maximum au bout de 60 minutes pour rester stable durant la deuxième heure de perfusion.
On constate que le foie conservé dans la solution de l'invention (C) présente le débit biliaire le plus élevé (0,56).
2 - Excrétion du vert d'indocyanine dans la bile
Le vert d'indocyanine en se fixant rapidement sur les protéines plasmatiques se distribue dans le volume vasculaire. Il est spécifiquement épuré par le foie et concentré dans la bile. La présence du vert d'indocyanine dans le foie dépend du débit de perfusion et son excrétion dépend du statut énergétique des hépatocytes. Il s'ensuit que ce paramètre donne non seulement des informations sur l'intégrité des cellules endothéliales, mais également des informations sur l'intégrité des hépatocytes
Le pourcentage d'excrétion du vert d'indocyanine dans la bile a été représenté dans le tableau suivant (tableau 4).
Tableau 4
Figure imgf000011_0001
On constate que la clairance du vert d'indocyanine est plus faible pour la conservation du foie dans la solution B que dans la solution C de l'invention, qui apporte donc une amélioration significative.
b) Paramètres biochimiques
1 - Variation d'activité des transaminases Les transaminases (ALAT et ASAT) sont des enzymes intracellulaires. Leur présence dans le perfusat témoigne d'une lyse cellulaire. Les résultats sont représentés dans le tableau ci-après (tableau 5).
Tableau 5
Figure imgf000012_0001
On constate que le foies perfusés avec la solution B de type intracellulaire libèrent plus d'ASAT et d'ALAT que les foies conservés dans la solution de l'invention de type extracellulaire (C). De plus, le remplacement de l'hydroxyéthylamidon de la solution B par le polyethylene glycol entraîne une importante diminution de la lyse cellulaire.
Enfin, on constate qu'il n'y a aucune différence de lyse cellulaire entre le foie perfusé par le liquide de conservation A par rapport au foie perfusé par le liquide ce conservation C.
2 - Variation d'activité des créatine kinases
La créatine kinase (CK-BB) est une isoenzyme qui se trouve spécifiquement dans les cellules endothéliales. Sa libération dans le liquide de perfusion montre donc une lyse de ces cellules. Au cours de la conservation en ischémie froide, les cellules endothéliales subissent des lésions sévères. La perte de viabilité des cellules endothéliales n'a lieu qu'après perfusion et le taux de mort cellulaire dépend de la qualité de la conservation et donc, de la solution de conservation. Le temps 0 référencé dans le tableau ci-après (tableau 6) correspond à la remise en perfusion des greffons. Dans ces conditions, le liquide récupéré est le liquide de conservation gardé 24 heures dans le foie. L'activité CK-BB dosée est donc un marqueur de la lésion des cellules endothéliales subie pendant la période de conservation.
On remarque que la solution C protège bien les cellules endothéliales.
Tableau 6
Figure imgf000013_0001
II - Conservation du rein
On a comparé l'efficacité du liquide de conservation de l'invention (solution C) par rapport au liquide BELZER-VIASPAN (solution B) et EURO COLLINS (solution D).
Pour ce faire, on a étudié les paramètres suivants.
a) Variation du débit urinaire
Le débit urinaire après greffe témoigne du mauvais ou bon fonctionnement rénal. Les résultats sont représentés dans le tableau ci-après (tableau 7).
Tableau 7
Figure imgf000013_0002
Comme le montre le tableau, le débit urinaire des reins perfusés par le liquide A reste inférieur au débit urinaire des reins sans conservation préalable.
En revanche, les reins conservés dans la solution de l'invention présentent le débit le plus important.
b) Clairance de l'inuline
Ce paramètre permet de mesurer la fonction glomérulaire du rein et donne des informations sur le débit de filtration glomérulaire.
Les résultats sont représentés dans le tableau 8.
Tableau 8
Figure imgf000014_0001
Comme le montre ce tableau, la clairance de l'inuline est plus faible avec la conservation du greffon dans la solution B. En revanche, la solution C de l'invention présente une amélioration significative.
c) Réabsorption de sodium
Le taux de réabsorption de sodium permet de mesurer la fonction tubulaire rénale. Les résultats sont représentés dans le tableau 9 ci-après.
Tableau 9
Figure imgf000014_0002
Comme le montre ce tableau, la réabsorption de sodium est plus faible pour les reins conservés avec la solution B que pour les reins conservés avec la solution C. Les avantages de l'invention ressortent bien de la description.
On notera notamment la capacité du liquide de conservation de l'invention à conserver tout organe, que ce soit foie, coeur, rein ou autre.
On note en outre l'amélioration des performances du liquide de l'invention sur les paramètres biochimiques et fonctionnels des organes perfusés par rapport aux liquides de conservation actuellement commercialisés.

Claims

REVENDICATIONS
1/ Solution aqueuse de conservation de tissus et d'organes, caractérisée en ce qu'elle est du type extracellulaire et en ce qu'elle comprend des ions calcium (Ca2+) et du polyethylene glycol purifié de poids moléculaire égal à 35 000.
2/ Solution aqueuse selon la revendication 1, caractérisée en ce que le PEG est synthétisé à partir de molécules de PEG de poids moléculaire inférieur.
3/ Solution aqueuse selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend des ions Na+ à une concentration d'au moins 30 millimoles, avantageusement 125 millimoles.
4/ Solution aqueuse selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que la concentration en ion Ca2+ est comprise entre 0,01 et 2 millimoles, avantageusement 0,5 millimole.
51 Solution aqueuse de conservation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce que la concentration de PEG dans la solution est comprise entre 0,01 et 5 millimoles, de préférence inférieure à 1 millimole, avantageusement égale à 0,03 millimole.
6/ Solution aqueuse de conservation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre un anion imperméant, un sucre, un agent stabilisant de membrane, une solution tampon, un agent antiradicalaire et une source d'énergie.
Il Solution aqueuse de conservation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend en outre :
- de 20 à 40 millimoles de raffinose,
- de 70 à 140 millimoles d'acide lactobionique,
- de 1 à 10 millimoles de MgS04,
- de 10 à 40 millimoles de H2P04 apporté par KH2P04,
- de 1 à 6 millimoles de Glutathion,
- de 1 à 10 millimoles d'Adénosine,
- de 1,5 à 5 millimoles d'Allopurinol,
- de 10 à 40 millimoles de K+ apportées par KH2P04,
- de 30 à 150 millimoles de Na+ apportées par NaOH,
- avec pH = 6,5 à 8
- et osmolarité de 290 à 320 millimoles/kg
8/ Solution aqueuse de conservation selon l'une des revendications précédentes, caractérisée en ce qu'elle comprend :
Raffinose 30 millimoles
PEG 35000 purifié 0,03 millimoles
MgS04 5 millimoles
H2P04 25 millimoles
CaCl2 0,5 millimoles
Gluthation 3 millimoles
Adénosine 5 millimoles
Allopurinol 1 millimole
Na+ (apporté par NaOH) 125 millimoles
K+ (apporté par KH2P04) 25 millimoles pH = 7,4 osmolarité 300 millimoles/kg
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